《卵磷脂的分離純化實(shí)驗(yàn)報(bào)告》6300字

卵磷脂的分離純化實(shí)驗(yàn)報(bào)告目錄TOC\o"1-2"\h\u23135卵磷脂的分離純化實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1260861.1引言 1203491.2實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 250311.2.1實(shí)驗(yàn)材料及試劑 251281.2.2實(shí)驗(yàn)儀器 2320561.3實(shí)驗(yàn)方法 3204511.3.1卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及檢測(cè)方法 314411.3.2乙醇體系萃取卵磷脂 345731.3.3乙醇體系冷凍提取卵磷脂 41821.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果 4260341.4.2乙醇體系萃取過(guò)程中不同因素對(duì)卵磷脂含量的影響 575721.4.3乙醇體系冷凍過(guò)程中不同因素對(duì)卵磷脂含量的影響 938641.4.4卵磷脂含量分析 12引言磷脂廣泛分布于動(dòng)植物體內(nèi)，根據(jù)Sn-3位磷酸衍生物的不同分為磷脂酰膽堿（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酸（PA）、磷脂酰肌醇（PI）、磷脂酰絲氨酸（PS）。本文主要研究DLPC這一類(lèi)特異性磷脂酰膽堿的純化。目前文獻(xiàn)中提及到的PC純化方法多以蛋黃和大豆為原料。盡管蛋黃磷脂中PC含量高于大豆磷脂，但它的Sn-2位主要是飽和脂肪酸。蛋黃PC中DLPC含量并不高，而DLPC是大豆PC的主要組成成分。所以純化富含DLPC的PC一般選擇價(jià)格低廉，磷脂含量高的大豆粉末磷脂作為原料。近幾年，大豆PC在食品、醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用越來(lái)越廣泛。針對(duì)不同的功能需求相繼出現(xiàn)不同改性方法的研究。目前研究較多的有柱層析法、超（亞）臨界萃取法、膜分離法、有機(jī)溶劑萃取法。其中柱層析法能得到純度在90%以上的PC，純化效果最突出，但上樣量低，生產(chǎn)效率不高。超（亞）臨界萃取法和膜分離法工藝簡(jiǎn)單、且不引入有毒試劑，但設(shè)備及耗材成本高。有機(jī)溶劑萃取法操作簡(jiǎn)易，產(chǎn)量大，成本低，但純化程度不夠高，一般可作為純化步驟的預(yù)處理方法。同時(shí)，還存在一些不太熱門(mén)的PC純化方法，酶水解法主要用于提取蛋黃卵磷脂，通過(guò)水解雞蛋中的蛋白質(zhì)的方式提高磷脂含量，無(wú)法分離大類(lèi)磷脂，純化效果有限；無(wú)機(jī)鹽沉淀法會(huì)引入的有毒沉淀劑，難以脫除徹底。而用乙醇冷凍法研究較少，但因其操作方法簡(jiǎn)單，處理量大，無(wú)需借助高成本維護(hù)的儀器，可將經(jīng)預(yù)分離的磷脂酰膽堿進(jìn)一步純化。因此，乙醇冷凍法可與有機(jī)溶劑萃取法結(jié)合探索出一種生產(chǎn)高純度PC的方式。本章內(nèi)容以大豆粉末磷脂為原料，采用乙醇萃取聯(lián)合乙醇冷凍法制備高純度PC，研究乙醇萃取過(guò)程中乙醇濃度、料液比、萃取時(shí)間、萃取溫度、萃取次數(shù)對(duì)乙醇萃取效果的影響，和乙醇冷凍過(guò)程中乙醇濃度、固液比、冷凍時(shí)間對(duì)冷凍純化效果的影響。實(shí)驗(yàn)儀器與試劑實(shí)驗(yàn)材料及試劑表2-1主要材料及試劑名稱(chēng)純度生產(chǎn)廠家乙腈色譜純天津市科密歐化學(xué)試劑公司甲醇色譜純上海國(guó)藥試劑公司85%磷酸色譜純阿拉丁試劑有限公司乙醇分析純上海國(guó)藥試劑公司丙酮分析純上海國(guó)藥試劑公司乙醚分析純上海國(guó)藥試劑公司大豆粉末磷脂≥97%安徽素之味生物科技有限公司大豆L-α-磷脂酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)品≥98%北京百靈威科技有限公司實(shí)驗(yàn)儀器表2-2主要儀器名稱(chēng)型號(hào)廠家鼓風(fēng)干燥箱DHG-9140A鞏義市予華儀器公司集熱式恒溫磁力攪拌器DF-101S常州國(guó)華電器公司液相色譜儀LC-10F天津博納艾杰爾公司超聲波清洗機(jī)SK3300上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司IKA懸臂攪拌器EUROSTAR40digital德國(guó)艾卡儀器設(shè)備有限公司分析天平FA2104N奧豪斯（上海）公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀YRE2000E鞏義市予華儀器公司自動(dòng)雙重純水蒸餾器SZ-93上海亞榮生化儀器廠快速高低溫程序控制恒溫槽CK-4010GD寧波新芝生物科技股份有限公司真空干燥箱DZF上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司InnovaSilica柱5μm4.6×250mm天津博納爾艾杰爾有限公司實(shí)驗(yàn)方法圖2-1PC制備工藝流程本章實(shí)驗(yàn)具體工藝流程如圖2-1所示。卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及檢測(cè)方法（1）PC標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別配制濃度梯度為0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2mg/mL的PC標(biāo)準(zhǔn)溶液，過(guò)0.22μm尼龍濾膜，待液相分析檢測(cè)。以PC濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)目標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）進(jìn)樣溶液配制稱(chēng)取30-50mg待測(cè)磷脂于5mL塑料離心管，加少量乙醇超聲溶解，后轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，塑料離心管用乙醇潤(rùn)洗3次，潤(rùn)洗液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶，最后用乙醇定容待檢測(cè)。（3）液相檢測(cè)方法HPLC色譜方法ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>張維農(nóng)</Author><Year>2004</Year><RecNum>266</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[69]</style></DisplayText><record><rec-number>266</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0xfzxasr89f5pgevv5npz2999veze2dzsvrv"timestamp="1617724706">266</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>張維農(nóng)</author></authors></contributors><titles><title>天然磷脂的置換色譜分離純化及其脂質(zhì)體色譜研究</title></titles><dates><year>2004</year></dates><publisher>武漢大學(xué)</publisher><urls></urls></record></Cite></EndNote>[69]：檢測(cè)器為UV檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；流動(dòng)相：乙睛:甲醇:85%磷酸=180:3:1（V/V/V）；流量：0.5mL/min；色譜柱：InnovaSilica5μm4.6×250mm；柱溫：24°C；進(jìn)樣量：20μL。乙醇體系萃取卵磷脂取20g大豆粉末磷脂于150mL或100mL燒杯中，根據(jù)固液比加入不同體積不同濃度的乙醇溶液。在不同溫度下250r/min水浴攪拌，萃取不同次數(shù)，取上清液轉(zhuǎn)入100mL圓底燒瓶中，50°C真空脫溶，脫溶物用10mL丙酮洗滌3次后真空脫溶去除丙酮，得到粗提PC。此時(shí)產(chǎn)品PC含量不足90%，粗提PC需經(jīng)過(guò)乙醇冷凍法進(jìn)一步提純。得率計(jì)算公式如下：式2.1粗提PC得率=粗提PC質(zhì)量大豆粉末乙醇體系冷凍提取卵磷脂優(yōu)化乙醇冷凍實(shí)驗(yàn)條件需要大量的粗提PC，以下為獲取冷凍法原料的操作方法：取500g粉末磷脂于2L燒杯中，選擇2.3.2優(yōu)化得到的乙醇萃取條件萃取大豆粉末磷脂。經(jīng)旋蒸后的粗提PC質(zhì)地粘稠，附著于圓底燒瓶瓶壁，不易取出。將150mL乙醚分三次加入圓底燒瓶超聲溶解并反復(fù)沖洗，乙醚磷脂溶液轉(zhuǎn)移至1L燒杯，45°C水浴30min，揮干部分乙醚。加入750mL丙酮使磷脂沉淀。倒掉上清液，將沉淀平鋪于表面皿，50°C真空干燥24h，得到粗提PC。取10g粗提PC于100mL旋蓋試劑瓶中，根據(jù)固液比加入不同體積不同濃度的乙醇溶液，60°C水浴溶解，置于高低溫程序控制恒溫槽中，1h內(nèi)從60°C降溫至-7°C，保溫不同時(shí)間。取上清液，50°C旋蒸去除溶劑，得到制備PC。得率計(jì)算公式如下：式2.2制備PC得率=制備PC質(zhì)量粗提PC質(zhì)量×10實(shí)驗(yàn)結(jié)果卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2-2PC的標(biāo)準(zhǔn)曲線以PC的濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2-2所示，PC標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=16395145.6254x+571837.0205，R2=0.9997。乙醇體系萃取過(guò)程中不同因素對(duì)卵磷脂含量的影響為了得到乙醇體系萃取PC的最優(yōu)條件，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)影響因子進(jìn)行探討。本實(shí)驗(yàn)考察乙醇濃度（%）、固液比（g/mL）、萃取時(shí)間（min）、萃取溫度（°C）和萃取次數(shù)這些因素對(duì)PC含量的影響，以粗提物PC含量（%）和得率（%）作為考察指標(biāo)。乙醇濃度對(duì)乙醇萃取效果的影響圖2-3乙醇濃度對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：固液比1:4（g/mL），萃取時(shí)間30min，萃取溫度60°C，萃取次數(shù)1次。探索80%、85%、90%、95%、100%濃度乙醇對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響。磷脂在乙醇和水中溶解度不同，不同乙醇-水比例的溶液萃取PC的效果也會(huì)有差異。PC在乙醇中溶解度遠(yuǎn)高于其他磷脂，水分添加過(guò)量會(huì)降低PC的溶解性，同時(shí)溶解更多如PA、PE這一類(lèi)比PC水溶性更強(qiáng)的磷脂，使PC含量降低。故本章只對(duì)80%以上乙醇濃度的萃取結(jié)果進(jìn)行探討。具體結(jié)果如圖2-3所示。由圖2-3可看出，乙醇濃度在80-95%時(shí)，PC含量和得率隨著乙醇濃度增加而逐漸上升。因?yàn)榇藭r(shí)PC在溶液中的溶解度高于其他磷脂，同時(shí)水分的添加促使磷脂與其結(jié)合形成膠體，磷脂在攪拌萃取過(guò)程中結(jié)團(tuán)成塊，不利于磷脂與溶劑體系接觸，造成了水分添加而PC含量降低的現(xiàn)象。當(dāng)乙醇濃度大于95%時(shí)，PC含量和得率反而隨著乙醇濃度的增加而降低。可能是因?yàn)樯倭克值奶砑咏档土艘掖?水溶液的黏度，使體系的傳質(zhì)效率增加ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>王成濤</Author><Year>2010</Year><RecNum>265</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[70]</style></DisplayText><record><rec-number>265</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0xfzxasr89f5pgevv5npz2999veze2dzsvrv"timestamp="1617724706">265</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>王成濤</author></authors></contributors><titles><title>大豆磷脂制備高純度磷脂酰膽堿的研究</title></titles><dates><year>2010</year></dates><publisher>河南工業(yè)大學(xué)</publisher><urls></urls></record></Cite></EndNote>[70]，促進(jìn)了除PC磷脂的溶解，而此時(shí)PC的溶解速率上升緩慢甚至可能低于95%乙醇濃度時(shí)PC的溶解速率，導(dǎo)致在無(wú)水乙醇體系下PC含量得率均低于95%乙醇濃度體系。因此選擇95%乙醇濃度進(jìn)行下一步因素的探索，該條件下PC含量為76.2%，得率為21.5%。固液比對(duì)乙醇萃取效果的影響圖2-4固液比對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：乙醇濃度95%，萃取時(shí)間30min，萃取溫度60°C，萃取次數(shù)1次。探索1:1.5、1:2、1:4、1:6、1:8固液比（g/mL）對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響。PC含量與PC在溶液中的濃度和是否處于飽和狀態(tài)有直接關(guān)系，探索不同固液比對(duì)PC以及其他磷脂在溶液中的濃度影響可通過(guò)PC含量和得率來(lái)反映。選擇合適的固液比，觀察PC從飽和狀態(tài)到濃度逐漸變低的含量趨勢(shì)至關(guān)重要。因?yàn)楣桃罕仍?:1（g/mL）時(shí)，固體含量過(guò)高，難以在攪拌時(shí)均勻分散在溶液中，故選擇固液比范圍為1:1.5-1:8（g/mL）。由圖2-4可知，固液比范圍在1:1.5–1:2（g/mL）時(shí)，PC含量隨溶液體積的增加而上升。該過(guò)程中固比為1:1.5（g/mL）時(shí)，溶液中PC過(guò)度飽和，多數(shù)PC未溶解，乙醇溶液增加時(shí)，PC與其他磷脂的溶解差異變大，使得PC含量提高。固液比范圍在1:2–1:8時(shí)，隨著溶液體積的增加，PC含量隨之下降，而得率逐漸上升。萃取溶液用量低于實(shí)驗(yàn)萃取常用量，一般多數(shù)文獻(xiàn)中乙醇萃取PC固液比范圍在1:4-1:20，造成PC含量隨溶液體積增加而下降的現(xiàn)象。此時(shí)PC在溶液中的濃度遠(yuǎn)低于飽和度，而乙醇-水溶液的添加會(huì)溶解更多其他磷脂，導(dǎo)致PC含量越來(lái)越低。磷脂整體溶解質(zhì)量隨溶液體積增加而增加，故PC得率呈現(xiàn)一直上升的趨勢(shì)。根據(jù)圖2-4可知，固液比為1:2（g/mL）時(shí)，純度最高，與固液比1:4（g/mL）相比PC含量高約4%，得率低約2%。綜合考慮，選擇固液比1:2（g/mL）最佳，該條件下PC含量為80.0%，得率為19.2%。萃取時(shí)間對(duì)乙醇萃取效果的影響圖2-5萃取時(shí)間對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：乙醇濃度95%，液比1:2（g/mL），萃取溫度60°C，萃取次數(shù)1次。探索10min、20min、30min、40min、50min萃取時(shí)間對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響。萃取時(shí)間過(guò)短，PC未溶解完全，得率低。萃取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，容易提高其他磷脂溶解量。因此需要選擇一個(gè)適合的萃取時(shí)間得到可觀的PC含量和得率。由圖2-5可知，萃取時(shí)間在20-40min時(shí)，PC含量隨著時(shí)間的推移而上升。此時(shí)溶液中PC未達(dá)到飽和，同時(shí)PC的溶解和擴(kuò)散需要時(shí)間，此時(shí)PC含量與萃取時(shí)間成正比。而萃取時(shí)間在10-20min和40-50min時(shí)，PC含量隨時(shí)間增加而下降，而PC得率上升。因?yàn)樵谶@段時(shí)間內(nèi)，磷脂中PE等其他磷脂組分的溶解速率大于PC，導(dǎo)致了PC含量的下降。根據(jù)圖2-5可知萃取時(shí)間為40min時(shí)，PC含量最高，且得率僅比萃取50min時(shí)低0.5%。該條件下PC含量為80.3%，得率為22.1%。故選擇萃取時(shí)間為40min佳條件。萃取溫度對(duì)乙醇萃取效果的影響圖2-6萃取溫度對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：乙醇濃度95%，固液比1:2（g/mL），萃取時(shí)間40min，萃取次數(shù)1次。探索30°C、40°C、50°C、60°C萃取溫度對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響。乙醇萃取過(guò)程中，溫度的改變會(huì)影響溶液的黏度及磷脂的傳質(zhì)速率，從而影響最終萃取效果。從工業(yè)生產(chǎn)的角度考慮，萃取溫度過(guò)高，會(huì)促進(jìn)磷脂的氧化，增大設(shè)備耗能，萃取溫度過(guò)低，會(huì)降低萃取效率，因此要挑選一個(gè)合適的溫度范圍對(duì)萃取效果進(jìn)行探索。由圖2-6可知，在溫度范圍為30-50°C時(shí)，隨著溫度升高，PC含量和得率上升，原因是該溫度范圍下，體系溫度升高，乙醇溶液粘度降低，磷脂各組分傳質(zhì)速率增大，擴(kuò)散系數(shù)增加，PC的溶解效率提高ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>葛玉卿</Author><Year>2004</Year><RecNum>262</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[71]</style></DisplayText><record><rec-number>262</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0xfzxasr89f5pgevv5npz2999veze2dzsvrv"timestamp="1617724706">262</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>葛玉卿</author></authors></contributors><titles><title>大豆磷脂酰膽堿的提取純化研究</title></titles><dates><year>2004</year></dates><publisher>中南大學(xué)</publisher><urls></urls></record></Cite></EndNote>[71]。當(dāng)溫度高于50°C時(shí)，PC含量和得率隨著溫度的升高而下降，此時(shí)溫度的升高促使磷脂與水和乙醇乳化，開(kāi)始凝結(jié)成團(tuán)，分散性降低，不易攪拌；同時(shí)，溫度的升高更有利于磷脂其他組分的溶解，導(dǎo)致最后PC含量和得率降低。萃取溫度為50°C時(shí)PC含量和得率最高，因此選擇該條件作為最優(yōu)條件，PC含量為83.8%，得率為23.2%。（5）萃取次數(shù)對(duì)乙醇萃取效果的影響圖2-7萃取次數(shù)對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：乙醇濃度95%，固液比1:2（g/mL），萃取時(shí)間40min，萃取溫度50°C。探索1次、2次、3次、4次、5次萃取次數(shù)對(duì)乙醇萃取PC含量和得率的影響。萃取PC的過(guò)程中，僅萃取一次并不能將磷脂中的PC提取完全，從生產(chǎn)的角度考慮，往往要選擇高得率和萃取溶劑的消耗量低的實(shí)驗(yàn)條件，確定合理的萃取次數(shù)。由圖2-7可知，相比萃取1次，萃取次數(shù)為2次時(shí)PC含量和得率更高，因?yàn)橹惠腿?次時(shí)，磷脂沉淀物中還殘留部分PC，經(jīng)過(guò)乙醇-水溶液的再次溶解提高了PC的含量。當(dāng)萃取次數(shù)超過(guò)兩次時(shí)，磷脂沉淀物中PC含量越來(lái)越少；此時(shí)，溶液溶解磷脂其他組分能力增強(qiáng)，溶解PC能力變?nèi)?，得率隨著萃取次數(shù)的增加而升高。在萃取次數(shù)達(dá)到4次時(shí)，得率的上升趨勢(shì)接近平緩。綜合PC含量、得率和溶劑消耗的考慮，萃取3次時(shí)，PC得率上升明顯且PC含量?jī)H次于萃取2次的條件，故選擇萃取3次作為最優(yōu)條件，該條件下PC含量為84.4%，得率為36.2%。乙醇體系冷凍過(guò)程中不同因素對(duì)卵磷脂含量的影響利用低溫條件下PC與其他磷脂組分在乙醇溶液中溶解度差異被放大，更多非PC的磷脂組分析出，達(dá)到進(jìn)一步提純PC的效果。以乙醇萃取法得到的粗提PC作為原料，其中PC含量約為84%。探索乙醇冷凍提取PC的最優(yōu)條件，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)影響因子進(jìn)行探討。本實(shí)驗(yàn)考察乙醇濃度（%）、固液比（g/mL）、萃取時(shí)間（min）對(duì)PC中DLPC含量的影響，以制備PC含量（%）和得率（%）作為考察指標(biāo)。乙醇濃度對(duì)冷凍純化效果的影響圖2-8乙醇濃度對(duì)冷凍純化PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：固液比1:4（g/mL），冷凍時(shí)間24h，冷凍溫度-7°C。探索80%、85%、90%、95%、100%乙醇濃度對(duì)冷凍純化PC含量和得率的影響。乙醇溶液中的水在低溫下結(jié)晶，影響不同磷脂在冷凍過(guò)程的析出程度以及在乙醇中的溶解情況。挑選合適的乙醇濃度進(jìn)行冷凍法有利于提高純化效果。磷脂通過(guò)與水形成膠體結(jié)晶析出ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>李桂華</Author><Year>2010</Year><RecNum>263</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[36]</style></DisplayText><record><rec-number>263</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0xfzxasr89f5pgevv5npz2999veze2dzsvrv"timestamp="1617724706">263</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>李桂華</author><author>王成濤</author><author>方芳</author></authors></contributors><titles><title>乙醇冷凍法純化分離大豆磷脂酰膽堿研究</title><secondary-title>糧食與油脂</secondary-title></titles><periodical><full-title>糧食與油脂</full-title></periodical><pages>17-19</pages><number>05</number><dates><year>2010</year></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[36]。由圖2-8可知，不同含水量條件下，乙醇與不同磷脂組分的結(jié)合能力也會(huì)發(fā)生變化。乙醇濃度范圍在85-95%時(shí)，PC含量隨著乙醇溶液中水分的減少而上升。當(dāng)溶劑體系完全無(wú)水時(shí)，PC含量顯著降低。原因是在無(wú)水時(shí)，乙醇溶解PC的能力變差；或者無(wú)水時(shí)不利于其余磷脂組分的析出。從圖2-8可看出，PC含量最低值與最高值相差約4%。因?yàn)橐掖紳舛葘?duì)冷凍法純化效果影響顯著。本章實(shí)驗(yàn)主要以提高PC含量為目的，乙醇濃度為95%時(shí)PC含量最高，故選擇95%乙醇濃度作為最優(yōu)條件，該條件下PC含量為92.4%，得率為58.3%。固液比對(duì)冷凍純化效果的影響圖2-9固液比對(duì)冷凍純化PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：乙醇濃度95%、冷凍時(shí)間24h。冷凍溫度-7°C。探索1:2、1:4、1:6、1:8（g/mL）固液比對(duì)冷凍純化PC含量和得率的影響。溶劑的體積決定了溶解磷脂量的多少，不同固液比下各磷脂組分與水和乙醇結(jié)合的方式也有所區(qū)別，探索固液比對(duì)冷凍純化PC的影響至關(guān)重要。由圖2-9可知，隨著溶液體積的添加，PC得率逐漸上升，但上升的趨勢(shì)逐漸由明顯變?yōu)榫徛?。因?yàn)樵谝欢ǚ秶鷥?nèi)，溶液體積越大，磷脂的溶解量越大，磷脂析出量越少；同時(shí)，溶劑體積的增加意味著PC逐漸脫離飽和狀態(tài)，磷脂其他組分逐漸在溶液中溶解，導(dǎo)致PC含量降低。圖2-9的結(jié)果中，固液比為1:2（g/mL）條件下PC含量最高，但此時(shí)得率最低。相比之下，固液比為1:4（g/mL）時(shí)，PC含量?jī)H低0.8%，且得率高22.6%。為保證實(shí)驗(yàn)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在提高PC含量的同時(shí)還需保證有足夠的得率。同時(shí)為了滿(mǎn)足得率，也不能以犧牲純度為代價(jià)，還要避免過(guò)度的溶劑消耗造成成本負(fù)擔(dān)。最后選擇固液比1:4（g/mL）作為本因素最優(yōu)條件，該條件下，PC含量為92.4%，得率為58.3%。冷凍時(shí)間對(duì)冷凍純化效果的影響圖2-10冷凍時(shí)間對(duì)冷凍純化PC含量和得率的影響固定實(shí)驗(yàn)條件：乙醇濃度95%、固液比1:2（g/mL）。冷凍溫度-7°C。探索8h、12h、16h、20h、24h冷凍時(shí)間對(duì)冷凍純化PC含量和得率的影響。乙醇冷凍純化效果與冷凍時(shí)長(zhǎng)有很大關(guān)聯(lián)。冷凍時(shí)間短，磷脂其他組分未沉淀完全，冷凍時(shí)間長(zhǎng)可能導(dǎo)致更多PC析出。由圖2-10可知，當(dāng)冷凍時(shí)間低于20h時(shí)，PC含量隨冷凍時(shí)間的增加而上升，隨著時(shí)間的推移，更多其他磷脂組分析出。有文獻(xiàn)報(bào)道溶液與環(huán)境存在溫度差時(shí)，因溫度驟降，飽和度高的其他磷脂會(huì)析出，同時(shí)夾帶部分PC析出ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>李召妍</Author><Year>2010</Year><RecNum>264</RecNum><DisplayText>