DB14T-草莓脫毒原原種苗制備技術(shù)規(guī)程

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB14/T1591—XXXX目次TOC\o"1-1"\h\u5967前言 II312581范圍 1202102規(guī)范性引用文件 124843術(shù)語和定義 1232334外植體選擇 171845脫毒與檢測 1208496莖尖初代培養(yǎng) 2167247組培苗繼代擴繁 235318組培苗生根誘導(dǎo) 2121499組培苗馴化移栽 325336附錄A（資料性）草莓脫毒原原種苗組培生產(chǎn)記錄表 413787附錄B（資料性）草莓脫毒原原種苗出圃登記表 5前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB14/T1591—2018《草莓脫毒原原種苗制備技術(shù)規(guī)程》，與DB14/T1591—2018相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——更改了病毒檢測方法（見5.2）；——增加了脫毒原原種苗的保存（見9.3.3）。本文件由山西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出、組織實施和監(jiān)督檢查。本文件由山西省市場監(jiān)督管理局對標準的組織實施情況進行監(jiān)督檢查。本文件由山西省農(nóng)業(yè)標準化技術(shù)委員會（SXS/TC19)歸口。本文件起草單位：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)。本文件主要起草人：劉偉、樊新萍、王國平、郭華、史華平、李磊、李志強、程春振、武敏、趙琪、李倩。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2018年首次發(fā)布為DB14/T1591—2018；——本次為第一次修訂。草莓脫毒原原種苗制備技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了草莓脫毒原原種苗制備的術(shù)語和定義、外植體的選擇、脫毒方法、病毒檢測方法、莖尖的初代培養(yǎng)、組培苗的繼代擴繁、生根誘導(dǎo)及馴化移栽、原原種苗的保存方式。本文件適用于草莓脫毒原原種苗的制備。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T3032-2016草莓脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。

草莓脫毒原原種苗指脫毒的草莓組培苗移栽于無草莓病源、蟲源的隔離區(qū)內(nèi)生長的植株。

微莖尖脫毒從匍匐莖上切取約0.2mm莖尖分生組織接種至培養(yǎng)基中，分化出的組培苗可脫除病毒。外植體選擇采集時期外植體宜在結(jié)果后期匍匐莖大量抽生階段進行采集。選擇要求選取健壯、無病、開花結(jié)果正常的草莓植株作為母株，采集剛抽出且葉片未展開的匍匐莖作為外植體材料。脫毒與檢測脫毒方法采用微莖尖脫毒法對草莓匍匐莖外植體材料進行脫毒處理。病毒檢測針對草莓斑駁病毒(Strawberrymottlevirus,SMoV)、草莓輕型黃邊病毒(Strawberrymildyellowedgevirus,SMYEV)、草莓鑲脈病毒(Strawberryveinbandvirus,SVBV)利用RT-PCR法進行檢測，具體操作依據(jù)NYT3032-2016的要求執(zhí)行。莖尖初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)基的選擇草莓莖尖初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+0.5mg/L~1.0mg/L6-BA，添加蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.8。外植體消毒方法切取匍匐莖頂端2cm左右作為外植體進行消毒，流水沖洗0.5h~2h。在超凈工作臺下，用75%酒精將外植體浸泡30s，再用1.0%次氯酸鈉消毒10min~15min或0.1%升汞溶液消毒5min~10min，無菌水沖洗3次~5次。所用消毒液與外植體體積的比例約為10:1。莖尖分生組織切取將消毒后的外植體用無菌濾紙吸干水分。在解剖鏡下用鑷子將外植體頂端一層一層小心剝開，直至露出莖尖分生組織部分，用鋒利的解剖刀切取約0.2mm的莖尖，接種于初代培養(yǎng)基中。初代培養(yǎng)條件初始接種的莖尖暗培養(yǎng)2d，之后轉(zhuǎn)置于常規(guī)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃，光照強度3000Lux~5000Lux，光照時間14h/d~16h/d，相對濕度70%~75%。莖尖組織在該培養(yǎng)條件下生長約50d~60d形成幼小無根植株后即可轉(zhuǎn)至繼代培養(yǎng)階段。組培苗繼代擴繁繼代培養(yǎng)基的選擇適宜草莓繼代擴繁的培養(yǎng)基為MS+0.1mg/L~0.3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，添加蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.8。繼代過程的條件控制草莓組培苗繼代培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度25℃，光照強度3000Lux~5000Lux，光照時間14h/d~16h/d，相對濕度70%~75%。繼代培養(yǎng)每隔30d~40d需繼代一次。用于制備脫毒原原種苗的組培苗在繼代次數(shù)上應(yīng)控制在7次以內(nèi)，總繼代培養(yǎng)時間不宜超過一年，即草莓組培苗應(yīng)在每年重新制備。組培生產(chǎn)過程應(yīng)參照附錄A進行詳細登記。組培苗生根誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的選擇誘導(dǎo)草莓生根的培養(yǎng)基為1/2MS+0.1mg/LNAA，添加蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.8。生根過程的條件控制用生長健壯且無明顯變異的組培苗進行生根誘導(dǎo)。選擇高度在2cm以上的組培幼苗接種至生根培養(yǎng)基進行生根。一般無根苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基培養(yǎng)30d左右即有多條根系產(chǎn)生，此時即達到馴化移栽的條件。生根階段的培養(yǎng)條件與繼代過程相同。組培苗馴化移栽組培苗的煉苗措施將達到馴化移栽條件的組培苗移至塑料薄膜（或玻璃）溫室或遮陰網(wǎng)室，溫室內(nèi)溫度控制在10℃~30℃，保持良好的通風(fēng)條件，在自然光條件下煉苗7d左右，每天10：00~15：00需進行適當遮蔭，避免日光曝曬。采用閉蓋煉苗2d、松蓋煉苗2d、開蓋煉苗3d的方式使組培苗逐漸適應(yīng)瓶外環(huán)境。移栽基質(zhì)的準備移栽基質(zhì)由草炭、蛭石和珍珠巖按4：3：1的比例復(fù)配而成，同時添加氮、磷、鉀比例為20：10：20的復(fù)合肥料200g/m3。移栽容器采用50孔育苗穴盤，提前裝好基質(zhì)并澆透水備用。組培苗移栽及栽后管理移栽時間與方法組培苗煉苗后葉片舒展變成深綠色且出現(xiàn)表皮毛，此時即可進行移栽。移栽適宜在晴天的傍晚或陰天進行。移栽時需將幼苗用鑷子小心地從瓶中夾出，用清水將根部的培養(yǎng)基清洗干凈，然后將幼苗在75%百菌清可濕性粉劑800~1000倍液浸泡殺菌10min。殺過菌的幼苗即可移栽至育苗穴盤，移栽時應(yīng)注意使根系保持舒展直立的狀態(tài)，以利于新根的發(fā)生與幼苗的成活。移栽后管理移栽后將育苗穴盤整齊擺放于溫室，然后需立即澆水，并搭建小拱棚外覆薄膜保濕。第一遍水需澆透，以利于迅速發(fā)根，以后每天上下午需各澆水1次。移栽后需仔細觀察幼苗狀態(tài)，及時控制溫室內(nèi)環(huán)境條件。移栽7d內(nèi)溫室內(nèi)溫度應(yīng)控制在25℃~30℃，濕度70%以上，并且晴天的10：00~15：00需特別注意遮陰。移栽7d后草莓植株挺立且有新葉發(fā)生則證明移栽成活。脫毒原原種苗的保存草莓脫毒原原種苗應(yīng)在隔離網(wǎng)室中進行保存。為防止蚜蟲、葉蟬等病毒介體昆蟲的進入，網(wǎng)室應(yīng)使用100目以上的網(wǎng)紗，確保有效的隔離效果，阻斷病毒傳播途徑。脫