甜瓜抗細菌性角斑病鑒定技術規(guī)程（征求意見稿）

ICS65.020.20CCSB3121在提交反饋意見時，請將您知道的相關專利連同支持性文件一并附上。IDB21/TXXXX—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由遼寧省農業(yè)農村廳提出并歸口。本文件起草單位：遼寧省農業(yè)科學院、鐵嶺市農業(yè)科學院、新民市鄉(xiāng)村振興發(fā)展中心、臺安縣農業(yè)農村發(fā)展中心。本文件主要起草人：王輝、于舒怡、劉麗、關天舒、李柏宏、劉長遠、何明、張嘉旺、呂艷玲本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復并認真處理，根據實際情況依法進行評估及復審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農業(yè)農村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：遼寧省農業(yè)科學院（沈陽市沈河區(qū)東陵路84號聯(lián)系電話1DB21/TXXXX—2025甜瓜抗細菌性角斑病鑒定技術規(guī)程本文件規(guī)定了甜瓜細菌性角斑病[Pseudomonassyringaepv.lachrymans(SmithetBryan)Young.Dye&Wilkie]抗病性鑒定過程的準備、接種、調查和評價等技術內容。本文件適用于甜瓜（CucumismeloL.）品種或種質資源對細菌性角斑病抗性的室內鑒定及評價。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T17980.1.110—2004農藥田間藥效試驗準則（二）第110部分：殺菌劑防治黃瓜細菌性角斑病GB/T36851—2018甜瓜細菌性角斑病菌檢疫鑒定方法NY/T1857.6—2010黃瓜主要病害抗病性鑒定技術規(guī)程第6部分：黃瓜抗細菌性角斑病鑒定技術規(guī)程SN/T1538.1培養(yǎng)基制備指南第1部分：實驗室培養(yǎng)基制備質量保證通則3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4準備4.1準備肉汁胨培養(yǎng)基（NA）：牛肉浸膏3.0g，酵母浸膏1.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖（或蔗糖）10.0g，瓊脂粉10.0g，蒸餾水1000mL，pH6.8～7.0，高壓滅菌121℃20min。4.2接種體制備4.2.1病原物分離從發(fā)病植株葉片的典型病斑上采集病樣，采用培奍皿稀釋分離法或平板劃線分離法進行分離，挑取單個菌落進行純化培養(yǎng)，經柯赫氏證病法則測定后，對純化的分離物進行形態(tài)學、分子學鑒定等，確定甜瓜細菌性角斑病病原菌，并將該病菌4℃保存?zhèn)溆?。病原物的分離與鑒定符合GB/T36851的規(guī)定和附錄A的要求。4.2.2菌種保存4.2.2.1斜面保存2DB21/TXXXX—2025將純化的病原物劃線轉接到NA試管斜面培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)36h～48h，待病菌長滿斜面后放4℃條件下冷藏保存，保存期為1周～10周。4.2.2.2超低溫甘油保存將獲得的病原菌在NA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，28℃恒溫培養(yǎng)36h～48h，用接種環(huán)挑取病原菌放入裝有滅菌的甘油（甘油:水=1:4）凍存管中混勻，放于-80℃超低溫冰箱下長期保存。4.2.3接種體制備將保存的病原菌在NA平板培養(yǎng)基上進行純培養(yǎng)，28℃恒溫培養(yǎng)36h～48h，用接種環(huán)刮取病原菌，將其放入裝有適量無菌水的三角瓶中，充分攪拌均勻，用稀釋平板計數法或血球計數板計數法測定菌懸液濃度，配制成3×106cfu/mL病菌懸浮液，供接種使用。4.3鑒定對照品種抗病性鑒定時選擇“彩虹7號”為甜瓜感病對照品種。4.4鑒定設計鑒定材料隨機排列，每份材料重復3次，每次重復10株苗。4.5鑒定材料育苗選擇顆粒飽滿、無病蟲害的甜瓜種子經5%次氯酸鈉溶液浸種10min后，用清水沖洗，放入墊有兩層濾紙的培養(yǎng)皿中，然后于恒溫培養(yǎng)箱中28℃催芽。待胚根長至0.5cm時，將其播于裝有播種基質的塑料育苗缽內。育苗基質中草炭：蛭石：菜田土配比為2:1:1，基質經高溫蒸汽滅菌（134℃,30min）。育苗在20℃~25℃的日光溫室內進行。4.6接種室與鑒定室設置4.6.1接種室設置接種室應包括接種間和緩沖間。接種室的地板、墻壁、天花板要平整。門窗應密閉，房間應設有工作臺，以便放置酒精燈、常用接種工具，工作臺上方和緩沖間天花板上應安裝紫外線殺菌燈和日光燈。4.6.2鑒定室設置人工接種室內應具備人工調節(jié)溫度、濕度及穩(wěn)定的光照條件；亦可使用恒溫光照箱。5接種5.1接種期抗性鑒定接種期為甜瓜2片～3片真葉期。5.2接種濃度接種用病原物菌懸浮液濃度為3×106cfu/mL。5.3接種方法3DB21/TXXXX—2025采用噴霧接種法。用小型手持噴霧器將準備好接種的病原物菌懸浮液均勻地噴霧到每片葉片的正反面，以不流水滴為宜。5.4接種后管理接種后將植株置于鑒定室或恒溫保藏箱內，溫度設定18℃~22℃,光照16小時、黑暗8小時，光照強度6000Lx，內部空間保持相對濕度90%～100%。6調查6.1調查時間病情調查于接種后10d～14d進行，對發(fā)病情況進行調查并記錄。6.2調查方法與病指計算根據病害分級標準，逐份調查植株葉片發(fā)病情況，記載接種的總葉數、各病情級別的葉片數、病情級別，計算出病情指數（DI）。病情指數（DI）按下列公式計算：式中：DI—病情指數；s—各級代表值；n—各級葉片數；S—發(fā)病最高代表值；N—調查總葉數。6.3病情分級病情分級及其對應的癥狀描述見表1。表1表1甜瓜細菌性角斑病鑒定病情級別劃分指標01A≤5%3579A>50%7抗病性評價7.1鑒定有效性判別4DB21/TXXXX—2025當感病對照材料達到感病程度（S級）時，該批次材料抗細菌性斑點病鑒定視為有效（表2）。7.2評價標準依據鑒定材料的病情指數確定其抗性水平，劃分標準見表2。表2甜瓜細菌性角斑病抗病性劃分指標病情指數（DI）DI=07.3鑒定記載表格甜瓜細菌性角斑病抗病性鑒定結果記載表格見圖1。圖1甜瓜細菌性角斑病抗病性鑒定結果記載表樣式圖5DB21/TXXXX—2025甜瓜細菌性角斑病A.1病名和癥狀描述A.1.1病名甜瓜細菌性角斑病病名為MuskmelonangularleafspotA.1.2田間癥狀該病害主要危害葉片，還可為害莖、葉柄及果實。染病初期產生水漬狀小點，以后病斑擴大，由于受葉脈的限制病斑呈多角形，在病斑周圍有黃色暈圈；再潮濕條件下葉背病部會出現白色菌膿。圖A.1甜瓜細菌性角斑病田間癥狀A.2病原菌學名和形態(tài)描述A.2.1病原菌該病害病原為丁香假單胞菌黃瓜致病變種[Pseudomonassyringaepv.Lachrymans(SmithetBryan)Young,Dye&Wil