2025年人民版選擇性必修3生物下冊(cè)階段測(cè)試試卷含答案

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年人民版選擇性必修3生物下冊(cè)階段測(cè)試試卷含答案考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共6題，共12分)1、一種雙鏈DNA分子被三種不同的限制酶切割；切割產(chǎn)物通過(guò)電泳分離，用大小已知的DNA片段的電泳結(jié)果作為分子量標(biāo)記（右圖左邊一列）。關(guān)于該雙鏈DNA,下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.呈環(huán)狀結(jié)構(gòu)B.分子質(zhì)量大小為10kbC.有一個(gè)NotI和兩個(gè)EcoRI切點(diǎn)D.其N(xiāo)otI切點(diǎn)與EcoRI切點(diǎn)的最短距離為2kb2、天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是（）A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，從而獲得互補(bǔ)DNA，再擴(kuò)增基因BB.利用DNA連接酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中可以獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞3、下列有關(guān)胚胎干細(xì)胞（簡(jiǎn)稱(chēng)ES細(xì)胞）的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.ES細(xì)胞體積大，核仁明顯B.ES細(xì)胞可以從原始性腺中分離獲取C.ES細(xì)胞具有發(fā)育的全能性D.ES細(xì)胞可用于研究細(xì)胞凋亡的機(jī)理4、下圖為利用重疊延伸PCR的方法在蛋白A基因中部引入定點(diǎn)突變（A/T堿基對(duì)變?yōu)镚/C）的過(guò)程。該過(guò)程需設(shè)計(jì)四種引物；其中引物A；D與蛋白A基因的兩端完全配對(duì)，引物B、C雖與蛋白A基因中部配對(duì)，但在欲引入突變的位置替換為突變后的堿基。通過(guò)多次獨(dú)立的PCR達(dá)到目的。

下列說(shuō)法不正確的是（）A.PCR1所用引物應(yīng)為引物A和BB.PCR2至PCR4依次以PCR1至PCR3的產(chǎn)物為模板C.PCR3無(wú)需額外加入引物D.PCR4的作用是大量擴(kuò)增突變基因5、重組新冠病毒疫苗的制備原理是將新冠病毒S蛋白受體結(jié)合區(qū)(RBD)基因通過(guò)基因工程技術(shù)重組到中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞內(nèi)，在體外大量表達(dá)出RBD二聚體，提取后制備成疫苗。下列敘述正確的是（）A.CHO細(xì)胞作為新冠病毒的宿主細(xì)胞，提供病毒所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)B.新冠病毒的RBD基因可以直接重組到CHO細(xì)胞的DNA分子上C.體外培養(yǎng)重組CHO細(xì)胞時(shí)需添加適量的干擾素防止雜菌污染D.要檢測(cè)RBD基因在CHO細(xì)胞中成功表達(dá)，可用抗原一抗體雜交方法6、如圖為基因表達(dá)載體的模式圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.構(gòu)建基因表達(dá)載體需要用到限制酶和DNA連接酶B.終止子位于基因的下游，使翻譯在所需要的地方停止下來(lái)C.構(gòu)建成功后可使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代D.抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因評(píng)卷人得分二、多選題(共8題，共16分)7、2012年6月29日，中國(guó)首例設(shè)計(jì)嬰兒誕生。這個(gè)嬰兒的父母均為地中海貧血基因的攜帶者。此前，二人曾育有一女，患有重度地中海貧血，為了再生一個(gè)健康的孩子，用他的臍帶血幫助姐姐進(jìn)行造血干細(xì)胞移植，設(shè)計(jì)了這個(gè)嬰兒。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（）A.“設(shè)計(jì)試管嬰兒”利用體外受精、胚胎移植、植入前胚胎遺傳學(xué)診斷技術(shù)等B.“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”均為有性生殖C.“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”都要進(jìn)行胚胎選擇，二者選擇的目的相同D.設(shè)計(jì)嬰兒性別是“設(shè)計(jì)試管嬰兒”的第一步8、下列有關(guān)利用酵母菌發(fā)酵制作葡萄酒的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.葡萄糖在酵母菌細(xì)胞的線粒體內(nèi)分解成丙酮酸B.制作葡萄酒時(shí)，酵母菌先在有氧條件下大量繁殖C.制作過(guò)程中，酵母菌始終處于堿性環(huán)境D.酵母菌的發(fā)酵產(chǎn)物不會(huì)影響自身的代謝活動(dòng)9、下圖為胚胎干細(xì)胞獲取及培養(yǎng)簡(jiǎn)圖；據(jù)圖示信息判斷，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.通過(guò)③過(guò)程可定向培育人造組織器官，用于器官移植B.研究細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理可選擇圖中②或③途徑C.胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中5%CO2的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞呼吸D.②過(guò)程只能在飼養(yǎng)層細(xì)胞上進(jìn)行，該細(xì)胞可作為干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞10、下列關(guān)于發(fā)酵工程的應(yīng)用，敘述正確的是（）A.檸檬酸是一種廣泛應(yīng)用的食品酸度調(diào)節(jié)劑，可以通過(guò)黑曲霉發(fā)酵制得B.可以將乙型肝炎病毒的抗原基因轉(zhuǎn)入酵母菌通過(guò)發(fā)酵工程制備乙型肝炎疫苗C.利用發(fā)酵工程生產(chǎn)的白僵菌特異性強(qiáng)，只能用來(lái)防治一種農(nóng)林害蟲(chóng)D.一種真菌通過(guò)發(fā)酵工程產(chǎn)生的井岡霉素可以用來(lái)防治水稻枯紋病11、將單克隆抗體與前體藥物的專(zhuān)一性活化酶藕聯(lián)（簡(jiǎn)稱(chēng)抗體導(dǎo)向酶偶聯(lián)）是特異性治療腫瘤并減少對(duì)正常細(xì)胞傷害的最新研究方向。堿性磷酸酶是抗腫瘤藥物多柔比星前體的專(zhuān)一性活化酶，醫(yī)學(xué)研究中利用抗體導(dǎo)向酶偶聯(lián)機(jī)理將堿性磷酸酶與單克隆抗體制成“生物導(dǎo)彈”，通過(guò)活化多柔比星使其對(duì)DNA造成損傷，進(jìn)而抑制以DNA為模板進(jìn)行的生理活動(dòng)，達(dá)到治療腫瘤的目的。下列說(shuō)法正確的是（）A.為獲得單克隆抗體應(yīng)首先給小白鼠注射腫瘤細(xì)胞表面抗原，得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞B.制備單克隆抗體的過(guò)程中至少要經(jīng)過(guò)兩次原理和目的均不同的篩選過(guò)程C.生物導(dǎo)彈綜合利用了堿性磷酸酶的定向制導(dǎo)作用和單克隆抗體的特異性殺傷能力D.多柔比星只作用于有增殖能力的細(xì)胞12、下面為制備單克隆抗體過(guò)程示意圖，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.①表示B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞均是從小鼠的脾臟中提取的B.④中的篩選是通過(guò)抗原—抗體反應(yīng)進(jìn)行的C.④中的篩選是為了獲得能產(chǎn)生多種抗體的雜交瘤細(xì)胞D.⑤可以無(wú)限增殖13、利用枯草芽孢桿菌的發(fā)酵可以生產(chǎn)亮氨酸脫氫酶。在啟動(dòng)子和亮氨酸脫氫酶基因之間插入信號(hào)肽（SPN）基因并將重組質(zhì)粒導(dǎo)人枯草芽孢桿菌構(gòu)建工程菌，可提高亮氨酸脫氫酶的生產(chǎn)水平。重組質(zhì)粒的構(gòu)建如圖所示，KmR為卡那霉素抗性基因，ApR為氨芐青霉素抗性基因，圖中各限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端不同。下列敘述正確的是（）

A.重組質(zhì)粒pMA5-SPN-leudh除圖中標(biāo)注外還應(yīng)具有終止子、復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)B.構(gòu)建重組質(zhì)粒用NdeI和BamHI兩種酶有助于正確插入目的基因C.圖中KmR和ApR存在于質(zhì)粒中的作用是便于重組DNA分子的篩選D.圖中各限制酶切開(kāi)的是氫鍵和磷酸二酯鍵，切下的DNA片段拼接需依靠DNA連接酶14、下列敘述中錯(cuò)誤的是（）A.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出B.細(xì)胞代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性C.在pH和溫度相同時(shí)加酶洗衣粉的洗滌效果好于普通洗衣粉D.透明帶反應(yīng)是防止多精入卵的第一道屏障評(píng)卷人得分三、填空題(共7題，共14分)15、哺乳動(dòng)物核移植可以分為_(kāi)_____核移植（比較容易）和______核移植（比較難）。16、在課題1中，我們學(xué)習(xí)了稀釋涂布平板法。這一方法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中_________________的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，____________________。17、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。18、第三步：將目的基因?qū)隷_____19、PCR技術(shù)的DNA體外復(fù)制環(huán)境有DNA解旋酶、耐熱DNA聚合酶、DNA母鏈、4種脫氧核苷酸和__________，它能使DNA聚合酶能夠從引物的________端開(kāi)始連接脫氧核苷酸。（人教P58列表），而引物是一段______________片段，用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為_(kāi)___個(gè)核苷酸。20、通常將DNAD的羥基（—OH）成為_(kāi)______________端，而磷酸基團(tuán)的末端成為_(kāi)__________端。由于_______________，因此DNA需要引物，因此DNA的合成方向總是從_________________延伸。21、植物繁殖的新途徑。

微型繁殖：可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。

作物脫毒：采用______組織培養(yǎng)來(lái)除去病毒（因?yàn)橹参锓稚鷧^(qū)附近的病毒______）

人工種子：以植物組織培養(yǎng)得到的______、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)_____包裝得到的種子。優(yōu)點(diǎn)：完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性，______；方便儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。

人工種子的結(jié)構(gòu)包括：______、_____和______。評(píng)卷人得分四、判斷題(共4題，共28分)22、從牛卵巢中采集的卵母細(xì)胞可直接用于體細(xì)胞核移植。（選擇性必修3P53）()A.正確B.錯(cuò)誤23、利用基因工程技術(shù)建立移植器官工廠是目前基因工程取得實(shí)際應(yīng)用成果非常多的領(lǐng)域。()A.正確B.錯(cuò)誤24、要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，最終必須通過(guò)改造氨基酸序列來(lái)完成。（選擇性必修3P94）()A.正確B.錯(cuò)誤25、中國(guó)政府積極支持制定《禁止生殖性克隆人國(guó)際公約》，堅(jiān)決反對(duì)克隆人，不允許進(jìn)行任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)。（選擇性必修3P108）()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共3題，共30分)26、I：“CTAB法”和“SDS法”是提取DNA的常用方法，CTAB提取液含有CTAB、EDTA等成分，SDS提取液含SDS、EDTA等成分。CTAB能破壞膜結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)變性，提高DNA在提取液中的溶解度；SDS能破壞膜結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)變性，EDTA能螯合Mg2+、Mn2+；抑制DNA酶的活性。某科研小組為了尋找提取臘梅DNA的優(yōu)良方法，比較了兩種提取DNA的方法，主要操作如下：

實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果如下（表中OD260反映溶液中核酸的濃度；OD280反映溶液中蛋白質(zhì)的濃度。理論上，純DNA溶液的OD260/OD280為1.8，純RNA溶液的OD260/OD280為2.0）。

。CTABSDSOD260OD280OD260/OD28OD260OD280OD260/OD280.0030.0181.8330.0060.0051.200請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（1）與常溫下研磨相比，液氮中研磨的優(yōu)點(diǎn)是_______；CTAB法和SDS法提取液中都加入EDTA的目的是_______。

（2）氯仿一異戊醇密度均大于水且不溶于水，DNA不溶于氯仿一異戊醇，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)可溶于氯仿一異戊醇，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加入氯仿一異戊醇離心后，應(yīng)取①______加異丙醇（異丙醇與水互溶）并離心進(jìn)行純化，利用異丙醇溶液純化DNA的原理是________。

（3）兩種方法中，________法提取的DNA較多，其可能原因是_______。

II：某研究組對(duì)玉米開(kāi)展了組織培養(yǎng)及相關(guān)研究；A；B、C、D表示以親本植物為材料進(jìn)行的四種人工繁殖過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，外植體需要進(jìn)行消毒處理。利用圖中的部分葉片進(jìn)行植物組織培養(yǎng)時(shí)，需將其先用________消毒30s后；用無(wú)菌水清洗2-3次，再用次氯酸鈉處理30min后，立即用無(wú)菌水清洗2-3次。

（2）2，4-D常用于玉米愈傷組織的誘導(dǎo)，對(duì)形態(tài)的發(fā)生有一定的抑制作用。為促進(jìn)愈傷組織再分化，在配制分化培養(yǎng)基時(shí)需____（填“升高”“保持”或“降低）2，4-D的濃度。當(dāng)玉米愈傷組織在只含有細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，出現(xiàn)具有分生能力的綠色芽點(diǎn)，但要繼續(xù)出芽，通常在培養(yǎng)基中添加____________；以促進(jìn)苗形成。

（3）研究中用顯微鏡可以觀察到的現(xiàn)象是_______（填下列序號(hào)）。

①綠色芽點(diǎn)細(xì)胞排列松散②剛?cè)诤系碾s交細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離。

③胚狀體細(xì)胞中有葉綠體④分化的愈傷組織的各細(xì)胞的形態(tài)大小一致27、某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A；磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基；成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。

（1）培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是__________，這種培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。

（2）“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來(lái)自培養(yǎng)基中的__________。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，由此推測(cè)“目的菌”呼吸作用的類(lèi)型是__________。

（3）在上述實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是__________。

（4）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí)，常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種，此過(guò)程中所用的接種工具是__________，操作時(shí)采用__________滅菌的方法。

（5）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是____________________。

（6）某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)污水池中“目的菌”的總數(shù)，他選用104、105、106倍稀釋液進(jìn)行平板劃線，每種稀釋液都設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿。從設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的角度看，還應(yīng)設(shè)置的一組對(duì)照實(shí)驗(yàn)是__________，此對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的是____________________。28、下圖是某同學(xué)設(shè)計(jì)的傳統(tǒng)發(fā)酵裝置示意圖。比較傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與現(xiàn)代發(fā)酵工程；回答下列問(wèn)題：

(1)傳統(tǒng)發(fā)酵釀酒與現(xiàn)代工業(yè)發(fā)酵釀酒的原理是______。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生了酒精（不考慮發(fā)酵液中葡萄糖的影響），寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)思路并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論______。

(2)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)一般以天然存在的______發(fā)酵，品質(zhì)不一，現(xiàn)代工業(yè)發(fā)酵一般為單一菌種發(fā)酵，品質(zhì)較高。自制的果酒并非商品意義上的產(chǎn)品，在實(shí)際生產(chǎn)中還需要經(jīng)過(guò)______裝瓶等過(guò)程才能獲得成品酒。

(3)若要測(cè)定發(fā)酵罐中酵母菌的種群密度，取10mL發(fā)酵液稀釋1000倍，利用25×16的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，觀察并統(tǒng)計(jì)到中方格中的酵母菌平均數(shù)為9個(gè)，則每毫升發(fā)酵液中酵母菌數(shù)量約是______個(gè)。

(4)利用上圖中裝置釀酒與釀醋時(shí)，操作上的最主要的區(qū)別是______。評(píng)卷人得分六、綜合題(共3題，共9分)29、三氯生是一種廣譜抑菌物質(zhì)；可用于基因工程中篩選含目的基因的受體菌。某科研團(tuán)隊(duì)通過(guò)先篩選出一種對(duì)三氯生抗性較強(qiáng)的重組質(zhì)粒(如圖1)，再將可以受溫度調(diào)控的基因插入該質(zhì)粒上，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)利用從細(xì)菌中提取的DNA通過(guò)PCR技術(shù)獲取fabV-A基因(或fabV-B基因)時(shí)，至少需經(jīng)過(guò)________次擴(kuò)增可獲得8個(gè)雙鏈等長(zhǎng)的目的基因。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，微量離心管中需加入的物質(zhì)有：模板、引物、原料、________________。下圖2為PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果，操作較理想的泳道有________條。

(2)圖1中，步驟Ⅰ需要的工具酶是________________；步驟Ⅱ常用的方法是用Ca2＋處理使細(xì)菌成為_(kāi)_______________；為達(dá)到步驟Ⅲ預(yù)期的篩選目的，所用物質(zhì)X最可能為_(kāi)_______。

(3)為獲得一種增強(qiáng)大腸桿菌對(duì)三氯生的抵抗作用效果較好的重組質(zhì)粒，將含有不同質(zhì)粒的大腸桿菌分別接種到相應(yīng)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)一段時(shí)間后，結(jié)果如圖3，則適宜選作構(gòu)建溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒的是________。

(4)科研工作者對(duì)上述選出的質(zhì)粒進(jìn)行改造，獲得了圖4所示質(zhì)粒。其中S1和S2是啟動(dòng)子，P1和P2是終止子。H基因在高溫下會(huì)抑制S1，L基因在低溫下會(huì)抑制S2。

①如果將lacZ基因和GFP(綠色熒光蛋白)基因插入圖4質(zhì)粒中，且使得低溫下只表達(dá)GFP基因，高溫下只表達(dá)lacZ基因，則lacZ基因插在________之間，而GFP基因的插入位置及注意點(diǎn)是________________。

②若以大腸桿菌為受體細(xì)胞，篩選上述①中插入GFP基因成功的受體細(xì)胞的依據(jù)是：大腸桿菌能在含________的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，且__________________。30、中科院動(dòng)物研究所通過(guò)基因工程技術(shù)向豬的基因組內(nèi)插入一個(gè)解偶聯(lián)蛋白基因（UCP）；經(jīng)過(guò)基因改造的豬瘦肉率高；脂肪少、抗寒能力強(qiáng)。下圖是基因改造過(guò)程中涉及的相關(guān)限制酶及酶切位點(diǎn)。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

(1)實(shí)施基因工程的核心步驟是_____。

(2)為避免出現(xiàn)質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，可用圖中_____兩種限制酶同時(shí)切割質(zhì)粒和UCP1基因。為了獲取重組質(zhì)粒，除了使用限制酶外，還需使用_____。

(3)重組質(zhì)粒上的_____是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位；以驅(qū)動(dòng)解偶聯(lián)蛋白基因（UCPI）轉(zhuǎn)錄。

(4)圖中的抗生素抗性基因的作用是作為_(kāi)____基因；以便于篩選。

(5)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA是否插入了解偶聯(lián)蛋白基因（UCPI），常用的檢測(cè)方法是_____。31、DDX5基因在細(xì)胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用。研究人員運(yùn)用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)對(duì)口蹄疫病毒易感的PK-15細(xì)胞株中的DDX5基因進(jìn)行敲除，為后續(xù)研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基礎(chǔ)。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題。

(1)圖1中，Ori是_______（酶）首先結(jié)合的核苷酸序列。構(gòu)建CRISPR-Cas9表達(dá)載體時(shí)使用的工具酶主要有______。結(jié)合對(duì)圖2中CRISPR-Cas9技術(shù)原理的理解，圖1表達(dá)載體中需要插入兩種sgRNA基因，原因是_____。

(2)研究中先將CRISPR-Cas9表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌DH5a，再將菌液利用________法接種到加有________的細(xì)菌培養(yǎng)基上，待菌落長(zhǎng)成后，直接挑取菌落加入到PCR反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行基因鑒定。PCR過(guò)程中不需要先提取細(xì)菌DNA的原因是______。

(3)研究中采用培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌對(duì)CRISPR-Cas9表達(dá)載體進(jìn)行擴(kuò)增。與PCR相比，利用大腸桿菌進(jìn)行目的基因擴(kuò)增的優(yōu)點(diǎn)有________、____________。

(4)取轉(zhuǎn)化的PK15細(xì)胞懸液進(jìn)行有限稀釋?zhuān)俳臃N到6孔培莽板上，一段時(shí)間后對(duì)各孔內(nèi)的細(xì)胞株進(jìn)行DDX5蛋白檢測(cè)，結(jié)果如圖（其中B-actin是真核細(xì)胞骨架蛋白）。對(duì)細(xì)胞懸液有限稀釋法的目的是________，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)CO2培養(yǎng)箱中充入的氣體應(yīng)是_______。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，敲除DDX5基因的細(xì)

胞株編號(hào)有___________。

參考答案一、選擇題(共6題，共12分)1、D【分析】【分析】

通過(guò)與分子量標(biāo)記比較可知單用EcoRI處理后產(chǎn)生了4kb和6kb兩條帶；而利用EcoRI和NotI雙酶切時(shí)產(chǎn)生了6kb、3kb、1kb三條帶，即4kb的片段進(jìn)一步被NotI酶切為3kb和1kb的片段，因此DNA含有一個(gè)NotI酶切位點(diǎn)，因?yàn)橛肗otI處理只產(chǎn)生了一個(gè)10kb的條帶，所以該分子必須是環(huán)狀的，長(zhǎng)度一定是10kb。據(jù)此答題。

【詳解】

AB、單用EcoRI處理和利用EcoRI和NotI雙酶切時(shí)產(chǎn)生的結(jié)果不同，說(shuō)明DNA含有NotI酶切位點(diǎn)，因?yàn)橛肗otI處理只產(chǎn)生了一個(gè)10kb的條帶，所以該分子必須是環(huán)狀的，且長(zhǎng)度一定是10kb；A正確；B正確；

C、因?yàn)橛肗otI處理只產(chǎn)生了一個(gè)10kb的條帶，說(shuō)明該環(huán)狀DNA上含有一個(gè)NotI切割位點(diǎn)，單用EcoRI處理后產(chǎn)生了4kb和6kb兩條帶；說(shuō)明該環(huán)狀DNA上含有2個(gè)EcoRI切割位點(diǎn)，C正確：

D、用EcoRI處理后產(chǎn)生的4kb的片段，進(jìn)一步被NotI酶切為3kb和1kb的片段，可以得知NotI切點(diǎn)與EcoRI切點(diǎn)的最短距離為1kb，最大距離為3kb；D錯(cuò)誤。

故選D。

【點(diǎn)睛】2、A【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA；逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，然后擴(kuò)增，可獲得大量的基因B，A正確；

B；基因文庫(kù)中保存的是各基因片段；從基因文庫(kù)中獲取基因B時(shí)，不需要使用DNA連接酶，B錯(cuò)誤；

C；目的基因與質(zhì)粒連接用的是DNA連接酶；而DNA聚合酶是在DNA復(fù)制中用到的酶，C錯(cuò)誤；

D；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)；常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，即將基因B先導(dǎo)入農(nóng)桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞，D錯(cuò)誤。

故選A。

【點(diǎn)睛】3、A【分析】【分析】

胚胎干細(xì)胞是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來(lái)的一類(lèi)細(xì)胞；它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖；自我更新和多向分化的特性。

【詳解】

A；胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上有體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯的特點(diǎn)；A錯(cuò)誤；

B；胚胎干細(xì)胞可以從早期胚胎或原始性腺中分離獲?。籅正確；

C；胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性；C正確；

D；胚胎干細(xì)胞是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料；是研究細(xì)胞凋亡的機(jī)理的理想材料，D正確；

故選A。4、B【分析】【分析】

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)；它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。

【詳解】

A、引物與模板的3，端結(jié)合；由圖PCR1的產(chǎn)物可知，PCR1所用引物應(yīng)為引物A和B，A正確；

B；由圖可知；PCR1和2均以原始DNA為模板，PCR3以PCR1和2的產(chǎn)物為模板，PCR4以PCR3產(chǎn)物為模板，B錯(cuò)誤；

C；由圖可知；兩條鏈互為模板和引物，故PCR3無(wú)需額外加入引物，C正確；

D；PCR4的作用是大量擴(kuò)增突變基因；得到大量的新的蛋白A基因，D正確。

故選B。5、D【分析】【分析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件：（1）充足的營(yíng)養(yǎng)供給--微量元素、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、血清等。（2）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（3）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。（4）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

【詳解】

A；CHO細(xì)胞不是新冠病毒的宿主細(xì)胞；中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞是基因工程的受體細(xì)胞，A錯(cuò)誤；

B；新冠病毒為RNA病毒；不能直接與CHO中的DNA重組，B錯(cuò)誤；

C；體外培養(yǎng)重組CHO細(xì)胞時(shí)需添加適量的抗生素；其目的是防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；

D；可用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)出蛋白質(zhì)；D正確。

故選D。6、B【分析】【分析】

基因表達(dá)載體的構(gòu)建〈即目的基因與運(yùn)載體結(jié)合）是實(shí)施基因工程的第二步；也是基因工程的核心。其構(gòu)建目的是使目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

【詳解】

A；首先用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體；再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組DNA分子，A正確；

B；終止子位于基因的下游；作用是使轉(zhuǎn)錄在相應(yīng)的地方停止，不是使翻譯在所需要的地方停止下來(lái)，B錯(cuò)誤；

C；基因表達(dá)載體的構(gòu)建目的是使目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在；并且可以遺傳給下一代，C正確；

D；抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因；標(biāo)記基因便于目的基因的鑒定和篩選，可檢測(cè)受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因，D正確。

故選B。二、多選題(共8題，共16分)7、A:B【分析】【分析】

1；試管嬰兒技術(shù)是指通過(guò)人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精；并通過(guò)培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

2；設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)是通過(guò)體外受精獲得許多胚胎；然后從中選擇符合要求的胚胎，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

【詳解】

A；“設(shè)計(jì)試管嬰兒”利用體外受精、胚胎移植、植入前胚胎遺傳學(xué)診斷技術(shù)等；A正確；

B；“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”均利用了體外受精技術(shù)；均為有性生殖，B正確；

C；“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”都要進(jìn)行胚胎選擇；但二者選擇的目的不同，C錯(cuò)誤；

D；體外受精獲得許多胚胎是“設(shè)計(jì)試管嬰兒”的第一步；D錯(cuò)誤。

故選AB。

【點(diǎn)睛】8、A:C:D【分析】【分析】

酵母菌是單細(xì)胞的真核生物；屬于真菌，代謝類(lèi)型是兼性厭氧型。在氧氣充足時(shí)，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，將葡萄糖分解為二氧化碳和水；在無(wú)氧條件下，進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳。

【詳解】

A；利用酵母菌發(fā)酵的方式制作葡萄酒時(shí)；酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸，葡萄糖在酵母菌細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)內(nèi)被分解成丙酮酸，A錯(cuò)誤；

B；酵母菌繁殖需要空氣；在完全隔絕空氣的情況下，酵母菌繁殖幾代就停止了，要維持酵母菌長(zhǎng)時(shí)間發(fā)酵，必須供給一定的氧氣，故制作葡萄酒時(shí)酵母菌先在有氧條件下大量增殖，B正確；

C、酵母菌發(fā)酵的后期，由于產(chǎn)生的CO2和其他代謝產(chǎn)物的積累；發(fā)酵液呈酸性，C錯(cuò)誤；

D；酵母菌發(fā)酵產(chǎn)生的酒精會(huì)對(duì)酵母菌的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用；D錯(cuò)誤。

故選ACD。9、B:C:D【分析】【分析】

1；胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性；在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。

2；識(shí)圖分析可知；圖中①為早期胚胎的囊胚階段，②為胚胎干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，如在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)，③表示在胚胎干細(xì)胞體外誘導(dǎo)，分裂、分化形成各種組織和器官，培育出各種人造組織器官的過(guò)程。

【詳解】

A.圖中③過(guò)程為干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化；通過(guò)該過(guò)程可定向培育人造組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和移植后免疫排斥的問(wèn)題，A正確；

B.圖中途徑②沒(méi)有發(fā)生細(xì)胞分化；所以研究細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理可選擇圖中③途徑，B錯(cuò)誤；

C.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，5%CO2的主要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH；C錯(cuò)誤；

D.②過(guò)程胚胎干細(xì)胞只分裂而不分化的培養(yǎng)；可在飼養(yǎng)層細(xì)胞上進(jìn)行，飼養(yǎng)層細(xì)胞可作為干細(xì)胞分裂；增殖的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，也可在添加抑制因子的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，使干細(xì)胞只分裂而不分化，D錯(cuò)誤。

故選BCD。10、A:B【分析】【分析】

發(fā)酵工程是指采用現(xiàn)代工程技術(shù)手段；利用微生物的某些特定功能，為人類(lèi)生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程的一種技術(shù)。發(fā)酵工程的內(nèi)容包括菌種選育；培養(yǎng)基的配制、滅菌、種子擴(kuò)大培養(yǎng)和接種、發(fā)酵過(guò)程和產(chǎn)品的分離提純（生物分離工程）等方面。

【詳解】

A；檸檬酸是一種廣泛應(yīng)用的食品酸度調(diào)節(jié)劑；可以通過(guò)黑曲霉發(fā)酵制得，A正確；

B；可以將乙型肝炎病毒的抗原基因轉(zhuǎn)入酵母菌通過(guò)發(fā)酵工程制備乙型肝炎疫苗；B正確；

C；利用發(fā)酵工程生產(chǎn)的白僵菌可以用來(lái)防治80多種農(nóng)林害蟲(chóng)；C錯(cuò)誤；

D；一種放線菌通過(guò)發(fā)酵工程產(chǎn)生的井岡霉素可以用來(lái)防治水稻枯紋病；D錯(cuò)誤。

故選AB。

【點(diǎn)睛】11、A:B【分析】【分析】

單克隆抗體的制備。

（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原；然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。

（2）獲得雜交瘤細(xì)胞。①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合。②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。

（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)。

（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。

（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

【詳解】

A；單克隆抗體制備過(guò)程中；需要給小白鼠注射腫瘤細(xì)胞表面抗原，刺激小鼠產(chǎn)生體液免疫，才能得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞，A正確；

B；制備單克隆抗體的過(guò)程中至少要經(jīng)過(guò)兩次原理和目的均不同的篩選過(guò)程；第一次篩選雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，B正確；

C；生物導(dǎo)彈綜合利用了單克隆抗體的定向制導(dǎo)作用和堿性磷酸酶的特異性殺傷能力；C錯(cuò)誤；

D；根據(jù)題干信息“通過(guò)活化多柔比星使其對(duì)DNA造成損傷；進(jìn)而抑制以DNA為模板進(jìn)行的生理活動(dòng)”，說(shuō)明多柔比星還可以抑制細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，而不增殖的細(xì)胞也具有轉(zhuǎn)錄過(guò)程，D錯(cuò)誤。

故選AB。12、A:C【分析】據(jù)圖分析；①過(guò)程表示獲取B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞；②過(guò)程促進(jìn)細(xì)胞融合，采用離心；電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導(dǎo)，篩選出雜交瘤細(xì)胞；④過(guò)程通過(guò)專(zhuān)一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性，篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群；⑥過(guò)程表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。

【詳解】

A；B淋巴細(xì)胞是從小鼠的脾臟中提取的；骨髓瘤細(xì)胞不是，A錯(cuò)誤；

B；④中篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；可以通過(guò)檢測(cè)抗原、抗體反應(yīng)，如果有反應(yīng)說(shuō)明表達(dá)了抗體，B正確；

C；④中的篩選是為了獲得能產(chǎn)生一種抗體的雜交瘤細(xì)胞；C錯(cuò)誤；

D；⑤可以無(wú)限增殖；也能產(chǎn)生特異性抗體，D正確。

故選AC。13、A:B:C【分析】【分析】

限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種。

【詳解】

A；重組質(zhì)粒pM5-SPN-leudh中除圖中標(biāo)注外；還應(yīng)該具有終止子，復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)，A正確；

B；NdeI和BamHI兩種酶切割形成的黏性末端不同；構(gòu)建重組質(zhì)粒用NdeI和BamHI兩種酶切有助于目的基因正確插入，B正確；

C；KmR和A_pR為標(biāo)記基因；圖中KmR和A_pR存在于質(zhì)粒中的作用是便于重組DNA分子的篩選，C正確；

D；限制酶和DNA連接酶的作用部位為磷酸二酯鍵；D錯(cuò)誤。

故選ABC。14、A:B:C【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液；但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。

2；植物組織培養(yǎng)依據(jù)的原理為植物體細(xì)胞的全能性；即已經(jīng)分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整植株的潛能；培養(yǎng)過(guò)程的順序是離體植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）脫分化形成愈傷組織，再分化形成根、芽等器官進(jìn)而形成新的植物體。

【詳解】

A；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；當(dāng)NaCl溶液的濃度為0.14mol/L時(shí)，DNA溶解度最小，因此改變NaCl溶液的濃度既能使DNA溶解也能使其析出，A錯(cuò)誤；

B；細(xì)胞代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)利用的是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；原理是細(xì)胞增殖，未體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，B錯(cuò)誤；

C；相同時(shí)加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉酶的催化作用需適宜的pH值；pH不適宜時(shí)，加酶洗衣粉洗滌效果不一定好于普通洗衣粉，C錯(cuò)誤；

D；精子與卵子相遇后；會(huì)發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放頂體酶，透明帶反應(yīng)和卵黃膜封閉作用是阻止其他精子入卵的兩道屏障，其中透明帶反應(yīng)是防止多精入卵的第一道屏障，D正確。

故選ABC。三、填空題(共7題，共14分)15、略

【解析】①.胚胎細(xì)胞②.體細(xì)胞16、略

【解析】①.活菌②.培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌17、略

【解析】①.接種②.平板劃線法③.稀釋涂布平板法18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】受體細(xì)胞19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2種引物DNA或RNA20—3020、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】3，5，DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成，而只能從3，端延伸DNA子鏈的5，端向3，端21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】莖尖極少或沒(méi)有）胚狀體人工薄膜不受季節(jié)的限制人工種皮；胚狀體和人工胚乳。

（2）四、判斷題(共4題，共28分)22、B【分析】【詳解】

從牛卵巢中采集到卵母細(xì)胞后；接著對(duì)其進(jìn)行的操作是先在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期，再通過(guò)顯微操作去除卵母細(xì)胞中的細(xì)胞核，獲得去核的卵母細(xì)胞，再經(jīng)核移植獲得重組的受體細(xì)胞。

故該表述錯(cuò)誤。23、B【分析】【詳解】

基因工程技術(shù)可以使建立移植器官工廠的設(shè)想成為現(xiàn)實(shí)；說(shuō)明并未開(kāi)始實(shí)際應(yīng)用。

故錯(cuò)誤。24、B【分析】【詳解】

要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，最終必須通過(guò)改造基因中的堿基序列來(lái)完成，因?yàn)榛蚰苤笇?dǎo)蛋白質(zhì)的生物合成，故說(shuō)法錯(cuò)誤。25、A【分析】【詳解】

中國(guó)政府對(duì)于“克隆人”的態(tài)度是禁止生殖性克隆人，積極支持制定《禁止生殖性克隆人國(guó)際公約》，堅(jiān)決反對(duì)克隆人，不允許進(jìn)行任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)。故該說(shuō)法正確。五、實(shí)驗(yàn)題(共3題，共30分)26、略

【分析】【分析】

I：核酸是生物有機(jī)體中的重要成分；在生物體中核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，以核蛋白的形式存在。核酸分為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）兩大類(lèi)，在真核細(xì)胞中，前者主要存在于細(xì)胞核中，后者主要存在于細(xì)胞質(zhì)及核仁里。在制備核酸時(shí)，通過(guò)研磨破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，使核蛋白被釋放出來(lái)。提取DNA有有多種方法，“CTAB法”和“SDS法”是提取DNA的常用方法，二者既有區(qū)別又有聯(lián)系。

II：題圖分析：A表示利用生殖細(xì)胞得到單倍體植株；B表示通過(guò)胚狀體進(jìn)行無(wú)性繁殖；其中①為脫分化；再分化；C為植物組織培養(yǎng)；D表示植物體細(xì)胞雜交，其中②是誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合。

【詳解】

I：（1）液氮溫度低，液氮中研磨會(huì)研磨得更充分，在液氮中研磨DNA酶活性低，降低DNA的分解；EDTA能螯合Mg2+、Mn2+；抑制DNA酶的活性，減少DNA水解，提高DNA的完整性和總量。

（2）氯仿-異戊醇密度均大于水且不溶于水；DNA不溶于氯仿-異戊醇，離心后，氯仿-異戊醇位于試管的底部，DNA溶于上清液中，所以離心后應(yīng)該取上清液；含DNA的上清液中加異丙醇離心后取的是沉淀物，說(shuō)明DNA不溶于異丙醇，而雜質(zhì)能溶于異丙醇。

（3）從表中數(shù)據(jù)可知；CTAB法提取的DNA的OD260是0.033，而SDS法提取的DNA的OD260是0.006，0.033＞0.006，所以CTAB法提取的DNA較多，根據(jù)CTAB和SDS兩種試劑作用的區(qū)別，可知CTAB提高了DNA在提取液中的溶解度，從而可提取出更多的DNA。

II：（1）植物組織培養(yǎng)過(guò)程中；整個(gè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌無(wú)毒，利用圖中的部分葉片進(jìn)行植物組織培養(yǎng)時(shí)，需將其先用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒30s后，用無(wú)菌水清洗2-3次，再用次氯酸鈉處理30min后，立即用無(wú)菌水清洗2-3次。

（2）為促進(jìn)愈傷組織再分化；在配制分化培養(yǎng)基時(shí)需降低2，4-D的濃度。當(dāng)玉米愈傷組織在只含有細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，出現(xiàn)具有分生能力的綠色芽點(diǎn)，但要繼續(xù)出芽，通常在培養(yǎng)基中添加適量的生長(zhǎng)素，以促進(jìn)苗形成。

（3）①芽是植物體中具有分生能力的組織；細(xì)胞排列緊密，①錯(cuò)誤；

②剛?cè)诤系闹参矬w細(xì)胞沒(méi)有成熟的大液泡；無(wú)法構(gòu)成滲透系統(tǒng)，不能發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，②錯(cuò)誤；

③胚狀體細(xì)胞出現(xiàn)具有分生能力的綠色芽；因此其細(xì)胞內(nèi)有葉綠體，③正確；

④分化的愈傷組織的結(jié)果形成了具有根和芽的胚狀體；細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生了變化，④錯(cuò)誤。

故選③。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查DNA提取原理、操作過(guò)程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析以及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，意在考查學(xué)生讀圖能力和分析應(yīng)用能力?！窘馕觥垦心コ浞郑蜏匾种泼富钚砸种艱NA酶的活性，減少DNA水解，提高DNA的完整性和總量上清液DNA不溶于異丙醇，而雜質(zhì)能溶于異丙醇CTABCTAB提高了DNA在提取液中的溶解度，從而能提取出更多的DNA（體積分?jǐn)?shù)為70-75%）酒精降低（適量的）生長(zhǎng)素③27、略

【分析】【分析】

微生物的培養(yǎng)；培養(yǎng)基的成分必須含有碳源；氮源、水和無(wú)機(jī)鹽。獲取純凈微生物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌入侵。實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選的原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

【詳解】

（1）本實(shí)驗(yàn)是分離出降解的有機(jī)化合物A的菌種；所以培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是篩選降解的有機(jī)化合物A的菌種，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）分析培養(yǎng)基的配方可知；該培養(yǎng)基由化合物A；磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制而成，其他成分中為體現(xiàn)出提供碳源和氮源，因此化合物A為目的菌提供了碳源和氮源；在培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)該振蕩培養(yǎng)，增加培養(yǎng)液中的溶氧量，故目的菌是需氧微生物，呼吸作用的類(lèi)型是有氧呼吸。

（3）獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是無(wú)菌技術(shù)；防止外來(lái)雜菌入侵。

（4）平板劃線操作的工具是接種環(huán)；對(duì)于接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)該是灼燒滅菌。

（5））實(shí)驗(yàn)結(jié)束后；使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后，才能倒掉，以殺死培養(yǎng)基上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

（6）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過(guò)程應(yīng)遵循對(duì)照原則；該實(shí)驗(yàn)還應(yīng)增設(shè)一組不接種的空白培養(yǎng)基作為對(duì)照，以證明培養(yǎng)基制備是否被雜菌污染，檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格。

【點(diǎn)睛】

本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記無(wú)菌技術(shù)操作方法及接種微生物接種常用的兩種方法，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。【解析】篩選目的菌選擇化合物A有氧呼吸防止外來(lái)雜菌入侵接種環(huán)灼燒防止造成環(huán)境污染不接種的空白培養(yǎng)基檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格28、略

【分析】【分析】

參與果酒的制作的微生物主要是酵母菌；其新陳代謝的類(lèi)型為異養(yǎng)兼性厭氧型，較適宜的發(fā)酵溫度為18~30℃。在無(wú)氧的環(huán)境中酵母菌把糖類(lèi)分解為酒精和二氧化碳。在果酒制作過(guò)程中檢測(cè)發(fā)酵液是否含有酒精，取樣后滴加適量酸性重鉻酸鉀溶液并振蕩，若觀察到溶液顏色的變化是橙色變成灰綠色，則說(shuō)明發(fā)酵液中含有酒精。

【詳解】

（1）傳統(tǒng)發(fā)酵釀酒與現(xiàn)代工業(yè)發(fā)酵釀酒都是利用了酵母菌的無(wú)氧呼吸。酵母菌屬于真核生物；其代謝類(lèi)型是兼性厭氧型，在有氧條件下進(jìn)行大量增殖，在無(wú)氧條件下將葡萄糖分解為酒精。

橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與乙醇（即酒精）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；變成灰綠色，該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖球?yàn)證發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生了酒精，因此實(shí)驗(yàn)自變量是是否加入發(fā)酵液，因變量為溶液顏色變化。對(duì)照組中應(yīng)加入酒精作為陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)遵循等量原則；單一變量原則等，因此實(shí)驗(yàn)思路是：取兩支試管分別標(biāo)號(hào)A、B，A試管中各加入2ml發(fā)酵液，作為實(shí)驗(yàn)組，B試管中各加入2ml酒精，作為對(duì)照組，兩試管中都加入適量酸性重鉻酸鉀，振蕩后觀察試管中顏色變化，AB兩試管都變?yōu)榛揖G色，即可驗(yàn)證發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生了酒精。

（2）傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)一般不進(jìn)行嚴(yán)格滅菌操作；因此其發(fā)酵菌種為天然的混合菌種?，F(xiàn)代工業(yè)發(fā)酵釀制果酒不同于自制果酒，需要經(jīng)過(guò)沉淀；過(guò)濾、滅菌、裝瓶等過(guò)程才能獲得成品酒。

（3）25×16型的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/1mL=1個(gè)中方格中酵母菌數(shù)×25×10000×稀釋倍數(shù)，因此該實(shí)驗(yàn)中每毫升發(fā)酵液中酵母菌數(shù)量=9×25×10000×1000=2.25×109。

（4）釀酒利用酵母菌的無(wú)氧呼吸，需要關(guān)閉充氣口，釀醋利用醋酸菌，醋酸菌是需氧型微生物，因此需向充氣孔中充入無(wú)菌空氣?！窘馕觥?1)酵母菌是兼性厭氧微生物；在無(wú)氧條件下將葡萄糖分解為酒精實(shí)驗(yàn)思路：取兩支試管分別標(biāo)號(hào)A；B，向A試管中各加入2ml發(fā)酵液，向B試管中各加入2ml酒精，向AB兩試管各滴加0．5ml溶有0．1g重鉻酸鉀的濃硫酸溶液（或酸性重鉻酸鉀），并輕輕震蕩，觀察試管中溶液顏色變化。

(2)混合菌種沉淀；過(guò)濾、滅菌。

(3)2.25×109

(4)釀酒時(shí)需關(guān)閉充氣口，釀醋時(shí)則需向充氣孔中充入無(wú)菌空氣六、綜合題(共3題，共9分)29、略

【分析】【分析】

1；基因工程又叫DNA重組技術(shù)；是指按照人們的意愿，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品?；蚬こ痰幕静僮鞑襟E主要包括四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2；PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；PCR技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，原理是DNA復(fù)制，前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物，條件還包括模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。具體過(guò)程為：

（1）變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)；氫鍵斷裂，雙鏈DNA解旋為單鏈。

（2）復(fù)性：當(dāng)溫度降低到50℃左右是；兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合。

（3）延伸：溫度上升到72℃左右；溶液中的四種脫氧核苷酸，在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈。

3；據(jù)圖1分析；圖中過(guò)程Ⅰ表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，是基因工程的核心步驟；過(guò)程Ⅱ表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；過(guò)程Ⅲ表示篩選含目的基因的受體菌的過(guò)程。

【詳解】

（1）結(jié)合PCR技術(shù)過(guò)程分析；其原理是雙鏈DNA復(fù)制，且Taq酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈，則第3次擴(kuò)增才會(huì)出現(xiàn)2個(gè)雙鏈等長(zhǎng)的目的基因，第4次擴(kuò)增才會(huì)出現(xiàn)8個(gè)雙鏈等長(zhǎng)的目的基因；實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，微量離心管中需加入的物質(zhì)有：模板；引物、原料、緩沖液、Taq酶；結(jié)合圖2分析可知，操作比較理想的泳道有4條。

（2）根據(jù)以上分析已知；圖1中過(guò)程Ⅰ表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，該過(guò)程需要限制酶和DNA連接酶的催化；步驟Ⅱ表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，若受體細(xì)胞為細(xì)菌（微生物），可以用鈣離子處理使之成為感受態(tài)；根據(jù)題干信息分析，圖1中要先篩選出一種對(duì)三氯生抗性較強(qiáng)的重組質(zhì)粒，因此步驟Ⅲ中所用的物質(zhì)X應(yīng)該是三氯生。

（3）根據(jù)題中信息及曲線圖分析可知；在培養(yǎng)12h之后，pEA組（含三氯生）與pE2組（無(wú)三氯生）菌液濃度相差不大，而明顯比pE2組（含三氯生）菌液濃度高，說(shuō)明pEA組（含三氯生）對(duì)三氯生的抵抗作用效果最好，因此要“獲得一種增強(qiáng)大腸桿菌對(duì)三氯生的抵抗作用效果較好的重組質(zhì)?！保赃m宜選作構(gòu)建溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒的是pEA。

（4）①根據(jù)題意和圖4分析，已知S1和S2是啟動(dòng)子，P1和P2是終止子，且H基因在高溫下會(huì)抑制S1，L基因在低溫下會(huì)抑制S2，現(xiàn)要低溫下只表達(dá)GFP基因，高溫下只表達(dá)lacZ基因，則lacZ基因應(yīng)該插在啟動(dòng)子S2和終止子P2之間，GFP基因應(yīng)該插在啟動(dòng)子S1和終止子P1之間；且不能破壞H基因和L基因。

②上述①中插入GFP基因成功的受體細(xì)胞（大腸桿菌）；則該大腸桿菌在含三氯生的培養(yǎng)基中可以生長(zhǎng)，且低溫下GFP基因可以表達(dá)，即有綠色熒光，而高溫下GFP基因表達(dá)被抑制，即無(wú)綠色熒光。

【點(diǎn)睛】

本題考查基因工程有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠掌握基因工程的操作步驟，識(shí)記基因工程的操作工具，理解PCR技術(shù)的