DB33T 2110.1-2018 實驗動物 長爪沙鼠 第1部分：微生物控制等級及監(jiān)測　　

DB33LaboratoryanimalMongolianPart1:Microbiologicalstandardsandmonit浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本部分依據(jù)GB/T1.1-2009給1實驗動物長爪沙鼠第1部分：微生物控制等級及監(jiān)測2NY/T541動物疫病實驗室檢驗采樣方法長爪沙鼠Mongoliangerbil（Merionesunguieulataus）普通級長爪沙鼠conventional(CV)Mongol清潔級長爪沙鼠clean(CL)Mongol無特定病原體級長爪沙鼠specific-pathogenfree（SPF）Mongo無菌級長爪沙鼠germfree（GF）Mongo4縮略語5長爪沙鼠等級3須檢測的項目。在引進種源和疑有本病流行時無菌級無特定清普通級皮膚病原真菌Pathogenicdermalfungi○潔級○嗜肺巴斯德桿菌Pasteurellapneumotro肺炎克雷伯桿菌Klebsiellapneumonia綠膿桿菌Pseudomonasaerug肺炎鏈球菌Streptococcuspnemoniae產(chǎn)酸克雷伯桿菌Klebsiellaoxy幽門螺旋桿菌Helicobacterpylori用現(xiàn)有的生物學(xué)技術(shù)，無可檢出的病原菌4無菌級無特定病原體級清潔普通級淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒LymphocyticChoriomeningitisVirus●●級小鼠肺炎病毒PneumoniaViruso●●59檢測規(guī)則9.1檢測頻率9.1.1普通級、清潔級和無特定病原體級長爪沙9.2采樣9.2.1方式選擇12周齡以上的長爪沙鼠用于檢測，隨機取樣；新鮮糞便樣本應(yīng)在飼養(yǎng)單元中選取至少4個點69.2.2方法9.2.3數(shù)量>5009.3送檢要求7根據(jù)免疫學(xué)原理，采用MVM抗原檢測長爪沙鼠血清中A.2主要試劑和器材A,2,1試劑A.2.1.1ELISA抗原A.2.1.1.1特異性抗原MVM接種小鼠胚胎（ME）或3T3細(xì)胞，融三次或超聲波處理后，低速離心去除細(xì)胞碎片，A.2.1.1.2正常抗原A.2.1.2抗原片A.2.1.5酶結(jié)合物A.2.1.6熒光抗體異硫氰酸熒光素標(biāo)記羊抗長爪沙鼠IgG抗體或兔抗長爪A.2.2器材A.3檢測方法8A.4結(jié)果判斷9根據(jù)免疫學(xué)原理，采用HV抗原檢測長爪沙鼠血清中在生物安全柜內(nèi)，用Hantaan型或Seoul型毒株感染的E6細(xì)胞，當(dāng)特異性熒光達+++時，即可收獲培E6細(xì)胞凍融破碎后，經(jīng)低速離心去除細(xì)胞碎片而獲得的上清液。生物安全柜內(nèi)，用Hantaan型或Seoul型毒株感染的E6細(xì)胞，每2d～3d更換維持液，培養(yǎng)7d~10d，用IFA法測定細(xì)胞內(nèi)特異性熒光。當(dāng)熒光達+++時，將細(xì)胞用胰酶分散，用PBS洗滌，涂片。室溫干燥的同時，在紫外線下20cm處照射30min,冷采用ELISA方法(見GB/T14926.50)進行血根據(jù)免疫學(xué)原理，采用MHV抗原檢測長爪沙鼠血清中+++～++++時收獲。凍融三次或超聲波處理后，低速離心去除細(xì)胞碎片，上清液再經(jīng)超速離心濃縮后制DBT或L929細(xì)胞細(xì)胞凍融破碎后，經(jīng)低速采用IEA方法（見GB/T14926.51）進行根據(jù)免疫學(xué)原理，采用PVM抗原檢測長爪沙鼠血清中細(xì)胞，吸附1.5h～2h，加維持液培養(yǎng)10d～14d，當(dāng)細(xì)胞病變達+++時收獲，凍融三次或超聲波處理采用IEA方法(見GB/T14926.51)進行用Reo3感染的BSC-1或BHK21細(xì)胞，每4d～5d滌，涂片。室溫干燥的同時，在紫外線下20cm處照射30min,冷丙酮固定10min，-20用SV感染的BHK21細(xì)胞，接種后2d～3d，病變達++～+++時用胰蛋白酶消化分散，用