臨床精液染色技術(shù)及形態(tài)分析

臨床精液染色技術(shù)及形態(tài)分析

精子正常形態(tài)涂片的制作與染色每份新鮮的精液標(biāo)本應(yīng)制備2張以上的涂片。

每次取樣前要充分混勻精液。

對于未稀釋的精液，采用拉薄技術(shù)；對于已洗滌的精液，采用移液管法。要用鉛筆做記號，記號筆會脫色。染色時2張涂片背靠背，使染色時間一致。用水沖洗已染色的涂片的力度和時間也要盡量一致。未經(jīng)稀釋的精液的涂片方法；（b）洗滌后的精子懸液的涂片方法。在精液液滴之前“拉”，而不要在液滴之后“推”精液涂片的厚度，影響因素有：液體的體積(10μl)…………體積越小，則精子分散越好拉片的角度(45°)…………角度越大，則涂片越薄涂片的速度(~1秒)…………速度越高，則片子越厚空氣干燥的精液涂片，如果固定會出現(xiàn)的缺點：脫水——比濕片小剪切力——不成熟的精子頭膨脹滲透損傷——胞漿小滴的丟失，過多的殘余胞漿滯留推薦采用Papanicolaou、Shorr或Diff-Quik染色法。使用光學(xué)顯微鏡觀察，精子頭部頂體區(qū)為淺藍色、頂體后區(qū)為深藍色，中段略呈紅色，尾部為藍色或紅色。殘余的胞漿小滴染成粉紅色或橙紅色。

染色方法選擇若采用人工分析精子形態(tài)，建議用巴氏染色法，涂片可以永久保存，符合質(zhì)控要求。Diff-Quik染色法適合CASA，只有3個步驟，用時不足一分鐘，但涂片不能保存。所以CASA必須能夠保存每條精子的形態(tài)圖片，而且要有圖像回放功能才符合質(zhì)控要求。Shorr染色法與巴氏染色的效果近似，步驟較少，涂片可以長期保存，適合人工分析。改良巴氏染色有20個步驟，耗時40-60分鐘。脫色時間長短影響染色強度。染色背景較淺。Diff-Quik染色

有4個步驟，耗時1-2分鐘。僅精子表面著色，對細胞膜影響小。背景較深。精子形態(tài)正常精子形態(tài)

精子頭部長度為4.0-5.0um

寬度為2.5-3.5um

長寬之比為1.50-1.75

頂體界限清晰，占頭部的40%-70%

中段稍細，寬度<1um,約為頭部長度的1.5倍

尾部直，均一，比中段細，非卷曲，長度約為45um形態(tài)異常精子

1、畸形精子：頭部畸形、中段偏厚、雙尾

2、畸形精子：頭部畸形、中段畸形

3、畸形精子：梨形頭、中段彎曲、不規(guī)則、胞漿小滴過多

4、畸形精子：頭部畸形

5、畸形精子：梨形頭

6、畸形精子：頭部畸形

形態(tài)異常精子

19、畸形精子：頭部畸形、空泡數(shù)>2

20、畸形精子：頭部正常、頂體>70%

21、畸形精子：頭部畸形、頂體>70%

22、畸形精子：頭部畸形、頂體<40%

23、畸形精子：頭部畸形、頂體<40%

對于頭部異常的描述對于頸和中段異常的描述對于主段異常的描述非精子細胞未評估精子精子多重缺陷的指標(biāo)畸形精子指數(shù)（theteratozoospermiaindex，TZI)=缺陷總數(shù)/缺陷精子數(shù)。精子畸形指數(shù)（thespermdeformityindex，SDI)=缺陷總數(shù)/精子總數(shù)。TZI等于1表示每個異常精于只有一種缺陷，TZI等于3則表示每個異常精子都有頭部、中段和尾部缺陷。所以，TZI反映的是每個精子的缺陷程度，是針對每個精子個體而言，而精子密度、活動率、前向活動率和正常形態(tài)以及SDI是就每一份精液的整體而言?；尉又笖?shù)的數(shù)值介于1.00和3.00之間。以前的報道提示，"TZI>1.6與未經(jīng)治療不育夫婦的低生育率有關(guān)，而且SDI=1.6是體外受精失敗的閾值。這些參數(shù)預(yù)示精子在體內(nèi)和體外的功能情況。例：使用六鍵計數(shù)器每次計數(shù)200條精子。在第1次計數(shù)時，42條正常158條異常。在158條異常精子中，140條有頭部缺陷，102條有頸部缺陷，30條有尾部缺陷，44條有多余的胞漿小滴殘留。在第2次計數(shù)時，36條正常，164條異常。其中122條有頭部畸形，22條頸部畸形，36條有多余的胞漿小滴。計算TZI時，用總的畸形數(shù)(140+102+30+44+122+108+22+36=604畸形)除以異常精子數(shù)(158+164=322),TZI=604/322=1.88；SDI=604/400=1.51。計算機輔助精子形態(tài)學(xué)計量分析的優(yōu)勢CASA的影像分析使精子形態(tài)學(xué)分析評估量化，能獲得更多的精子特征參數(shù)。

自動分析系統(tǒng)比手工操作具有更好的客觀性、精確性和可重復(fù)性，變異系數(shù)＜7%,甚至比熟練的操