血細(xì)胞分析儀原理講解

血細(xì)胞分析儀原理手工計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀兩分群（淋巴與非淋）三分群（淋巴、單個(gè)核、中性粒）五分群五分群＋網(wǎng)織紅血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀前世今生血細(xì)胞分析儀的基本功能血液分析儀主要能完成三大功能：①細(xì)胞計(jì)數(shù)功能（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板）②細(xì)胞分類功能(白細(xì)胞：三分群和五分群)③血紅蛋白測(cè)定檢測(cè)原理電學(xué)光學(xué)

電阻抗法

激光散射法

分光光度法電學(xué)原理電阻抗法（又稱Culter）的原理：血細(xì)胞是電的不良導(dǎo)體，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)，會(huì)導(dǎo)致小孔兩端電阻變化，將其轉(zhuǎn)化成脈沖，感應(yīng)器通過(guò)檢測(cè)脈沖的數(shù)量及大小，從而計(jì)算出通過(guò)小孔的細(xì)胞數(shù)量及體積。V=IR，電阻↑，電壓↑（一）電阻抗法電學(xué)原理（一）電阻抗法脈沖數(shù)量與細(xì)胞數(shù)量一致，脈沖高度與體積呈正比電學(xué)原理（一）電阻抗法電學(xué)原理（一）電阻抗法電學(xué)原理的應(yīng)用檢測(cè)通道一：白細(xì)胞計(jì)數(shù)分析檢測(cè)通道二：紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)分析白細(xì)胞檢測(cè)分析前，需先加溶血素溶解紅細(xì)胞。溶血素破壞磷脂雙分子層。（一）三分群血細(xì)胞分析儀電學(xué)原理的應(yīng)用（一）三分群血細(xì)胞分析儀（白細(xì)胞檢測(cè)通道）經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化?。。‰妼W(xué)原理的應(yīng)用（一）三分群血細(xì)胞分析儀（白細(xì)胞檢測(cè)通道）紅細(xì)胞和血小板共用一個(gè)小孔管，正常人紅細(xì)胞體積和血小板體積間有一個(gè)明顯界限（40fL），血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確容易。電學(xué)原理的應(yīng)用(二）射頻電導(dǎo)法射頻（radiofrequency,RF)指射頻電流，是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。高頻電流能通過(guò)細(xì)胞壁。用高頻電磁探針滲入細(xì)胞膜脂質(zhì)可測(cè)定細(xì)胞的導(dǎo)電性，提供細(xì)胞內(nèi)部化學(xué)成分、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)、顆粒成分等特征信息。光（化）檢測(cè)原理(一）激光散射法基本檢測(cè)原理鞘液光（化）檢測(cè)原理(一）激光散射法基本檢測(cè)原理1）熒光染料：堿性槐黃、噻唑橙、碘化丙啶等，主要用于核酸染色。（可用于網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)）2）非熒光染料：亞甲藍(lán)（核酸染色）、氯唑黑（用于單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞顆粒和白細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)染色）和過(guò)氧化物酶試劑等。被染色部分可發(fā)生光吸收現(xiàn)象，使檢測(cè)器接收到的散射光強(qiáng)度發(fā)生改變，從而區(qū)分細(xì)胞的種類。光（化）檢測(cè)原理(二）分光光度法朗伯-比爾定律（Lamber-Beer）是吸收光度法的基本定律。入射光I0透射光I式中A代表吸光度；T表示透光度或透射率；I0、I為入射光和透射光強(qiáng)度；c為吸光物質(zhì)溶液的濃度；b為液層厚度；k為吸光系數(shù)。光（化）檢測(cè)原理(二）分光光度法用途：血紅蛋白測(cè)定0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光（化）檢測(cè)原理(二）分光光度法含氰化物溶血?jiǎng)?40nm。不含氰化物溶血?jiǎng)?，如月桂酰硫酸鈉（sodiumlaurylsulfate,SLS）法，當(dāng)用HiCN法校準(zhǔn)后，其檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是既可達(dá)到與HiCN法相當(dāng)?shù)木芏群蜏?zhǔn)確性，又可避免HiCN法試劑對(duì)操作人員的潛在危害和對(duì)環(huán)境的污染。聯(lián)合檢測(cè)原理(一）容量、電導(dǎo)、光散射聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)（volume，conductivity，scatter,VCS）電阻抗技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞大?。╇妼?dǎo)性技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)）光散射技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞顆粒）。聯(lián)合檢測(cè)原理(一）容量、電導(dǎo)、光散射聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)（VCS）

體積

電導(dǎo)

光散射聯(lián)合檢測(cè)原理(一）容量、電導(dǎo)、光散射聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)（VCS）DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導(dǎo)值）DF3（體積值和電導(dǎo)值）光（化）檢測(cè)原理(二）電阻抗、傳導(dǎo)、光散射和核酸熒光染色技術(shù)原理(1)4DIFF通道（白細(xì)胞分類通道）：利用流式細(xì)胞術(shù)和核酸熒光染色技術(shù)檢測(cè)。利用專用溶血?jiǎng)┩耆芙饧t細(xì)胞和血小板，聚亞甲藍(lán)核酸熒光染料可進(jìn)入白細(xì)胞內(nèi)，使DNA、RNA和細(xì)胞器著色。因?yàn)闊晒鈴?qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)核酸含量成比例，所以未成熟粒細(xì)胞、異常細(xì)胞熒光染色深，成熟白細(xì)胞熒光染色淺，從而得到4DIFF白細(xì)胞散點(diǎn)圖。光（化）檢測(cè)原理白細(xì)胞分類：DIFF通道溶血?jiǎng)和耆芙饧t細(xì)胞，在白細(xì)胞膜上打孔核酸染料：對(duì)核酸染色光（化）檢測(cè)原理(二）電阻抗、傳導(dǎo)、光散射和核酸熒光染色技術(shù)原理SSC側(cè)向散射光：內(nèi)部復(fù)雜程度SFL側(cè)向熒光：核酸含量和種類FSC前向散射光：細(xì)胞體積和顆粒數(shù)量光（化）檢測(cè)原理白細(xì)胞分類：DIFF通道縱坐標(biāo)：側(cè)向熒光（SFL），反映核酸含量橫坐標(biāo)：側(cè)向散射光（SSC），反映細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度光（化）檢測(cè)原理加溶血?jiǎng)┖笾行粤＜?xì)胞嗜酸粒細(xì)胞內(nèi)部形態(tài)－透射電子顯微鏡內(nèi)部構(gòu)造；淋巴細(xì)胞＜單核細(xì)胞＜中性粒細(xì)胞＜嗜酸性粒細(xì)胞加溶血?jiǎng)┣傲馨图?xì)胞 單核細(xì)胞聯(lián)合檢測(cè)原理（2）白細(xì)胞／嗜堿性粒細(xì)胞(WBC/BASO)通道：血液與酸性表面活性劑反應(yīng)，不僅紅細(xì)胞溶解，而且除嗜堿性粒細(xì)胞外，其他所有白細(xì)胞膜均被破壞，胞質(zhì)溢出，僅剩裸核。當(dāng)激光束照射到細(xì)胞時(shí)，產(chǎn)生不同強(qiáng)度的散射光，形成二維細(xì)胞圖，其中，嗜堿性粒細(xì)胞呈高狹角散射，定位于細(xì)胞圖上部，裸核細(xì)胞則位于細(xì)胞圖下部。(二）電阻抗、傳導(dǎo)、光散射和核酸熒光染色技術(shù)原理白細(xì)胞／嗜堿性粒細(xì)胞(WBC/BASO)通道聯(lián)合檢測(cè)原理血細(xì)胞分析儀的原理(3)未成熟髓細(xì)胞信息(IMI)通道：采用射頻、電阻抗和特殊試劑結(jié)合法。在細(xì)胞懸液中先加硫化氨基酸，幼稚細(xì)胞膜脂質(zhì)含量高，結(jié)合硫化氨基酸的量多于較成熟的細(xì)胞，對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔谩＜尤肴苎獎(jiǎng)┖?，成熟?xì)胞被溶解，只留下幼稚細(xì)胞（包括造血祖細(xì)胞、原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、有核紅細(xì)胞）和異型／異常淋巴細(xì)胞。檢測(cè)報(bào)告百分率和絕對(duì)值。(二）電阻抗、傳導(dǎo)、光散射和核酸熒光染色技術(shù)原理血細(xì)胞分析儀的原理(4)網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定：網(wǎng)織紅細(xì)胞中嗜堿性物質(zhì)RNA，在活體狀態(tài)下與特殊的熒光染料結(jié)合，根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)射熒光強(qiáng)弱來(lái)判別區(qū)分網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟程度，不同成熟階段的網(wǎng)織紅細(xì)胞含有不同量的RNA，從而根據(jù)熒光強(qiáng)度而獲得低、中、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞群。(二）電阻抗、傳導(dǎo)、光散射和核酸熒光染色技術(shù)原理血細(xì)胞分析儀的原理3.多角度激光散射、電阻抗聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)此類儀器多使用電阻抗原理計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)或某一類細(xì)胞，采用多個(gè)角度激光照射同一個(gè)白細(xì)胞，再測(cè)定其多個(gè)角度的散射光強(qiáng)度，將白細(xì)胞分類。4.光散射與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)此類儀器應(yīng)用激光散射與過(guò)氧化物酶染色技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。(三）聯(lián)合檢測(cè)原理血細(xì)胞分析儀的原理血細(xì)胞分析儀工作流程略有差異，但基本相似，其工作流程如圖血細(xì)胞分析儀工作流程圖2-11五分類血細(xì)胞工作流程圖血細(xì)胞分析儀的原理血細(xì)胞分析儀已經(jīng)由單項(xiàng)檢測(cè)原理和技術(shù)、少量