丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南 實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理規(guī)范

丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了丙型病毒性肝炎（以下簡稱“丙肝”）實(shí)驗(yàn)室開展的檢測(cè)項(xiàng)目、設(shè)施與環(huán)境、管理體系文件、人員要求、質(zhì)量控制、生物安全防護(hù)、生物安全操作、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力及職能要求、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)要求、實(shí)驗(yàn)室職業(yè)暴露預(yù)防與處置。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級(jí)各類醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)開展丙肝病毒檢測(cè)工作的實(shí)驗(yàn)室。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB50346生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范WS/T213丙型肝炎診斷WS233病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則WS/T369醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范WS/T453丙型病毒性肝炎篩查及管理ISO/IEC17025檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。丙型肝炎病毒hepatitisCvirus，HCV屬于黃病毒科，肝炎病毒屬，其基因組為單股正鏈RNA，由9.6×103個(gè)核苷酸組成。HCV基因易變異，目前可至少分為6個(gè)基因型及多個(gè)亞型。HCV對(duì)一般化學(xué)消毒劑敏感，甲醛熏蒸等均可滅活HCV；100℃5分鐘或60℃10小時(shí)、高壓蒸汽等物理方法也均可滅活HCV。丙型病毒性肝炎hepatitisC是由丙型肝炎病毒感染引起的一種以肝臟病變?yōu)橹鞯膫魅拘约膊?，肝臟為其主要靶器官，可造成長期慢性感染，并可導(dǎo)致肝硬化或肝癌。丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)hepatitisCvirusantibodydetection對(duì)人體免疫細(xì)胞因HCV感染產(chǎn)生的丙型肝炎病毒抗體進(jìn)行檢測(cè)的一種方法。其原理是利用基因工程表達(dá)HCV基因結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白作為包被抗原，來測(cè)定HCV抗體。目前臨床最常用的檢測(cè)方法是酶聯(lián)免疫吸附分析法、化學(xué)發(fā)光法和免疫層析法等。丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)hepatitisCvirusnucleicaciddetection利用分子生物學(xué)方法確定查找患者的血液中是否存在丙肝病毒的核酸，來判斷是否被丙肝病毒感染的檢測(cè)方法。核酸檢測(cè)分為定性和定量檢測(cè)。主要檢測(cè)方法有轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)。丙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)hepatitisCvirusgenotypingdetection利用分子生物學(xué)方法確定丙型肝炎病毒的基因型及亞型?；蚍中蜋z測(cè)主要基于基因序列測(cè)定和基于特異性核苷酸互補(bǔ)探針結(jié)合的方法。實(shí)驗(yàn)室生物安全laboratorybiosafety實(shí)驗(yàn)室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實(shí)驗(yàn)室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全責(zé)任的要求。生物安全實(shí)驗(yàn)室biosafetylaboratories通過防護(hù)屏障和管理措施，達(dá)到生物安全要求的病原微生物實(shí)驗(yàn)室。室內(nèi)質(zhì)量控制internalqualitycontrol為達(dá)到質(zhì)量要求所采取的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的作業(yè)技術(shù)和活動(dòng)。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)externalqualityassessment多家實(shí)驗(yàn)室分析同一標(biāo)本，并由外部獨(dú)立機(jī)構(gòu)收集和反饋實(shí)驗(yàn)室上報(bào)的結(jié)果，以此評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室操作的過程。標(biāo)準(zhǔn)操作程序standardoperatingprocedure，SOP將某一實(shí)驗(yàn)全部標(biāo)準(zhǔn)操作步驟和要求以統(tǒng)一的格式描述出來，用來指導(dǎo)日常工作。職業(yè)暴露occupationalexposure職業(yè)工作人員，如醫(yī)生、護(hù)士、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員、人民警察等，在從事診療、護(hù)理或其他職業(yè)工作過程中意外被丙型肝炎患者的血液、體液污染了破損的皮膚或者黏膜，或者被含有丙型肝炎病毒的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚，有可能導(dǎo)致丙型肝炎病毒感染風(fēng)險(xiǎn)的情況?？s略語下列縮略語適用于本文件。RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）BSL-2：二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BiosafetyLevel-2）開展檢測(cè)項(xiàng)目丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)。丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)。丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)主要包括以下檢測(cè)內(nèi)容：丙型肝炎病毒RNARNA丙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室建設(shè)設(shè)施與環(huán)境丙型肝炎病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按BSL-2的標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)。具體要求參見GB19489和GB50346。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室備案。醫(yī)療機(jī)構(gòu)丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)符合《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》及其附件《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》?；驹O(shè)備：包括壓力蒸汽滅菌鍋、二級(jí)生物安全柜、冰箱、生物安全型離心機(jī)、加樣器等基本設(shè)備，應(yīng)當(dāng)與所開展檢測(cè)項(xiàng)目和工作量相適應(yīng)。管理體系文件實(shí)驗(yàn)室內(nèi)具備完善的管理體系文件，至少應(yīng)包含實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度、質(zhì)量手冊(cè)、程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書、生物安全管理文件等，明確實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、安全負(fù)責(zé)人和安全監(jiān)督員，參照ISO/IEC17025。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有丙型肝炎病毒檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)具有但不僅限于檢測(cè)方法的SOP、原始記錄、質(zhì)量控制、高壓滅菌記錄等記錄文件，并及時(shí)更新。人員要求需配備2名以上檢測(cè)技術(shù)人員，至少1人具有中級(jí)及以上衛(wèi)生技術(shù)職稱。每年進(jìn)行一次人員比對(duì)考核。丙型肝炎病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室或?qū)嶒?yàn)室設(shè)立單位應(yīng)當(dāng)每年定期對(duì)檢測(cè)技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，保證其掌握實(shí)驗(yàn)室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護(hù)知識(shí)和實(shí)際操作技能，并進(jìn)行考核。檢測(cè)技術(shù)人員經(jīng)考核合格的，方可上崗。上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括（參考《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理辦法》第34條規(guī)定）：丙型肝炎病毒檢測(cè)相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)，丙型肝炎病毒相關(guān)檢測(cè)技術(shù)及管理要求，實(shí)驗(yàn)操作，質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，生物安全等。報(bào)告簽署人員應(yīng)分為檢驗(yàn)人、復(fù)核人和簽發(fā)人，且三人不可重復(fù)，其中簽發(fā)人可根據(jù)報(bào)告機(jī)構(gòu)工作需求選擇是否在報(bào)告單中體現(xiàn)。檢驗(yàn)人需接受過市級(jí)及以上丙型肝炎病毒檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)，并獲得培訓(xùn)證書；要求掌握相關(guān)專業(yè)知識(shí)和技能，能獨(dú)立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。復(fù)核人、簽發(fā)人應(yīng)具備對(duì)檢測(cè)過程進(jìn)行分析和處理的能力。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力及職能要求二級(jí)以上綜合醫(yī)院、傳染病專科醫(yī)院、丙肝定點(diǎn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)丙型肝炎檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備抗體檢測(cè)和核酸檢測(cè)能力。傳染病?？漆t(yī)院、丙肝定點(diǎn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)還應(yīng)具備基因分型檢測(cè)能力。其他醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)具備丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)能力。第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)丙型肝炎檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)工作需求選擇相應(yīng)的檢測(cè)能力。具有管理職能的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)負(fù)責(zé)對(duì)管轄實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行管理、培訓(xùn)、督導(dǎo)、考評(píng)等工作并提供技術(shù)支持。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配合傳染病報(bào)告人員完成丙肝抗體陽性且核酸檢測(cè)陽性病例在國家傳染病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的上報(bào)工作。實(shí)驗(yàn)室管理質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室必須建立質(zhì)控計(jì)劃并開展室內(nèi)質(zhì)量控制。采購符合本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的商品化弱陽性質(zhì)控品，并與樣品在同等條件下進(jìn)行檢測(cè)。選擇合適的質(zhì)控方法、設(shè)定質(zhì)控失控規(guī)則，質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)可溯源，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理失控情況。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室每年至少參加一次由有資質(zhì)的第三方單位組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或能力驗(yàn)證考核且成績合格。如無法參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，可用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)代替，結(jié)果形成報(bào)告保存。生物安全防護(hù)丙型肝炎病毒相關(guān)檢測(cè)的生物安全級(jí)別丙型肝炎病毒不是高致病性病原微生物，但未經(jīng)滅活的感染性材料應(yīng)在符合二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室生物安全保障措施實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立安全制度、標(biāo)準(zhǔn)操作程序、意外事故處理預(yù)案及信息安全保密制度。培訓(xùn)和管理培訓(xùn)并強(qiáng)化“普遍性防護(hù)原則”。所有檢測(cè)人員應(yīng)接受過生物安全培訓(xùn)并掌握生物安全防護(hù)用品和儀器設(shè)施使用方法、意外事故處理方法。個(gè)人防護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員上崗前及其后每年必須進(jìn)行丙型肝炎病毒標(biāo)志物本底檢測(cè)并保留檢測(cè)記錄。實(shí)驗(yàn)室為工作人員提供充分的個(gè)人防護(hù)用品和個(gè)人防護(hù)設(shè)施。實(shí)驗(yàn)室操作實(shí)驗(yàn)室生物安全操作試劑的管理和使用保證試劑包裝完整性，按試劑要求溫度、環(huán)境保存。樣品的管理和使用參考GB/T38576，依照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理辦法》妥善保管丙型肝炎抗體陽性和丙型肝炎R(shí)NA陽性樣本，樣本保存、運(yùn)輸、銷毀應(yīng)有記錄。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程丙型肝炎病毒感染性生物樣品離心應(yīng)使用生物安全型離心機(jī)；開蓋、加樣等操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行或在具有高效過濾器的自動(dòng)脫蓋機(jī)中開蓋并在封閉機(jī)器內(nèi)自動(dòng)加樣。實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒參照GB19489和WS/T369處置。實(shí)驗(yàn)室發(fā)生核酸污染處理后需對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境采樣并進(jìn)行丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)，結(jié)果陰性后才可恢復(fù)核酸檢測(cè)工作。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)操作根據(jù)檢測(cè)方法不同，樣品可選擇血清、血漿或全血。樣品應(yīng)具有實(shí)驗(yàn)室唯一標(biāo)識(shí)，可溯源。試劑出入庫明細(xì)清楚，按要求保存。臨床診斷用試劑應(yīng)是經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門注冊(cè)、在有效期內(nèi)的試劑。使用的試劑和儀器應(yīng)做適用性和性能驗(yàn)證，相同試劑盒不同批號(hào)之間應(yīng)做批號(hào)比對(duì)。所有實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開展的丙型肝炎病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)按照SOP及試劑說明書操作，保存原始記錄以保證結(jié)果可溯源。每批次項(xiàng)目檢測(cè)須同時(shí)完成該項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控品檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開展的丙型肝炎病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所用儀器應(yīng)按照要求定期檢查、檢驗(yàn)、校準(zhǔn)、保養(yǎng)、維護(hù)并予以記錄。結(jié)果用于臨床報(bào)告的儀器應(yīng)是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)的儀器。同批次檢測(cè)中，試劑盒內(nèi)對(duì)照結(jié)果成立、室內(nèi)質(zhì)控品結(jié)果在控時(shí)，可出具檢測(cè)報(bào)告