項目5谷氨酸發(fā)酵代謝曲線測定

制藥微生物發(fā)酵技術(shù)----課件項目1項目2項目3項目4項目5制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1-3谷氨酸發(fā)酵工藝過程控制

制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

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噬菌體的分離檢查

告知：

制藥微生物發(fā)酵技術(shù)①掌握滅菌與空氣的凈化知識。②掌握發(fā)酵工藝過程控制知識。③掌握發(fā)酵生產(chǎn)染菌及其防治知識。④掌握發(fā)酵罐及其相關(guān)設(shè)備操作維護知識1.了解種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基的區(qū)別。2.了解發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)流程。3.掌握5L發(fā)酵罐的操作及谷氨酸發(fā)酵的條件控制。4.掌握分光光度計法測定菌濃及殘?zhí)?、谷氨酸產(chǎn)量測定。5.掌握分批發(fā)酵過程中菌體代謝曲線的繪制和菌體生長四期的特點。引入（任務(wù)項目）

？制藥微生物發(fā)酵技術(shù)谷氨酸的產(chǎn)量發(fā)酵分析是通過？曲線操練

制藥微生物發(fā)酵技術(shù)提出生長曲線概念→提出代謝曲線的概念→曲線的繪制制藥微生物發(fā)酵技術(shù)訓(xùn)練項目11谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

由于發(fā)酵的目的不同，發(fā)酵培養(yǎng)基與種子培養(yǎng)基有所不同。發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)流程一般是：保藏斜面→活化斜面→搖瓶種子→種子罐→發(fā)酵罐，小型實驗可以略去種子罐一步。發(fā)酵罐的條件控制優(yōu)于搖瓶，產(chǎn)物產(chǎn)量更高。一、項目指導(dǎo)制藥微生物發(fā)酵技術(shù)訓(xùn)練項目11谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

通用式發(fā)酵罐訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

通用式發(fā)酵罐訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

小型發(fā)酵罐訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

5L發(fā)酵罐訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

發(fā)酵生產(chǎn)過程中要隨時觀察菌體生長情況。從培養(yǎng)液外觀變化和鏡檢兩方面著手，及時發(fā)現(xiàn)并處理染菌事故；定時取樣檢測相應(yīng)的參數(shù)，尤其是菌濃、殘?zhí)羌爱a(chǎn)物產(chǎn)量，反饋調(diào)節(jié)發(fā)酵罐控制條件，如攪拌轉(zhuǎn)數(shù)、堿液、消泡劑流加速度等。訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

5L罐延遲期（4h）

5L罐對數(shù)期（32h）

5L罐穩(wěn)定期（48h）5L罐衰亡期（68h）

搖瓶衰亡期（72h）

分批發(fā)酵條件下，黃色短桿菌TK0303的菌體形態(tài)變化

訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

菌濃的測定方法有分光光度計法和干重法，生產(chǎn)中一般采用前者。殘?zhí)羌肮劝彼岙a(chǎn)量一般采用SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析儀測定。亦可用葡萄糖試劑盒測定殘?zhí)牵垖游龇y定谷氨酸產(chǎn)量。訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

1.菌種黃色短桿菌2.器材恒溫搖床、培養(yǎng)箱、5L發(fā)酵罐、SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析儀、分光光度計、250mL三角瓶、吸管（10mL、1mL）、洗瓶、吸水紙、接種環(huán)、顯微鏡、載玻片、蓋玻片3.培養(yǎng)基和試劑5mol/LNaOH溶液、泡敵、保藏培養(yǎng)基、活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基一、材料和器材訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

1.菌種活化取保藏斜面菌種劃線接種于活化斜面，32℃培養(yǎng)24h。2.種子培養(yǎng)接一環(huán)生長良好的的活化斜面種子至裝有30mL種子培養(yǎng)基的250mL搖瓶中，8層紗布封口，32℃、100rpm的恒溫搖床上培養(yǎng)至對數(shù)生長中后期。3.發(fā)酵培養(yǎng)種子液鏡檢無雜菌。加大發(fā)酵罐的通氣量，以10％接種量接至裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中。二、內(nèi)容訓(xùn)練項目1制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1谷氨酸發(fā)酵的代謝曲線測定

接種完畢，5L發(fā)酵罐各項參數(shù)設(shè)置如下：通氣量3L/min，轉(zhuǎn)速250rpm，溫度32℃，pH值7.0，培養(yǎng)30～40h。發(fā)酵期間，流加尿素以補充氮源，每隔4h取樣測定OD620nm值（將發(fā)酵液稀釋20倍后，用分光光度計于吸光度620nm處測定）、谷氨酸產(chǎn)量和殘?zhí)橇俊?噬菌體的分離檢查訓(xùn)練項目2制藥微生物發(fā)酵技術(shù)認識噬菌體，學(xué)習(xí)并掌握噬菌體的分離技術(shù)。2噬菌體的分離檢查訓(xùn)練項目2制藥微生物發(fā)酵技術(shù)噬菌體的存在，往往給發(fā)酵生產(chǎn)帶來危害，但從分子遺傳學(xué)研究方面,噬菌體確是一個很好的工具。因此認識和掌握噬菌體的習(xí)性，使之造福于人類是十分重要的。噬菌體在自然界的廣泛分布，往往造成微生物發(fā)酵工業(yè)的嚴重損失與困難。如果生產(chǎn)菌株被一個噬菌體侵染，那么它會很快地在菌體內(nèi)得到增殖，并迅速裂解釋放出100個左右的子代噬菌體，其后果是嚴重的。因此，充分了解噬菌體的特性，對于防止生產(chǎn)中的噬菌體污染具有一定的實際意義。2噬菌體的分離檢查訓(xùn)練項目2制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1．樣品味精廠土樣，黃色短桿菌。2．培養(yǎng)基肉湯固體培養(yǎng)基，肉湯半固體培養(yǎng)基3．器皿平皿，試管，三角瓶等。實訓(xùn)材料2噬菌體的分離檢查訓(xùn)練項目2制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1．噬菌體的繁殖(1)首先將黃色短桿菌接入裝有20毫升肉湯培養(yǎng)基的三角瓶中，32℃培養(yǎng)12小時，使細胞生長至對數(shù)中期，(2)加入土樣1克、碳酸鈣0.3克搖勻繼續(xù)培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)液經(jīng)4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液至無菌瓶中，作為第一次噬菌體增殖液。實訓(xùn)步驟2噬菌體的分離檢查訓(xùn)練項目2制藥微生物發(fā)酵技術(shù)2．噬菌體增殖液的稀釋離心第二次增殖液，取上清液用肉湯液體培養(yǎng)基以10倍稀釋法適當(dāng)稀釋，取后三個稀釋度的稀釋液用以分離。3．噬菌體的分離融化固體、半固體培養(yǎng)基，先倒底層固體培養(yǎng)基平板，凝固后，分別取上述三個濃度的稀釋液0.5毫升于底層培養(yǎng)基上，然后在融化后并冷卻至50℃的半固體培養(yǎng)基中加入5毫升黃色短桿菌菌液，搖勻，傾注于上述平板上，與其中的噬菌體增殖液混勻放置。待凝固后于32℃保溫箱中培養(yǎng)24小時。

2噬菌體的分離檢查訓(xùn)練項目2制藥微生物發(fā)酵技術(shù)4．噬菌體的選擇觀察平板中噬菌斑的形成，用接種針在噬菌斑中刺幾下，接入有肉湯培養(yǎng)液的試管中，適當(dāng)稀釋，再次以上述雙層平板法分離。如此反復(fù)進行大約5次，就可得到形態(tài)大小基本一致的噬菌斑。該噬菌斑便可作為一個噬菌體的純株應(yīng)用。歸納總結(jié)制藥微生物發(fā)酵技術(shù)菌體代謝曲線的繪制和菌體生長四期的特點；噬菌體的分離技術(shù)應(yīng)知應(yīng)會

制藥微生物發(fā)酵技術(shù)代謝（metabolism）噬菌體（phage）問題與討論制藥微生物發(fā)酵技術(shù)1．詳細描述分離過程中噬菌斑的形態(tài)及變化2．如果經(jīng)多次分離純化仍得不到形態(tài)一致的噬菌斑，如何解釋?制藥微生物發(fā)酵技術(shù)以時間為橫坐標(biāo)，OD6