1-2-微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用高二生物課后培優(yōu)分級(jí)練(原卷版)

第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用知識(shí)梳理知識(shí)梳理教學(xué)目標(biāo)課程標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)解讀獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)。闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌產(chǎn)品與無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。教學(xué)重點(diǎn)微生物純培養(yǎng)的基本操作要求。酵母菌的純培養(yǎng)。微生物選擇培養(yǎng)的原理。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)。教學(xué)難點(diǎn)1.酵母菌的純培養(yǎng)。2.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)。一、培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2.培養(yǎng)基的類型及用途（1）按物理性質(zhì)分：固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定、計(jì)數(shù)液體培養(yǎng)基用于工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)半固體培養(yǎng)基用于菌種保存（2）按化學(xué)組成分：天然培養(yǎng)基用于工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定（3）按目的用途分：選擇培養(yǎng)基添加或缺少某種化學(xué)成分用于菌種分離鑒別培養(yǎng)基添加某指示劑或化學(xué)藥劑用于菌種鑒別3.培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分培養(yǎng)的基本配方：不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(例如:生長(zhǎng)因子)以及氧氣的要求。二、無(wú)菌技術(shù)1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，防止外來(lái)雜菌入侵的保證是無(wú)菌技術(shù)。2.無(wú)菌技術(shù)（操作）泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無(wú)菌技術(shù)包括：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒；操作者的手、衣著消毒；實(shí)驗(yàn)用具、器皿、培養(yǎng)基滅菌；實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，酒精燈火焰附近進(jìn)行；實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。無(wú)菌技術(shù)目的：防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其它外來(lái)微生物污染；避免操作者被微生物感染。3.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別（1）消毒：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）（2）滅菌：使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。4.常用的消毒與滅菌的方法(1)消毒的方法：煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min巴氏消毒法：62-65℃下煮30min或80-90℃處理30s-1min化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源紫外線消毒（2）滅菌的方法：灼燒滅菌：在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。滅菌時(shí)保證熱空氣流通。濕熱滅菌：利用沸水、流通蒸汽、高壓蒸汽滅菌（常用）。高壓蒸汽滅菌，100kPa、121℃下維持15-30min.它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不破壞。三、微生物的純培養(yǎng)培養(yǎng)物：將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。純培養(yǎng)物及純培養(yǎng)：由單一個(gè)體繁殖所得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程稱為純培養(yǎng)。純培養(yǎng)步驟：配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離、培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)（一）實(shí)驗(yàn)原理1.菌落：分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，即菌落。2.方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。3.培養(yǎng)基：馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（二）目的要求（三）材料用具（四）方法步驟1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基加瓊脂的目的是什么?作為凝固劑2.滅菌調(diào)pH：pH7.6（用0.1%的氫氧化鈉或鹽酸溶液把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值）分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？在滅菌時(shí)能避免水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞，在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。無(wú)菌檢查將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。如果有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基已被污染。3.接種和分離酵母菌原理：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。接種方法：平板劃線法4.培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，分別觀察記錄結(jié)果。四、微生物的選擇培養(yǎng)（一）選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。（二）選擇培養(yǎng)的方法稀釋涂布平板法：稀釋涂布法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放在30-37℃恒溫箱中培養(yǎng)1-2d，平板上就可以觀察到單菌落。（三）微生物的數(shù)量測(cè)定常用方法：稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、濾膜法1.稀釋涂布平板法（也叫活菌計(jì)數(shù)法、間接計(jì)數(shù)法）原理：成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪取．?dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。操作：①設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂布在整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。②為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30—300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（1）原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。（2）方法：用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1mm2，高為0.1mm的計(jì)數(shù)室，一個(gè)計(jì)數(shù)室又被分成25個(gè)（或16個(gè)）中格，每個(gè)中格再被分成16個(gè)（或25個(gè)）小格，每個(gè)計(jì)數(shù)室都由400個(gè)小格組成。（3）操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)4~5個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含的細(xì)菌數(shù)，再按計(jì)數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。（4）計(jì)算公式（5）缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；3.濾膜法大腸桿菌菌落呈黑色或深紫色,有金屬光澤以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色?？梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量大腸桿菌菌落呈黑色或深紫色,有金屬光澤原理：伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB)是鑒別培養(yǎng)基，可以用來(lái)檢測(cè)自來(lái)水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，因?yàn)榇竽c桿菌的代謝產(chǎn)物與伊紅—美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色或黑色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來(lái)，并沒(méi)有促進(jìn)大腸桿菌的生長(zhǎng)和抑制其他微生物的生長(zhǎng)。（四）探究實(shí)踐一：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（一）課題背景1.尿素的利用：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2.細(xì)菌利用尿素的原因：土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福?.常見(jiàn)的分解尿素的微生物：芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。（二）課題目的①?gòu)耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌（三）實(shí)驗(yàn)原理在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，從而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。（四）實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣、制備培養(yǎng)基、樣品稀釋、取樣涂布、微生物培養(yǎng)、觀察并記錄結(jié)果、細(xì)菌計(jì)數(shù)、對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定1.土壤取樣從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2.制備培養(yǎng)基：設(shè)計(jì)一種選擇培養(yǎng)基，用尿素作為唯一氮源，可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)。3.樣品稀釋：將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶中（錐形瓶體積為250mL），充分搖勻，吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至盛有9mL的生理鹽水的無(wú)菌大試管中，依次等比稀釋至107稀釋度。由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103～107。每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基，1個(gè)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，因此共需要15個(gè)選擇培養(yǎng)基，5個(gè)基礎(chǔ)培養(yǎng)基。此外，還需要準(zhǔn)備8個(gè)滅菌的試管和1個(gè)滅菌的移液管?！魬?yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^(guò)程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行◆不同微生物在土壤中含量不同；保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。微生物的種類土壤稀釋倍數(shù)目標(biāo)分離土壤中所有細(xì)菌104、105、106平板上的菌落數(shù)應(yīng)為30～300個(gè)，便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。分離土壤中的放線菌103、104、105分離土壤中的真菌102、103、104分離土壤中的尿素細(xì)菌104、105、106、107◆為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。4.取樣涂布按照由107～103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！羧绻玫搅?個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。5.微生物的培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。微生物的種類培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間觀察時(shí)間細(xì)

菌30～37℃1～2d①每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。②仔細(xì)觀察并記錄菌落的（形狀、大小、隆起程度和顏色等）特征。霉

菌25～28℃3～4d放線菌25～28℃5～7d將涂布好的培養(yǎng)皿放在某（如：30℃）溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)有不同的菌落產(chǎn)生。6.觀察記錄比較基礎(chǔ)培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，并做好記錄。7.細(xì)菌計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。8.進(jìn)一步探究：對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如圖的顏色反應(yīng)。因?yàn)樵谝阅蛩貫槲ㄒ坏吹呐囵B(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說(shuō)明該細(xì)菌能夠分解尿素。（五）拓展應(yīng)用：分解纖維素的微生物的分離1.實(shí)驗(yàn)原理（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即CX酶、C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。（2）纖維素分解菌的篩選剛果紅染色法：這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選原理：剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中心的透明圈。這樣我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。2.實(shí)驗(yàn)流程五、平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較作用優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法都能使細(xì)菌純化可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不易分離出單個(gè)菌落，不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法能使單菌落分離，便于計(jì)數(shù)；可以觀察菌落特征吸收量較少、較麻煩；平板不干燥效果不好；適用于厭氧菌和兼性厭氧菌課后培優(yōu)練課后培優(yōu)練級(jí)練培優(yōu)第一階——基礎(chǔ)過(guò)關(guān)練一、單選題1.下列關(guān)于微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（）A.微生物培養(yǎng)前，需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行消毒

B.分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度

C.測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用菌落計(jì)數(shù)法

D.分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源2.需要在火焰旁操作的有（

）①土壤取樣②稱取土壤③稀釋土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培養(yǎng)A.①②③④⑤ B.②③④ C.③④⑤ D.②③④⑤3.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)或純化的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.微生物在培養(yǎng)前要先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理再接種

B.培養(yǎng)液中溶氧量的變化會(huì)影響酵母菌的繁殖和代謝途徑

C.分離自養(yǎng)型微生物的方法是用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

D.分離純化微生物的常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法4.下列關(guān)于微生物培養(yǎng)的敘述，不正確的是（）A.倒置平板可防止培養(yǎng)皿蓋上冷凝水滴落，造成污染

B.高溫滅菌的目的是殺死微生物的細(xì)胞、孢子、芽孢

C.劃線分離可在培養(yǎng)基上獲得均勻分布的單菌落

D.稀釋涂布平板法易獲得單菌落和計(jì)數(shù)活菌數(shù)目5.下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.篩選尿素分解菌需采用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基

B.實(shí)驗(yàn)室通常使用平板劃線法對(duì)分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)

C.纖維素酶不只包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶這三種組分

D.剛果紅染色法可以在制備培養(yǎng)基的時(shí)候加入剛果紅6.關(guān)于微生物的培養(yǎng)，下列說(shuō)法正確的是（

）A.培養(yǎng)基、手、接種環(huán)、工作臺(tái)等都需要用適宜的方法滅菌處理

B.制備固體培養(yǎng)基的操作程序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、滅菌、調(diào)pH、倒平板

C.平板劃線法和稀釋涂布平板法都可用于大腸桿菌的純化培養(yǎng)

D.稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比實(shí)際活菌數(shù)多7.如圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過(guò)程中的部分操作步驟，下列說(shuō)法不正確的是（）A.步驟①倒平板操作時(shí)，倒好后應(yīng)立即將其倒過(guò)來(lái)放置

B.①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

C.操作③到④的過(guò)程中，每次接種前后都需要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理

D.用接種環(huán)在平板上劃線時(shí)注意不能將培養(yǎng)基劃破8.下列關(guān)于微生物鑒定方法的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.利用酚紅指示劑鑒定尿素分解菌，指示劑將變紅

B.利用剛果紅試劑鑒定纖維素分解菌，纖維素分解菌的菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈

C.利用青霉素鑒定酵母菌，酵母菌的菌落會(huì)呈現(xiàn)青色

D.利用伊紅美藍(lán)試劑鑒定大腸桿菌，大腸桿菌的菌落會(huì)呈現(xiàn)黑色9.下圖甲為纖維單胞菌（能產(chǎn)生纖維素酶）的獲取過(guò)程。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.①②③④培養(yǎng)基都應(yīng)以纖維素為唯一碳源

B.圖中所用培養(yǎng)基矢菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌

C.④所用的接種方法可對(duì)培養(yǎng)的微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)

D.可用剛果紅染料鑒定，看菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈10.下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是（

）A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板

B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上

C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37°C恒溫培養(yǎng)24~48小時(shí)

D.確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)11.幽門螺旋桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下，請(qǐng)選擇下列敘述錯(cuò)誤的一項(xiàng)（）A.在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有脲酶，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落變黑，周圍會(huì)出現(xiàn)黑色環(huán)帶。

B.步驟X表示接種。在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上，菌液稀釋的目的是為了獲得單菌落。

C.在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置。若不倒置培養(yǎng)，將可能導(dǎo)致培養(yǎng)基被污染。

D.臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和CO2。12.下列有關(guān)微生物分離、純化及計(jì)數(shù)的敘述中，錯(cuò)誤的是（）A.常用富含纖維素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)纖維素分解菌

B.平板劃線法通過(guò)連續(xù)劃線將聚集的菌種分散并計(jì)數(shù)

C.稀釋涂布平板法通過(guò)系列梯度稀釋可將微生物分散

D.用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)微生物時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往偏大土壤微生物的數(shù)量與土壤肥力有極為密切的關(guān)系。如圖1、2是測(cè)定某土壤微生物數(shù)量的相關(guān)過(guò)程，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.按微生物需求配制好的培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌后，應(yīng)冷卻至50℃左右再倒平板

B.在選擇培養(yǎng)基上加入青霉素可以淘汰細(xì)菌，篩選得到酵母菌和霉菌等真菌

C.用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物的數(shù)量測(cè)定時(shí)，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際數(shù)目高

D.若取0.1mL稀釋液涂布平板后平均長(zhǎng)出40個(gè)菌落，則1g土壤中的活菌數(shù)約為4×107個(gè)二、填空題14.孔雀石綠（簡(jiǎn)稱MG）是廣泛使用的有機(jī)染料，在自然環(huán)境中極難降解，容易引起土壤污染，進(jìn)而危害人體健康。因此從土壤中分離和篩選出高效的MG降解菌有非常重要的意義。已知MG在水中溶解度低，含過(guò)量MG的固體培養(yǎng)基不透明。

（1）培養(yǎng)基的配制：MG降解菌富集培養(yǎng)基需含有NaH2PO4、KH2PO4、NaCl、NH4Cl、CaCl2、MgSO4、水等，再加__________________作為唯一碳源。培養(yǎng)基配制好后，需進(jìn)行滅菌處理。滅菌是指____________________________________________________________。（2）MG高效降解菌株的富集：如圖所示，將1.0g土樣接入含上述配制好的培養(yǎng)液的三角瓶中，將三角瓶置于30℃、180r/min搖床中振蕩培養(yǎng)1-2天，此操作的目的是__________________________，直至培養(yǎng)液變渾濁后，換瓶重復(fù)操作2-3次，以達(dá)到富集的目的。（3）MG高效降解菌株的分離和純化：圖中所示的分離純化細(xì)菌的方法是________________。實(shí)驗(yàn)中初步估測(cè)A中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為1.5×109個(gè)/mL，若要在圖中每個(gè)平板上涂布0.1mL稀釋后的菌液，且每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)約為150個(gè)，則應(yīng)將A中的菌液稀釋__________倍。（4）MG高效降解菌株的鑒定：將純化獲得的菌種接種于含過(guò)量MG的固體培養(yǎng)基（其他營(yíng)養(yǎng)成分等適宜）上，根據(jù)培養(yǎng)基是否出現(xiàn)__________________，就可以鑒別出目的菌株，原因是_______________________________。（5）MG高效降解菌株的保存：獲得純凈的菌種后，需要進(jìn)行菌種的保藏。若需長(zhǎng)期保存，可以采用______________的方法。15.尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，需經(jīng)細(xì)菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，下列是從土壤中分離分解尿素細(xì)菌的有關(guān)問(wèn)題，請(qǐng)分析回答：

(1)如圖是利用_______________法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分離到培養(yǎng)基的表面。除此方法外，常用的微生物接種方法還有____________________。(2)如果要對(duì)培養(yǎng)的菌落進(jìn)行純化，在培養(yǎng)基上劃線操作時(shí)，操作的第一步及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是________________，灼燒過(guò)的接種環(huán)必須冷卻后才能接種的原因是_______________________________________________________。(3)下面是兩種培養(yǎng)基配方：表1：A培養(yǎng)基配方KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂H2O1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0g1000mL表2：B培養(yǎng)基配方纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母浸膏H2O5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g1000mL①配制培養(yǎng)基的操作步驟_____________(用字母順序回答)。a．倒平板b．計(jì)算c．溶化

d．稱量e．滅菌②通常培養(yǎng)基采用_______________法滅菌。③如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)選擇上述________(A/B)配方的培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中加入________指示劑，可初步鑒定出該種細(xì)菌能否分解尿素。④為了分析該選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落，可以配制牛肉膏蛋白胨完全培養(yǎng)基。溶化過(guò)程中，將稱好的________連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱。待其溶化至與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙，往燒杯中加入稱量好的_______、_______，攪拌使其溶解。加入瓊脂時(shí)，要不斷用玻棒攪拌，目的是__________________________。培優(yōu)第二階——拓展培優(yōu)練單選題1.雙酚A（BPA）是一種含碳有機(jī)物，是重要的工業(yè)原料，在環(huán)境中不易降解，科研人員對(duì)土壤中細(xì)菌等微生物進(jìn)行篩選，得到了具有降解BPA能力的菌株，下列有關(guān)敘述正確的是（

）A.為了有效防止雜菌的污染，可將土壤稀釋液徹底滅菌后再接種到培養(yǎng)基上

B.分離BPA降解菌的培養(yǎng)基需要以BPA為唯一碳源

C.可用平板劃線法和稀釋涂布平板法對(duì)該菌進(jìn)行計(jì)數(shù)

D.培養(yǎng)基要維持正常的pH和滲透壓，調(diào)pH一般應(yīng)在滅菌后2.有些細(xì)菌可以分解原油，從而消除由于原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)從受原油污染的土壤中，篩選出能高效降解原油的菌株。下列相關(guān)操作不正確的是（

）A.將滅菌后的土壤樣品稀釋液接種于以原油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基初篩菌種

B.純化菌種時(shí)，可用平板劃線法或稀釋涂布平板法分離得到單菌落

C.通過(guò)比較純化得到的菌種的降解效率以獲得降解能力強(qiáng)的菌株

D.可通過(guò)基因組測(cè)序方法對(duì)篩選得到的菌株進(jìn)行分子鑒定3.下列是一些關(guān)于微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用的基本理論和基礎(chǔ)知識(shí)，其中都正確的一組是（

）①接種環(huán)、玻璃器皿（如培養(yǎng)皿等）可以通過(guò)灼燒滅菌和干熱滅菌

②人工配制的培養(yǎng)基常需要調(diào)pH，其應(yīng)在分裝滅菌前進(jìn)行

③超凈工作臺(tái)、接種室、空氣可以通過(guò)紫外線消毒

④菌種的長(zhǎng)期保存通常接種在試管的固體斜面培養(yǎng)基上，-4℃下進(jìn)行

⑤用涂布稀釋平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)的缺點(diǎn)是不能觀察到微生物的的形態(tài)、大小、結(jié)構(gòu)

⑥實(shí)驗(yàn)室測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量時(shí)，選取的稀釋度的要求通常分別是：103、104、105，A.①②③ B.①②④ C.②③⑤ D.②③⑥4.某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種培養(yǎng)、菌落觀察與計(jì)數(shù)。下列與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)問(wèn)題的敘述中正確的是（）A.實(shí)驗(yàn)用過(guò)的帶菌培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)加熱后才能倒掉

B.利用平板劃線法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離純化并計(jì)數(shù)

C.觀察細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好是在另一塊平板上接種清水作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)

D.培養(yǎng)基中含有的淀粉、蛋白胨可以分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供碳源和氮源下圖表示從土壤中分離能降解酚類化合物對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程。下列與該實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容的敘述中不正確的是（

）A.實(shí)驗(yàn)中所用的培養(yǎng)基①②③④均屬于選擇培養(yǎng)基

B.通過(guò)圖中I、Ⅱ過(guò)程目的是增加目標(biāo)微生物的數(shù)量

C.統(tǒng)計(jì)⑤處培養(yǎng)基中的菌落數(shù)并不一定代表接種到④上的活菌數(shù)

D.在⑤處培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的一定是能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物6.下列有關(guān)微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的說(shuō)法正確有（）項(xiàng)。①接種環(huán)、玻璃器皿（如培養(yǎng)皿等）可以通過(guò)灼燒滅菌和干熱滅菌②根據(jù)對(duì)生存環(huán)境的要求，在對(duì)應(yīng)環(huán)境中尋找，就一定能尋找到目的菌株③稀釋涂布平板法是需將不同稀釋濃度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面④滅菌是指殺滅物體內(nèi)外一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子⑤平板劃線操作第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物感染操作者⑥稀釋涂布平板法進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，要用移液管吹吸試管中溶液幾次，目的是達(dá)到足夠稀釋倍數(shù)⑦平板劃線在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)自第一次劃線末端⑧實(shí)驗(yàn)室測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量時(shí)，選取的稀釋度的要求通常分別是：103、104、105A.1項(xiàng) B.2項(xiàng) C.3項(xiàng) D.4項(xiàng)7.如圖是兩種不同接種方法所得的結(jié)果，下列說(shuō)法正確的是（）

A.A、B兩種接種方法使用的接種工具在接種前都要在酒精燈火焰上灼燒，且處理方法完全相同

B.進(jìn)行接種之前都要對(duì)操作者雙手和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理

C.A方法劃線時(shí)，是沿方①②③向進(jìn)行，且在③區(qū)域看到有單個(gè)菌落，可直接計(jì)數(shù)

D.A、B所使用的培養(yǎng)基可以相同，且制作時(shí)要先調(diào)pH再滅菌最后倒平板8.下列根據(jù)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象分析得出的結(jié)論，錯(cuò)誤的是（）A.牛肉膏蛋白胨空白對(duì)照培養(yǎng)基上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染

B.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基有選擇作用

C.稀釋涂布平板法獲得的培養(yǎng)基上菌落數(shù)小于，說(shuō)明可能是稀釋的倍數(shù)太大

D.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上觀察到菌落有大有小，說(shuō)明培養(yǎng)基已被雜菌污染苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A.圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源

B.如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法

C.若圖中④為對(duì)照實(shí)驗(yàn)判斷培養(yǎng)基的篩選功能，則其中應(yīng)以苯酚作為唯一碳源

D.使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落某學(xué)者利用“影印培養(yǎng)法”研究大腸桿菌抗鏈霉素性狀產(chǎn)生的原因，先將原始菌種接種在1號(hào)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)出菌落后，將滅菌絨布在1號(hào)上印模，絨布沾上菌落并進(jìn)行轉(zhuǎn)印，使絨布上的菌落按照原位接種到2號(hào)和3號(hào)培養(yǎng)基上。待3號(hào)上長(zhǎng)出菌落后，在2號(hào)上找到對(duì)應(yīng)的菌落，然后接種到不含鏈霉素的4號(hào)培養(yǎng)液中，培養(yǎng)后再接種到5號(hào)培養(yǎng)基上，并重復(fù)以上步驟。實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.大腸桿菌抗鏈霉素的性狀是由鏈霉素的選擇作用引起的

B.1號(hào)和5號(hào)采用平板劃線法將菌種接種在相應(yīng)選擇培養(yǎng)基上

C.4號(hào)與8號(hào)培養(yǎng)液中，大腸桿菌抗鏈霉素菌株的比例逐漸增大

D.該實(shí)驗(yàn)缺乏對(duì)照實(shí)驗(yàn)，無(wú)法確定抗鏈霉素性狀屬于可遺傳的變異11.酵母菌的品質(zhì)影響葡萄酒的產(chǎn)量和質(zhì)量，研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌菌株，進(jìn)行了如圖Ⅰ所示實(shí)驗(yàn)，甲、乙、丙、丁錐形瓶?jī)?nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.葡萄酒發(fā)酵過(guò)程中，缺氧酸性環(huán)境、酵母菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物酒精等可抑制雜菌的繁殖

B.用稀釋涂布平板法計(jì)算出葡萄酒過(guò)濾液的活菌數(shù)為6.8×109個(gè)/L，此數(shù)值可能低于實(shí)際的活菌數(shù)

C.對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，菌種接種過(guò)程中的試管口、瓶口等需灼燒滅菌

D.由圖Ⅱ可知，丙瓶培養(yǎng)基渾濁的原因是培養(yǎng)基滅菌不徹底，丁組酵母菌產(chǎn)酒精能力比乙強(qiáng)12.下列與土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)相關(guān)的敘述，正確的是（）A.統(tǒng)計(jì)尿素分解菌的數(shù)目時(shí)應(yīng)該選擇菌落數(shù)多的培養(yǎng)基進(jìn)行計(jì)數(shù)

B.對(duì)樣品中的尿素分解菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)可采用平板劃線法進(jìn)行接種

C.可以通過(guò)設(shè)置空白對(duì)照組來(lái)檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到了雜菌的污染

D.尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成氨后會(huì)使培養(yǎng)基pH下降13.在分離土壤中分解纖維素的細(xì)菌過(guò)程中，需要進(jìn)行的是（）A.用紫外線對(duì)樣品進(jìn)行消毒 B.用顯微鏡對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)

C.用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選 D.用剛果紅對(duì)菌體進(jìn)行染色二、填空題14.金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后進(jìn)行分離培養(yǎng)，具體如圖所示，已知金黃色葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含即黃的同體培養(yǎng)幕上形成的菌落周圍會(huì)出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。請(qǐng)回答：

（1）在配制培養(yǎng)基時(shí)，通常利用_________法進(jìn)行滅菌，然后待溫度降到_________℃左右時(shí)，在無(wú)菌條件下，加入無(wú)菌的_________，搖勻后立即倒平板。

（2）若之后需要進(jìn)行計(jì)數(shù)，則步驟X可以表示用_________法進(jìn)行接種。

（3）在培養(yǎng)時(shí)，需要將培養(yǎng)皿倒置，原因是__________________。若對(duì)培養(yǎng)、鑒定完畢的該菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，將1mL樣本稀釋100倍，在3個(gè)平板上分別接入0.1mL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為43、44、45，據(jù)此可得1L樣本中活菌數(shù)為_________個(gè)。

（4）菌種保存：如果要臨時(shí)保藏，需要將菌種接種到試管的_________上，在合適的溫度下培養(yǎng)，待菌落長(zhǎng)成后，將試管放人4℃冰箱中保藏。如果需要長(zhǎng)期保存，可以采用_________法。15.下表中甲、乙分別是分離兩種土壤中微生物的培養(yǎng)基的配方，圖丙所示為相關(guān)分離過(guò)程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題（注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到）：KH2PO41.4g纖維素粉5.0gNa2HPO42.1gNaNO31.0gMgSO4·7H2O0.2gNa2HPO41.2g葡萄糖10.0gKH2PO40.9g尿素1.0gMgSO4·7H2O0.5g瓊脂15.0gKCl0.5g酵母膏0.5g水解酪素0.5g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL甲乙（1）從功能上看，甲培養(yǎng)基屬于________，其中提供氮源的物質(zhì)是________。（2）如果將乙培養(yǎng)基配制成固體培養(yǎng)基，則在該培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落是否都能分解纖維素？________（填“是”或“否”）。如果培養(yǎng)基中加入________可以篩選出具有分解纖維素能力的菌株，同時(shí)透明圈越________（填“大”或“小”），表示該菌分解纖維素的能力越強(qiáng)。（3）為了計(jì)數(shù)微生物的數(shù)量，圖丙采用________法進(jìn)行接種培養(yǎng)計(jì)數(shù)，除此之外，還可以采用________法進(jìn)行計(jì)數(shù)。其中前一種計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果要比后一種計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果________（填“大”或“小”）。（4）一位同學(xué)利用圖丙的方法步驟在4個(gè)平板培養(yǎng)基上分別接種0.1mL土壤稀釋液④，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，則1mL原土壤樣液①中微生物數(shù)量約為________________。16.近日市衛(wèi)計(jì)委發(fā)布的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)信息顯示多家美容美發(fā)場(chǎng)所的毛巾、理發(fā)用具等大腸桿菌含量嚴(yán)重超標(biāo)，回答下列相關(guān)問(wèn)題：

（1）在檢查某美發(fā)店的衛(wèi)生狀況時(shí)對(duì)該美發(fā)店毛巾浸泡液中的大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)可采用稀釋涂布平板法，也可采用如圖甲所示的______________法，圖甲中a的孔徑應(yīng)__________（填“大于”或“小于”）大腸桿菌的大小，培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，需將pH調(diào)至__________。在伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基上可觀察到大腸桿菌菌落呈__________色。（2）如圖乙是大腸桿菌鑒別培養(yǎng)基的配方，在該配方中缺少的營(yíng)養(yǎng)成分是__________；若要進(jìn)行選擇培養(yǎng)，則培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)滿足_______________________________________。在用稀釋涂布平板法對(duì)大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)結(jié)果往往比實(shí)際偏小，原因是_________________________________________________。（3）若該美發(fā)店需要對(duì)毛巾進(jìn)行定期消毒，最簡(jiǎn)單有效的消毒方法是__________。

培優(yōu)第三階——高考沙場(chǎng)點(diǎn)兵一、單選題1.如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

??????????????A.在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)先調(diào)pH值后高壓蒸汽滅菌

B.步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落

C.步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素

D.步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力2.下列有關(guān)微生物分離、純化及計(jì)數(shù)的敘述中，錯(cuò)誤的是（）A.常用富含纖維素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)纖維素分解菌

B.平板劃線法通過(guò)連續(xù)劃線將聚集的菌種分散并計(jì)數(shù)

C.稀釋涂布平板法通過(guò)系列梯度稀釋可將微生物分散

D.用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)微生物時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往偏大3.如圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過(guò)程中的部分操作步驟，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

B.步驟①中待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋

C.步驟③中，每次劃線前后都需對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理

D.劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4.咔唑是一種含N有機(jī)物，有潛在致癌性，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定難以清除。為了獲得高效降解咔唑的微生物，研究人員設(shè)計(jì)了下圖所示的實(shí)驗(yàn)方案。下列針對(duì)該方案的表述錯(cuò)誤的是（

）A.加入無(wú)菌水稀釋前的油田淤泥樣品無(wú)需滅菌

B.在CNFM中加入咔唑的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基

C.固體平板培養(yǎng)基培養(yǎng)的目的是分離得到降解咔唑的微生物

D.利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)測(cè)量經(jīng)多瓶培養(yǎng)后培養(yǎng)瓶中目標(biāo)微生物的數(shù)量小于實(shí)際值5.在分離土壤中分解纖維素的細(xì)菌過(guò)程中，需要進(jìn)行的是（）A.用紫外線對(duì)樣品進(jìn)行消毒 B.用顯微鏡對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)

C.用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選 D.用剛果紅對(duì)菌體進(jìn)行染色6.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，正確的是（）A.溶化牛肉膏時(shí)，稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

B.涂布接種時(shí)，涂布器應(yīng)在干熱滅菌箱中滅菌冷卻后再使用

C.純化培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)的搖床上培養(yǎng)

D.觀察菌落時(shí)，應(yīng)將培養(yǎng)皿蓋拿掉后在顯微鏡下進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)7.將從種植煙草的土壤里分離得到的尼古?。–10H14N2）降解菌株SC接種到尼古丁培養(yǎng)基中，30℃搖床培養(yǎng)并定時(shí)取樣，測(cè)定并計(jì)算發(fā)酵液中的尼古丁濃度和菌體濃度，得到的結(jié)果如圖所示。下列分析不正確的是（）A.分離SC時(shí)可用稀釋涂布平板法或劃線法

B.培養(yǎng)36h時(shí)SC的數(shù)量為該種群的環(huán)境容納量

C.影響SC種群密度變化的主要因素是O2濃度和pH

D.發(fā)酵液中的尼古丁為SC提供碳源和氮源8.下列有關(guān)用平板劃線法和稀釋涂布平板法純化培養(yǎng)大腸桿菌的敘述，正確的是（）

①都需要用固體培養(yǎng)基

②都需要使用接種針進(jìn)行接種

③都需要在火焰旁進(jìn)行接種

④都可以用菌落數(shù)來(lái)計(jì)數(shù)活菌．A.①②

B.①③

C.②④

D.③④9.某研究小組探究A、B、C、D四種抗生素對(duì)某種罕見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖的抑制能力，設(shè)計(jì)

完成了抑菌實(shí)驗(yàn)，得到了如圖所示的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以下說(shuō)法正確的是（）A.抗生素A對(duì)這種細(xì)菌的抑制能力最強(qiáng) B.抗生素B對(duì)這種細(xì)菌的抑制能力最強(qiáng)

C.實(shí)驗(yàn)所用四種抗生素的濃度各不相同 D.濾紙片E應(yīng)該蘸取自來(lái)水作為對(duì)照10.野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補(bǔ)充相應(yīng)氨基酸才能生長(zhǎng)。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單獨(dú)接種在基本培養(yǎng)基上時(shí)，均不會(huì)產(chǎn)生菌落。某同學(xué)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，將M、N菌株混合培養(yǎng)一段時(shí)間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個(gè)細(xì)菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學(xué)對(duì)這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是（）A.操作過(guò)程中出現(xiàn)雜菌污染

B.M、N菌株互為對(duì)方提供所缺失的氨基酸

C.混合培養(yǎng)過(guò)程中，菌株獲得了對(duì)方的遺傳物質(zhì)

D.混合培養(yǎng)過(guò)程中，菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變11.下列關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒

C.接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)基污染

D.菌種分離和菌落計(jì)數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基12.科學(xué)家通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌的快速進(jìn)化過(guò)程。人們發(fā)現(xiàn)用肉湯培養(yǎng)假單胞桿菌時(shí)，如果肉湯保持不動(dòng)，不久后在肉湯的不同部位如表面、底部或其他部位，細(xì)菌的形態(tài)發(fā)生了如下圖所示的變化，出現(xiàn)一定數(shù)量的變異株。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是(

)A.這個(gè)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了細(xì)菌在不同的小環(huán)境中沒(méi)有發(fā)生進(jìn)化

B.細(xì)菌的生命周期短，繁殖速度快，不容易受到外界環(huán)境影響

C.用高壓蒸汽滅菌對(duì)肉湯作無(wú)菌處理后加入一定量的抗生素以防止培養(yǎng)過(guò)程中的污染

D.用不斷搖動(dòng)的肉湯培養(yǎng)SM細(xì)菌，難以出現(xiàn)FS細(xì)菌和WS細(xì)菌13.某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A，研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素等配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）．實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）