實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量控制程序

實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量控制程序目的采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性?；靖拍钯|(zhì)量控制是監(jiān)視ELISA操作全過(guò)程，排除誤差，維持標(biāo)準(zhǔn)化操作的一個(gè)管理過(guò)程。這一過(guò)程是通過(guò)一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的：確定控制的對(duì)象；規(guī)定控制對(duì)象的標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)期值）；制定或選擇控制方法和手段；測(cè)量實(shí)際數(shù)據(jù)；比較或比對(duì)實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說(shuō)明原因。超出預(yù)定誤差范圍，報(bào)警系統(tǒng)發(fā)出信號(hào)，反饋通道中斷。采取行動(dòng)，解決差異?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。質(zhì)控圖是把某一檢驗(yàn)的性能數(shù)據(jù)與所計(jì)算出來(lái)的預(yù)期的"控制限"進(jìn)行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進(jìn)行時(shí)，按時(shí)間順序而抽選出來(lái)的，其目的是檢測(cè)檢驗(yàn)過(guò)程中變異的可追溯性原因?？勺匪菪缘恼`差原因，是指除去隨機(jī)誤差以外的其他原因。在GLP概念里QC即指IQC，其定義為：由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本室工作的可靠性，旨在監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高批內(nèi)批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定檢驗(yàn)報(bào)告是否可靠或可否發(fā)出的一項(xiàng)工作。免疫測(cè)定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式?；覅^(qū)概念把定量分析的正常值范圍引入定性分析建立灰區(qū)概念，即將COV值上下的一段區(qū)域定為陽(yáng)性可疑，需重復(fù)試驗(yàn)或換試劑重測(cè)以確定其陰陽(yáng)性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報(bào)告+（陽(yáng)性）?；覅^(qū)概念對(duì)血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。灰區(qū)的設(shè)置有兩種：COV×（1±CV），CV為該試劑的批內(nèi)CV（一般在15%～20%時(shí)間）；COV±2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室內(nèi)質(zhì)控ROC的s。高值鉤鐮效應(yīng)（HD-HOOK）在二位點(diǎn)夾心ELISA中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑量（HIGHDOSE，HD）區(qū)段，線性走向不是呈平臺(tái)狀無(wú)限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀（HOOK），MILES（1974）根據(jù)此現(xiàn)象寫(xiě)實(shí)性地稱(chēng)之為"HD-HOOK"效應(yīng)。產(chǎn)生該現(xiàn)象的分子機(jī)理有"分子變構(gòu)說(shuō)"和"濃度效應(yīng)"等推論。一步法和二步法均存在"HD-HOOK"效應(yīng)，只是前者出現(xiàn)的更早些，大多數(shù)是高值低吸光度，很少陰性結(jié)果。質(zhì)量控制血清質(zhì)控血清是已有靶值的血清，在每次的常規(guī)檢驗(yàn)中加入一份或數(shù)份，通過(guò)所得結(jié)果來(lái)了解本次檢驗(yàn)的情況。質(zhì)控血清檢驗(yàn)的結(jié)果如能控制其誤差在一定范圍內(nèi)，就說(shuō)明該檢驗(yàn)沒(méi)有發(fā)生不允許的誤差。如果出現(xiàn)超過(guò)允許誤差范圍的異常結(jié)果，提示該檢驗(yàn)不合格，應(yīng)尋找原因，糾正后，重檢待測(cè)標(biāo)本。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控工作中起重要作用。衛(wèi)健委臨床檢驗(yàn)中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時(shí)，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開(kāi)展某項(xiàng)檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個(gè)月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清，在一批質(zhì)控血清將用完之前，需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長(zhǎng)期內(nèi)效價(jià)不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測(cè)作用。質(zhì)量控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點(diǎn)上，定性測(cè)定時(shí)處于弱陽(yáng)性水平，稱(chēng)為臨界值。乙肝標(biāo)志物臨界值的制定，應(yīng)按臨床要求，為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)。臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品以外的第三個(gè)對(duì)照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本不漏檢。質(zhì)控血清的制備，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的條件，選用臨床中心提供的質(zhì)控血清，或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清（以乙肝質(zhì)控血清為例）。收集新鮮的無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)細(xì)菌污染的陽(yáng)性血清。56℃加熱10小時(shí)滅活。離心或過(guò)濾除去沉淀。用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成分更接近于檢測(cè)標(biāo)本。抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆?。不可反?fù)凍融。被檢物要求檢出的水平常被認(rèn)為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。如果該試驗(yàn)還有其他要求，則應(yīng)加所要求濃度的質(zhì)控物。標(biāo)定含量。20-30次測(cè)定結(jié)果刪除〉±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值，并與已知定值血清對(duì)比測(cè)定。室間質(zhì)評(píng)的方法1.發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查，這是目前國(guó)內(nèi)外常見(jiàn)的形式，采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn)，并將結(jié)果報(bào)至組織者（部、省臨檢中心）。組織者通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，再將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回實(shí)驗(yàn)室，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，提高質(zhì)量。其缺點(diǎn)為由于各實(shí)驗(yàn)室吃小灶或互相打電話修改結(jié)果而達(dá)不到真正評(píng)價(jià)作用。這是國(guó)內(nèi)外室間質(zhì)評(píng)的常用形式。部臨檢中心對(duì)乙肝標(biāo)志物ELISA檢驗(yàn)的室間質(zhì)評(píng)采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn)，并將檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回各實(shí)驗(yàn)室。通過(guò)評(píng)價(jià)，各實(shí)驗(yàn)室了解本室工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)差距，并設(shè)法改進(jìn)，以不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。這種評(píng)價(jià)方式有一定缺點(diǎn)，即各實(shí)驗(yàn)室常對(duì)質(zhì)控物特殊對(duì)待，在檢驗(yàn)時(shí)選用特殊試劑盒，選派特別的技術(shù)員進(jìn)行檢驗(yàn)，有的實(shí)驗(yàn)室互相核對(duì)結(jié)果并作修改。這就使EQA的結(jié)果不能反映該實(shí)驗(yàn)室日常工作水平。2.現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，事先不通知，臨時(shí)派出人員到各實(shí)驗(yàn)室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測(cè)一組標(biāo)本，進(jìn)行評(píng)價(jià)。這種方法可以解決實(shí)際問(wèn)題，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常進(jìn)行。派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行試劑調(diào)查，這種調(diào)查事先不通知，臨時(shí)派觀察員到實(shí)驗(yàn)室，指定采用常規(guī)方法，檢驗(yàn)規(guī)定的一組標(biāo)本，進(jìn)行評(píng)價(jià)。成績(jī)計(jì)算方法1.定性試驗(yàn)：檢驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，得100分，錯(cuò)誤不得分，總計(jì)實(shí)驗(yàn)室的得分。從全部參評(píng)單位的得分中求出該批質(zhì)控物平均分（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），再通過(guò)公式計(jì)算出每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的得分比值（SI）SI=（實(shí)驗(yàn)室得分-平均分X）/平均標(biāo)準(zhǔn)差（s），SI在0.0-0.9間為良好，1.0-1.9間為優(yōu)秀，SI為負(fù)值時(shí)數(shù)值越大成績(jī)?cè)讲睢?.定量試驗(yàn)：SI=（實(shí)驗(yàn)室測(cè)定值-預(yù)期值X）/預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)差s，SI越小，表明越靠近靶值，成績(jī)?cè)胶谩?-1.0為優(yōu)秀，1.1-2.0為良好，>2.0為差。SI無(wú)正負(fù)之分。（五）質(zhì)