評審報告-miR-92a 檢測試劑盒（熒光RT-PCR 法）

申請人名稱：深圳市XXX生物有限公司基本信息 3 3 3 3產品審評摘要 4 4二、臨床前研究摘要 5 四、風險分析及說明書提示 綜合評價意見 基本信息深圳市南山區(qū)桃源街道田寮工業(yè)A區(qū)9棟二樓西面深圳市南山區(qū)桃源街道田寮工業(yè)A區(qū)9棟二樓西面深圳市南山區(qū)桃源街道田寮工業(yè)A區(qū)田寮大廈1503產品審評摘要組成成分管數(shù)1111質控品11質控品211RNA酶抑制劑110.1%DEPC水2該產品配套使用的核酸提取試劑為深圳市晉百慧生物有限公司生產的核酸提取試劑，備案號為：粵深械備該產品用于體外定性檢測人糞便樣本中的miR-92a核該產品用于便潛血陽性、綜合其他癥狀如排便習慣改診斷建議腸鏡檢查同時由于不同原因拒絕進行腸鏡檢查的期，Ⅲ期，IV期，早期一般呈現(xiàn)如排便習慣改變、大便形因癥狀輕微和不典型而被忽視。miR-92a來自人類13號染色體上的miR-17-92基因簇，是一類小分子非編碼RNA。miR-92a通過靶向抑制PTEN、KLF4和下游的p21基因，可(三)產品包裝規(guī)格miR-92a檢測試劑盒(熒光RT-PCR法)是采用RNA提取試劑盒提取糞便中的RNA,進行RT-引物、探針能夠與miR-92a反轉錄產物特異性結合并進行PCR擴增，在擴增過程中探針與含miR-92a模板的反轉錄(一)主要原材料2.主要原材料的選擇釋配制而成，檢測限參考品濃度為1×10?copies/μL的質控品包括質控品1和質控品2,質控品1含有miR-92a基因RNA片段，質控品2為0.1%DEPC水，用于檢測過程中(二)生產工藝及反應體系研究1.反轉錄申請人對PCR反應體系中各主要原料(反轉錄酶、反轉dNTP、引物、探針、PCR反應緩沖液、50%甘油)的濃度(三)分析性能評估最低檢測限評估中，申請人采用高濃度miR-92a陽性參考品梯度稀釋于提取的不含miR-92a基因的糞便樣本中，分別進行25次重復檢測，得到檢出率為95%的濃度水平為100患者、大腸癌中期患者、大腸癌晚期患者糞便樣本各5份來進行檢測，檢測結果顯示陽性符合率達到100%。劑的批內和批間檢測Ct值CV%均不高于5%。特異反應，與常見的miR-135b和miR-21帶血糞便樣本中，樣本中血紅蛋白含量超過>8.0mg/mL后，蛋白含量≤10mg/g時，對檢測結果不會產生影響；糞便樣本線性范圍評估中，申請人采用高濃度miR-92a陽性參考品梯度稀釋于提取的不含miR-92a基因的糞便樣本中，分別重復檢測3次，得出線性相關系數(shù)r2≥0.980的線性范圍為針對核酸提取純化步驟，申請人對其生產的核酸提取試劑進行研究，結果顯示該試劑盒核酸提取效率大于90%,提取樣本用于試劑盒檢測性能良好。通過以上評價，選擇晉百慧公司生產的核酸提取試劑(備案號為：粵深械備20150228號)作為該產品核酸提取純化方法。本次申報產品包裝規(guī)格為48份/盒，申請人提供了六批產品(批號為：20131201、20131202、20131203、20161001、20161002、20161003)在所有適用機型上的性能評估資料。(四)陽性判斷值通過深圳人民醫(yī)院提供的健康人的糞便樣本150例、大腸癌患者樣本120例，同時從香港中文大學獲得49例正常人糞便樣本、76例大腸癌患者糞便樣本、36例息肉患者糞便樣本、30例肝癌患者糞便樣本、30例腸炎患者糞便樣本、30例食道癌患者糞便樣本、30例胃癌患者糞便樣本、30例腺瘤患者糞便樣本、30例胃炎患者糞便樣本、30例闌尾炎患者糞便樣本、30例結腸炎患者糞便樣本、30例消化性潰瘍患者糞便樣本、30例胰腺癌患者糞便樣本、30例膽管癌測試劑盒(熒光RT-PCR法)對其進行檢測，檢測結果采用SPSS15.0統(tǒng)計分析軟件進行ROC曲線分析，根據(jù)約登指數(shù)的分析結果，取約登指數(shù)最大所對應的Ct值為陽性判斷值 (Cut-off)為30.75。試劑盒有效性判定：1.質控品1:Ct值在30.70-32.3范圍內且有明顯指數(shù)增長期；2.質控品2:Ct值>36.00或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無明顯指數(shù)增長期；檢測。結果判定：1.樣本的Ct值>30.75時，檢測結果判定為陰性；(五)穩(wěn)定性其中針對實時穩(wěn)定性研究，采用三批次試劑盒(批號：在0、3、6、9、12、15個月進行準確度、分析特異性、精開瓶穩(wěn)定性采用三批次試劑盒(批號：20131201、標符合成品質量要求，因此開瓶穩(wěn)定性為12個月。凍融穩(wěn)定性采用三批次試劑盒(批號：20131201、20131202、20131203)開瓶后至于室溫下解凍，待其完全解凍并放置約15分鐘左右后，置于-20℃以下冷凍，每凍融2物質進行檢驗，總共凍融8次，在凍融6次后產品各項指標符合成品質量要求，但在反復凍融8次后部分性能指標不符得超過6次。申請人在天津市人民醫(yī)院、深圳市人民醫(yī)院、中山大學腫瘤防治中心共3家臨床試驗機構完成了臨床試驗。采用待步比較的方法，驗證本產品的臨床性能。1.通過地方篩查所有便潛血檢測陽性患者在臨床試驗機構進行腸鏡檢查，同時所有陽性患者留取糞便樣本采用本試劑盒進行檢測。便潛血檢測陽性患者共459例，其中腸鏡確診的大腸癌陽性病例共計56例，其余病例為健康人和其他2.門診經(jīng)臨床醫(yī)生診斷需進行腸鏡檢查的初診患者263例，患者癥狀主要包括排便習慣改變、大便形狀變化、大便帶血、慢性便秘、排便里急后重等癥狀。以上所有患者在進行腸鏡檢查前留取糞便樣本采用本試劑盒進行檢測，腸鏡確診的大腸癌陽性病例共計36例，其余病例為健康人和其他3.大腸癌術前住院患者248例，為門診患者主訴上述癥狀或其他檢查懷疑大腸癌且經(jīng)腸鏡檢查確診為大腸癌，手術前留取患者糞便進行本試劑盒檢測。4.其余病例：其他消化系統(tǒng)腫瘤患者(治療前)包括食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、膽管癌、口腔癌，通過病理進肉、腺瘤；以及大腸癌術后住院患者65例。共入組1306例樣本，其中以上人群中通過腸鏡檢查最終確診為大腸癌的患者共340例，通過腸鏡確診為大腸癌陰性的患者901例，大腸癌術后患者65例。同時進行了179例樣本的測序檢測，以驗證檢測的準確臨床試驗結果：三家臨床試驗機構共入組340例大腸癌患者，采用待考表1大腸癌臨床分期樣本檢測結果0期(7I例)分期不明(49例)總計檢測結果為陽性3檢測結果為陰性4靈敏度三家臨床試驗機構共入組59例腺瘤患者，采用待考核試劑檢測結果陽性8例，特異性86.44%;共入組20例胰腺癌患者，采用待考核試劑檢測結果陽性0例，特異性100%;共入組20例膽管癌患者，采用待考核試劑檢測結果陽性1例，特異性95.00%;共入組20例肝癌患者，采用待考核試劑檢測結果陽性1例，特異性95.00%;共入組20例口腔癌患者，采用待考核試劑檢測結果陽性1例，共入組20例食管癌患者，采用待考核試劑檢測結果陽性0例，特異性100%;共入組25例胃癌患者，采用待考核試劑檢測結果陽性2例，特異性92.00%。三家臨床試驗機構共入組45例腸炎患者，采用待考核試劑檢測結果陽性3例，特異性93.33%;共入組29例結腸共入組24例消化性潰瘍患者，采用待考核試劑檢測結果陽性1例，特異性95.83%;共入組180例息肉患者，采用待考核試劑檢測結果陽性14例，特異性92.22%;共入組20例闌尾炎患者，采用待考核試劑檢測結果陽性1例，特異性95.00%;共入組20例胃炎患者，采用待考核試劑檢測結果陽性1例，特異性95.00%。三家臨床試驗機構共入組65例大腸癌術后患者，采用綜合所有試驗數(shù)據(jù)分析，以全結腸鏡診斷金標準為參照，本產品檢測靈敏度為71.76%,特異性為90.23%。檢測待考核試劑金標準陽性陰性陽性陰性靈敏度：[244/(244+96)]*100%=71.76%特異性：[813/(813+88)]*100%=90.23%四、風險分析及說明書提示檢測試劑盒(熒光RT-PCR法)已知和可預見的安全風險主