2025年統(tǒng)編版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年統(tǒng)編版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷298考試試卷考試范圍：全部知識點(diǎn)；考試時間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共6題，共12分)1、下列表述正確的是（）A.微生物的培養(yǎng)基中都必須加入碳源、氮源、無機(jī)鹽、水及特殊營養(yǎng)物質(zhì)B.無菌技術(shù)包括對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行滅菌C.微生物的生長除受營養(yǎng)因素影響外，還受pH、氧、滲透壓的影響D.使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行消毒，以免污染環(huán)境2、植物被野生型農(nóng)桿菌感染后會產(chǎn)生瘤狀結(jié)構(gòu)（類似愈傷組織）；主要原因是農(nóng)桿菌附著植物細(xì)胞后，T-DNA首先在農(nóng)桿菌中從右邊界到左邊界被剪切；復(fù)制，然后進(jìn)入植物細(xì)胞并整合到染色體上，繼而誘發(fā)細(xì)胞異常生長和分裂，形成植物腫瘤。Ti質(zhì)粒中含有生長素合成基因、細(xì)胞分裂素合成基因和冠癭堿合成基因。冠癭堿是農(nóng)桿菌生命活動必需的有機(jī)物質(zhì)，而植物自身不能合成和利用。下圖為農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)段結(jié)構(gòu)示意圖。以下有關(guān)敘述正確的是（）

A.植物腫瘤的形成與生長素基因和細(xì)胞分裂素兩個基因的在農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)有關(guān)B.清除植物腫瘤組織中的農(nóng)桿菌后腫瘤不再生長C.利用T-DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)基因時不需保留左邊界和右邊界序列D.去除冠癭堿合成基因，農(nóng)桿菌在被感染植物體內(nèi)不能大量繁殖3、如圖是單克隆抗體制備過程示意圖；1~3代表相關(guān)過程，a~e代表相關(guān)細(xì)胞，其中c是兩兩融合的細(xì)胞。以下敘述錯誤的是（）

A.過程1是給小鼠注射特定抗原蛋白，可刺激小鼠產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)B.過程2的促融方法可采用電融合技術(shù)，該技術(shù)能擊穿核膜促使核融合C.c細(xì)胞有三種，每種細(xì)胞染色體組數(shù)都相等，e細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞D.過程3是進(jìn)行抗體檢測，并克隆產(chǎn)生陽性細(xì)胞的過程4、下列哪項(xiàng)是對待生物技術(shù)的理性態(tài)度（）A.轉(zhuǎn)基因技術(shù)是按照人們的意愿對生物進(jìn)行的設(shè)計，不存在負(fù)面影響B(tài).轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對于解決糧食、能源等問題起了積極作用，同時也存在一定風(fēng)險C.克隆技術(shù)如果被不合理利用將給社會造成災(zāi)難，應(yīng)禁止任何克隆研究D.轉(zhuǎn)基因技術(shù)如果被恐怖分子利用將可能導(dǎo)致人類滅絕，應(yīng)停止轉(zhuǎn)基因研究5、圖甲是人類某單基因遺傳病的系譜圖，相關(guān)基因?yàn)锳/a，在人群中該致病基因的頻率為1/100。圖乙為科研人員對1~6號個體（6號為胎兒）含相關(guān)基因的DNA片段擴(kuò)增后，并進(jìn)行電泳分析的結(jié)果，下列敘述正確的是（）

A.該遺傳病為隱性病，但不能判斷致病基因位于常染色體還是X染色體上B.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增含A和a兩種基因的DNA片段時必須要設(shè)計兩對引物C.3號個體與一表型正常的女性婚配，理論上后代患該病的概率是1/101D.6號應(yīng)為女性，且表型正常，其M2片段可能來自1號或2號個體6、紅細(xì)胞生成素（EPO）是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種激素物質(zhì)，是當(dāng)今最成功的基因工程藥物，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨床使用的紅細(xì)胞生成素主要來自基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素（rhEPO）。其簡要生產(chǎn)流程如圖；下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.過程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA連接酶B.構(gòu)建的重組表達(dá)載體中終止子的作用是終止翻譯過程C.檢測重組細(xì)胞是否表達(dá)出rhEPO常用抗原—抗體雜交技術(shù)D.用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO可將人EPO基因?qū)氩溉閯游矬w細(xì)胞獲得評卷人得分二、多選題(共8題，共16分)7、下列有關(guān)生物技術(shù)的安全性的敘述，正確的是（）A.病毒可感染動物細(xì)胞，因此誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合一般不用病毒B.我國對農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物實(shí)行了嚴(yán)格的標(biāo)識制度C.經(jīng)過基因重組的致病菌可能成為生物武器D.轉(zhuǎn)基因物種的迅速擴(kuò)散有利于增加生物多樣性8、生長圖形法是一種測定微生物營養(yǎng)需求的簡便方法。為探究某嗜熱菌所需生長因子的種類；研究小組把該菌的懸浮液與不含任何生長因子但含有其他必需營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基混合后倒成平板，然后在平板上劃分?jǐn)?shù)區(qū)，將甲；乙、丙三種生長因子分別添加到不同區(qū)域，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示，下列說法正確的是（）

A.倒成平板后直接培養(yǎng)可判斷有無污染B.倒成平板后需要進(jìn)行滅菌處理C.圖示結(jié)果表明該菌需要生長因子乙或丙D.生長圖形法還可用于某些菌種的篩選9、某實(shí)驗(yàn)小組利用下圖所示質(zhì)粒和目的基因來構(gòu)建基因表達(dá)載體，將目的基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞并表達(dá)。下列敘述正確的是（）

A.圖中的質(zhì)粒用酶A切割后，會產(chǎn)生4個游離的磷酸基團(tuán)B.在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，可用酶A和酶C切割質(zhì)粒和目的基因C.成功導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌可在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長D.若用酶B和酶C切割，可以避免質(zhì)粒的自身環(huán)化10、進(jìn)行土壤中尿素分解菌的選擇培養(yǎng)時，利用的培養(yǎng)基組分及含量如表所示。下列分析錯誤的是（）。組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4?7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL

A.KH2PO4和Na2HPO4既可為菌體提供無機(jī)鹽，又可調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pHB.尿素既可為尿素分解菌提供氮源，又可對培養(yǎng)基中的微生物起選擇作用C.瓊脂既可為尿素分解菌提供碳源，又起到凝固劑的作用D.蒸餾水既可進(jìn)行定容，又可對培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋以便于計數(shù)11、下列關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的說法中，錯誤的是（）A.果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌屬于兼性厭氧生物，在有氧條件下大量繁殖B.制作果醋需要醋酸菌，它是一種嚴(yán)格厭氧的微生物，可將葡萄中的糖分解為乙酸C.多種微生物參與了腐乳的制作，如酵母菌、毛霉、曲霉等D.制作泡菜利用的乳酸菌是一種厭氧微生物，可以通過無氧呼吸產(chǎn)生乳酸和二氧化碳12、下列有關(guān)菊花組織培養(yǎng)的敘述，正確的是（）A.實(shí)驗(yàn)中使用的培養(yǎng)基、器械和外植體都要滅菌B.外植體用酒精消毒30s后，再用流水充分沖洗C.誘導(dǎo)愈傷組織期間不需要光照，后續(xù)培養(yǎng)需要適當(dāng)?shù)墓庹誅.一般先誘導(dǎo)根的形成，再轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基上13、下列敘述中錯誤的是（）A.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出B.細(xì)胞代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性C.在pH和溫度相同時加酶洗衣粉的洗滌效果好于普通洗衣粉D.透明帶反應(yīng)是防止多精入卵的第一道屏障14、下列關(guān)于微生物發(fā)酵的敘述，錯誤的是（）A.制備培養(yǎng)基過程中，需要在滅菌后進(jìn)行pH的調(diào)節(jié)B.制作果酒時適當(dāng)加大接種量可以提高發(fā)酵速率，抑制雜菌生長C.現(xiàn)代發(fā)酵工程選育出性狀優(yōu)良的菌種后即可進(jìn)行發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵D.醋酸菌能將乙醇變成乙醛而后變?yōu)橐宜幔氏奶扉_瓶后的紅酒容易變酸評卷人得分三、填空題(共8題，共16分)15、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？____________________________16、功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中______部位的兩個核苷酸之間的______斷開，因此具有______。17、第三步：將目的基因?qū)隷_____18、來源：主要是從______中分離純化出來的。19、在____________的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開，這過程成為__________。20、95%的______________以使DNA析出，用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起的絲狀物的顏色是____________。獲取的絲狀物后加入到質(zhì)量濃度為______________mol/L濃度的NaCL溶液的試管中，使絲狀物重新溶解。21、請回答有關(guān)植物細(xì)胞工程的問題：

（1）在植物中，一些分化的細(xì)胞，經(jīng)過________的誘導(dǎo)，可以脫分化失去其__________而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞。

（2）胡蘿卜的組織培養(yǎng)中，將接種后的胡蘿卜組織塊，放在恒溫_________（填：“光照”或“黑暗”）條件下培養(yǎng)。一段時間后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到_________培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）在植物組織培養(yǎng)過程中，由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到__________的影響而產(chǎn)生突變。為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將種子播種在含_____的培養(yǎng)基上，獲得所需個體。22、科學(xué)家采用定點(diǎn)誘變的方法構(gòu)建T4溶菌酶的新蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)其中一種新蛋白質(zhì)的第9和第164位氨基酸殘基被轉(zhuǎn)換為半胱氨酸殘基，并形成一個二硫鍵。這種新蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性會有什么變化？這項(xiàng)技術(shù)的要點(diǎn)是什么？_________評卷人得分四、判斷題(共2題，共4分)23、植物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是植物細(xì)胞的全能性。()A.正確B.錯誤24、我國對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的方針是研究上要大膽，堅(jiān)持自主創(chuàng)新；推廣上要慎重，做到確保安全；管理上要嚴(yán)格，堅(jiān)持依法監(jiān)管。（選擇性必修3P104）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共28分)25、丙肝病毒引起的丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化；部分患者可能發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。為研制丙肝病毒的單克隆抗體，某研究者以小鼠為實(shí)驗(yàn)材料設(shè)計了以下實(shí)驗(yàn)流程。回答下列問題：

(1)為使單細(xì)胞懸液中的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的抗體中一定含有能與丙肝病毒結(jié)合的抗體，需要進(jìn)行的操作是______。融合之前的兩種細(xì)胞中，能通過動物細(xì)胞培養(yǎng)大量增加數(shù)量的是____

(2)誘導(dǎo)細(xì)跑融合時利用的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶，能夠與細(xì)胞膜上的______（填化學(xué)本質(zhì)）發(fā)生作用，使得細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的______重新排布，細(xì)胞發(fā)生融合。篩選1利用______進(jìn)行篩選，而篩選2通過多次的_______來完成。

(3)得到大量丙肝病毒單克隆抗體的方法之一是將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，接入培養(yǎng)液中雜交瘤細(xì)胞的量是單克隆抗體產(chǎn)量的重要影響因素之一，為探究一定培養(yǎng)液中接種雜交瘤細(xì)胞的最佳數(shù)量，實(shí)驗(yàn)思路為_______。26、科研人員進(jìn)行了土壤中某種固氮菌的分離和純化培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)流程如圖1所示。農(nóng)藥；除草劑的長期使用，會使土壤受到嚴(yán)重污染。某科研小組為篩選能分解除草劑草甘膦的微生物，其流程示意圖如圖2所示?；卮鹣铝袉栴}：

(1)圖1中，“？”處是__________，純化培養(yǎng)時采用的接種方法是_______________，該方法可用于菌落數(shù)的統(tǒng)計，原因是_________________________。

(2)圖1中純化培養(yǎng)所利用的培養(yǎng)基在營養(yǎng)成分和物理性質(zhì)上的特點(diǎn)分別是____________________，圖1和圖2中的兩個培養(yǎng)基在用途方面的共同點(diǎn)是____________________。

(3)圖2中的接種方法需要連續(xù)劃線，且除第一次劃線外，后面的每一次劃線都要從上一次劃線的末端開始，目的是_________________。結(jié)果有的菌落周圍有透明圈而有的沒有，原因是________________。27、T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子；可通過污染飼料引起畜禽中毒反應(yīng)。CYP3A是豬體內(nèi)降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)水平升高。

(1)T-2毒素是霉菌的_____（選填“初級”或“次級”）代謝產(chǎn)物，主要以_____方式進(jìn)入豬細(xì)胞。

(2)B1和B2是CYP3A基因啟動子上游的兩個調(diào)控序列，為研究T-2毒素誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)的機(jī)理，研究者首先將不同調(diào)控序列分別和CYP3A基因啟動子及熒光素酶基因（LUC基因）連接構(gòu)建表達(dá)載體，再分別導(dǎo)入豬肝細(xì)胞，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入_____，適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)；24h后檢測LUC酶活性，計算啟動子活性相對值，結(jié)果如圖1所示。據(jù)圖可知，B1和B2調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件，理由是_____。

(3)研究表明NF-Y和Sp1兩種蛋白均參與T-2毒素對CYP3A的誘導(dǎo)；B2是Spl的結(jié)合位點(diǎn)。研究者推測，NF-Y通過與B1結(jié)合，與Sp1共同調(diào)控CYP3A基因的表達(dá)。

①為證明Bl是NF-Y的結(jié)合位點(diǎn)，研究者依據(jù)B1序列制備了野生型和突變型探針，分別與豬肝細(xì)胞核蛋白提取物混合，實(shí)驗(yàn)分組及結(jié)果如圖2．據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測，第4組出現(xiàn)阻滯帶的原因是_____，進(jìn)而推測第5組結(jié)果產(chǎn)生的原因是_____。

②研究者設(shè)計實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了NF-Y和Spl通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，實(shí)驗(yàn)設(shè)計思路是：增大或縮小B1和B2兩者之間的距離，檢測CYP3A基因的啟動子活性。據(jù)此分析，實(shí)驗(yàn)假設(shè)是_____。28、微生物因具有體積小；易培養(yǎng)，繁殖快，且自身遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)簡單，經(jīng)人工處理或自然突變可獲得新性狀等特點(diǎn)，在發(fā)酵工程中應(yīng)用廣泛?；卮鹣铝袉栴}：

(1)大腸桿菌是發(fā)酵工程中應(yīng)用較為廣泛的菌種之一。培養(yǎng)大腸桿菌時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至____性，再利用_________________法滅菌后進(jìn)行接種。

(2)在發(fā)酵工程中，常常需要對菌種數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計。相對真菌來說，細(xì)菌的體積較小，因此對細(xì)菌數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計時，適合使用_________________（填“細(xì)菌計數(shù)板”或“血細(xì)胞計數(shù)板”）進(jìn)行計數(shù)，且統(tǒng)計的細(xì)菌數(shù)目往往比實(shí)際活菌數(shù)目_________________（填“多”或“少”）。

(3)人工處理或自然突變往往會使菌種成為營養(yǎng)缺陷型菌株；現(xiàn)欲設(shè)計實(shí)驗(yàn)證明野生型大腸桿菌經(jīng)紫外線照射后，可獲得組氨酸缺陷型突變菌株，請簡單描述實(shí)驗(yàn)思路并預(yù)計實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

實(shí)驗(yàn)思路：_____________________________；

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：_____________________________。評卷人得分六、綜合題(共4題，共32分)29、結(jié)球甘藍(lán)是我國重要的蔬菜品種；危害甘藍(lán)生長的主要是菜青蟲；小菜蛾等鱗翅目害蟲。為使結(jié)球甘藍(lán)獲得抗蟲性狀，科研人員將蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞中獲得的BT毒蛋白基因?qū)虢Y(jié)球甘藍(lán)。

（1）轉(zhuǎn)運(yùn)肽能引導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)中合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入葉綠體。為構(gòu)建BT毒蛋白基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的融合基因（見下圖）；需用限制酶_____處理相關(guān)的DNA片段，再用_____連接。

注：E1；E2、E3、E4為限制酶。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)將融合基因插入Ti質(zhì)粒的_____區(qū)。用Ca2+處理農(nóng)桿菌后獲得_____細(xì)胞；將其與基因表達(dá)載體混合完成轉(zhuǎn)化后，在添加_____的培養(yǎng)基中，經(jīng)篩選1得到含基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。

（注：GUS基因表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)染色能由無色變成藍(lán)色）

（3）鑒定愈傷組織中是否含有目的基因；可以用分子水平的_____方法，還可以通過肉眼觀察選擇_____的愈傷組織，以確定目的基因是否_____。兩次篩選后得到的轉(zhuǎn)基因愈傷組織經(jīng)過細(xì)胞的再分化過程，獲得轉(zhuǎn)基因水稻。

（4）為獲得具有抗性的轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)；還需要進(jìn)行個體水平的檢測。請?jiān)O(shè)計實(shí)驗(yàn)方案：

_____

（5）轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)的抗蟲效果逐年下降；以下_____措施能減緩害蟲對BT毒蛋白產(chǎn)生抗藥性。

a.將轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)與非轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)間隔種植。

b.同時轉(zhuǎn)入兩種或兩種以上不同機(jī)理的殺蟲基因。

c.大量使用蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑。

（6）種植轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)的過程中，在生態(tài)安全方面可能會出現(xiàn)什么問題？（答出一點(diǎn)）_____30、α1－抗胰蛋白酶缺乏癥是一種在北美較為常見的單基因遺傳??；患者成年后會出現(xiàn)肺氣腫及其他疾病，嚴(yán)重者甚至死亡。對于該致病患者?？刹捎米⑸淙甩?－抗胰蛋白酶來緩解癥狀。據(jù)此回答：

（1）圖1表示獲取人α1－抗胰蛋白酶基因的兩種方法；請回答下列問題：

①a過程是在____________酶的作用下完成的，該酶的作用特點(diǎn)是__________________。

②c過程需要的原料是______________________。

③要確定獲得的基因是否是所需的目的基因，可以從分子水平上利用_______技術(shù)檢測該基因的堿基序列。

（2）利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將控制該酶合成的基因?qū)胙虻氖芫?；最終培育出能在乳腺細(xì)胞表達(dá)人α1－抗胰蛋白酶的轉(zhuǎn)基因羊，從而更易獲得這種酶，簡要過程如圖2所示。

①獲得目的基因后，常利用PCR技術(shù)在體外將其大量擴(kuò)增，其過程是高溫變性解旋，低溫復(fù)性______________，然后中溫延伸，在相關(guān)酶的作用下從___________________進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。

②載體上綠色熒光蛋白（GEP）基因的作用是便于__________________?；虮磉_(dá)載體d，除圖中的標(biāo)示部分外，還必須含有_______________。

（3）在基因工程的基礎(chǔ)上發(fā)展起了蛋白質(zhì)工程，蛋白質(zhì)工程目標(biāo)是________________。31、器官移植中供體器官的嚴(yán)重缺乏一直是困擾需要器官移植患者的問題?？茖W(xué)家們培育出了猴鼠嵌合體——“猴鼠”；期待成果可用于人體角膜等器官的移植。請據(jù)圖回答下列問題：

(1)①培養(yǎng)過程中為了防止細(xì)胞代謝積累物對細(xì)胞自身造成危害，需要的操作是__________。

(2)常采用__________激素處理雌鼠，使其排出更多的卵子，然后從輸卵管中沖取卵子，直接與_________的精子在體外受精。

(3)實(shí)驗(yàn)中③和④要同時注射激素在操作上稱為_______，將囊胚植入受體母鼠體內(nèi)的④過程運(yùn)用了_________技術(shù)。

(4)囊胚已出現(xiàn)細(xì)胞分化，應(yīng)將猴子的皮膚干細(xì)胞注射到小鼠囊胚的_______部位，才能伴隨其發(fā)育成某種組織。若想進(jìn)一步提高胚胎的利用率，可對圖中囊胚進(jìn)行_________。

(5)胚胎工程包括胚胎移植，胚胎分割、_________和_____________。32、學(xué)習(xí)以下材料；回答（1）~（5）題。

基因治療在探索中前進(jìn)。20世紀(jì)60年代；科學(xué)家首次提出基因治療的概念，為基因治療的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。1990年，研究者用逆轉(zhuǎn)錄病毒將正確編碼腺苷脫氨酶的基因?qū)腚x體培養(yǎng)的患者淋巴細(xì)胞，再將細(xì)胞輸回患者體內(nèi)，恢復(fù)了患者體內(nèi)腺苷脫氨酶的合成。此次成功是基因治療史上的重要里程碑。此后，科學(xué)家開展了大量的基因治療試驗(yàn)，一些基因治療產(chǎn)品陸續(xù)獲得批準(zhǔn)上市。近年來，以CRISPR/Cas9為代表的基因編輯技術(shù)的興起讓基因治療步入了全新的起點(diǎn)。利用基因編輯技術(shù)，可在體內(nèi)或體外對靶基因進(jìn)行精準(zhǔn)編輯，比如將目的基因插入到指定位點(diǎn)，或敲除特定基因；通過單堿基編輯技術(shù)，可對靶位點(diǎn)進(jìn)行精準(zhǔn)的堿基編輯，從而糾正原來的基因突變。目前，基于基因編輯技術(shù)的臨床試驗(yàn)顯示了良好的治療效果?；蛑委熢谌〉梅e極進(jìn)展的同時，也面臨著諸多問題，如安全性；倫理問題等。目前基因治療常用的載體是病毒載體，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺相關(guān)病毒（AAV）等。逆轉(zhuǎn)錄病毒可整合外源基因到宿主基因組而使產(chǎn)物長期穩(wěn)定表達(dá)，但這種隨機(jī)整合的特性會帶來潛在的安全隱患。病毒有一定的免疫原性，可激活機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，導(dǎo)致基因治療失敗，甚至危及生命。2017年，首例利用AAV載體攜帶凝血因子基因?qū)ρ巡〉呐R床治療以失敗告終，就與載體輸注后AAV病毒衣殼引起的免疫應(yīng)答有關(guān)。基因編輯的脫靶效應(yīng)也不容忽視，一旦脫靶效應(yīng)發(fā)生在重要功能基因上會造成不必要的安全風(fēng)險。

經(jīng)過幾十年的螺旋式發(fā)展,基因治療在遺傳病和獲得性疾病（如惡性腫瘤；心血管疾病和感染性疾病等）的治療上均取得了令人興奮的臨床試驗(yàn)進(jìn)展?；蛑委煹倪M(jìn)步為許多疾病的治療提供了新的思路,也讓無數(shù)患者看到了希望。不久的將來；基因治療或?qū)⒊蔀槿祟惣膊≈委煵豢苫蛉钡囊徊糠帧?/p>

(1)基因治療是在________水平進(jìn)行操作；以實(shí)現(xiàn)緩解或治愈疾病的一種治療手段。

(2)將AAV載體輸注自身存在抗AAV抗體的患者，抗體會________而降低載體的遞送效果，AAV病毒衣殼會引起機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)而使________被破壞而失效。

(3)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可將外源基因整合到宿主基因組，這種隨機(jī)整合會帶來潛在的安全隱患，原因是________。

(4)CCR5是HIV感染人體細(xì)胞不可缺少的關(guān)鍵受體?？蒲腥藛T以CCR5為靶基因，利用基因治療手段治療艾滋病，取得積極效果，該治療的思路是________。

(5)對基因治療的認(rèn)識或態(tài)度，正確的是（）。A．所有的基因治療策略都是用正?；蛉ヌ鎿Q突變基因B．遺傳病是由于遺傳物質(zhì)改變所致，基因治療只適用于治療遺傳病C．對于體外無法培養(yǎng)的細(xì)胞，可通過載體直接將基因?qū)牖颊唧w內(nèi)細(xì)胞進(jìn)行治療D．基因治療具有難以預(yù)料的潛在安全隱患，不應(yīng)該繼續(xù)研究和發(fā)展參考答案一、選擇題(共6題，共12分)1、C【分析】【分析】

微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要包括碳源；氮源、水和無機(jī)鹽等；配置培養(yǎng)基時一般要考慮微生物的營養(yǎng)物質(zhì)是否全面、各種營養(yǎng)物質(zhì)的比例及pH等因素。

【詳解】

A；培養(yǎng)基不一定都含有碳源、氮源；如培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基中不需加入碳源，分離自生固氮菌的培養(yǎng)基中，不需加入氮源，A錯誤；

B；操作者的衣著和手只能進(jìn)行消毒；不能滅菌，要考慮物體的耐受程度，B錯誤；

C；對于微生物的生長來說；在營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)充分的基礎(chǔ)上，pH適宜、滲透壓濃度適宜及適宜的氧氣對于其生長繁殖都是有利的，C正確；

D；使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌；以免污染環(huán)境，D錯誤。

故選C。

【點(diǎn)睛】2、D【分析】【分析】

由題意知：農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的基因被剪切后整合到植物的染色體上；因?yàn)槠滟|(zhì)粒上的細(xì)胞分裂素和生長素基因，誘發(fā)細(xì)胞異常生長和分裂，產(chǎn)生了過量的細(xì)胞分裂素和生長素，導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖形成植物腫瘤。

【詳解】

A；植物腫瘤的形成與生長素基因和細(xì)胞分裂素兩個基因在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)有關(guān)；A錯誤；

B；清除植物腫瘤組織中的農(nóng)桿菌后；還有Ti質(zhì)粒整合到植物DNA上的，通過基因的復(fù)制表達(dá)也會導(dǎo)致腫瘤繼續(xù)生長，B錯誤；

C；T-DNA在轉(zhuǎn)移的過程中需要保留左邊界和右邊界序列；轉(zhuǎn)移結(jié)束后需要將左邊界和右邊界序列進(jìn)行剪切，C錯誤；

D；根據(jù)題干信息“冠癭堿是農(nóng)桿菌生命活動必需的有機(jī)物質(zhì)；而植物自身不能合成和利用”可知，去除冠癭堿合成基因，農(nóng)桿菌在被感染植物體內(nèi)不能大量繁殖，D正確。

故選D。

【點(diǎn)睛】3、B【分析】【分析】

單克隆抗體的制備涉及細(xì)胞融合；細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞篩選；從題干信息圖可看出，過程1代表的是注射特異性抗原使小鼠免疫，從而獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞；過程2是將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的過程；過程3是克隆培養(yǎng)篩選后的陽性細(xì)胞，一共需要進(jìn)行兩次，最終獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，此后在培養(yǎng)基或小鼠腹腔中培養(yǎng)。

【詳解】

A；圖中過程1是通過注射抗原或抗原蛋白來獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞；A正確；

B；過程2是促進(jìn)細(xì)胞融合的過程；其中電融合技術(shù)是用低壓電流擊穿細(xì)胞膜促使細(xì)胞融合，B錯誤；

C；c細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞；有三種，分別是骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞-B淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞-B淋巴細(xì)胞，其中骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞都有兩個染色體組，融合后的細(xì)胞都含有4個染色體組，其中e細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞，C正確；

D；過程3是專一抗體檢測及克隆培養(yǎng)篩選后獲得陽性細(xì)胞；該過程需要多次進(jìn)行，D正確。

故選B。4、B【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題包括：（1）食物安全：滯后效應(yīng)；出現(xiàn)過敏源、食物的營養(yǎng)成分改變等。（2）生物安全：基因擴(kuò)散導(dǎo)致對生物多樣性的威脅。（3）環(huán)境安全：對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性及環(huán)境的影響。

【詳解】

A；轉(zhuǎn)基因技術(shù)是按照人們的意愿對生物進(jìn)行設(shè)計的；但是也存在負(fù)面影響，A錯誤；

B；轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對于解決糧食、能源等問題起了積極作用；同時也存在著一定風(fēng)險，如可能造成食物的營養(yǎng)成分發(fā)生改變等，B正確；

C；克隆技術(shù)如果被不當(dāng)利用將給社會造成災(zāi)難；應(yīng)禁止生殖性克隆，但是不反對治療性克隆，如治療性克隆可用于治療白血病等，C錯誤；

D；轉(zhuǎn)基因技術(shù)如果被恐怖分子利用將可能導(dǎo)致人類滅絕；但不應(yīng)該停止轉(zhuǎn)基因相關(guān)研究，應(yīng)加大監(jiān)督和管理力度，D錯誤。

故選B。5、C【分析】【分析】

1；PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱；指在引物指導(dǎo)下由酶催化的對特定模板（克隆或基因組DNA）的擴(kuò)增反應(yīng)，是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程，在體外特異性擴(kuò)增DNA片段的一種技術(shù)，在分子生物學(xué)中有廣泛的應(yīng)用。

2；伴性遺傳是由性染色體上的基因所控制的遺傳；若就一對相對性狀而言，則為一對等位基因控制的一對相對性狀的遺傳，伴性遺傳遵循基因的分離定律。

【詳解】

A；分析圖甲可知；1號、2號都正常，而3號患病，說明該病為隱性基因致病。再分析圖乙可知，3號個體電泳結(jié)果只有M1片段，2號只有M2片段，據(jù)此分析，可以判斷致病基因是位于X染色體上，A錯誤；

B；PCR時；引物設(shè)計應(yīng)該在基因的上游和下游，如果基因A和基因a的上游和下游的序列部分相同，則引物相同，否則不同，所以利用PCR技術(shù)擴(kuò)增含A和a兩種基因的DNA片段時，可能要設(shè)計兩對引物或者一對引物，B錯誤；

C、根據(jù)題干“圖甲是人類某單基因遺傳病的系譜圖，相關(guān)基因?yàn)锳/a，在人群中該致病基因的頻率為1/100”，即Xa的基因頻率為1/100，則XA的基因頻率為99/100；人群中基因型XAXA頻率=（99/100）2，基因型XAXa頻率=2×（1/100）×（99/100），則普通人群的正常女性中攜帶者的基因型頻率=XAXa/（XAXA+XAXa）=2/101。故3號個體與一表型正常的女性婚配，即為XaY×2/101XAXa；則理論上后代患該病的概率=1/2×2/101=1/101，C正確；

D、分析圖乙，6號有M1和M2片段，則6號的基因型應(yīng)為XAXa；所以6號應(yīng)為女性，且表型正常；則6號的M1片段只能來自4號，6號的M2片段只能來自5號，M2片段不可能來自1號或2號，D錯誤。

故選C。6、C【分析】【分析】

分析題圖：圖中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建；②表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。

【詳解】

A；過程①構(gòu)建基因表達(dá)載體；需用限制酶切割目的基因和載體，并用DNA連接酶連接，該過程無需DNA聚合酶參與，A錯誤；

B；終止子的作用是終止轉(zhuǎn)錄過程；B錯誤；

C、檢測重組細(xì)胞是否表達(dá)出rhEPO；可利用抗原—抗體特異性結(jié)合的原理，采用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測，C正確；

D；采用細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)EPO成本比較高；可以采用乳腺生物反應(yīng)器，將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入雌性哺乳動物受精卵中，使EPO基因在轉(zhuǎn)基因動物的乳腺細(xì)胞中表達(dá)，通過分泌的乳汁來生產(chǎn)EPO，目前還不能直接用高度分化的體細(xì)胞克隆哺乳動物，D錯誤。

故選C。二、多選題(共8題，共16分)7、B:C【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）．生物安全：①轉(zhuǎn)基因植物擴(kuò)散到種植區(qū)外變成野生種或雜草；②轉(zhuǎn)基因植物競爭能力強(qiáng)，可能成為“入侵的外來物種”，③轉(zhuǎn)基因植物的外源基因與細(xì)菌或病毒雜交，重組出有害的病原體，④可能使雜草成為有抗除草劑基因的“超級雜草”。

【詳解】

A；誘導(dǎo)動物細(xì)胞可用滅活的病毒；A錯誤；

B；我國對農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物實(shí)施標(biāo)識制度；比如由轉(zhuǎn)基因大豆加工制成的大豆油，標(biāo)注為“本產(chǎn)品加工原料中含有轉(zhuǎn)基因大豆，但本產(chǎn)品已不再含有轉(zhuǎn)基因成分”，其相關(guān)的生物學(xué)依據(jù)是大豆油屬于脂肪，不含目的基因編碼的蛋白質(zhì)，B正確；

C；生物武器種類包括致病菌、病毒、生化毒劑以及經(jīng)過基因重組的致病菌等；C正確；

D；轉(zhuǎn)基因物種的無序迅速擴(kuò)散可能變成野生種類或變成入侵的外來物種；威脅生態(tài)系統(tǒng)中其他生物的生存，甚至?xí)茐纳锏亩鄻有?，D錯誤。

故選BC。8、A:D【分析】【分析】

培養(yǎng)基的概念及營養(yǎng)構(gòu)成。

（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求；配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

（2）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水；碳源、氮源、無機(jī)鹽；此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件。

【詳解】

A；平板上不含任何生長因子；若倒成平板后直接培養(yǎng)，出現(xiàn)菌落說明已被雜菌感染，因?yàn)樵撌葻峋荒茉谌狈ιL因子的培養(yǎng)基中生長，A正確；

B；制備平板時；先滅菌再倒平板，B錯誤；

C；圖中菌落生活在乙丙區(qū)域之間；說明同時需要乙和丙，C錯誤；

D；不同菌種所需生長因子不同；可利用生長圖形法篩選菌種，D正確。

故選AD。9、A:D【分析】【分析】

分析題圖：圖中質(zhì)粒和外源DNA都含有限制酶A；B、C的識別序列和切割位點(diǎn)；若用酶A切割會同時破壞質(zhì)粒上的兩個抗性基因。

【詳解】

A；質(zhì)粒中含有2個酶A的酶切位點(diǎn)；所以切割后會產(chǎn)生4個游離的磷酸基團(tuán)，A正確；

B；如果用酶A和酶C同時切割質(zhì)粒；會破壞質(zhì)粒的標(biāo)記基因，B錯誤；

C；根據(jù)B項(xiàng)分析；需要用酶B和酶C切割質(zhì)粒和目的基因，導(dǎo)致四環(huán)素抗性基因被破壞，所以不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長，C錯誤；

D；若用酶B和酶C切割；產(chǎn)生不同的黏性末端，可避免質(zhì)粒自身環(huán)化，D正確。

故選AD。10、C:D【分析】【分析】

實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)基按照功能劃分；可以分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。

【詳解】

A、KH2PO4和Na2HPO4可為尿素分解菌提供無機(jī)鹽，H2PO4-和HPO42-又是一種調(diào)節(jié)pH的緩沖對；A正確；

B；培養(yǎng)基中除了尿素?zé)o其他含氮物質(zhì)；只有尿素分解菌能通過分解尿素進(jìn)行生長繁殖，故尿素既能為尿素分解菌提供氮源，又可對培養(yǎng)基中的微生物起選擇作用，B正確；

C；瓊脂不能被微生物利用；只能充當(dāng)凝固劑，C錯誤；

D、表中的H2O為蒸餾水；起定容作用，蒸餾水不能對培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋，稀釋所用的溶劑應(yīng)該是無菌水，D錯誤。

故選CD。11、B:D【分析】【分析】

參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉；酵母、曲霉、毛霉等多種；其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌，常見于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具有發(fā)達(dá)的白色菌絲。毛酶等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。

【詳解】

A；果酒的制作原理是酵母菌的無氧呼吸產(chǎn)生酒精；酵母菌屬于兼性厭氧生物，在有氧條件下大量繁殖，A正確；

B；制作果醋需要醋酸菌；它是一種好氧的微生物，可將葡萄中的糖（或乙醇）分解為乙酸，B錯誤；

C；多種微生物參與了腐乳的制作；如酵母菌、毛霉、曲霉等，其中起主要作用的是毛霉，C正確；

D；制作泡菜利用的乳酸菌是一種厭氧微生物；可以通過無氧呼吸產(chǎn)生乳酸，D錯誤。

故選BD。12、B:C【分析】【分析】

植物組織培養(yǎng)的過程為：離體的植物組織；器官或細(xì)胞經(jīng)過脫分化（避光）形成愈傷組織；愈傷組織經(jīng)過再分化（需光）過程形成胚狀體，進(jìn)一步發(fā)育形成植株。

【詳解】

A；無菌技術(shù)包括消毒和滅菌；植物組織培養(yǎng)需要無菌操作，防止雜菌污染，所用器械需滅菌，實(shí)驗(yàn)人員和外植體需消毒操作，A錯誤；

B；菊花莖段在洗滌靈稀釋液浸泡2min；用流水沖洗干凈后，在70%酒精中消毒30s，再用流水沖洗后置于10%次氯酸鈉溶液中消毒10min，然后用無菌水多次沖洗，B正確；

C；誘導(dǎo)培養(yǎng)愈傷組織期間一般不需要照光；在后續(xù)培養(yǎng)過程中，每日需要給予光照，目的是誘導(dǎo)葉綠素的形成，進(jìn)一步形成葉綠體進(jìn)行光合作用，C正確；

D；誘導(dǎo)愈傷組織形成試管苗的過程；需要將生長良好的愈份組織先轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基上，長出芽后，再將其轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基上，進(jìn)一步誘導(dǎo)生根，D錯誤。

故選BC。13、A:B:C【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液；但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色。

2；植物組織培養(yǎng)依據(jù)的原理為植物體細(xì)胞的全能性；即已經(jīng)分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整植株的潛能；培養(yǎng)過程的順序是離體植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）脫分化形成愈傷組織，再分化形成根、芽等器官進(jìn)而形成新的植物體。

【詳解】

A；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；當(dāng)NaCl溶液的濃度為0.14mol/L時，DNA溶解度最小，因此改變NaCl溶液的濃度既能使DNA溶解也能使其析出，A錯誤；

B；細(xì)胞代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)利用的是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；原理是細(xì)胞增殖，未體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，B錯誤；

C；相同時加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉酶的催化作用需適宜的pH值；pH不適宜時，加酶洗衣粉洗滌效果不一定好于普通洗衣粉，C錯誤；

D；精子與卵子相遇后；會發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放頂體酶，透明帶反應(yīng)和卵黃膜封閉作用是阻止其他精子入卵的兩道屏障，其中透明帶反應(yīng)是防止多精入卵的第一道屏障，D正確。

故選ABC。14、A:C【分析】【分析】

果酒的制作利用酵母菌的無氧呼吸產(chǎn)生酒精；醋酸菌在糖源；氧氣充足時；直接將葡萄糖氧化為醋酸；在糖源不足、氧氣充足時，可利用酒精，即乙醇作為呼吸底物，先將乙醇變成乙醛而后變?yōu)橐宜幔ù姿幔?/p>

【詳解】

A；制備培養(yǎng)基過程中；pH的調(diào)節(jié)應(yīng)在滅菌前進(jìn)行，A錯誤；

B；制作果酒時適當(dāng)加大接種量；酵母菌菌體的基數(shù)增大，可使其快速形成優(yōu)勢菌群，抑制雜菌生長，提高發(fā)酵速率，B正確；

C；現(xiàn)代發(fā)酵工程選育出性狀優(yōu)良的菌種后；為滿足發(fā)酵過程的需要，還要對菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，之后才可進(jìn)行發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵，C錯誤；

D；醋酸菌能夠氧化酒精產(chǎn)生醋酸；造成葡萄酒的敗壞。首先，乙醇被氧化生成乙醛，然后乙醛再被氧化生成醋酸（乙酸），故夏天開瓶后的紅酒容易變酸，D正確。

故選AC。三、填空題(共8題，共16分)15、略

【解析】避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種16、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】特定磷酸二酯鍵特異性17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】受體細(xì)胞18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】原核生物19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】80—100℃變性20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】冷酒精白色221、略

【分析】【分析】

植物組織培養(yǎng)的條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度；適時的光照、pH和無菌環(huán)境等）；②一定的營養(yǎng)（無機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例；特別是生長素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要，被稱為“激素杠桿”。

【詳解】

（1）在植物中；一些分化的細(xì)胞，經(jīng)過激素的誘導(dǎo)，可以脫分化失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞。

（2）胡蘿卜的組織培養(yǎng)中；將接種后的胡蘿卜組織塊，放在恒溫黑暗條件下培養(yǎng)。一段時間后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）在植物組織培養(yǎng)過程中；由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而產(chǎn)生突變。為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將種子播種在含一定濃度的鹽的培養(yǎng)基上，獲得所需個體。

【點(diǎn)睛】

本題考查植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記植物組織培養(yǎng)的過程、原理及條件，掌握植物組織培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確分析，屬于考綱識記和理解層次的考查?！窘馕觥竣?激素②.特有的結(jié)構(gòu)和功能③.黑暗④.分化⑤.培養(yǎng)條件和外界壓力⑥.一定濃度的鹽22、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)形成二硫鍵，使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，因此T4溶菌酶的熱穩(wěn)定性會提高。這項(xiàng)技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，其步驟為從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)?！窘馕觥繒岣逿4溶菌酶的耐熱性。這項(xiàng)技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，該技術(shù)的要點(diǎn)是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)。四、判斷題(共2題，共4分)23、B【分析】【詳解】

植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)，最終獲得了完整的植株，體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性，而植物細(xì)胞培養(yǎng)的目的使獲得大量的植物細(xì)胞，從而獲得次生代謝物，利用的原理是細(xì)胞增殖，故錯誤。24、A【分析】【詳解】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）；對待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利弊，正確的做法應(yīng)該是趨利避害，不能因噎廢食。我國對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的方針是一貫的、明確的，就是研究上要大膽，堅(jiān)持自主創(chuàng)新；推廣上要慎重，做到確保安全；管理上要嚴(yán)格，堅(jiān)持依法監(jiān)管。

該說法正確。五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共28分)25、略

【分析】【分析】

單克隆抗體的制備過程：（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原；然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。（2）獲得雜交瘤細(xì)胞：①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

【詳解】

（1）用丙肝病毒對小鼠進(jìn)行免疫后；小鼠的B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗丙肝病毒的抗體，從該小鼠的脾細(xì)胞中能獲得產(chǎn)生該抗體的B淋巴細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖，而骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，故融合之前的兩種細(xì)胞中，能通過動物細(xì)胞培養(yǎng)大量增加數(shù)量的是骨髓瘤細(xì)胞。

（2）誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶；能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使得細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜具有一定的流動性，在滅活病毒的誘導(dǎo)下，其上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜會發(fā)生融合。細(xì)胞融合后產(chǎn)生的融合細(xì)胞有B細(xì)胞間的融合；骨髓瘤細(xì)胞間的融合及B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合，會產(chǎn)生三類細(xì)胞。篩選1是指利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選得到雜交瘤細(xì)胞。由于雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體除了抗丙肝病毒的抗體外，還可能有其他類型，故篩選2是指進(jìn)行多次的克隆化培養(yǎng)和專一性抗體檢測，以得到能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（3）實(shí)驗(yàn)的自變量是培養(yǎng)液中接種雜交瘤細(xì)胞的數(shù)量，因變量為一定時間內(nèi)抗丙肝病毒抗體的數(shù)量，除自變量外，其他條件要相同且適宜。所以實(shí)驗(yàn)思路為：將適宜的動物細(xì)胞培養(yǎng)液分為體積相同的幾組（可自設(shè)組數(shù)）。在不同組別中接種不同量的能產(chǎn)生丙肝病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，一定時間后測定培養(yǎng)液中的抗體含量?！窘馕觥?1)給小鼠注射丙肝病毒使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)骨髓瘤細(xì)胞。

(2)糖蛋白蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。

(3)將適宜的動物細(xì)胞培養(yǎng)液分為體積相同的幾組（可自設(shè)組數(shù)）。在不同組別中接種不同量的能產(chǎn)生丙肝病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，一定時間后測定培養(yǎng)液中的抗體含量26、略

【分析】【分析】

將微生物接種到固體培養(yǎng)基常用稀釋涂布平板法；接種前先要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，再將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在一定的稀釋度的菌液里，聚集在一起的微生物能分散成單個細(xì)胞，在適宜的條件下培養(yǎng)讓菌體進(jìn)行繁殖，能夠在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。稀釋涂布平板操作：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡冷卻8-10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基上，涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。

【詳解】

（1）圖1中是將土壤懸浮液取1mL；加入9mL無菌水進(jìn)行稀釋10倍。圖1中微生物接種方式為稀釋涂布平板法。該方法可以用于對菌落數(shù)進(jìn)行計數(shù)，因?yàn)楫?dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面可以獲得由單個細(xì)菌繁殖而成的單菌落，通過統(tǒng)計菌落的數(shù)量可以推測所涂菌液中細(xì)菌的數(shù)量。

（2）土壤中某種固氮菌的分離和純化培養(yǎng)；培養(yǎng)基需要采用固體培養(yǎng)基，才可用于稀釋涂布平板法，且因?yàn)槭欠蛛x固氮菌，所以培養(yǎng)基中不加氮源。圖1和圖2中的兩個培養(yǎng)基都是用于從多種微生物中分離目的菌種。

（3）圖2中接種方法為平板劃線法，且除第一次劃線外，后面的每一次劃線都要從上一次劃線的末端開始，目的是將聚集的菌種逐步稀釋，分散到培養(yǎng)基表面，最終達(dá)到分離的效果。圖2中培養(yǎng)基時為了篩選出能分解除草劑草甘膦的微生物，所以有的菌落中的細(xì)菌能分解草甘膦，菌落周圍因?yàn)椴莞熟⒈环纸舛霈F(xiàn)透明圈，有的菌落中的細(xì)菌不能分解草甘膦，菌落周圍不能形成透明圈?！窘馕觥?1)無菌水稀釋涂布平板法當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時；培養(yǎng)基表面可以獲得由單個細(xì)菌繁殖而成的單菌落，通過統(tǒng)計菌落的數(shù)量可以推測所涂菌液中細(xì)菌的數(shù)量。

(2)沒有氮源；屬于固體培養(yǎng)基從多種微生物中分離出目的菌。

(3)將聚集的菌種逐步稀釋，分散到培養(yǎng)基表面，最終達(dá)到分離的效果有的菌落中的細(xì)菌能分解草甘膦，菌落周圍因?yàn)椴莞熟⒈环纸舛霈F(xiàn)透明圈，有的菌落中的細(xì)菌不能分解草甘膦，菌落周圍不能形成透明圈27、略

【分析】【分析】

圖1可知：T-2毒素是一種常見的菌素；CYP3A是降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)其表達(dá)水平升高，當(dāng)用兩種調(diào)控序列同時連接啟動子，啟動子的活性最高。

圖2可知：野生型探針能與NF-Y結(jié)合；突變型探針不能與NF-Y結(jié)合，NF-Y抗體一定能與NF-Y結(jié)合。

【詳解】

（1）初級代謝產(chǎn)物一般是霉菌生命活動所必需的，大多存在于細(xì)胞內(nèi)。次級代謝產(chǎn)物不是霉菌生命活動必需的，并且分泌到體外，故T-2毒素是霉菌的次級代謝產(chǎn)物。T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子，脂溶性小分子以自由擴(kuò)散的方式進(jìn)入細(xì)胞。

（2）實(shí)驗(yàn)的自變量是有無調(diào)控序列；根據(jù)單一變量原則，對照組的目的是為了排除無光變量的影響，除了沒有調(diào)控序列，其他處理和實(shí)驗(yàn)組相同，所以對照組和實(shí)驗(yàn)組豬肝細(xì)胞均導(dǎo)入含CYP3A基因啟動子及LUC基因的表達(dá)載體，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入加入等量T-2毒素，適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。從圖中信息可知，缺失兩個調(diào)控序列和對照組活性一致，缺失一個比對照組活性略強(qiáng)，兩個都存在活性最高，說明這兩個調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件。故缺失兩個調(diào)控序列或其中任一個，T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動子活性明顯增強(qiáng)。

（3）①實(shí)驗(yàn)的目的是要驗(yàn)證NF-Y能與B1結(jié)合；根據(jù)第2組和第3組結(jié)果，依據(jù)B1序列制備的NF-Y結(jié)合位點(diǎn)野生型探針能與NF-Y結(jié)合，根據(jù)第4組結(jié)果，突變型探針不能與NF-Y結(jié)合。第5組加入了NF-Y抗體，一定能與NF-Y結(jié)合。故可以解釋為：結(jié)合位點(diǎn)突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會競爭NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶。第5組，NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針；NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后。

②假設(shè)NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離，故增大或縮小B1和B2兩者之間的距離都會降低CYP3A基因的啟動子的活性。【解析】(1)次級自由擴(kuò)散。

(2)等量的T-2毒素缺失兩個調(diào)控序列或其中任一個；T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動子活性增強(qiáng)。

(3)結(jié)合位點(diǎn)突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會競爭NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶。NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針、NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后。NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離。28、略

【分析】【分析】

1；利用顯微鏡進(jìn)行直接計數(shù)；也是一種常用的、快速直觀的測定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。細(xì)菌計數(shù)板和血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)原理相同。血細(xì)胞計數(shù)板比細(xì)菌計數(shù)板厚，常用于相對較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計數(shù)。用細(xì)菌計數(shù)板可對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計數(shù)。

2；滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物；包括芽孢和孢子。濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌（壓力為100kPa、溫度為121℃、15~30min）；干熱滅菌：160~170℃熱空氣維持2~3h。耐高溫的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金屬用具等；灼燒滅菌：接種工具。接種過程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位。

【詳解】

（1）大腸桿菌是細(xì)菌；培養(yǎng)培養(yǎng)大腸桿菌時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，對培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。

（2）細(xì)菌計數(shù)板和血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)原理相同。血細(xì)胞計數(shù)板比細(xì)菌計數(shù)板厚；常用于相對較大的酵母菌細(xì)胞；霉菌孢子等的計數(shù)。用細(xì)菌計數(shù)板可對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計數(shù)。該方法統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和，所以統(tǒng)計的細(xì)菌數(shù)目往往比實(shí)際活菌數(shù)目多。

（3）本實(shí)驗(yàn)為了證明野生型大腸桿菌經(jīng)紫外線照射后；可獲得組氨酸缺陷型突變菌株，可將野生型大腸桿菌經(jīng)紫外線照射后接種于不含組氨酸的完全培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)一段時間后觀察大腸桿菌是否生長，如果在培養(yǎng)基上無大腸桿菌生長，說明野生型大腸桿菌經(jīng)紫外線照射后，獲得了組氨酸缺陷型突變菌株。具體實(shí)驗(yàn)思路及結(jié)果如下：

實(shí)驗(yàn)思路：使用稀釋涂布平板法將紫外線照射后的大腸桿菌接種于不含組氨酸的完全培養(yǎng)基上；標(biāo)記為甲組；使用稀釋涂布平板法將等量的野生型大腸桿菌接種于不含組氨酸的完全培養(yǎng)基上，標(biāo)記為乙組；將未接種的不含組氨酸的完全培養(yǎng)基標(biāo)記為丙組；將甲；乙、丙組培養(yǎng)基放于相同且適宜的環(huán)境中培養(yǎng)，一段時間后觀察并統(tǒng)計培養(yǎng)基上的菌落數(shù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：乙組培養(yǎng)基出現(xiàn)較多菌落；甲組培養(yǎng)基沒有出現(xiàn)菌落或出現(xiàn)菌落、但菌落數(shù)少于乙組；丙組培養(yǎng)基無菌落?！窘馕觥?1)中性或弱堿高壓蒸汽滅菌（或濕熱滅菌）

(2)細(xì)菌計數(shù)板多。

(3)使用稀釋涂布平板法將紫外線照射后的大腸桿菌接種于不含組氨酸的完全培養(yǎng)基上，標(biāo)記為甲組；使用稀釋涂布平板法將等量的野生型大腸桿菌接種于不含組氨酸的完全培養(yǎng)基上，標(biāo)記為乙組；將未接種的不含組氨酸的完全培養(yǎng)基標(biāo)記為丙組；將甲、乙、丙組培養(yǎng)基放于相同且適宜的環(huán)境中培養(yǎng)，一段時間后觀察并統(tǒng)計培養(yǎng)基上的菌落數(shù)乙組培養(yǎng)基出現(xiàn)較多菌落；甲組培養(yǎng)基沒有出現(xiàn)菌落或出現(xiàn)菌落、但菌落數(shù)少于乙組；丙組培養(yǎng)基無菌落六、綜合題(共4題，共32分)29、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）由圖1可知：BT毒蛋白基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基相鄰；介于啟動子與終止子之間，為構(gòu)建BT毒蛋白基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的融合基因，需用限制酶E1；E3、E4處理相關(guān)的DNA片段，再用DNA連接酶連接。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)將融合基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)。用Ca2+處理農(nóng)桿菌后獲得感受態(tài)細(xì)胞；將其與基因表達(dá)載體混合完成轉(zhuǎn)化后，由于重組質(zhì)粒中含有潮霉素的抗性基因，故在添加潮霉素的培養(yǎng)基中，經(jīng)篩選1得到含基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。

（3）為鑒定愈傷組織中是否含有目的基因；可利用堿基互補(bǔ)配對的原理，用分子水平的PCR/DNA分子雜交進(jìn)行鑒定，也可以通過肉眼觀察選擇藍(lán)色的愈傷組織，以確定目的基因是否表達(dá)。

（4）為獲得具有抗性的轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)；還可以通過選取長勢相似的野生型和轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)，分別進(jìn)行抗蟲接種實(shí)驗(yàn)，一段時間后，統(tǒng)計被害蟲啃食的葉面積比，進(jìn)行個體水平的檢測。

（5）為減緩害蟲對BT毒蛋白產(chǎn)生抗藥性；延緩轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)的抗蟲效果逐年下降的情況，可將轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)與非轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)間隔種植或同時轉(zhuǎn)入兩種或兩種以上不同機(jī)理的殺蟲基因。

（6）由于轉(zhuǎn)基因植物可能成為自然界原本不存在的“外來物種”；造成生物入侵；BT毒蛋白基因通過花粉擴(kuò)散造成基因污染；通過食物鏈影響生物多樣性，影響生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能，故應(yīng)注意相應(yīng)的生態(tài)安全問題。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的操作步驟，能結(jié)合題干和圖形獲取有效信息，再結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確答題，難度中等?！窘馕觥縀1、E3、E4DNA連接酶T-DNA感受態(tài)潮霉素PCR/DNA分子雜交藍(lán)色表達(dá)選取長勢相似的野生型和轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)，分別進(jìn)行抗蟲接種實(shí)驗(yàn)，一段時間后，統(tǒng)計被害蟲啃食的葉面積比例。a、b轉(zhuǎn)基因植物可能成為自然界原本不存在的“外來物種”，造成生物入侵；BT毒蛋白基因通過花粉擴(kuò)散造成基因污染；通過食物鏈影響生物多樣性，影響生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能（答出一點(diǎn)即可）30、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@?。焕肞CR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；