DB11-T 677-2009 動物防疫抽樣規(guī)范

ICS65.020.30

B41

備案號：26850-2010DB

北京市地方標準

DB11/T677—2009

動物防疫抽樣規(guī)范

Samplingspecificationsforanimalepidemicprevention

2009-12-12發(fā)布2010-04-01實施

北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB11/T677—2009

動物防疫抽樣規(guī)范

1范圍

本標準規(guī)定了動物防疫抽樣的一般要求，抽樣前準備，抽樣動物種類，抽樣范圍，抽樣數(shù)量，抽樣，

抽樣的記錄及樣本的保存運輸。

本標準適用于動物疫病實驗室血清學監(jiān)測、分子生物學監(jiān)測、病原學監(jiān)測等抽樣工作。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標準。

2.1

無菌操作asepticoperation

用于防止微生物進入動物體組織或其它無菌范圍的操作技術(shù)稱為無菌操作。

2.2

動物防疫抽樣Samplingforanimalepidemicprevention

為了預(yù)防和控制動物疫病，按照一定的規(guī)則采集動物體液、臟器等樣本的行為。

2.3

份portion

動物個體中1個組織的1個樣本的數(shù)量單位。

3一般要求

3.1根據(jù)國家和北京市動物防疫的抽樣計劃，設(shè)定常規(guī)監(jiān)測、疫點、疫區(qū)、受威脅區(qū)疫病監(jiān)測抽樣種

類、數(shù)量、范圍。

3.2抽樣人員應(yīng)是獸醫(yī)技術(shù)人員，能夠正確掌握抽樣方法，熟練使用采樣器具。

3.3根據(jù)不同的疫病或檢驗?zāi)康?，采其相?yīng)的組織臟器、內(nèi)容物、分泌物、排泄物或其他材料。在無

法估計病因時，要選取有代表性的樣品，進行多點、全面的采集。

3.4凡發(fā)現(xiàn)動物有急性死亡，在排除炭疽病情況下，方可剖檢采樣。

3.5防止污染環(huán)境，防止疫病傳播，做好環(huán)境消毒和病害尸體的處理。

3.6采集一份樣本，使用一套器械與容器，使用過的用具應(yīng)先消毒后清洗。

3.7一次性消毒用品不得超期使用。

4抽樣前準備

4.1準備口罩、帽子、防護眼鏡、防護服、手套、膠靴等人員防護用品。

4.2準備滅菌處理的解剖刀、鑷子等抽樣用器具。

4.3準備消毒液及樣本的記錄、保存、運輸物品。

5抽樣動物種類

5.1家禽。

5.2家畜（馬屬動物、豬、牛、羊）。

5.3寵物（犬、貓）。

5.4野生動物。

1

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6抽樣范圍

6.1養(yǎng)殖區(qū)域包括規(guī)?；N畜禽場、商品畜禽場、養(yǎng)殖小區(qū)、養(yǎng)殖戶等。

6.2流通區(qū)域包括從事動物及動物產(chǎn)品交易活動的批發(fā)市場、零售市場、寵物交易市場及動物隔離場

點等。

6.3其它區(qū)域包括畜禽屠宰場、公園、動物園、野禽棲息地等。

7抽樣數(shù)量

7.1常規(guī)監(jiān)測抽樣數(shù)量

常規(guī)監(jiān)測抽樣數(shù)量應(yīng)符合表1的規(guī)定。

表1常規(guī)監(jiān)測抽樣數(shù)量

存欄數(shù)

＞50001000～5000500～1000100～500＜100

種類

家禽≥30份/場≥20份/場≥10份/場≥10份/場≥10份/場

家畜≥30份/場≥30份/場≥30份/場≥20份/場≥10份/場

寵物（犬、貓）≥25份/地區(qū)、20份/場

野生動物≥25份/地區(qū)、10份/動物園、10份/野禽棲息地

7.2疫點監(jiān)測抽樣數(shù)量

疫點監(jiān)測抽樣數(shù)量應(yīng)符合表2的規(guī)定。

表2疫點監(jiān)測抽樣數(shù)量

存欄數(shù)

≥10000＜10000

種類

家禽≥100份/場≥50份/場

家畜馬屬動物100%；豬、牛、羊≥200份/場

寵物（犬、貓）≥20份/場

野生動物≥20份/地區(qū)

7.3疫區(qū)監(jiān)測抽樣數(shù)量

疫區(qū)監(jiān)測抽樣數(shù)量應(yīng)符合表3的規(guī)定。

表3疫區(qū)監(jiān)測抽樣數(shù)量

種類家禽家畜寵物（犬、貓）野生動物

豬、牛、羊≥200份；

數(shù)量≥300份≥50份≥30份

馬屬動物100%

7.4受威脅區(qū)監(jiān)測抽樣數(shù)量

受威脅區(qū)監(jiān)測抽樣數(shù)量應(yīng)符合表4的規(guī)定。

表4受威脅區(qū)監(jiān)測抽樣數(shù)量

種類家禽家畜寵物（犬、貓）野生動物

豬、牛、羊≥200份；

數(shù)量≥300份≥50份≥30份

馬屬動物100%

8抽樣

8.1血液

8.1.1抽樣部位

翅靜脈、頸靜脈、尾靜脈、心臟、耳尖或耳殼外側(cè)靜脈。

8.1.2抽樣方法

2

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8.1.2.1抽血部位的皮膚先剃毛、清潔，再用75%的酒精消毒。

8.1.2.2用滅菌真空采血器、注射器或針頭穿刺抽取。

8.1.3處理方法

8.1.3.1全血

將全血注入裝有抗凝劑的試管中，輕輕搖動，充分混合?？蛇x用以下三種方法：

1）10mL全血加入0.1mL～0.2mL的1%肝素溶液。

2）1份全血加入2份阿氏液，阿氏液配制方法見附錄A.1。

3）4份全血加入1份3.8%枸櫞酸鈉。

8.1.3.2血清

方法一：全血凝固后，在室溫下靜置至自然析出。

方法二：全血凝固后，1500r/min～2500r/min，離心10min，吸取上清液。

8.1.3.3血漿

容器內(nèi)先加抗凝劑，血液與抗凝劑充分混合，然后靜置，待細胞下沉后，吸取上清液。

8.2一般臟器

8.2.1抽樣部位

8.2.1.1心臟。

8.2.1.2肝臟。

8.2.1.3脾臟。

8.2.1.4肺臟。

8.2.1.5腎臟。

8.2.1.6胰臟。

8.2.1.7淋巴結(jié)。

8.2.2抽樣方法

采集死亡動物的內(nèi)臟樣本，最遲不超過死亡后6h，按無菌操作方法采集相關(guān)臟器的部分組織或整個

臟器。

8.2.3處理方法

8.2.3.1用于細菌分離的組織，單獨放在無菌容器內(nèi)。

8.2.3.2用于病毒分離的組織，放在裝有病毒保存緩沖液的容器內(nèi),病毒保存緩沖液的配制見附錄

A.2。

8.2.3.3用于病理學檢查的組織，放入裝有10倍于樣本體積的10%中性福爾馬林溶液的容器內(nèi)。

8.3腦組織

8.3.1抽樣部位

8.3.1.1大腦。

8.3.1.2小腦。

8.3.1.3腦干。

8.3.1.4延腦。

8.3.2抽樣方法

按無菌操作方法采集部分腦組織或全腦。

8.3.3處理方法

方法一：全腦用浸過消毒液的紗布包裹后，浸入含30%甘油鹽水溶液中,30%甘油鹽水溶液配制見附

錄A.3。

方法二：將組織樣本-20℃～-70℃冷凍。

方法三：將組織樣本放入裝有10倍于樣本體積的10%中性福爾馬林溶液的容器內(nèi)。

8.4食道/咽部刮取物（O-P液）

3

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8.4.1抽樣部位

8.4.1.1食道。

8.4.1.2咽部。

8.4.2抽樣方法

8.4.2.1被檢動物在抽樣前禁食（可飲少量水）12h，探杯用0.2%檸檬酸浸泡5min，再用接近動物體

溫的清水沖洗探杯后使用，每采完一份樣本，探杯要進行消毒并充分清洗。

8.4.2.2動物站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部10cm～15cm處，輕輕來回移動2～3次，然

后將探杯拉出，采集8mL～10mLO-P液。

8.4.3處理方法

倒入含有等量Earle細胞培養(yǎng)液的滅菌廣口瓶中，Earle細胞培養(yǎng)液配制見附錄A.4。

8.5呼吸道分泌物

8.5.1抽樣部位

8.5.1.1鼻腔。

8.5.1.2咽喉。

8.5.1.3氣管。

8.5.2抽樣方法

用拭子采集粘膜分泌物，放入裝有2mL保存液的試管。

8.5.3處理方法

方法一：將拭子浸入pH7.2～7.4的滅菌肉湯保存液中，滅菌肉湯配制見附錄A.5。

方法二：將拭子浸入0.04mol/L磷酸鹽緩沖液中，磷酸鹽緩沖液配制見附錄A.6。

方法三：接種組織培養(yǎng)用的拭子浸入0.5%乳蛋白水解物的漢克氏（Hanks）營養(yǎng)液中，乳蛋白水解

物的漢克氏液配制見附錄A.7。

8.6眼睛

8.6.1抽樣部位

8.6.1.1眼結(jié)膜表面。

8.6.1.2眼病變組織。

8.6.2抽樣方法

8.6.2.1眼結(jié)膜表面用拭子輕輕擦拭后，放入滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中。

8.6.2.2取病變組織碎屑，置載玻片上，制成玻璃觸片。

8.7皮膚及粘膜

抽樣方法：

1)用于一般檢測的樣本，用滅菌剪子和鑷子直接采自病變部位。加適量抗菌素于30%甘油鹽水緩

沖液中，加蓋密封。

2)用于檢測核酸的樣本，不得使用酒精、碘酒等消毒劑消毒。

8.8脊髓液

抽樣方法：

1)抽樣使用特制的專用消毒穿刺針。

2)頸椎穿刺點為環(huán)樞孔，垂直緩慢刺入蛛網(wǎng)膜下腔，立即拔出針芯，腦脊髓液自動流出，取適量

液體，盛入消毒容器內(nèi)。

3)腰椎穿刺部位為腰薦孔，垂直緩慢刺入蛛網(wǎng)膜下腔，立即拔出針芯，腦脊髓液自動流出，盛入

消毒容器內(nèi)。腰椎穿刺一次抽取量15mL～30mL。

8.9乳汁

8.9.1抽樣部位

乳房。

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8.9.2抽樣方法

用消毒藥水洗凈取乳者的手和動物乳房，棄去最初所擠的3mL～4mL乳汁，采集10mL乳汁于滅菌

試管中。

8.9.3處理方法

進行血清學檢驗的乳汁不應(yīng)凍結(jié)、加熱或強烈震動。

8.10胃內(nèi)容物

8.10.1抽樣部位

動物胃內(nèi)。

8.10.2抽樣方法

8.10.2.1將多孔胃管送入單胃胃內(nèi)，其外露端接在吸引器的負壓瓶上，加負壓后，胃液即可自動流入

瓶內(nèi)。

8.10.2.2在反芻動物反芻時，在食團從食道逆入口腔時，立即開口拉住舌頭，另一只手深入口腔取出

少量的瘤胃內(nèi)容物。

8.10.2.3對死亡的動物直接剖檢采集。

8.10.3處理方法

取出的胃內(nèi)容物應(yīng)即放在0℃～4℃中保存。

8.11腸內(nèi)容物

8.11.1抽樣部位

選擇病變最明顯的部分。

8.11.2抽樣方法

8.11.2.1用滅菌生理鹽水將腸管外表輕輕沖洗三遍，燒烙腸壁表面，用吸管扎穿腸壁，從腸腔內(nèi)吸取

內(nèi)容物。

8.11.2.2將腸管雙結(jié)扎，從兩端剪斷，單獨放在已消毒的容器內(nèi)。

8.11.3處理方法。

將腸內(nèi)容物放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中。

8.12糞便

8.12.1抽樣部位

肛門。

8.12.2抽樣方法

用拭子小心地插到直腸粘膜表面轉(zhuǎn)一圈采集。

8.12.3處理方法

將糞便拭子放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中。

8.13胎兒

抽樣方法：將流產(chǎn)后的整個胎兒，裝入不透水的塑料袋，放入有冰袋的冷藏箱。

8.14動物尸體

抽樣方法：將病死動物尸體裝入兩層不漏水的塑料袋內(nèi)，放入有冰袋的冷藏箱。

8.15精液

8.15.1抽樣方法

用消毒藥水洗凈陰莖，用假陰道擠壓陰莖或人工刺激的方法采取精液。

8.15.2處理方法

8.15.2.1將集精杯從假陰道取下，裝入滅菌容器中。

8.15.2.2樣本中不得加入防腐劑。

8.16生殖道分泌物

8.16.1抽樣方法

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8.16.1.1擴開陰道后，用纏有滅菌紗布條的長鉗子采取陰道粘液。

8.16.1.2把龜頭牽引到包皮外面，用清水洗凈后以紗布纏好固定，將纏有紗布條（用滅菌生理鹽水浸

濕）的尿道敷料鉗或尿道探子插入尿道輕輕轉(zhuǎn)動采尿道黏液。

8.16.1.3用宮頸或尿道拭子，蘸取陰道或包皮沖洗液。

8.16.2處理方法

8.16.2.1粘液、拭子放于滅菌試管中。

8.16.2.2制成玻璃觸片。

8.17環(huán)境病原微生物

8.17.1抽樣地點

抽取墊草、飼料通道、下水道、遺棄物、通風管、孵化廠、屠宰場有代表性樣本。

8.17.2抽樣方法

8.17.2.1空氣樣本

方法一：用空氣采樣器直接采集。

方法二：用平板沉降法，將瓊脂平板置于各采樣點，打開平皿蓋，暴皿于規(guī)定時間后立即蓋好蓋采

集。

8.17.2.2水樣本

方法一：手工采樣，將水樣瓶用鐵架固定，塞住瓶口，待瓶沉入到一定深度時拉開瓶塞，讓水樣進

入。

方法二：用自動采樣器在一定間隔時間中或連續(xù)采集樣品，分別放入樣品瓶或合并于一個樣品瓶中

成為混合樣。

8.17.2.3土壤樣本

用滅菌工具先除去地表枯枝落葉，再鏟除1cm左右表層土，以避免地面微生物與土樣混雜，用燒灼

過的勺或鏟取土樣約200g～300g，裝于滅菌容器內(nèi)，混合后送檢。

8.17.3處理方法

樣本放入金屬飯盒，送實驗室置37℃培養(yǎng)。

9抽樣的記錄

9.1對所有樣本統(tǒng)一編號，確保統(tǒng)一編號與原始編號相對應(yīng)，每份樣本上標注唯一標識，疑似人畜共

患病樣品還應(yīng)作特殊標記。

9.2記錄應(yīng)有一式二份的說明單，一份隨樣本送實驗室，另一份留存?zhèn)浒浮?/p>

9.3各類動物樣本的記錄，可按照附錄表B.1～表B.3的格式填寫。

10樣本的保存運輸

10.1樣本送抵實驗室的時間為：冬季不得超過24h，夏季不得超過4h～6h，采集后應(yīng)立即放入4℃左

右的容器中冷藏。

10.2須冷凍或長期保存的樣本，應(yīng)置于-20℃以下冷凍，但要盡量避免反復(fù)凍融。

10.3做病毒中和試驗的血清應(yīng)避免使用化學防腐劑。

10.4樣本運送應(yīng)符合生物安全要求，應(yīng)遵循世界衛(wèi)生組織對傳染性物質(zhì)和診斷性標本的安全運送指

南。

10.5應(yīng)避免樣本泄漏。樣本密封后置于保溫箱中運送，并在保溫箱中放置填充物固定樣本，防止容器

傾倒。

10.6制成的涂片、觸片、玻片兩端用細木條分隔開，層層疊加，底層和最上一片涂面向內(nèi)，在保證不

被壓碎的條件下運送。

10.7在樣品包裝箱上貼標簽并做“上、下”標記箭頭。

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附錄A

（規(guī)范性附錄）

抽樣常用溶液的配制

A.1阿（Alserer）氏液

葡萄糖（C6H12O6·2H2O）2.05g

檸檬酸鈉（Na3C6H5O7·2H2O）0.8g

氯化鈉（NaCl）0.42g

蒸鎦水（或無離子水）加至100.0mL。

溶解后，以10%檸檬酸調(diào)至pH為6.1分裝后，70KPa10min滅菌，冷卻后4℃保存，用時1份血液加

2份阿氏液。

A.2病毒保存緩沖液（0.01mol/L、PH7.2磷酸鹽緩沖鹽水）的配制

A液

0.2mol/L磷酸二氫鈉水溶液

磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)27.6g，溶于蒸餾水中，最后稀釋至1000mL。

B液

0.2mol/L磷酸氫二鈉水溶液

磷酸氫二鈉(Na2HPO4·7H2O)53.6g，（或Na2HPO4·12H2O71.6g或Na2HPO4·2H2O35.6g）加蒸餾

水溶解，最后稀釋至1000mL。

0.2mol/LA液14mL

0.2mol/LB液36mL

加氯化鈉(NaCl)8.5g

用蒸餾水稀釋至1000mL

A.330%甘油鹽水緩沖液

甘油（CH2OHCHOHCH2OH）30.0mL

氯化鈉（NaCl）4.2g

磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.0g

磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）3.lg

0.02%酚紅（C19H14O5S）1.5mL

蒸餾水加至100mL

加熱溶化，校正pH值為7.6，100KPa15min滅菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

A.4Earle細胞培養(yǎng)液

甲液：

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氯化鈉（NaCl）68.0g

氯化鉀（KCl）4.0g

磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)1.4g

碳酸氫鈉(NaHCO3)*22.0g

葡萄糖10.0g

雙蒸水加至500mL

溶解后加氯仿1mL作為防腐劑，置0℃～4℃中保存?zhèn)溆谩?/p>

*為便于調(diào)節(jié)pH和避免沉淀，碳酸氫鈉可單獨滅菌，使用前用以調(diào)整pH。

乙液：

氯化鈣（CaCl2）2.0g

氯化鎂（MgCl2·6H2O）1.7g

0.4%酚紅液0.5mL

雙蒸水加至500mL

溶解后加氯仿1mL作為防腐劑，置0℃～4℃中保存?zhèn)溆谩?/p>

使用時按以下比例配成Earle細胞培養(yǎng)液

甲液：1份

乙液：1份

雙蒸水18份

以70KPa10min滅菌，0℃～4℃中保存?zhèn)溆谩Ｓ们耙?.6%碳酸氫鈉溶液調(diào)整pH為7.4～7.6。

A.5肉湯（broth）

牛肉膏3.5g

蛋白胨10.0g

氯化鈉（NaCl）5.0g

充分混合后，加熱溶解，校正pH為7.2～7.4，再用流通蒸氣加熱30min，用濾紙過濾，獲黃色透明

液體，分裝于試管或燒瓶中，以100KPa20min滅菌。保存于4℃冰箱中備用。

A.6磷酸鹽緩沖液（0.04mol/L、pH7.4）

磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）12.22g

磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.77g

加雙蒸水至1000.0mL，pH7.4～7.6

高壓滅菌100KPa30min

A.7漢克氏（Hanks）液

甲液：

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溶液（1）

氯化鉀（KCl）4.0g

氯化鈉（NaCl）80.0g

硫酸鎂（MgSO4·7H2O）1.0g

氯化鎂（MgCl2·6H2O）1.0g

混合后加入雙蒸水400mL

溶液（2）

氯化鈣（CaCl2）1.4g溶于50mL雙蒸水中

將上述（1）、（2）兩種溶液混合后，加雙蒸水至500mL，再加氯仿1mL作為防腐劑，放置0℃～4℃

中保存。

乙液：

磷酸氫二鈉（Na2HPO4·7H2O）0.52g

磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.6g

葡萄糖（C6H12O6·2H2O）10.0g

0.4%酚紅液0.5mL

將上述甲、乙二溶液混合后，加雙蒸水至500mL，加氯仿1mL，置0℃～4℃中保存。

使用時按以下比例配成漢克氏液。

甲液：1份

乙液：1份

雙蒸水18份

以100KPa10min滅菌

此溶液保存于0℃～4℃，可使用1個月。用前以5.6%碳酸氫鈉液（70kPa10min滅菌）調(diào)整pH為

7.4～7.6。

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

抽樣記錄表格

表B.1禽類抽樣登記表

采樣地點區(qū)縣鎮(zhèn)鄉(xiāng)村街道小區(qū)存欄（只）

采樣場名樣品代次

聯(lián)系人聯(lián)系電話采樣日期

□蛋雞□肉雞□肉鴨□蛋鴨□鵝

禽種類

□烏雞□鴿□其它日齡

及日齡

血清份號

樣品數(shù)量樣品序號

糞或雙拭子份號

采樣場□規(guī)模種場□規(guī)模商品場□養(yǎng)殖小區(qū)□散養(yǎng)戶□市場

監(jiān)測種類□公園□野鳥棲息地□其它

疫苗

接種疫苗名稱免疫時間，免疫次數(shù)疫苗接種類型批號

廠家

年月日次□型

年月日次□型

□型

年月日次

□型型

年月日次

年月日次

年月日次

年月日次

被采樣場戶負責人簽字：采樣人簽字：區(qū)縣站接樣人簽字：（公章）：

年月日年月日年月日

附：樣本編號表

填表說明：1.樣品代次指祖代、父母代、商品代；

2.規(guī)?；輬鲋傅扒荽鏅诔?000只或肉禽存欄超2000只；

3.樣本序號指采樣管上所標示的號碼。

4.疫苗接種類型填寫單價、多價等型。

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表B.2畜類抽樣登記表

采樣地點區(qū)縣鎮(zhèn)鄉(xiāng)村街道小區(qū)存欄（只）

采樣場名樣品代次

聯(lián)系人聯(lián)系電話采樣日期

畜種類及日齡

□規(guī)模種場□規(guī)模商品場□養(yǎng)殖小區(qū)□散養(yǎng)戶□屠宰場

□動物醫(yī)院□犬場□其它日齡

血清份——號

淋巴份——號

涂片份——號

樣品數(shù)量拭子份樣品序號——號

OP液份——號

唾液份——號

其它份——號

接種疫苗名稱免疫時間，免疫次數(shù)接種疫苗型疫苗廠家批號

□型

年月日次

□型

□型

年月日次

□型型

年月日次

年月日次

年月日次

被采樣場戶負責人簽字：采樣人簽字：區(qū)縣站接樣人簽字：（公章）：

年月日年月日年月日

附：樣本編號表

填表說明：樣品代次指祖代、父母代、商品代；規(guī)?；瘓鲋复鏅诔?00頭豬或100只羊或50頭牛的場。

樣本序號指采樣管上所標示的號碼。疫苗接種類型填寫單價、多價等型。

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DB11/T677—2009

表B.3樣本編號表

序號原始編號樣本種類序號原始編號樣本種類序號原始編號