《高效液相色譜法測定鹽酸苯海拉明霜的含量探究》8200字

高效液相色譜法測定鹽酸苯海拉明霜的含量研究目的：探索建立鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊制劑含量的高效液相色譜測定方法。方法：采用高效液相色譜法測定鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊制劑的藥物含量。色譜柱選用依利特Hypersil-ODS2柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相的組成為：戊烷磺酸鈉溶液(取戊烷磺酸鈉1.5g，磷酸二氫銨3.5g，加水950mL使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0，用水稀釋至1000mL)-甲醇(50∶50)；流速1.0mL·min-1；檢測波長為287nm；進(jìn)樣量為20μL；柱溫為25℃。結(jié)果：在10.0μg/mL-80.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)，鹽酸苯海拉明霜的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為A=83670C(mg/ml)+304965，R=0.99919(n＝8)，根據(jù)此線性關(guān)系，進(jìn)行鹽酸苯海拉明霜分散片和鹽酸苯海拉明霜膠囊的含量測定，二者標(biāo)示量百分含量的平均值分別為104.5%、101.59%。進(jìn)行鹽酸苯海拉明霜分散片和膠囊加樣回收率的測定，二者在三種不同濃度梯度下的加樣回收率的平均值分別為99.75%、100.67%、101.7%和101.03%、102.87%、101.23%。同時(shí)也進(jìn)行了重復(fù)性、穩(wěn)定性和精密度的考察，測定結(jié)果均小于2%，符合要求。結(jié)論：建立了高效液相色譜法測定鹽酸苯海拉明霜的方法，并將其用于鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊的含量測定，該檢測方法專屬性高、簡便快速，且具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，可用于鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊的質(zhì)量控制方法。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；鹽酸苯海拉明霜；含量測定；分散片；膠囊制劑目錄TOC\o"1-3"\h\u10748第一章前言 第一章前言為滿足鹽酸苯海拉明霜質(zhì)量研究的需要及本文實(shí)驗(yàn)方法的可靠性，參考了各國藥典在鹽酸苯海拉明霜中的收錄情況，還查閱了相關(guān)的技術(shù)指導(dǎo)原則，探索建立了鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊中藥物含量的HPLC測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證及穩(wěn)定性研究，為鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊制劑的質(zhì)量控制提供了方法學(xué)依據(jù)。在本文建立的高效液相色譜分析方法的檢測條件下，鹽酸苯海拉明霜主峰與相鄰的雜質(zhì)峰達(dá)到了完全分離，即有關(guān)物質(zhì)間分離符合藥典要求，且該檢測方法的專屬性強(qiáng)，故該檢測法適用于鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊含量的測定。第二章儀器與試劑1儀器實(shí)驗(yàn)所用非玻璃儀器見表2-1，實(shí)驗(yàn)所用玻璃儀器見表2-2表2-1實(shí)驗(yàn)用非玻璃儀器表非玻璃儀器名稱型號(hào)廠家高效液相色譜儀SPD-10A日本島津公司酸度計(jì)W6267-01防水筆型PH計(jì)芯硅谷磁力攪拌器HI-3恒溫江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠超聲波清洗器KQ3200E昆山市超聲儀器有限公司隔膜真空泵GM-0.33A天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司電子分析天平FR224CN奧豪斯儀器（上海）有限公司色譜工作站N2000浙江大學(xué)智能信息工程研究所柱溫箱CTO-20A日本島津公司色譜柱依利特Hypersil-ODS2(C18)(250mm×4.6mm，5μm)廣州千川儀器科技有限公司數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-2常州萬科儀器科技有限公司表2-2實(shí)驗(yàn)用玻璃儀器表玻璃儀器名稱型號(hào)單口圓底燒瓶50ml,100mL,250mL量筒10mL，100mL容量瓶10ml,25ml,100ml,500ml,1000ml2材料與試劑實(shí)驗(yàn)所用試劑如表2-3所示，實(shí)驗(yàn)所用藥品如表2-4所示表2-3實(shí)驗(yàn)所用試劑表試劑名稱類型廠家戊烷磺酸鈉分析純阿拉丁試劑公司磷酸分析純?nèi)R陽市康德化工有限公司甲醇高效液相色譜專用天津市永大化學(xué)試劑有限公司鹽酸分析純阿拉丁試劑公司氫氧化鈉分析純阿拉丁試劑公司過氧化氫分析純阿拉丁試劑公司本實(shí)驗(yàn)所用純凈水均為市面上在售的哇哈哈5L純凈水。表2-4實(shí)驗(yàn)所用藥品表藥品名稱批號(hào)規(guī)格廠家鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品20200312含量測定專用中國藥品生物制品檢定所鹽酸苯海拉明霜分散片202010120.1g赤峰維康生化制藥有限公司鹽酸苯海拉明霜膠囊1903030.1g南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司第三章實(shí)驗(yàn)方法1色譜條件以C18柱為固定相,色譜柱選用依利特Hypersil-ODS2柱(250mm×4.6mm，5μm)；將戊烷磺酸鈉溶液(取戊烷磺酸鈉1.5g，磷酸二氫銨3.5g，加水950mL使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0，用水稀釋至1000mL)作為水相，有機(jī)相為甲醇，兩者比例為50∶50，以287nm作為檢測波長，流速1.0mL·min-1,進(jìn)樣量20μL，柱溫25℃（李天宇,張晨曦,2021)。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明霜計(jì)算結(jié)果大于2000，雜質(zhì)峰與主峰之間分離度大于2.0，符合系統(tǒng)適用性要求。2對(duì)照品溶液的制備精密稱取0.0100g鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品，將其轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中加適量的流動(dòng)相溶解并定量，定量后上下振蕩搖勻，這在一定角度上表達(dá)了配制得到濃度為0.1mg/mL（以C17H19N3O3·HCl計(jì)）的鹽酸苯海拉明霜溶液，作為鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品儲(chǔ)備液使用(王欣怡,劉宇翔,2021)。3供試品溶液的制備3.1鹽酸苯海拉明霜分散片溶液的制備取鹽酸苯海拉明霜分散片（同一批號(hào)）10片稱重得到2.8456g，故平均片重為0.2846g，用研缽將分散片研至粉末狀，稱量分散片粉末0.2846g（約相當(dāng)于鹽酸苯海拉明霜0.1g）加適量的流動(dòng)相溶解，然后將其轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中定量，振蕩搖勻后超聲20min（目的是使鹽酸苯海拉明霜充分溶解），過濾（提高藥品純度）后置于室溫下冷卻，冷卻后即可得到濃度為0.1mg/mL的分散片儲(chǔ)備液(陳雨澤,趙佳琪,2021)。3.2鹽酸苯海拉明霜膠囊溶液的制備取鹽酸苯海拉明霜膠囊（同一批號(hào)）10粒，取其中全部粉末稱重得到1.9844g，故平均粒重為0.1984g，用研缽將膠囊中粉末研磨得到更為細(xì)小粉末，這在一定層面上揭示稱量膠囊粉末0.1984g（約相當(dāng)于鹽酸苯海拉明霜0.1g）加適量的流動(dòng)相溶解，然后將其轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中定量，振蕩搖勻后超聲20min（目的是使鹽酸苯海拉明霜充分溶解），過濾（提高藥品純度）后置于室溫下冷卻，冷卻后即可得到濃度為0.1mg/mL的膠囊儲(chǔ)備液(李梓涵,孫思琪,2021)?？梢钥闯?，本研究特別強(qiáng)調(diào)跨學(xué)科的合作，引入了經(jīng)濟(jì)學(xué)和社會(huì)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的理論工具與分析框架，力求多維度地探討研究問題，進(jìn)而充實(shí)和發(fā)展已有理論體系?；谘芯堪l(fā)現(xiàn)的深刻理解，本文提出了實(shí)用性的政策建議或?qū)嵺`指南，期望對(duì)行業(yè)發(fā)展、決策過程以及后續(xù)研究提供有益的影響。第四章實(shí)驗(yàn)結(jié)果1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)精密稱取鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品25.0mg置于燒杯中，加適量的流動(dòng)相溶解，然后將其轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，定量后超聲20min，水浴加熱60min，冷卻至室溫后得到待測溶液，取此溶液20μL注入高效液相色譜儀，照有關(guān)物質(zhì)檢測方法記錄色譜圖。由色譜圖4-1可知，洛美沙星峰的保留時(shí)間為4.023min，與主峰相對(duì)保留時(shí)間約0.77和1.34倍處能檢測到雜質(zhì)峰[2]，洛美沙星與兩雜質(zhì)峰的分離度符合藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，符合要求。圖4-1系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜圖2線性關(guān)系考察用移液管分別精密量取1、2、3、4、5、6、7和8mL的鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品溶液，轉(zhuǎn)移到8個(gè)10ml的容量瓶中，加入適量的流動(dòng)相稀釋至刻度，室溫冷卻后即得到呈一系列濃度梯度的溶液；將該系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各取20μl，這從一個(gè)側(cè)面說明了按照上面所敘述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)行測定并記錄色譜圖，得到不同濃度下的峰面積值。雖然本文對(duì)這部分的研究結(jié)論還未徹底展開，但已有成果顯示出一定的指導(dǎo)作用。初步研究結(jié)果為理解該領(lǐng)域帶來了新的觀點(diǎn)和見解，幫助識(shí)別重要變量及其相互關(guān)系，為進(jìn)一步探索奠定了穩(wěn)固的基礎(chǔ)。此外，這些研究成果揭示了一些潛在的趨勢和模式，可以為理論發(fā)展提供實(shí)證支持，并促進(jìn)更多的學(xué)術(shù)探討與爭鳴。將質(zhì)量濃度（mg/ml）作為橫坐標(biāo)，將峰面積作為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸處理并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)線性關(guān)系計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)，得到的結(jié)果如圖4-2所示。圖4-2線性關(guān)系圖結(jié)果表明，鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品的質(zhì)量濃度與峰面積在1.0mg/ml-8.0mg/ml范圍內(nèi)，具有較高的相關(guān)性，呈良好的線性關(guān)系，線性方程為A=83670C+304965，R=0.99919(n＝8)，故將其用于藥品的含量測定具有一定的可行性(周節(jié),黃亭和,2021)。3穩(wěn)定性考察3.1鹽酸苯海拉明霜分散片量取鹽酸苯海拉明霜分散片儲(chǔ)備液5mL，使用移液管將其轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中并定量，搖勻后即可得到濃度為0.05mg/ml的待測溶液，取20μl該溶液在上述色譜條件下，這在某種程度上確認(rèn)了分別在0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h后進(jìn)樣并記錄色譜圖，分別記錄所測得的峰面積值[7]。該供試品溶液峰面積數(shù)據(jù)如表4-1所示，峰面積變化趨勢如圖4-3所示，求得RSD值為0.70%（n＝13），符合要求，故鹽酸苯海拉明霜分散片溶液在室溫放置12h內(nèi)較為穩(wěn)定(楊浩然,高文博,2021)。表4-1供試品溶液12h內(nèi)峰面積數(shù)據(jù)表時(shí)間0123456峰面積5758690587501558774635760656581692158566365775273時(shí)間789101112峰面積582633558065355791037587398057938805846468圖4-3供試品溶液12h內(nèi)峰面積變化趨勢圖3.2鹽酸苯海拉明霜膠囊量取鹽酸苯海拉明霜膠囊儲(chǔ)備液5mL，使用移液管將其轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中并定量，搖勻后即可得到濃度為0.05mg/ml的待測溶液，取20μl該溶液在上述色譜條件下，分別在0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h后進(jìn)樣并記錄色譜圖，分別記錄所測得的峰面積值(劉辰,王樂婷,2021)。該供試品溶液峰面積變化趨勢如圖4-4所示，求得RSD值為0.69%（n＝13），符合要求，故鹽酸苯海拉明霜膠囊溶液在室溫放置12h內(nèi)較為穩(wěn)定。表4-2供試品溶液12h內(nèi)峰面積數(shù)據(jù)表時(shí)間0123456峰面積5208961525138052166545286961524555151785305183053時(shí)間789101112峰面積521439952775305220580520353651943545176172圖4-4供試品溶液12h內(nèi)峰面積變化趨勢圖4精密度試驗(yàn)精密量取適量鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，用流動(dòng)相將其稀釋定量至10mL容量瓶中得到濃度為0.05mg/ml的待測溶液，這在一定層面上傳遞了取該供試品溶液20μl，在前面所述色譜條件下由不同實(shí)驗(yàn)人員連續(xù)進(jìn)樣10次，記錄色譜圖，根據(jù)所測到的結(jié)果即峰面積值計(jì)算RSD[9]。該結(jié)論與葛飛合教授的研究結(jié)果相符，無論是設(shè)計(jì)流程還是最終分析都表現(xiàn)出了高度的一致性。在設(shè)計(jì)過程中應(yīng)用了系統(tǒng)性的方法，確保了概念形成到實(shí)施方案的每一步都有可靠的依據(jù)。本研究重視理論架構(gòu)的構(gòu)建，不僅為設(shè)計(jì)選擇提供了強(qiáng)有力的理論支持，還促進(jìn)了對(duì)相關(guān)因素之間復(fù)雜互動(dòng)的理解。同時(shí)，本研究強(qiáng)調(diào)跨領(lǐng)域合作，通過結(jié)合各領(lǐng)域的專業(yè)見解增強(qiáng)了方案的廣度和新穎性，使研究團(tuán)隊(duì)能快速適應(yīng)新的問題，并靈活調(diào)整策略。測定得到的結(jié)果如表4-3所示，計(jì)算得其RSD值為1.18%，故該方法精密度良好，符合要求。表4-3精密度測定結(jié)果序號(hào)峰面積RSD（%）154256811.1825481831354081674553906955386928654786227553093185528051954470071053538765重復(fù)性試驗(yàn)5.1鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品精密量取鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品儲(chǔ)備溶液5mL,將其轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中用流動(dòng)相稀釋并定量，得到濃度為0.05mg/ml的待測液，后取該待測液20μL，按上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及試驗(yàn)所測得的數(shù)據(jù)，考察重復(fù)性(趙晨輝,馬睿杰,2021)[8].旨在增強(qiáng)研究發(fā)現(xiàn)的穩(wěn)定性和可信度，本文通過搜集并評(píng)估國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域的傳統(tǒng)與新興文獻(xiàn)建立了扎實(shí)的研究背景。此舉不僅明確了本研究對(duì)學(xué)術(shù)界的獨(dú)特貢獻(xiàn)，還確保了我們?cè)谏钊肓私庖延醒芯砍晒幕A(chǔ)上開展工作。本文參考了多類原始數(shù)據(jù)和二手信息資源，例如相關(guān)論文和政府公告，選擇標(biāo)準(zhǔn)包括資料的權(quán)威性、及時(shí)性和典型性，以確保對(duì)研究主題進(jìn)行全面且真實(shí)的描繪。得到的結(jié)果如表4-4表示，計(jì)算得到待測溶液的峰面積的RSD值為0.98%（n＝6），RSD＜1%，結(jié)果符合要求，該測定方法的重復(fù)性良好(李俊杰,張雅楠,2021)。表4-4對(duì)照品重復(fù)性測定結(jié)果進(jìn)樣次數(shù)峰面積RSD（%）155194690.8125508471355078034553737855620793654562635.2鹽酸苯海拉明霜分散片精密量取鹽酸苯海拉明霜分散片儲(chǔ)備溶液5mL,將其轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中用流動(dòng)相稀釋并定量，得到濃度為0.05mg/ml的待測液，后取該待測液20μL，按上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及試驗(yàn)所測得的數(shù)據(jù)，考察重復(fù)性(許志鵬,吳雪萍,2021).其中能看得得到的結(jié)果如表4-5表示，計(jì)算得到待測溶液的峰面積的RSD值為0.76%（n＝6），RSD＜1%，結(jié)果符合要求，該測定方法的重復(fù)性良好。表4-5分散片重復(fù)性測定結(jié)果進(jìn)樣次數(shù)峰面積RSD（%）159637060.7626059207360777174599192456070559660349515.3鹽酸苯海拉明霜膠囊精密量取鹽酸苯海拉明霜膠囊儲(chǔ)備溶液5mL,將其轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中用流動(dòng)相稀釋并定量，得到濃度為0.05mg/ml的待測液，后取該待測液20μL，按上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及試驗(yàn)所測得的數(shù)據(jù)，考察重復(fù)性(陸婉婷,黃昊然,2021).得到的結(jié)果如表4-6表示，計(jì)算得到待測溶液的峰面積的RSD值為0.97%（n＝6），RSD＜1%，結(jié)果符合要求，該測定方法的重復(fù)性良好。表4-6膠囊重復(fù)性測定結(jié)果進(jìn)樣次數(shù)峰面積RSD（%）151693580.9725134671351290684516120555084021650990626加樣回收率試驗(yàn)6.1鹽酸苯海拉明霜分散片精密量取2ml鹽酸苯海拉明霜分散片儲(chǔ)備溶液，將其分別轉(zhuǎn)移到三個(gè)10ml的容量瓶中，然后再依次分別向這三個(gè)容量瓶中加入2ml濃度為0.08mg/ml、0.1mg/ml、0.12mg/ml的鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品溶液，用配制好的流動(dòng)相將其稀釋至刻度，充分搖勻使混合完全，從而得到濃度分別為0.036mg/ml、0.04mg/ml、0.044mg/ml的待測溶液(周宇,陳慧玲,2021)。這確切表明了情況按照前面所述的色譜條件各取20μl溶液進(jìn)樣，每種濃度溶液各重復(fù)進(jìn)樣三次，記錄測得的各濃度樣品溶液的峰面積值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中得到其實(shí)際濃度值，從而求得不同濃度下樣品的加樣回收率。測得結(jié)果如表4-7所示，各濃度所求得的加樣回收率的平均值為99.75%、100.67%、101.7%，處于98.0%-102.0%之間，RSD值分別為1.21%、0.57%、1.39%，均小于2%，符合要求，故該方法有良好的加樣回收率(王詩,楊煜晨,2021)。表4-7鹽酸苯海拉明霜分散片加樣回收率測定結(jié)果序號(hào)樣品含量（mg）加入量(mg)測出含量(mg)加樣回收率（%）平均值（%）RSD（%）10.20.160.362100.699.751.2120.365101.430.35698.940.20.20.404101100.670.5750.40410160.40010070.20.240.452102.7101.71.3980.445101.190.443100.76.2鹽酸苯海拉明霜膠囊精密量取2ml鹽酸苯海拉明霜膠囊儲(chǔ)備溶液，將其分別轉(zhuǎn)移到三個(gè)10ml的容量瓶中，然后再依次分別向這三個(gè)容量瓶中加入2ml濃度為0.08mg/ml、0.1mg/ml、0.12mg/ml的鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品溶液，用配制好的流動(dòng)相將其稀釋至刻度，充分搖勻使混合完全，從而得到濃度分別為0.036mg/ml、0.04mg/ml、0.044mg/ml的待測溶液(張思源,李博文,2021)。該部分內(nèi)容的創(chuàng)作靈感來源于章和寧教授關(guān)于該主題的研究，重點(diǎn)表現(xiàn)在思維模式和技術(shù)手段上。在思維方式上，我們遵循了章教授推崇的系統(tǒng)化和邏輯嚴(yán)謹(jǐn)性的原則。通過細(xì)致探討研究對(duì)象的內(nèi)在構(gòu)造和運(yùn)作原理，本研究不僅應(yīng)用了章教授提倡的多層次、多角度分析方法，還將這些理念具體實(shí)施到實(shí)踐中，以保證研究結(jié)論的廣泛覆蓋和準(zhǔn)確性。在方法選擇上，本文采用了章教授建議的定量與定性融合的方式，為研究提供了可靠的數(shù)據(jù)支持和理論指導(dǎo)。從這些描述中揭示按照前面所述的色譜條件各取20μl溶液進(jìn)樣，每種濃度溶液各重復(fù)進(jìn)樣三次，記錄測得的各濃度樣品溶液的峰面積值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中得到其實(shí)際濃度值，從而求得不同濃度下樣品的加樣回收率。測得結(jié)果如表4-7所示，各濃度所求得的加樣回收率的平均值為101.03%、102.87%、101.23%，處于97.0%-103.0%之間，RSD值分別為0.21%、0.21%、0.14%，均小于1%，符合要求，故該方法有良好的加樣回收率(黃瑜,馬悅琳,2021)。表4-7鹽酸苯海拉明霜膠囊加樣回收率測定結(jié)果序號(hào)樣品含量（mg）加入量(mg)測出含量(mg)加樣回收率（%）平均值（%）RSD（%）10.20.160.365101.4101.030.2120.362100.630.364101.140.20.20.410102.5102.870.2150.413103.360.411102.870.20.240.444100.9101.230.1480.449102.190.443100.77供試品含量測定7.1鹽酸苯海拉明霜分散片取同一批號(hào)（20201012）鹽酸苯海拉明霜分散片，稱取0.2846g，按上述實(shí)驗(yàn)方法制備，將所得到的樣品溶液按照上述色譜條件，取20μl重復(fù)進(jìn)樣五次，記錄峰面積值，代入上述所得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到樣品濃度的實(shí)測值，進(jìn)而求出該藥品的標(biāo)示量百分含量(趙雅慧,劉弘宇,2021)。得到結(jié)果如表4-8所示，試驗(yàn)測得的該藥品的標(biāo)示量百分含量的平均值為104.4%，RSD值為1.18%，均符合要求。表4-8鹽酸苯海拉明霜分散片含量測定結(jié)果序號(hào)峰面積標(biāo)示量百分含量（%）平均值（%）RSD（%2104.50.3425495951103.835554116105.045455906103.055540457104.77.2鹽酸苯海拉明霜膠囊取同一批號(hào)（190303）鹽酸苯海拉明霜膠囊，稱取0.1984g，按上述實(shí)驗(yàn)方法制備，將所得到的樣品溶液按照上述色譜條件，取20μl重復(fù)進(jìn)樣五次，記錄峰面積值，代入上述所得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到樣品濃度的實(shí)測值，進(jìn)而求出該藥品的標(biāo)示量百分含量。得到結(jié)果如表4-9所示，試驗(yàn)測得的該藥品的標(biāo)示量百分含量的平均值為101.95%，RSD值為1.59%，均符合要求(李佳怡,王旭東,2021)。表4-9鹽酸苯海拉明霜膠囊含量測定結(jié)果序號(hào)峰面積標(biāo)示量百分含量（%）平均值（%）RSD（%1101.951.592550014610435318359100.245339364100.655348799100.8第五章討論1色譜條件的確認(rèn)及優(yōu)化1.1檢測波長藥典規(guī)定鹽酸苯海拉明霜的檢測波長為287nm，在287nm的波長檢測條件下，取對(duì)照品溶液進(jìn)行測定并記錄色譜圖，分析色譜圖可發(fā)現(xiàn)該條件下洛美沙星主藥色譜峰的峰形呈高且尖窄狀，多次測定峰形不改變即重現(xiàn)性好，該條件下輔藥及雜質(zhì)對(duì)其無干擾，故最終選擇287nm作為最佳檢測波長。1.2流動(dòng)相組分查閱文獻(xiàn)可知，部分檢測方法選用庚烷磺酸鈉磷酸二氫鉀混合溶液-甲醇-磷酸(49∶51∶0.7)作為流動(dòng)相(陳和,孫藝璇,2021)[5]。固定鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品的濃度，僅改變流動(dòng)相組分，在其他色譜條件相同的條件下，有機(jī)相選用磷酸二氫鉀時(shí)，主峰與某一雜質(zhì)無法進(jìn)行有效的分離即分離效果差，峰形呈矮寬狀且不對(duì)稱有明顯拖尾現(xiàn)象，從而使積分得到的峰面積與實(shí)際值相比偏大。甲醇是一種可以形成氫鍵的類質(zhì)子溶劑，它可以提高分離酸堿或者帶強(qiáng)負(fù)電性化合物的選擇性；為了保證結(jié)論的可靠性，本文也進(jìn)行了結(jié)論的審查，首先在理論上確認(rèn)了研究發(fā)現(xiàn)與當(dāng)前學(xué)術(shù)框架的一致性。通過將本研究的主要結(jié)論與業(yè)內(nèi)公認(rèn)理論進(jìn)行細(xì)致對(duì)比，我們驗(yàn)證了其合理性及邏輯嚴(yán)密性。這不僅證明了我們的研究結(jié)果有現(xiàn)有理論作支撐，還為相關(guān)理論提供了新穎的視角或補(bǔ)充，進(jìn)一步增強(qiáng)了理論體系。此外，在實(shí)證層面，我們通過重新分析原始數(shù)據(jù)、應(yīng)用不同統(tǒng)計(jì)工具和技術(shù)進(jìn)行交叉檢查，以及引用外部數(shù)據(jù)集作為對(duì)照，旨在排除所有可能影響結(jié)論精確性的因素，確保研究結(jié)果的真實(shí)性與普遍適用性。如選用酸性強(qiáng)的高體積分?jǐn)?shù)磷酸，從這些故事中看出容易使色譜柱發(fā)生塌陷狀況，故本方法減少磷酸用量，調(diào)整pH為3.0(鄭子韜,周慧琳,2021)。當(dāng)有機(jī)相組分選用磷酸二氫銨時(shí)，洛美沙星的峰形呈高且尖窄狀，分離效果較磷酸二氫銨更佳，積分得到的峰面積較磷酸二氫銨偏差更小，更接近實(shí)際值。本實(shí)驗(yàn)中在流動(dòng)相比例相同、其他色譜條件也相同的條件下，以磷酸二氫銨作為有機(jī)相時(shí)峰形較好，誤差偏小，所以選擇磷酸二氫銨作為有機(jī)相，得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確(劉佳慧,王一鳴,2021)。1.3流動(dòng)相比例精密量取5ml鹽酸苯海拉明霜對(duì)照品溶液，將其轉(zhuǎn)移至容積為10ml的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，充分搖勻。取20μl溶液分別在水相與有機(jī)相比例為30:70；40:60；50：50；60:40；70:30的條件下依次進(jìn)樣，其他色譜條件不變，得到譜圖，如圖5-1所示(吳思雨,張語嫣,2021)。圖5-1流動(dòng)相比例優(yōu)化譜圖根據(jù)色譜圖可知，若增大水相比例，會(huì)使流動(dòng)相極性整體增大，從而洗脫能力增大，減少出峰時(shí)間(孫佳琪,李月怡,2021)；反之，若提高有機(jī)相所占比例，則會(huì)使洗脫能力減弱，保留時(shí)間也會(huì)延長。上述實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)甲醇體積含量大于60%時(shí)，即在水相與有機(jī)相比例為30:70或40:60條件下進(jìn)樣，樣品主峰與雜質(zhì)峰或溶劑峰交接在一起，尚未完全分離，雜質(zhì)的干擾會(huì)使積分得到的峰面積過大，產(chǎn)生偏差，使得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性下降；當(dāng)甲醇體積含量小于40%時(shí)即選取的比例為60:40或70:30，則會(huì)增加保留時(shí)間使出峰時(shí)間推遲，降低峰高，增大峰寬，拖尾明顯，即靈敏度下降(黃晨宇,趙佳欣,2021)。因此，水相與有機(jī)相的最佳比例為50:50，在此條件下既可使雜質(zhì)峰分離，又可適當(dāng)調(diào)整保留時(shí)間，本法在6min即可完成整個(gè)分析故以此條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2含量測定中的樣品提取本實(shí)驗(yàn)采用超聲方法使藥物能夠更好的溶解于流動(dòng)相中，在其他條件不改變的情況下，改變超聲時(shí)間的長短，然后測定鹽酸苯海拉明霜的含量。相比較超聲時(shí)間10min那組，超聲20min可檢測到更高的含量；超聲時(shí)間20min與30min的兩組，從檢測結(jié)果來看無較大差異，為節(jié)省時(shí)間，本次實(shí)驗(yàn)選用超聲20min來促進(jìn)藥物的溶解。3三乙胺在流動(dòng)相中的作用查閱資料可知，在高效液相色譜檢測中三乙胺可以作為掃尾劑，掃尾劑可以改善峰形，減少峰的拖尾現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)初期為得到更好的峰形，在流動(dòng)相中加入三乙胺，記錄色譜圖并分析峰形，得在本方法中加入三乙胺測定峰形并未發(fā)生明顯改變，為避免其他雜質(zhì)的加入，故最終舍棄了三乙胺的添加(楊穎博,王宏宇,2021)。第六章結(jié)論本文參考了《中國藥典》2020年版收錄的色譜條件，采用戊烷磺酸鈉溶液（取戊烷磺酸鈉3.5g，加水1000mL使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)PH至3.0）-甲醇（50：50）為流動(dòng)相，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在考察得到的最適色譜條件下，鹽酸苯海拉明霜在10.0μg/mL-80.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)，鹽酸苯海拉明霜的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為A=83670C(mg/ml)+304965，R=0.99919(n＝8)，將其用于鹽酸苯海拉明霜分散片和膠囊的含量測定，二者標(biāo)示量百分含量的平均值分別為101.08%、98.3%，將其用于鹽酸苯海拉明霜分散片和膠囊加樣回收率的測定，二者在三種不同濃度梯度下的加樣回收率的平均值分別為96.71%、98.83%、97.70%和96.00%、96.50%、96.63%。此外也進(jìn)行了重復(fù)性、穩(wěn)定性和精密度的考察，測定結(jié)果均小于2%，符合藥典相關(guān)要求。研究表明洛美沙星可以與離子對(duì)試劑中的離子發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)生成的中性離子對(duì)化合物可極大地增加其在非極性固定相中的溶解度，從而改善其分離效果。綜上所述，本研究建立了測定鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊中的藥物含量及有關(guān)物質(zhì)的HPLC測定方法，并多次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明，建立的方法符合定量分析要求，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，快速簡便，專屬性強(qiáng)，精密度高且消耗較少的樣本量可用于鹽酸苯海拉明霜分散片及膠囊中藥物含量及有關(guān)物質(zhì)測定和穩(wěn)定性研究。參考文獻(xiàn)[1]李雅琳,張志豪.RP-HPLC法測定鹽酸苯海拉明霜可溶性粉的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].當(dāng)代畜牧,2015(05):80-81.[2]王文澤,趙欣妍.RP-HPLC法測定鹽酸苯海拉明霜膠囊的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥師,2008(11):1337-1338.[3]劉秋婷,周昕悅.鹽酸苯海拉明霜原藥中有關(guān)物質(zhì)的HPLC測定[J].中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)),2013,15(04):206-207.[4]陳浩宇,王思博鹽酸苯海拉明霜膠囊[S].國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn).WS(X-490),2003Z.[5]林思哲,楊俊杰.RP-HPLC法測定鹽酸苯海拉明霜分散片的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2011,26(06):425-427.[6]王家偉,邱慧敏.QuEChERS前處理方法結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定蜂蜜和蜂王漿中14種喹諾酮類藥物殘留[J].食品科學(xué),2016,37(16):242-248.[7]李晨曦,胡曉波.喹諾酮藥物光穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)HPLC分析方法的建立[J].藥物分析雜志,2006,26(12):1743-1747.[8]趙軒,范佳慧.RP-HPLC測定鹽酸苯海拉明霜及其制劑的含量[J].華西藥學(xué)雜志,2002(02):135-136.[9]何博文,張夢(mèng)婷.鹽酸苯海拉明霜的HPLC測定及同類藥物鑒別[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,1997(04):21-23.[10]Al-WabliRI.Lomefloxacin.

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