人K562細胞系染色體標本制備及核型初步分析

人K562細胞系染色體標本制備及核型初步分析

醫(yī)學遺傳教研室2016.11實驗目的熟悉人類有核細胞（k562）染色體標本的制備方法。熟悉染色體核分裂相的初步分析。實驗原理染色體:見于細胞有絲分裂過程中,通常利用有核細胞（如外周血、細胞系、羊水、絨毛）制備染色體標本，顯微鏡下觀察。通常情況下，少量外周血(0.5ml)做短期培養(yǎng)，至72h細胞進入增殖旺盛期，或者細胞系增殖至旺盛期，此時加入秋水仙素抑制細胞分裂，使其停止在中期以獲得足夠的分裂期細胞。實驗過程細胞培養(yǎng)、收集、低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進行核型分析。以外周血為例，實驗流程如上終止培養(yǎng)前2-4小時，加入秋水仙素↓收集培養(yǎng)物至離心管，離心（配平，1200rpm,6min）↓用吸管棄上清，加8ml0.075mol/LKCl，吹打混勻↓37℃，低滲20min↓加1ml固定液預固定，小心吹打，混勻↓1200rpm離心6-8min（注意配平）↓棄上清，加8ml固定液，室溫固定20-30min↓1200rpm離心6-8min↓實驗步驟↓留少量固定液制成細胞懸液(沉淀高度的1-2倍)↓滴片（1-2滴至涼玻片），干燥↓吉姆薩染液染5min↓沖洗玻片（背面）↓風筒吹干↓鏡下觀察終止培養(yǎng)、收集、低滲、固定滴片，吹干染色，去浮色如何使用顯微鏡首先，肉眼觀察玻片上染料的痕跡;然后，10倍鏡下聚焦，微移載物臺，將理想的核分裂相調至視野中央；物鏡切換為40倍,再次微調至視野清晰，并選擇理想的核分裂相調整至視野中央；挪開鏡頭，滴1滴鏡油；物鏡切換為100倍,微調至清晰圖像,觀察記錄分析；使用后，關掉電源，用擦鏡紙沾二甲苯脫鏡油。K562核分裂像細胞染色體數(shù)目變異范圍為44～71,干系核型為亞三倍體,染色體眾數(shù)為62±2外周血核分裂相46，XX【標本質量不佳的原因】①秋水仙素處理不當：濃度不夠或處理時間不足，結果分裂相太少；濃度過高或處理時間過長，染色體過于縮短難于分析；②低滲處理不當：時間過長，細胞膜往往過早破裂，染色體丟失；低滲處理不夠，則染色體分散不佳，難以計數(shù)分析；③離心速度不合適：收集細胞時離心速度太低易丟失細胞；低滲后離心速度過高，使分裂相過早破裂，完整分裂相減少；④標本固定不充分：如固定液不新鮮，或甲醇、冰醋酸的質量不佳，則染色體模糊，或殘留胞漿痕跡，使背景不清；⑤玻片去污不徹底，冷凍不夠，使細胞懸液不能均勻附著以致細胞大量丟失，或染色體分散不佳。思考題核型制備的常