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PAGE2PAGE1繡球花組織培養(yǎng)快繁育苗技術(shù)規(guī)程1范圍本文件確立了大花繡球(Hydrangeamacrophylla)組織培養(yǎng)快繁育苗技術(shù)的組培室條件、培養(yǎng)基制備、外植體選擇與處理、無根苗生產(chǎn)、生根與移栽、商品苗生產(chǎn)、廢棄物處理與檔案管理。本文件適用于XX省大花繡球組織培養(yǎng)快繁育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。DB32/T3785—2020繡球花扦插育苗技術(shù)規(guī)程DB33/T752—2022植物種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4組培室條件植物組織培養(yǎng)室應(yīng)包括準(zhǔn)備室、洗滌滅菌室、無菌操作室、培養(yǎng)室、緩沖間和馴化室。組培所需設(shè)備有:冰箱、天平、酸度計(jì)、高壓滅菌鍋、超聲波清洗器、干燥滅菌器、超凈工作臺(tái)、滅菌接種儀、接種器械、全自動(dòng)光照培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架等。5培養(yǎng)基制備5.1培養(yǎng)基配方5.1.1誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+食用白砂糖30g/L+X脂7g/L,調(diào)整pH為5.8。增殖培養(yǎng)基:MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+食用白砂糖30g/L+X脂7g/L,調(diào)整pH為5.8。5.2培養(yǎng)基母液及培養(yǎng)基配制按照附錄A依次取MS母液,培養(yǎng)基的制作按照DB33/T752—2022執(zhí)行。5.3培養(yǎng)基滅菌及保存5.3.1滅菌培養(yǎng)基封口后放入高壓滅菌鍋內(nèi),121℃滅菌15min-20min。滅菌完成后,待滅菌鍋內(nèi)氣壓表降至0時(shí)取出培養(yǎng)基,檢查并擰緊瓶蓋。滅菌后的培養(yǎng)基標(biāo)注好配制日期,置于接種室自然冷卻。5.3.2保存滅菌后的培養(yǎng)基,放置3-5d后使用,但是貯存時(shí)間不超過10d。5.4培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25℃±1℃,光照強(qiáng)度2500Lx,每天光照時(shí)間10h-12h。6外植體選擇與消毒6.1外植體選擇選擇當(dāng)年生顏色嫩綠、芽體飽滿、生長健壯、無病蟲害的枝條為外植體。6.2外植體消毒將長約5-10cm的大花繡球枝條去除大葉片,用洗滌劑清洗表面污垢,投入大燒杯內(nèi)流水沖洗1-2h,再用紗布吸干表面水分,轉(zhuǎn)至超凈工作臺(tái)備用。先用75%酒精浸泡震蕩30s,再用3-5%次氯酸鈉溶液浸泡15min,然后將莖段置于50%植物組織培養(yǎng)抑菌劑中浸泡15min,最后用無菌水洗3次-5次,取出后用無菌濾紙吸干莖段表面水分。6.3外植體切段將消毒完成的莖段置于無菌的培養(yǎng)皿中,用剪刀將莖段剪成2-3cm長的帶節(jié)位小段備用。7無根苗生產(chǎn)7.1誘導(dǎo)培養(yǎng)將帶節(jié)位的小莖段接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,每瓶接2個(gè)-4個(gè)外植體,均勻分布,封好瓶口后,注明代號(hào)及日期等,放至培養(yǎng)室培養(yǎng)30d左右。7.2增殖培養(yǎng)將已經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)出來的叢生芽切成單芽,接種到增殖培養(yǎng)基中,每瓶接種2個(gè)-4個(gè)單芽,培養(yǎng)30d。8瓶外生根及商品苗生產(chǎn)8.1移栽基質(zhì)采用珍珠巖:蛭石:草炭土=1:1:2體積比的混合基質(zhì),首先用50%多菌靈500倍液對(duì)栽培基質(zhì)進(jìn)行澆灌滅菌消毒,然后用塑料薄膜覆蓋24h,放置3-4d后備用。8.2煉苗與移栽組培瓶內(nèi)無根苗葉片濃綠、生長健壯、葉片數(shù)4片及以上且植株高度約為3cm左右時(shí),將組培瓶置于無強(qiáng)烈直射光的煉苗室內(nèi)煉苗2d,擰開瓶蓋再煉苗2d,洗凈基部培養(yǎng)基,去除枯葉及黃葉。將洗凈后的無根苗置于0.1%高錳酸鉀溶液浸泡8-10min,取出后放置在無陽光直射且避風(fēng)處晾干水分。將消毒完成的無根苗栽入栽培基質(zhì)中,澆透定根水,再使用50%多菌靈1000倍液噴霧,最后加蓋薄膜和遮陽網(wǎng),濕度控制在80%-90%,溫度以20℃-25℃為宜。8.3移栽后管理注意控制環(huán)境的溫度和濕度,防止雜菌滋生,每隔7d噴施1次50%多菌靈1000倍液;14d后,每7d噴施一次1/2MS培養(yǎng)基溶液。培養(yǎng)40d。8.4商品苗生產(chǎn)移栽40d左右后,無根苗生長健壯,葉色濃綠,植株高度達(dá)6-10cm;根系發(fā)生整齊,須根數(shù)量多且粗壯,即可作為商品種苗進(jìn)行盆花生產(chǎn)。9廢棄物處理繁育實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)集中收集,定點(diǎn)存放,存放地點(diǎn)必須張貼警告牌或告示,做到專人負(fù)責(zé)管理。10檔案管理建立大花繡球組培快繁繁育苗技術(shù)基本情況檔案,按照附錄B記載大花繡球材料來源、培養(yǎng)基配制、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、瓶外生根培養(yǎng)和移栽等主要繁育過程技術(shù)內(nèi)容,檔案由組培人員填寫,檔案填寫后,及時(shí)整理歸檔。
附錄A(資料性)MS培養(yǎng)基成分表表A.1MS培養(yǎng)基成分表名稱成分貯備液配制濃度(mg/l)每升培養(yǎng)基取用量(ml)大量元素母液(20倍)KNO33800050NH4NO333000KH2PO43400MgSO4·7H2O7400CaCl2·2H2O8800微量元素母液(200倍)KI1665H3BO31240MnSO4·4H2O4460ZnSO4·7H2O1720Na2MoO4·2H2O50CuSO4·5H2O5CoCl2·6H2O5鐵鹽母液(200倍)Na2-EDTA74605FeSO4·7H2O5560有機(jī)成分母液(200倍)肌醇200005煙酸100鹽酸吡哆醇100鹽酸硫胺素20甘氨酸400
附錄B(資料性)B.1材料來源表序號(hào)大花繡球品種名稱品種特征及外植體特征描述記載人日期12…B.2培養(yǎng)基制作記錄表母液名稱大量元
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