2025年滬教新版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年滬教新版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷155考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共6題，共12分)1、實(shí)驗(yàn)人員利用矮牽牛（二倍體，2n=14）的紅色花瓣細(xì)胞（液泡呈紅色）與枸杞（四倍體，4n=48）葉肉細(xì)胞，制備了相應(yīng)的原生質(zhì)體，并誘導(dǎo)其融合，經(jīng)篩選、培養(yǎng)獲得雜種植株。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.獲得該雜種植株時(shí)不用考慮兩種高等植物間的生殖隔離問題B.可利用聚乙二醇、滅活的病毒等作為融合劑誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合C.可利用光學(xué)顯微鏡觀察，篩選出雜種原生質(zhì)體D.若原生質(zhì)體均為兩兩融合，則融合后的細(xì)胞中染色體數(shù)目可能為28、96或62條2、下列哪項(xiàng)是對(duì)待生物技術(shù)的理性態(tài)度？（）A.轉(zhuǎn)基因技術(shù)是按照人們的意愿對(duì)生物進(jìn)行的設(shè)計(jì)，不存在負(fù)面影響B(tài).轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對(duì)于解決糧食、能源等問題起了積極作用，同時(shí)也存在一定風(fēng)險(xiǎn)C.大量引入國(guó)外轉(zhuǎn)基因作物與本地近緣作物品種雜交D.轉(zhuǎn)基因技術(shù)如果被恐怖分子利用將可能導(dǎo)致人類滅絕，應(yīng)停止轉(zhuǎn)基因研究3、下列有關(guān)生物工程技術(shù)圖解的敘述正確的是（）

A.基因工程除了需要圖一所示的工具外，還需兩種工具酶B.圖二中的4是指受精卵的體外培養(yǎng)過程C.圖三中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)最終發(fā)育成胎膜和胎盤D.圖四高度概括了系統(tǒng)整體性原理4、中國(guó)的許多傳統(tǒng)美食制作過程蘊(yùn)含了生物發(fā)酵技術(shù)。下列敘述正確的是（）A.泡菜制作過程中，酵母菌將葡萄糖分解成乳酸B.饅頭制作過程中，酵母菌進(jìn)行呼吸作用產(chǎn)生CO2C.米酒制作過程中，將容器密封可以促進(jìn)酵母菌生長(zhǎng)D.酸奶制作過程中，后期低溫處理可產(chǎn)生大量乳酸桿菌5、科學(xué)家成功地把外源的致病基因利用“基因敲除”技術(shù)整合到小鼠胚胎干細(xì)胞的DNA同源序列中，使正常基因被取代或破壞而失活，然后將得到的胚胎干細(xì)胞植入小鼠的早期胚胎中，培育出患病的嵌合體小鼠。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.在“基因敲除”中需要用到限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶等B.通過上述“基因敲除”技術(shù)可以定向改變生物體的某一基因C.這種嵌合體小鼠長(zhǎng)大后，體內(nèi)存在外源基因，但不會(huì)遺傳給后代D.“基因敲除”技術(shù)有利于人類對(duì)某些遺傳因素引發(fā)的疾病進(jìn)行研究6、如圖表示獲得細(xì)胞膜上乙酰膽堿(一種神經(jīng)遞質(zhì))受體基因cDNA的操作過程；下列相關(guān)分析正確的是（）

A.獲得該mRNA的最佳材料是心肌細(xì)胞B.構(gòu)建基因表達(dá)載體最常用的載體是腺病毒C.完成過程①、②必不可少的酶分別是逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶D.探針篩選的目的是淘汰被感染的細(xì)菌，獲得未被感染的細(xì)菌評(píng)卷人得分二、多選題(共5題，共10分)7、營(yíng)養(yǎng)缺陷性菌株是野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種成長(zhǎng)因子的能力；只能在補(bǔ)充了相應(yīng)的生長(zhǎng)因子的基本培養(yǎng)基中才能正常生長(zhǎng)的變異菌株。某研究小組對(duì)酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種（不改變菌落位置）到乙；丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進(jìn)一步培養(yǎng)得到如下圖所示結(jié)果。

下列分析正確的是（）A.接種到甲培養(yǎng)皿采用的是稀釋涂布平板法B.甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基C.甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少D.甲、乙、丙三個(gè)培養(yǎng)皿都可能存在營(yíng)養(yǎng)缺陷型8、下列有關(guān)哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育和胚胎工程的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.克隆羊、試管羊、轉(zhuǎn)基因羊的繁殖方式都是有性生殖B.胚胎干細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)可維持只增殖不分化狀態(tài)C.受精時(shí)防止多精入卵的兩屏障是頂體反應(yīng)和卵細(xì)胞膜反應(yīng)D.滋養(yǎng)層細(xì)胞在囊胚期發(fā)育成胎膜和胎盤并可用于性別鑒定9、下列有關(guān)生物技術(shù)安全性和倫理問題的觀點(diǎn)，合理的是（）A.對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，我們應(yīng)該趨利避害，理性看待B.我國(guó)禁止生殖性克隆和治療性克隆C.我國(guó)不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲(chǔ)存生物武器，并反對(duì)其擴(kuò)散D.對(duì)基因檢測(cè)應(yīng)該保護(hù)個(gè)人遺傳信息的隱私權(quán)10、科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)人工轉(zhuǎn)基因操作的番薯都含有農(nóng)桿菌的部分基因，而這些基因的遺傳效應(yīng)促使番薯根部發(fā)生膨大產(chǎn)生了可食用的部分，因此番薯被人類選育并種植。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.農(nóng)桿菌這些特定的基因可以在番薯細(xì)胞內(nèi)復(fù)制B.農(nóng)桿菌和番薯的基因都是4種堿基對(duì)的隨機(jī)排列C.農(nóng)桿菌和番薯的基因都是有遺傳效應(yīng)的DNA片段D.農(nóng)桿菌這些特定的基因可能在自然條件下轉(zhuǎn)入了番薯細(xì)胞11、轉(zhuǎn)座子是一段可移動(dòng)的DNA序列，這段DNA序列可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來，插入另一位點(diǎn)。轉(zhuǎn)座子可在真核細(xì)胞染色體內(nèi)部和染色體間轉(zhuǎn)移，在細(xì)菌的擬核DNA、質(zhì)?；蚴删w之間自行移動(dòng)。有的轉(zhuǎn)座子中含有抗生素抗性基因，可以很快地傳播到其他細(xì)菌細(xì)胞。下列推測(cè)合理的是A.轉(zhuǎn)座子不能獨(dú)立進(jìn)行DNA復(fù)制B.轉(zhuǎn)座子可造成染色體變異或基因重組C.轉(zhuǎn)座子可用于基因工程的研究D.細(xì)菌的抗藥性可來自轉(zhuǎn)座子或者自身的基因突變?cè)u(píng)卷人得分三、填空題(共9題，共18分)12、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義：克服了______，成為研究_____、_____、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。13、酶是細(xì)胞合成的生物催化劑。隨著生物科學(xué)技術(shù)的發(fā)展；酶已經(jīng)走出實(shí)驗(yàn)室，走進(jìn)人們的生產(chǎn)和生活。請(qǐng)回答下面有關(guān)酶的問題：

（1）在腐乳制作的過程中；利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成________，____________將脂肪水解為甘油和脂肪酸。加酶洗衣粉里添加的酶制劑中，應(yīng)用最廣泛；效果最明顯的是____________。

（2）果膠酶包括_____________________________；生產(chǎn)中如果要固定果膠酶；最好采用______________________________________法固定化。

（3）酶提取和分離原理：需要用__________法去除相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白，以純化酶；利用_________________________法對(duì)酶進(jìn)行純度鑒定。14、基因的“剪刀”是_____，它的化學(xué)本質(zhì)是_____，它只能識(shí)別一種特定的_____，并在_____上切割DNA分子；基因的“針線”是______，它能連接DNA骨架上的_____，DNA的骨架由___________構(gòu)成；基因的運(yùn)載體是將_____送入_____的運(yùn)輸工具。目前常用的運(yùn)載體有_____、________和_____。質(zhì)粒存在于許多_____和______等生物中，是擬核或_____外能夠_____的很小的環(huán)狀_____。15、最常用的載體是______，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有______能力的_____。16、回答下列問題。

（1）果酒的制作離不開酵母菌，溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件，酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在_________，醋酸菌是一種________細(xì)菌，它的最適生長(zhǎng)溫度為_______________，乳酸菌是________細(xì)菌，在無氧的情況下，將葡萄糖分解成___________。

（2）微生物的接種方法很多，最常用的是_____________和__________________，稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目___________，這是因?yàn)開_____________________________。

（3）飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可以通過濾膜法來測(cè)定，將濾膜放在____________培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)___________；從而計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目。

（4）固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包括化學(xué)結(jié)合法、____________和物理吸附法。酶更適合采用__________和___________固定化，而細(xì)胞多采用___________固定化。17、獲取目的基因的方法______、______、______18、將DNA粗提取液在____________℃的恒溫水浴箱中保溫10—15分鐘。19、胚胎工程。

胚胎工程指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)，由______、______、______、胚胎冷凍保存技術(shù)和______技術(shù)等組成的現(xiàn)代生物技術(shù)。20、蛋白質(zhì)工程是指以______作為基礎(chǔ)，通過______，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行_____，或制造一種______，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)______的蛋白質(zhì)）

評(píng)卷人得分四、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共24分)21、單克隆抗體技術(shù)在生物工程中有著廣泛的應(yīng)用；下圖1是單克隆抗體制備流程圖，下圖2是我國(guó)科研人員為了準(zhǔn)確篩選沒有明顯表型特征的某種微生物所采用的流程圖，圖3是某雙特異性抗體作用示意圖，雙特異性抗體是指一個(gè)抗體分子可以與兩個(gè)不同抗原或同一抗原的兩個(gè)不同抗原表位相結(jié)合。

（1）據(jù)圖2分析，科研人員利用目標(biāo)微生物編碼膜蛋白的基因序列，構(gòu)建____________________，并導(dǎo)入用__________處理的大腸桿菌細(xì)胞中；獲取大量膜蛋白。

（2）已知細(xì)胞合成DNA有“D途徑”和“S途徑”兩條途徑，其中“D途徑”能被氨基嘌呤阻斷。兔子的已免疫的淋巴細(xì)胞有上述兩種途徑，但一般不分裂增殖；兔子的骨髓瘤細(xì)胞中只有“D途徑”，但能不斷分裂增殖。據(jù)此，圖1所示的__________（填“HAT培養(yǎng)基”或“多孔板”）中添加氨基嘌呤可以達(dá)到篩選目的，其原理是______________________________。

（3）將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是______________________________。

（4）與直接使用抗腫瘤藥物相比，將抗腫瘤藥物與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對(duì)人體的副作用更小，原因是________________________________________，體現(xiàn)的是雙特異性單克隆抗體在__________方面的用途。22、霍山石斛多糖具有顯著的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。為探究引起該免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的物質(zhì)是大分子霍山石斛多糖還是多糖小分子片段；某科研小組進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：將霍山石斛的某種多糖與牛血清蛋白偶聯(lián)制作成抗原；并生產(chǎn)出單克隆抗體，利用該抗體探究霍山石斛多糖引起的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。制備單克隆抗體的流程如圖所示。請(qǐng)回答：

（1）圖中細(xì)胞a是免疫后小鼠體內(nèi)的___________，通常情況下該細(xì)胞不能進(jìn)行增殖，原因是___________。

（2）與植物原生質(zhì)體融合相比，①過程特有的誘導(dǎo)因素是___________。若只存在細(xì)胞的兩兩融合，融合體系中除未融合的細(xì)胞外，還可能有__________和__________。篩選時(shí)，需用特定的____________培養(yǎng)基才能把實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞選擇出來。

（3）在篩選過程中需進(jìn)行__________和__________，以便獲得足夠數(shù)量的能分泌特異性抗體的細(xì)胞，還需用___________作為檢測(cè)特異性抗體的物質(zhì)。

（4）將篩選出的細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)，可從小鼠____________中提取單克隆抗體。

（5）研究發(fā)現(xiàn)，霍山石斛多糖可降解產(chǎn)生小分子片段，這些片段不能與獲得的單克隆抗體結(jié)合?？蒲行〗M用霍山石斛多糖給小鼠灌胃后，取出小腸、肝、脾、腎和肺進(jìn)行抗原-抗體雜交實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)除腸腔外其他組織均未檢測(cè)到霍山石斛多糖。該實(shí)驗(yàn)____________（填“能”或“不能”）說明引起免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的是大分子霍山石斛多糖，理由是___________。23、氨基丁酸（GABA）是具有降血壓；抗焦慮等功能的水溶性氨基酸?？蒲腥藛T通過實(shí)驗(yàn)研究了白方腐乳在前發(fā)酵鹽腌和后發(fā)酵過程中GABA的含量變化；為尋找生產(chǎn)富含GABA腐乳的工藝奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①豆腐白坯表面接種毛霉孢子后；在適宜的溫度和濕度下培養(yǎng)48h，獲得毛坯。

②將毛坯分層整齊地?cái)[放在瓶中；鹽腌5天。

③腌制后加入鹵湯；置于28℃恒溫箱中后發(fā)酵90天。

④分別采集各時(shí)段的腐乳坯樣品；測(cè)定GABA含量，結(jié)果如圖。

請(qǐng)分析并回答問題：

（1）前發(fā)酵過程中，毛坯的GABA含量發(fā)生明顯變化的原因是毛霉產(chǎn)生的_______促進(jìn)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生GABA。

（2）步驟②中，加鹽腌制的正確操作是______________。此過程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面與食鹽抑制毛霉生長(zhǎng)，酶活性降低有關(guān)；另一方面，豆腐中的水分滲出，部分GABA會(huì)____________而導(dǎo)致測(cè)定值減小。

（3）后發(fā)酵所加的鹵湯中，具有抑菌防腐和調(diào)味的成分主要有_______。此過程中，發(fā)酵_______天后的白方腐乳出廠銷售比較適宜。24、科研人員進(jìn)行了土壤中某種固氮菌的分離和純化培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)流程如圖1所示。農(nóng)藥；除草劑的長(zhǎng)期使用，會(huì)使土壤受到嚴(yán)重污染。某科研小組為篩選能分解除草劑草甘膦的微生物，其流程示意圖如圖2所示?；卮鹣铝袉栴}：

(1)圖1中，“？”處是__________，純化培養(yǎng)時(shí)采用的接種方法是_______________，該方法可用于菌落數(shù)的統(tǒng)計(jì)，原因是_________________________。

(2)圖1中純化培養(yǎng)所利用的培養(yǎng)基在營(yíng)養(yǎng)成分和物理性質(zhì)上的特點(diǎn)分別是____________________，圖1和圖2中的兩個(gè)培養(yǎng)基在用途方面的共同點(diǎn)是____________________。

(3)圖2中的接種方法需要連續(xù)劃線，且除第一次劃線外，后面的每一次劃線都要從上一次劃線的末端開始，目的是_________________。結(jié)果有的菌落周圍有透明圈而有的沒有，原因是________________。評(píng)卷人得分五、綜合題(共4題，共16分)25、蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用；而且對(duì)人體沒有影響。我國(guó)科學(xué)家欲獲得高效表達(dá)蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究。

（1）研究者將重組質(zhì)粒置于經(jīng)__________處理的大腸桿菌細(xì)胞懸液中；獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。

（2）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)；轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)效率很低，研究者推測(cè)不同生物對(duì)密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對(duì)引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），并按圖中方式依次進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以得到新的蛋白A基因。

①這是一種定點(diǎn)的__________技術(shù)。

②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請(qǐng)?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”；若不選用該引物則劃“×”）__________。

。引物A引物B引物C引物DPCR1________________________________________PCR2________________________________________PCR3________________________________________PCR4________________________________________（3）研究者進(jìn)一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和__________分別導(dǎo)入大腸桿菌；提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用__________方法檢測(cè)并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長(zhǎng)滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較__________的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。

（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點(diǎn)是__________。26、基因定點(diǎn)整合可替換特定基因，該技術(shù)可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由某基因（A）突變引起的，將正常A基因定點(diǎn)整合到A基因突變的小鼠胚胎干細(xì)胞的染色體DNA上，替換突變基因，可用來研究該病的基因治療過程?；蚨c(diǎn)整合的過程如圖所示，已知neor基因可作為標(biāo)記基因，含有neor的細(xì)胞具有對(duì)G418的抗性?；卮鹣铝袉栴}：

(1)構(gòu)建重組載體，常用的工具酶有__________。構(gòu)建重組載體時(shí)，需要大量A基因，常用__________技術(shù)合成A基因，利用該方法合成A基因時(shí)需要設(shè)計(jì)并合成__________種引物。

(2)將重組載體導(dǎo)入患病小鼠胚胎干細(xì)胞的常用方法為__________。檢測(cè)患病小鼠胚胎干細(xì)胞中是否導(dǎo)入重組載體的方法是在含有__________的培養(yǎng)液中培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞。

(3)用圖中重組載體轉(zhuǎn)化胚胎干細(xì)胞時(shí)，會(huì)出現(xiàn)A基因錯(cuò)誤整合。錯(cuò)誤整合時(shí)，重組載體上的兩個(gè)HSV-tk至少會(huì)有一個(gè)neor一起整合到染色體DNA上。已知HSV-tk1、HSV-tk2的產(chǎn)物都把DHPG轉(zhuǎn)化成有毒物質(zhì)而使細(xì)胞死亡。將導(dǎo)入重組載體胚胎干細(xì)胞置于同時(shí)含有G418和DHPG的培養(yǎng)，存活下來的是__________（填“正確整合”或“錯(cuò)誤整合”）的胚胎干細(xì)胞。

(4)將上述篩選得到的胚胎干細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因小鼠，還需要__________技術(shù)和_________技術(shù)。27、布設(shè)于道路周邊或地勢(shì)較低區(qū)域的生物滯留池可截留雨水；某城市道路收集到的雨水含有高濃度污染物，其中的多環(huán)芳烴（PAHs）會(huì)嚴(yán)重危害城市水環(huán)境?？蒲腥藛T擬通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得高效降解污染物的工程菌。

（1）經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)；生物滯留池內(nèi)PAHs中的芘含量相對(duì)較高，研究者嘗試篩選能降解芘的菌種：

①篩選菌種的基本操作步驟如下，請(qǐng)將下列方框內(nèi)字母后面內(nèi)容補(bǔ)充完整：a__；b__；c__。

②在對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)滅菌鍋內(nèi)壓力達(dá)到100kPa而溫度未達(dá)到121℃，為同時(shí)達(dá)到設(shè)定的溫度和壓力要求，此時(shí)應(yīng)該__（填操作過程）。

（2）科研人員篩選出在生物滯留池中占比較高且對(duì)芘具有較高耐受性的菌株作為受體菌；運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得高效降解芘的工程菌，回答下列相關(guān)問題：

①研究者先用PCR技術(shù)擴(kuò)增能高效降解芘的外源基因，但外源基因序列兩端無限制酶酶切位點(diǎn)，根據(jù)圖1和表信息推測(cè)，擴(kuò)增外源基因時(shí)應(yīng)在所用的一對(duì)引物一端分別加上的限制酶識(shí)別序列是__。

限制酶識(shí)別序列。限制酶識(shí)別序列BamHⅠHindⅢEcoRⅠXbaⅠ

②將基因表達(dá)載體與經(jīng)Ca2+處理的處于__的受體菌細(xì)胞于緩沖液中混合；完成轉(zhuǎn)化過程。

③將完成轉(zhuǎn)化的受體菌接種在加有__的培養(yǎng)基上初步篩選后，再進(jìn)一步檢測(cè)、鑒定。28、銅綠假單胞菌常常引起禽類、水貂等發(fā)生敗血癥及呼吸系統(tǒng)感染等疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重?fù)p失?？蒲腥藛T嘗試克隆和表達(dá)該菌外膜蛋白o(hù)prD基因；以用于后期的疫苗研制工作。相關(guān)限制酶識(shí)別序列及用于構(gòu)建基因表達(dá)載體的質(zhì)粒圖示如下，其中Amp“表示氨芐青霉素抗性基因，請(qǐng)回答下列問題：

限制酶識(shí)別序列BamHⅠ5'G↓GATCC3'EcoRⅠ5'G↓AATTC3'NotⅠ5'GC↓GGCCGC3'XhoⅠ5'C↓TCGAG3'

(1)質(zhì)粒的基本單位是_________________，一個(gè)質(zhì)粒分子中通常含______________個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。Amp基因常作為基因工程中的標(biāo)記基因，標(biāo)記基因的作用是____________。

(2)若已知銅綠假單胞菌的oprD基因序列，可利用____________技術(shù)快速大量擴(kuò)增該基因。為便于擴(kuò)增的oprD基因與表達(dá)載體的連接，在設(shè)計(jì)引物時(shí)，常在兩條引物的____________端加上限制酶的識(shí)別序列；設(shè)計(jì)后的引物如下：

引物1：5'-CGGGATCCATGAAAGTGATGAAGTGG-3'；

引物2：5'-CCCTCGAGTTACAGGATCGACAGCGG-3'.

(3)根據(jù)上題中的引物信息分析，在構(gòu)建oprD基因表達(dá)載體時(shí)，可選擇_________和____________兩種不同的限制酶同時(shí)切割目的基因和質(zhì)粒；以提高目的基因和質(zhì)粒的重組效率。

(4)將目的基因?qū)氪竽c桿菌時(shí)，一般先用Ca2+溶液處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于___________的生理狀態(tài)即感受態(tài)。參考答案一、選擇題(共6題，共12分)1、B【分析】【分析】

誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合前；先要采用酶解法（纖維素酶和果膠酶）去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體；誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合時(shí)，可以采用物理方法（電激；振動(dòng)等）和化學(xué)方法（聚乙二醇）；若原生質(zhì)體均為兩兩融合，則會(huì)形成3種細(xì)胞，即矮牽牛細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、枸杞細(xì)胞自身融合的細(xì)胞，雜種細(xì)胞。可利用顯微鏡篩選得到融合后的雜種原生質(zhì)體。

【詳解】

A；植物體細(xì)胞雜交技術(shù)能克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙；因此獲得該雜種植株時(shí)不用考慮兩種高等植物間的生殖隔離問題，A正確；

B；誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合時(shí)不能用滅活的病毒作為誘導(dǎo)劑；B錯(cuò)誤；

C；顯微鏡下可以觀察到染色體；因此可利用光學(xué)顯微鏡觀察，篩選出雜種原生質(zhì)體，C正確；

D；若原生質(zhì)體均為兩兩融合；則有三種情況，即矮牽牛細(xì)胞自身融合、枸杞細(xì)胞自身融合、矮牽牛細(xì)胞和枸杞細(xì)胞融合，因此融合后的細(xì)胞中染色體數(shù)目可能為28、96或62條，D正確。

故選B。2、B【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題包括：

（1）食物安全：滯后效應(yīng)；出現(xiàn)過敏源、食物的營(yíng)養(yǎng)成分改變等；

（2）生物安全：基因擴(kuò)散導(dǎo)致對(duì)生物多樣性的威脅；

（3）環(huán)境安全：對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性及環(huán)境的影響。

【詳解】

A；轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在負(fù)面影響；A錯(cuò)誤；

B；轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對(duì)于解決糧食、能源等問題起了積極作用；同時(shí)也存在一定風(fēng)險(xiǎn)，B正確；

C；大量引入國(guó)外轉(zhuǎn)基因作物與本地近緣作物品種雜交；容易造成基因污染，是不理性的表現(xiàn)，C錯(cuò)誤；

D；轉(zhuǎn)基因技術(shù)有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)；應(yīng)正確判斷，不能因噎廢食，D錯(cuò)誤。

故選B。

【點(diǎn)睛】3、A【分析】【分析】

分析圖一：圖一表示質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)；質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀結(jié)構(gòu)；

分析圖二：1為精子；2表示體外受精過程，3表示受精卵，4表示胚胎移植；

分析圖三：圖三表示胚胎分割；對(duì)囊胚期進(jìn)行分割時(shí)注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割；

分析圖四：圖四表示系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能原理；即要通過改善和優(yōu)化系統(tǒng)結(jié)構(gòu)改善功能。

【詳解】

A；圖一為質(zhì)粒；可作為基因工程的運(yùn)載體，此外基因工程還需要兩種工具酶，即限制酶和DNA連接酶，A正確；

B；圖二中的4是指胚胎移植過程；B錯(cuò)誤；

C；圖三中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)最終發(fā)育成各種組織；C錯(cuò)誤；

D；圖四高度概括了系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能原理；D錯(cuò)誤。

故選A。

【點(diǎn)睛】4、B【分析】【分析】

1；參與腐乳制作的微生物主要是毛霉；其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型．腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。

2；參與泡菜制作的微生物是乳酸菌；泡菜制作的原理：（1）乳酸菌在無氧條件下，將糖分解為乳酸。（2）利用乳酸菌制作泡菜的過程中會(huì)引起亞硝酸鹽的含量的變化。

3；醋酸菌好氧性細(xì)菌；當(dāng)缺少糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生長(zhǎng)的最佳溫度是在30℃～35℃。

【詳解】

A；泡菜制作過程中；主要是乳酸菌將葡萄糖分解形成乳酸，A錯(cuò)誤；

B；做饅頭或面包時(shí)；經(jīng)常要用到酵母菌，酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，產(chǎn)生二氧化碳和酒精，二氧化碳是氣體，遇熱膨脹而形成小孔，使得饅頭或面包暄軟多孔，B正確；

C；酵母菌在有氧條件下可以大量繁殖；在密封也就是無氧條件下產(chǎn)生酒精，C錯(cuò)誤；

D；酸奶制作過程中；后期低溫處理時(shí)大部分乳酸桿菌已死亡，不會(huì)大量繁殖，D錯(cuò)誤。

故選B。5、C【分析】【分析】

把外源的致病基因利用“基因敲除”技術(shù)整合到小鼠胚胎干細(xì)胞的DNA同源序列中；使正?；虮蝗〈蚱茐亩Щ睿摷夹g(shù)屬于DNA重組技術(shù)?；疾〉那逗象w小鼠部分細(xì)胞中存在外源基因。

【詳解】

A；DNA重組技術(shù)需要用到限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶等；A正確；

B；通過上述“基因敲除”技術(shù)可以定向改變生物體的某一基因；以研究該基因的功能，B正確；

C；這種嵌合體小鼠長(zhǎng)大后；若原始生殖細(xì)胞存在外源基因，則可能會(huì)遺傳給后代，C錯(cuò)誤；

D；培育出患病的嵌合體小鼠；有利于人類對(duì)某些遺傳因素引發(fā)的疾病進(jìn)行研究，D正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】6、C【分析】【分析】

1；基因工程的工具：（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

2；基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲??；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與鑒定。

【詳解】

A；由于乙酰膽堿受體大量分布于神經(jīng)細(xì)胞膜上；所以在神經(jīng)細(xì)胞中最易獲得該基因的mRNA，A錯(cuò)誤；

B；腺病毒不能作為基因表達(dá)的載體；但可以作為基因表達(dá)載體的受體，B錯(cuò)誤；

C；①是逆轉(zhuǎn)錄過程；需要逆轉(zhuǎn)錄酶，②是DNA的復(fù)制，需要DNA聚合酶，C正確；

D；探針篩選的目的是保留被感染的細(xì)胞；因?yàn)榧?xì)胞被感染證明基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，而應(yīng)淘汰未被感染的細(xì)菌，D錯(cuò)誤。

故選C。二、多選題(共5題，共10分)7、A:C【分析】【分析】

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過足夠稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后，可形成單菌落。

【詳解】

A；甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布；接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A正確；

B；甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多；包括野生型酵母菌菌株和某種營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿菌株是某種營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙是加入了同種營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；

C；由于基因突變具有不定向性；接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他營(yíng)養(yǎng)缺陷型，且有些菌落不一定由一個(gè)酵母菌形成，所以，甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C正確；

D；乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基；形成的菌落只可能是野生型菌落，D錯(cuò)誤。

故選AC。8、A:C:D【分析】【分析】

哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞；是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞。ES細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性，在形態(tài)上，表現(xiàn)為體積?。患?xì)胞核大、核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外，在體外培養(yǎng)條件下，ES可以增殖而不發(fā)生分化。ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上，或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中能夠維持不分化狀態(tài)。

【詳解】

A；試管羊、轉(zhuǎn)基因羊的繁殖方式都是有性生殖；克隆羊的繁殖方式屬于無性生殖，A錯(cuò)誤；

B；胚胎干細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)可維持只增殖不分化狀態(tài)；B正確；

C；受精時(shí)防止多精入卵的兩屏障是透明帶反應(yīng)和卵細(xì)胞膜反應(yīng)；C錯(cuò)誤；

D；囊胚期的滋養(yǎng)層細(xì)胞可用于性別鑒定；將來可以發(fā)育成胎膜和胎盤，D錯(cuò)誤。

故選ACD。9、A:C:D【分析】【分析】

1；轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

2；治療性克?。褐咐每寺〖夹g(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚、神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。

3；生殖性克?。褐笇⒖寺〖夹g(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類個(gè)體。

4；中國(guó)政府：禁止生殖性克隆人；堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆。

【詳解】

A；對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)；我們應(yīng)該趨利避害，理性看待，A正確；

B；中國(guó)政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆人；堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆，B錯(cuò)誤；

C；中國(guó)在任何情況下不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲(chǔ)存生物武器；并反對(duì)生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散，C正確；

D；對(duì)基因檢測(cè)應(yīng)該保護(hù)個(gè)人遺傳信息的隱私權(quán)；D正確。

故選ACD。10、A:C:D【分析】【分析】

1；基因的概念：基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段；是決定生物性狀的基本單位。

2；基因和遺傳信息的關(guān)系：基因中的脫氧核苷酸（堿基對(duì)）排列順序代表遺傳信息。

【詳解】

A；DNA能夠自我復(fù)制；農(nóng)桿菌這些特定的基因可以在番薯細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，A正確；

B；基因中4種堿基對(duì)的排列順序是特定的；B錯(cuò)誤；

C；農(nóng)桿菌和番薯的基因都是有遺傳效應(yīng)的DNA片段；C正確；

D；農(nóng)桿菌這些特定的基因可能在自然條件下轉(zhuǎn)入了番薯細(xì)胞；如利用運(yùn)載體，D正確。

故選ACD。

【點(diǎn)睛】11、B:C:D【分析】【分析】

本題考查DNA復(fù)制；生物變異的相關(guān)知識(shí)；意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問題的能力，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查。

【詳解】

根據(jù)題干中“轉(zhuǎn)座子是一段可移動(dòng)的DNA序列；這段DNA序列可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來”，說明轉(zhuǎn)座子可以獨(dú)立進(jìn)行DNA復(fù)制，A錯(cuò)誤；根據(jù)題干中“轉(zhuǎn)座子可在真核細(xì)胞染色體內(nèi)部和染色體間轉(zhuǎn)移”，說明轉(zhuǎn)座子可造成真核生物染色體變異或基因重組，B正確；根據(jù)題干中“轉(zhuǎn)座子可在細(xì)菌的擬核DNA；質(zhì)?；蚴删w之間自行移動(dòng)”，說明轉(zhuǎn)座子可用于基因工程的研究，C正確；根據(jù)題干中“有的轉(zhuǎn)座子中含有抗生素抗性基因，可以很快地傳播到其他細(xì)菌細(xì)胞”，說明細(xì)菌的抗藥性可來自轉(zhuǎn)座子或者自身的基因突變，D正確。

【點(diǎn)睛】

可遺傳的變異有三種來源：基因突變、染色體變異和基因重組：

（1）基因突變是基因結(jié)構(gòu)的改變；包括堿基對(duì)的增添；缺失或替換。

（2）基因重組的方式有同源染色體上非姐妹單體之間的交叉互換和非同源染色體上非等位基因之間的自由組合，另外，外源基因的導(dǎo)入也會(huì)引起基因重組。

（3）染色體變異是指染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的改變。三、填空題(共9題，共18分)12、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】遠(yuǎn)緣雜交的不親和性細(xì)胞遺傳細(xì)胞免疫、13、略

【分析】【分析】

1；腐乳制作過程中多種微生物參與了發(fā)酵；其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物產(chǎn)生蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化成小分子肽和氨基酸，脂肪酶將脂肪轉(zhuǎn)化成甘油和脂肪酸。

2；果膠酶能夠分解果膠；瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層，使榨取果汁變得容易，而果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得渾濁的果汁變得澄清。果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶。

【詳解】

（1）在腐乳制作的過程中；利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸，脂肪酶將脂肪水解為甘油和脂肪酸；加酶洗衣粉里添加的酶制劑中，應(yīng)用最廣泛；效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。

（2）果膠酶并不特指某一種酶；而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶；果膠分解酶和果膠酯酶；在果汁生產(chǎn)過程中如果要固定果膠酶，最好采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定化，這是因?yàn)槊阜肿有。w積小的酶容易從包埋材料中漏出。

（3）酶提取和分離原理：需要用凝膠色譜法去除相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白；以純化酶；利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)酶進(jìn)行純度鑒定。

【點(diǎn)睛】

本題考查腐乳制作和酶提取等知識(shí)，對(duì)于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)采用的試劑及試劑的作用等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過程中注意積累?！窘馕觥啃》肿与暮桶被嶂久笁A性蛋白酶和堿性脂肪酶半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶化學(xué)結(jié)合法和物理吸附凝膠色譜（分配色譜）聚丙烯酰胺凝膠電泳14、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】限制酶蛋白質(zhì)核苷酸序列特定的切點(diǎn)DNA連接酶缺口磷酸-脫氧核糖外源基因受體細(xì)胞質(zhì)粒噬菌體動(dòng)植物病毒細(xì)菌酵母菌細(xì)胞核自主復(fù)制DNA分子15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】質(zhì)粒自我復(fù)制雙鏈環(huán)狀DNA分子16、略

【分析】【分析】

果酒制作菌種是酵母菌；來源于葡萄皮上野生型酵母菌或者菌種保藏中心，條件是無氧；溫度是18～25℃，pH值呈酸性．果醋制備的菌種是醋酸菌，條件是發(fā)酵過程中充入無菌氧氣，溫度為30～35℃。

【詳解】

（1）酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18～25℃；醋酸菌是一種好氧細(xì)菌，它的最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃。乳酸菌是厭氧細(xì)菌，在無氧的情況下，將葡萄糖分解成乳酸。

（2）微生物的接種方法很多；最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。

（3）飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可以通過濾膜法來測(cè)定；將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，從而計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目。

（4）固定化技術(shù)一般包括化學(xué)結(jié)合法；包埋法和物理吸附法。酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定化；而細(xì)胞多采用包埋法固定化。

【點(diǎn)睛】

本題考查果酒和果醋制備原理，意在考查學(xué)生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，屬識(shí)記內(nèi)容?！窘馕觥?8－25℃好氧30－35℃厭氧乳酸平板劃線法稀釋涂布平板法低當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落伊紅美藍(lán)黑色包埋法化學(xué)結(jié)合法物理吸附法包埋法17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】基因文庫(kù)人工合成PCR技術(shù)18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】60—7519、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】體外受精技術(shù)、胚胎移植技術(shù)、胚胎分割技術(shù)性別控制20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系基因修飾或基因合成改造新的蛋白質(zhì)自然界已存在四、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共24分)21、略

【分析】【分析】

單克隆抗體制備過程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）

據(jù)圖分析，科研人員利用基因工程將目標(biāo)微生物編碼膜蛋白的基因序列，構(gòu)建基因表達(dá)載體，并導(dǎo)入用CaCl2處理的大腸桿菌細(xì)胞中；使目的基因增殖并表達(dá)可獲取大量膜蛋白。

（2）

雜交瘤細(xì)胞由淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合而成；其合成DNA有“D途徑”和“S途徑”兩條途徑。“HAT培養(yǎng)基”有篩選作用，在添加了氨基喋吟的HAT培養(yǎng)基中，雜交瘤細(xì)胞“D途徑”雖然被氨基嘌呤阻斷，但可通過“S途徑”合成DNA，不斷分裂增殖；而淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞因缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力，而不能在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中因DNA合成途徑被氨基嘌呤阻斷而不能進(jìn)行DNA復(fù)制，也不生長(zhǎng)。

（3）

帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合；可起到標(biāo)記目標(biāo)微生物的作用。

（4）

雙特異性單克隆抗體借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用；能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，這樣既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。體現(xiàn)的是雙特異性單克隆抗體在治療疾病方面起到運(yùn)載藥物的用途。

【點(diǎn)睛】

本題考查單克隆抗體的制備過程和動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，意在考查學(xué)生對(duì)所學(xué)知識(shí)的理解與掌握程度，培養(yǎng)了學(xué)生分析圖示、獲取信息、解決問題的綜合應(yīng)用的能力。【解析】（1）基因的表達(dá)載體Ca2+或CaCl2

（2）HAT培養(yǎng)基淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞因缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力；故不能在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中因DNA合成途徑被氨基嘌呤阻斷而不能進(jìn)行DNA復(fù)制，而不生長(zhǎng)。

（3）標(biāo)記目標(biāo)微生物。

（4）雙特異性單克隆抗體能將抗癌藥物定向帶到腫瘤細(xì)胞所在位置，在原位殺死癌細(xì)胞治療疾?。ㄟ\(yùn)載藥物）22、略

【分析】【分析】

1.體液免疫的具體過程：

(1)感應(yīng)階段：除少數(shù)抗原可以直接刺激B細(xì)胞外；大多數(shù)抗原被吞噬細(xì)胞攝取和處理，并暴露出其抗原決定簇；吞噬細(xì)胞將抗原呈遞給T細(xì)胞，再由T細(xì)胞呈遞給B細(xì)胞；

(2)反應(yīng)階段：B細(xì)胞接受抗原刺激后；開始進(jìn)行一系列的增殖；分化，形成記憶細(xì)胞和漿細(xì)胞；

(3)效應(yīng)階段：漿細(xì)胞分泌抗體與相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合；發(fā)揮免疫效應(yīng)。

2.單克隆抗體的制備：

(1)細(xì)胞來源：B淋巴細(xì)胞：能產(chǎn)生特異性抗體；在體外不能無限繁殖；骨髓瘤細(xì)胞：不產(chǎn)生專一性抗體，體外能無限繁殖。

(2)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量增殖；又能產(chǎn)生特異性抗體。

(3)兩次次篩選：①篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。

(4)兩次抗體檢測(cè)：專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性。

(5)提取單克隆抗體：從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取。

(6)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)；靈敏度高；并可能大量制備。

【詳解】

（1）圖為單克隆抗體的制備的流程；圖中細(xì)胞a是免疫后小鼠體內(nèi)的B細(xì)胞（或漿細(xì)胞），該細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，不能進(jìn)行分裂。

（2）與植物原生質(zhì)體融合相比；動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)因素是滅活的病毒。若只存在細(xì)胞的兩兩融合，融合體系中除未融合的細(xì)胞外，還有兩兩融合的細(xì)胞，由于細(xì)胞的融合是隨機(jī)的，兩兩融合的細(xì)胞包括雜交瘤細(xì)胞和同種細(xì)胞融合成的細(xì)胞。篩選時(shí)，需用特定的選擇性培養(yǎng)基才能從中篩選出雜交瘤細(xì)胞。

（3）要想獲得足夠數(shù)量的能分泌特異性抗體的細(xì)胞；在篩選過程中需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，該過程是將霍山石斛的某種多糖與牛血清蛋白偶聯(lián)制作成抗原；并生產(chǎn)出單克隆抗體，因此還需用（霍山石斛）多糖與牛血清蛋白偶聯(lián)物作為檢測(cè)特異性抗體的物質(zhì)。

（4）若將篩選出的細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)；則可從小鼠腹水中提取單克隆抗體。

（5）科研小組用霍山石斛多糖給小鼠灌胃后；取出小腸；肝、脾、腎和肺進(jìn)行抗原-抗體雜交實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)除腸腔外其他組織均未檢測(cè)到霍山石斛多糖。霍山石斛多糖可降解產(chǎn)生小分子片段，該實(shí)驗(yàn)不能證明具有免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的物質(zhì)是多糖還是降解后的小分子片段，因此該實(shí)驗(yàn)不能說明引起免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的是大分子霍山石斛多糖。

【點(diǎn)睛】

本題考查免疫調(diào)節(jié)、單克隆抗體的制備等知識(shí)，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的能力以及獲取信息、分析問題的能力?！窘馕觥緽細(xì)胞（或漿細(xì)胞）該細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，不能進(jìn)行分裂滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞同種細(xì)胞融合成的細(xì)胞選擇性克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)（霍山石斛）多糖與牛血清蛋白偶聯(lián)物腹水不能霍山石斛多糖在腸腔中被降解，產(chǎn)生的多糖小分子片段可能具有免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)（或該實(shí)驗(yàn)不能證明具有免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的物質(zhì)是多糖還是降解后的小分子片段）23、略

【分析】【分析】

腐乳的制作過程主要是：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制。

1；讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)；將籠屜中的溫度控制在15～18℃，并保持在一定的濕度。約48h后，毛霉開始生長(zhǎng)，3d之后菌絲生長(zhǎng)旺盛，5d后豆腐塊表面布滿菌絲。豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉來自空氣中的毛霉孢子。

2；加鹽腌制：將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中；同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增高鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。加鹽研制的時(shí)間約為8d左右．加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會(huì)過早酥爛。同時(shí)，鹽能抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。

3；加鹵湯裝瓶：鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱酒等；含量一般控制在12%左右。加酒可以抑制微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。香辛料種類很多，如胡椒、花椒、八角、桂皮、姜、辣椒等。香辛料可以調(diào)制腐乳的風(fēng)味，也具有防腐殺菌的作用?？蓳?jù)個(gè)人口味配置鹵湯。

4；密封腌制。

【詳解】

（1）前發(fā)酵過程中，毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶促進(jìn)豆腐中的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生GABA，使得毛坯的GABA含量明顯升高。

（2）步驟②中；加鹽腌制的正確操作是將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增高鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。鹽能抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。此過程腐乳干重中的GABA含量下降的原因可能是：①食鹽會(huì)抑制毛霉生長(zhǎng)，酶的活性降低；②豆腐中的水分滲出，部分GABA會(huì)溶解于水而導(dǎo)致測(cè)定值減小。

（3）鹵湯是由料酒及各種香辛料配制而成的；可以抑制微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。后發(fā)酵過程中GABA的含量變化曲線圖顯示，在60天以后，GABA的含量達(dá)到最大值且保持相對(duì)穩(wěn)定，所以此時(shí)出廠銷售白方腐乳比較適宜。

【點(diǎn)睛】

解答本題的關(guān)鍵是掌握腐乳的制作的相關(guān)流程和知識(shí)要點(diǎn)，主要依靠學(xué)生對(duì)課本知識(shí)的理解和掌握，并結(jié)合題目中所給的GABA為水溶性氨基酸這一關(guān)鍵信息回答問題，同時(shí)需要學(xué)生在做題時(shí)思考符合經(jīng)濟(jì)效益的選擇?！窘馕觥康鞍酌钢饘蛹欲}隨著層數(shù)的加高增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些隨水流失（溶解于水中）香辛料和料酒6024、略

【分析】【分析】

將微生物接種到固體培養(yǎng)基常用稀釋涂布平板法；接種前先要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，再將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在一定的稀釋度的菌液里，聚集在一起的微生物能分散成單個(gè)細(xì)胞，在適宜的條件下培養(yǎng)讓菌體進(jìn)行繁殖，能夠在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。稀釋涂布平板操作：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡冷卻8-10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基上，涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。

【詳解】

（1）圖1中是將土壤懸浮液取1mL；加入9mL無菌水進(jìn)行稀釋10倍。圖1中微生物接種方式為稀釋涂布平板法。該方法可以用于對(duì)菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，因?yàn)楫?dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面可以獲得由單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的單菌落，通過統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)量可以推測(cè)所涂菌液中細(xì)菌的數(shù)量。

（2）土壤中某種固氮菌的分離和純化培養(yǎng)；培養(yǎng)基需要采用固體培養(yǎng)基，才可用于稀釋涂布平板法，且因?yàn)槭欠蛛x固氮菌，所以培養(yǎng)基中不加氮源。圖1和圖2中的兩個(gè)培養(yǎng)基都是用于從多種微生物中分離目的菌種。

（3）圖2中接種方法為平板劃線法，且除第一次劃線外，后面的每一次劃線都要從上一次劃線的末端開始，目的是將聚集的菌種逐步稀釋，分散到培養(yǎng)基表面，最終達(dá)到分離的效果。圖2中培養(yǎng)基時(shí)為了篩選出能分解除草劑草甘膦的微生物，所以有的菌落中的細(xì)菌能分解草甘膦，菌落周圍因?yàn)椴莞熟⒈环纸舛霈F(xiàn)透明圈，有的菌落中的細(xì)菌不能分解草甘膦，菌落周圍不能形成透明圈?！窘馕觥?1)無菌水稀釋涂布平板法當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)；培養(yǎng)基表面可以獲得由單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的單菌落，通過統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)量可以推測(cè)所涂菌液中細(xì)菌的數(shù)量。

(2)沒有氮源；屬于固體培養(yǎng)基從多種微生物中分離出目的菌。

(3)將聚集的菌種逐步稀釋，分散到培養(yǎng)基表面，最終達(dá)到分離的效果有的菌落中的細(xì)菌能分解草甘膦，菌落周圍因?yàn)椴莞熟⒈环纸舛霈F(xiàn)透明圈，有的菌落中的細(xì)菌不能分解草甘膦，菌落周圍不能形成透明圈五、綜合題(共4題，共16分)25、略

【分析】含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒；空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對(duì)人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高。

【分析】

1；基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法;

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）大腸桿菌需事先用氯化鈣進(jìn)行處理；增大細(xì)胞壁的通透性，使之處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)，以便重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。

（2）①根據(jù)題意和圖示分析；經(jīng)過4次PCR技術(shù)后獲得了新的基因，這是一種定點(diǎn)的基因突變技術(shù)。

②與研究者推測(cè)不同生物對(duì)密碼子具有不同的偏好；因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對(duì)引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），因此4次PCR應(yīng)該分別選擇如圖所示的引物，如下表所示：

。

引物A

引物B

引物C

引物D

PCR1

√

√

×

×

PCR2

×

×

√

√

PCR3

×

×

×

×

PCR4

√

×

×

√

（3）將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒；空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）分別導(dǎo)入大腸桿菌；提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用抗原-抗體雜交方法檢測(cè)并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長(zhǎng)滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較抑菌圈的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。

（4）作為微生物農(nóng)藥；使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，是因?yàn)榈鞍譇基因的發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)人；畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查基因工程、PCR技術(shù)等相關(guān)知識(shí)，考生需要理解和記憶相關(guān)知識(shí)，并學(xué)會(huì)應(yīng)用所學(xué)知識(shí)正確答題?！窘馕觥緾aCl2基因突變。

。

引物A

引物B

引物C

引物D

PCR1

√

√

×

×

PCR2

×

×

√

√

PCR3

×

×

×

×

PCR4

√

×

×

√

26、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：(1)目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA：分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

(1)

構(gòu)建重組載體時(shí)；需要使用的工具酶為限制酶和DNA連接酶。大量制備A基因，即特定基因的擴(kuò)增，常用PCR技術(shù)，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)需要合成基因兩側(cè)的兩種不同的引物。

(2)

由題意可知，小鼠胚胎干細(xì)胞為受體細(xì)胞，培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)將重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的常用方法為顯微注射法。由題意可知，neor為標(biāo)記基因；結(jié)合題中該基因的作用可知，欲篩選含有重組載體的小鼠胚胎干細(xì)胞，應(yīng)將處理后的胚胎干細(xì)胞放在含有G418的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，存活下來的即為導(dǎo)入重組載體的胚胎干細(xì)胞。

(3)

由題意可知，含有neor基因的細(xì)胞具有對(duì)G418的抗性，轉(zhuǎn)化的胚胎干細(xì)胞能在含G418的培養(yǎng)液中存活，說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含