TCSES 148-2024 水生生物環(huán)境DNA 實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)要求

.S.SZ09團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)S4水生生物環(huán)境實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)要求ly0發(fā)布 0實(shí)施中國(guó)環(huán)境科學(xué)學(xué)會(huì) 發(fā)布中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社 出版S4目 次前言 Ⅲ引言 Ⅳ范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語(yǔ)和定義 1總體原則 2分區(qū)設(shè)置要求 2實(shí)驗(yàn)室操作要求 3房屋配件實(shí)驗(yàn)室輔助設(shè)施基本要求 4附錄A資料性)環(huán)境實(shí)驗(yàn)室典型布局圖 5參考文獻(xiàn) 7ⅠS4前 言本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)總站提出。本文件由中國(guó)環(huán)境科學(xué)學(xué)會(huì)歸口。本文件起草單位中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)總站南京師范大學(xué)南京大學(xué)南京易基諾環(huán)?？萍加邢薰?、生態(tài)環(huán)境部南京環(huán)境科學(xué)研究所江蘇省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心河南省濟(jì)源生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。本文件主要起草人王延軍姚志鵬楊江華陳亞男孫晶瑩張效偉王志浩劉允陳鑫母亞雯、謝玉為沈嘉豪張宗可王亮劉清旺何宇慧仲雨晴張麗馬鈺瑩。ⅢS4引 言環(huán)境技術(shù)廣泛應(yīng)用于水生生物監(jiān)測(cè)該技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)水生態(tài)系統(tǒng)中浮游植物浮游動(dòng)物水生維管植物大型底棲無(wú)脊椎動(dòng)物和魚(yú)類(lèi)等水生生物的精準(zhǔn)監(jiān)測(cè)。實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的規(guī)范化可為環(huán)境DNA水生生物監(jiān)測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化提供良好的條件與保障。為促進(jìn)環(huán)境技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化以及在我國(guó)生物多樣性監(jiān)測(cè)體系中的應(yīng)用推廣實(shí)驗(yàn)室建設(shè)制定本文件。Ⅳ

規(guī)范水生生物環(huán)S4水生生物環(huán)境實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)要求范圍本文件確立了環(huán)境實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的總體原則規(guī)定了實(shí)驗(yàn)室分區(qū)實(shí)驗(yàn)室操作房屋配件實(shí)驗(yàn)室輔助設(shè)施等方面的技術(shù)要求。本文件適用于環(huán)境實(shí)驗(yàn)室的新建改建和擴(kuò)建的設(shè)計(jì)建設(shè)包括但不限于環(huán)境監(jiān)測(cè)中心高校和第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)等。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件。8分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法0檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求4轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要8實(shí)驗(yàn)室 生物安全通用要求5檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)與建設(shè)技術(shù)要求 第1部分通用要求3淡水生物A條形碼構(gòu)建技術(shù)規(guī)程3淡水生物監(jiān)測(cè) 環(huán)境A宏條形碼法3基于環(huán)境A的淡水生物評(píng)價(jià)技術(shù)指南術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

水生生物m生活史的全部或部分生活在各類(lèi)水體中的動(dòng)植物。環(huán)境AA環(huán)境介質(zhì)水土壤沉積物周叢生物生物膜空氣等或從水體中初步富集或分選的混合生物組織中賦存的脫氧核糖核酸。來(lái)源有修改]

環(huán)境A實(shí)驗(yàn)室y可從各類(lèi)環(huán)境介質(zhì)中分離純化生物遺傳物質(zhì)并利用高通量測(cè)序等技術(shù)實(shí)現(xiàn)物種定性和DNA定量檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室。1S4總體原則基本原則環(huán)境A實(shí)驗(yàn)室建設(shè)宜符合5規(guī)定的規(guī)劃設(shè)計(jì)和系統(tǒng)設(shè)計(jì)要求。環(huán)境A實(shí)驗(yàn)室宜設(shè)功能分區(qū)每周使用5次氯酸鈉對(duì)工作環(huán)境消毒包括地面臺(tái)面設(shè)備等。工作區(qū)域溫度相對(duì)濕度及潔凈度等級(jí)要求宜符合1中規(guī)定的一級(jí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)室工作人員宜自覺(jué)遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度在各分區(qū)進(jìn)行試驗(yàn)操作時(shí)要做好個(gè)人防護(hù)穿戴隔離衣口罩手套護(hù)目鏡等。通用原則實(shí)驗(yàn)室的功能布局分區(qū)隔離空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)氣流控制等宜以避免污染為首要原則。實(shí)驗(yàn)室宜以室為單元進(jìn)行布局規(guī)劃和功能分區(qū)一般包括以下單元試劑制備和儲(chǔ)存室前處理室提取純化室核酸檢測(cè)室質(zhì)量控制室和數(shù)據(jù)分析室。受條件限制的實(shí)驗(yàn)室試劑制備和儲(chǔ)存室可與其他具備類(lèi)似功能的實(shí)驗(yàn)室共用。實(shí)驗(yàn)室的典型布局圖見(jiàn)附)錄。 、 、 、 、b 試劑制備和儲(chǔ)存室提取純化室核酸檢測(cè)室和質(zhì)量控制室宜具備移液渦旋振蕩瞬時(shí)離心功能。移液器需包含L和L的規(guī)格根據(jù)需求選配L或其他規(guī)格移液器。渦旋振蕩速度通常不小于瞬時(shí)離心速度不小于。遵守單向工作流程前處理室提取純化室→核酸檢測(cè)室。有條件的實(shí)驗(yàn)室宜在各工作區(qū)域設(shè)置緩沖間。分區(qū)設(shè)置要求試劑制備和儲(chǔ)存室應(yīng)具備純水制備冷藏儲(chǔ)存稱(chēng)量磁力攪拌制冰和水浴等功能。純水應(yīng)符合T—8中一級(jí)水制備的規(guī)定去離子水的電阻應(yīng)達(dá)到2。冷凍儲(chǔ)存需具備0℃條件冷藏儲(chǔ)存需具備4℃條件。稱(chēng)量精度為萬(wàn)分之一。磁力攪拌轉(zhuǎn)速應(yīng)不小于。制冰機(jī)出冰速度應(yīng)不低于。水浴溫度最大允許誤差為5℃。面積應(yīng)不小于52。前處理室應(yīng)具備樣品儲(chǔ)存水樣過(guò)濾凍干稱(chēng)量組織處理和烘干等功能。樣品儲(chǔ)存需滿足4℃和0℃儲(chǔ)存條件。不同類(lèi)型樣品應(yīng)設(shè)置不同操作區(qū)如環(huán)境水樣處理區(qū)土壤沉積物樣品處理區(qū)生物組織樣品處理區(qū)等。水樣過(guò)濾功能需適配一體化環(huán)境A過(guò)濾器負(fù)壓應(yīng)達(dá)到a以下宜具備廢液直排功能。土壤糞便沉積物冷凍干燥的溫度應(yīng)不高于0℃干燥過(guò)程中的升華溫度應(yīng)不高于0℃。稱(chēng)量功能應(yīng)符合1要求。烘箱溫控范圍應(yīng)滿足室溫到0℃溫度控制精度最大允許誤差為5℃烘箱容積不小于0。2S4面積應(yīng)不小于52。需負(fù)壓應(yīng)安裝排風(fēng)系統(tǒng)如萬(wàn)向排風(fēng)罩。提取純化室應(yīng)具備均質(zhì)破碎水浴離心渦旋振蕩儲(chǔ)存等功能。有條件的實(shí)驗(yàn)室可設(shè)環(huán)境介質(zhì)處理區(qū)和生物組織處理區(qū)。均質(zhì)破碎應(yīng)滿足一體化環(huán)境過(guò)濾器和普通濾膜的均質(zhì)均質(zhì)速度不小于6?？蛇x水浴氣浴和金屬浴等進(jìn)行孵育溫度控制精度最大允許誤差為5℃孵育容積不小于3。離心速度不小于A短期儲(chǔ)存應(yīng)滿足0℃條件如需長(zhǎng)期儲(chǔ)存應(yīng)滿足0℃條件。面積應(yīng)不小于82。需負(fù)壓宜安裝排風(fēng)系統(tǒng)如萬(wàn)向排風(fēng)罩。核酸檢測(cè)室應(yīng)具備擴(kuò)增核酸高通量測(cè)序核酸定量檢測(cè)等功能。宜根據(jù)功能設(shè)試驗(yàn)分區(qū)包括擴(kuò)增區(qū)、檢測(cè)區(qū)。應(yīng)配備擴(kuò)增儀高通量測(cè)序儀熒光定量?jī)x數(shù)字儀等擴(kuò)增溫控精度最大允許誤差為1℃。高通量測(cè)序儀讀長(zhǎng)不小于堿基質(zhì)量值為9以上數(shù)據(jù)占比不少于0。面積應(yīng)不小于02。需負(fù)壓宜安裝排風(fēng)系統(tǒng)如萬(wàn)向排風(fēng)罩。精密設(shè)備宜避免集中擺放防止強(qiáng)烈震動(dòng)干擾。質(zhì)量控制室應(yīng)具備凝膠電泳膠圖掃描混庫(kù)核酸濃度測(cè)定等功能。膠塊制備通常使用微波快速加熱電泳電壓應(yīng)滿足00V范圍調(diào)節(jié)膠圖拍照分辨率不低于L混庫(kù)體系移液精度最大允許誤差為0L混庫(kù)體系移液精度最大允許誤差為2。宜配備熒光檢測(cè)儀或微量分光光度計(jì)熒光檢測(cè)儀檢出線不高于微量分光光度計(jì)應(yīng)含m檢測(cè)波長(zhǎng)。面積應(yīng)不小于42。需負(fù)壓宜安裝排風(fēng)系統(tǒng)如萬(wàn)向排風(fēng)罩。必要時(shí)可配置可移動(dòng)紫外消毒設(shè)備。數(shù)據(jù)分析室應(yīng)具備高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)存儲(chǔ)數(shù)據(jù)備份等功能。數(shù)據(jù)分析服務(wù)器運(yùn)行內(nèi)存不小于2硬盤(pán)容量不小于0。服務(wù)器上需安裝專(zhuān)業(yè)化的數(shù)據(jù)分析軟件系統(tǒng)并配備本土物種數(shù)據(jù)庫(kù)。測(cè)序數(shù)據(jù)應(yīng)至少備份1份。數(shù)據(jù)分析過(guò)程應(yīng)注意數(shù)據(jù)安全。面積應(yīng)不小于42。必要時(shí)配備空調(diào)以控制環(huán)境溫度濕度條件以滿足服務(wù)器穩(wěn)定工作的環(huán)境條件。宜配備S不間斷電源以應(yīng)對(duì)突發(fā)斷電應(yīng)急情況。其他分區(qū)除主要功能區(qū)外環(huán)境實(shí)驗(yàn)室需配備消洗室更衣室等。消洗室應(yīng)具備試劑耗材滅菌除酶、生物樣品滅菌處理等功能安排在有上下水的角落位置但不宜與高溫室或較強(qiáng)電磁干擾的房間相鄰。更衣室用于更換試驗(yàn)服鞋子以及存放個(gè)人物品等。實(shí)驗(yàn)室操作要求試驗(yàn)操作人員應(yīng)通過(guò)環(huán)境技術(shù)試驗(yàn)技能培訓(xùn)。非實(shí)驗(yàn)室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。試驗(yàn)操作使用的試劑耗材應(yīng)無(wú)菌無(wú)酶試劑的選購(gòu)驗(yàn)收儲(chǔ)存應(yīng)符合T0的3S4規(guī)定。各試驗(yàn)區(qū)域宜有專(zhuān)用的儀器設(shè)備避免混用。應(yīng)按照3和3試驗(yàn)操作程序開(kāi)展試驗(yàn)特別注意防止樣品交叉污染。試驗(yàn)前后操作臺(tái)面消毒廢棄物處理等按照T4的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。操作過(guò)程涉及微生物安全的內(nèi)容按8的規(guī)定執(zhí)行。房屋配件實(shí)驗(yàn)室輔助設(shè)施基本要求房屋配件實(shí)驗(yàn)室輔助設(shè)施門(mén)窗試驗(yàn)臺(tái)和物品的建設(shè)5中1規(guī)定的要求。有條件的實(shí)驗(yàn)室宜設(shè)置緩沖區(qū)緩沖區(qū)的壓力為負(fù)壓或上設(shè)抽風(fēng)裝置與其相連的工作間為正壓工作區(qū)與緩沖區(qū)之間宜安裝磁性連鎖裝置。緩沖區(qū)的面積不能大于實(shí)驗(yàn)室房間面積的通常設(shè)置于清潔區(qū)與污染區(qū)之間保證有效隔離。無(wú)條件設(shè)置緩沖區(qū)的實(shí)驗(yàn)室按照8規(guī)定的