《辣椒紅中辣椒素的測定 高效液相色譜法》

Q/JLS02-2005 辣椒紅中辣椒素的測定高效液相色譜法 范圍本文件規(guī)定了辣椒紅中辣椒素含量的高效液相色譜測定方法。本文件適用于辣椒紅中辣椒素含量的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T601化學(xué)試劑標準滴定溶液的制備GB/T602化學(xué)試劑雜質(zhì)測定用標準溶液的制備GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。辣椒素capsaicinoid在辣椒中產(chǎn)生辣味的N-香草基酰胺類生物堿物質(zhì)的統(tǒng)稱。注1：其中辣椒堿、二氫辣椒堿和降二氫辣椒堿約占辣椒素總量的95%以上，是表征辣度的主要成分。注2：本文件中辣椒素含量以辣椒堿、二氫辣椒堿和降二氫辣椒堿三種成分計。原理辣椒紅樣品用甲醇提取辣椒素，過濾后經(jīng)C18色譜柱分離，熒光檢測器檢測，以標準品相對保留時間定性，外標法定量。試劑和溶液本文件中所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和符合GB/T6682規(guī)定的一級水。試驗中所用標準滴定溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。冰乙酸：色譜純。N-壬酸香草酰胺（合成辣椒堿）標準品（CAS號：2444-46-4）：純度≥95%。標準儲備溶液：稱取標準品約10mg（精確至0.00001g），用甲醇溶解并定容至50mL容量瓶中，得到濃度為200μg/mL的標準儲備溶液，置于2℃～8℃避光保存，有效期為24個月。標準工作溶液：將標準儲備溶液用甲醇分別稀釋成0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL的標準工作溶液，置于2℃～8℃避光保存，有效期為6個月。儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配備熒光檢測器，或其他等效的檢測器。分析天平：感量為0.01mg和0.1mg。漩渦混合器。高速離心機：轉(zhuǎn)速大于4500r/min。參考色譜條件色譜柱：C18色譜柱（φ4.6mm×15cm），厚度為5μm，或同等性能的色譜柱。流動相：1%冰乙酸溶液-乙腈，體積比為60:40。柱溫：40℃。激發(fā)波長：280nm。發(fā)射波長：325nm。流速：1.5mL/min。進樣量：10μL。分析步驟樣品溶液的制備稱取辣椒紅樣品約0.5g（精確至0.0001g）于50mL離心管中，加入20mL甲醇，渦旋混勻1min，在4000r/min條件下離心5min，取上清液過0.45μm微孔濾膜，作為樣品溶液備用。測定標準曲線的繪制在7參考色譜條件下，分別將標準工作溶液注入高效液相色譜儀中，記錄各濃度溶液對應(yīng)的峰面積值，以標準工作液的濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。含量測定將樣品溶液注入高效液相色譜儀中，根據(jù)標準工作溶液中不同組分的相對保留時間（參見表1）定性樣品溶液中各待測組分辣椒堿、二氫辣椒堿、降二氫辣椒堿的色譜峰，由峰面積按照標準曲線計算各組分的質(zhì)量分數(shù)。待測辣椒紅樣品中辣椒素的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線的線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再重新進行分析。參考色譜圖見附錄A。表1標準溶液中不同組分的相對保留時間參考值待測組分相對保留時間辣椒堿1.02二氫辣椒堿1.52降二氫辣椒堿0.92結(jié)果計算辣椒紅樣品中待測組分（辣椒堿、二氫辣椒堿、降二氫辣椒堿）的含量wi按式（1）計算：wi=ci×式中：wi——辣椒紅樣品中待測組分的含量（i=1、2、3，分別表示辣椒堿、二氫辣椒堿、降二氫辣椒堿），%；ci——由標準曲線計算得到的樣品溶液中辣椒堿、二氫辣椒堿或降二氫辣椒堿的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；Ri——樣品溶液中待測組分相對標準品的響應(yīng)因子（參見表2）；V——樣品溶液的定容體積，單位為毫升（mL）；1000000——單位換算系數(shù)；m——樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。表2待測組分相對標準品的響應(yīng)因子表待測組分響應(yīng)因子辣椒堿0.88二氫辣椒堿0.93降二氫辣椒堿0.92精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值應(yīng)不大于其算術(shù)平均值的10%。檢出限和定量限按取樣量0.5g，用20mL甲醇提取，本方法的檢出限為0.001%，定量限為0.003%。

（資料性）

外標法測定辣椒紅中辣椒素含量的色譜圖外標法測定合成辣椒堿標準品的參考色譜圖見