藥品微生物檢驗技術(shù) 課件 模塊二 項目六 異常毒性檢查

《藥品微生物檢驗技術(shù)》模塊二藥品安全性檢查項目六異常毒性檢查

任務(wù)一小白鼠的挑選與飼養(yǎng)

任務(wù)二右旋糖酐20葡萄糖注射液的異常毒性檢查

目錄項目六異常毒性檢查

任務(wù)一小白鼠的挑選與飼養(yǎng)

任務(wù)引入請思考異常毒性檢查需要使用實驗動物，而動物的品質(zhì)是影響試驗結(jié)果的重要因素之一。

小白鼠的挑選與飼養(yǎng)有什么特殊要求呢？

相關(guān)知識-異常毒性

一、異常毒性的概念

異常毒性非藥物本身所具有的毒性，是指在生產(chǎn)過程中引入或其他原因所致的毒性。某些生物制品可能在制備的過程中混入或在儲存過程中分解產(chǎn)生與原料毒性不同，而且毒性大于原料的雜質(zhì)（如微生物發(fā)酵過程中可能產(chǎn)生一些難以預(yù)測的毒素和未知雜質(zhì)），而這些雜質(zhì)又難以用理化的方法加以控制，這時進行異常毒性檢查就顯得尤為重要。二、異常毒性檢查的原理

異常毒性檢查系給予動物一定劑量的供試品溶液，在規(guī)定時間內(nèi)觀察動物出現(xiàn)的異常反應(yīng)或死亡情況，檢查供試品中是否污染外源性毒性物質(zhì)以及是否存在意外的不安全因素。因此，異常毒性檢查實際上是一個限度試驗。任務(wù)實施一、制訂工作計劃序號工作內(nèi)容完成時間成員負(fù)責(zé)人1試驗前準(zhǔn)備

2小白鼠的挑選

3小白鼠的飼養(yǎng)

根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。任務(wù)實施二、試驗前準(zhǔn)備設(shè)備、器材規(guī)格數(shù)量用途天平

小白鼠稱重小鼠固定器、支架

固定小白鼠鼠籠、飼料

溶解、稀釋溶液

小白鼠應(yīng)從具備實驗動物生產(chǎn)許可資質(zhì)的單位購進，來源、飼養(yǎng)條件、品種均應(yīng)相同。小白鼠須健康、無傷、毛色光滑、活潑，體重在18～22g,雌雄并用(雌性不得有孕)。同時還要注意鼠齡，一般正常飼養(yǎng)條件下，體重達到18～22g時，鼠齡約25天，避免挑選因飼養(yǎng)條件較差導(dǎo)致體重達標(biāo)但鼠齡較大的小白鼠。小白鼠在稱重前自然飽腹，做過本試驗的小白鼠不得重復(fù)使用。三、小白鼠的挑選要求

在小白鼠較安靜的時候，輕輕取走鼠籠蓋，用右手將其尾部抓住并提起，放在鼠籠蓋上，輕輕向后拉鼠尾，當(dāng)小白鼠向前掙脫時，用左手拇指及食指抓住小白鼠頭頸部皮膚，使其頭部固定，然后將鼠體置于左手心中，翻轉(zhuǎn)左手，右手拉住鼠尾部，將后肢拉直，再用左手無名指和小指夾緊后肢與尾巴，以掌心包住小白鼠的背部，使其頭、軀干及尾部呈一條直線，即可進行注射和其他操作。進行尾部注射時，可將小白鼠裝入固定器，只留尾巴在外面。四、小白鼠的抓取與固定

小白鼠的飼養(yǎng)環(huán)境要求溫度為20~26℃,相對濕度為30%～70%,保持空氣清新，空氣中沉降菌最大平均濃度為3cfu/(0.5h·φ90mm平皿),氨質(zhì)量濃度小于或等于14mg/m3,實驗室維持晝夜明暗交替。采用適當(dāng)營養(yǎng)成分的飼料，保持一直有飼料和潔凈的水供應(yīng)。墊料定期更換，一般每周2～3次。五、小白鼠的飼養(yǎng)任務(wù)實施六、小白鼠挑選原始記錄動物品種來源數(shù)量性別體重毛色是否健康無外傷狀態(tài)是否活潑飼養(yǎng)環(huán)境室溫：℃相對濕度：%檢驗人員日期任務(wù)測評考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分試驗前準(zhǔn)備能判斷試驗需要的設(shè)備、器材是否準(zhǔn)備好15小鼠的挑選與飼養(yǎng)能按要求正確挑選小鼠15能正確飼養(yǎng)小鼠15小鼠的抓取與固定能正確抓取小鼠15能正確使用固定器固定小鼠15小鼠的稱量能按要求對小鼠進行體重稱量15清場能按要求完成清場10合計100項目六異常毒性檢查

任務(wù)二右旋糖酐20葡萄糖注射液的異常毒性檢查

任務(wù)引入請思考

右旋糖酐20葡萄糖注射液可以有效治療因創(chuàng)傷、燒傷、失血引起的休克，還適合平時患有腦血栓、心絞痛、腦供血不足的人群使用。該藥通過靜脈注射直接進入血液循環(huán)，如果混有超過正常毒性的雜質(zhì)，可能導(dǎo)致急性不良反應(yīng)。如何對注射液進行異常毒性檢查呢?

按照抽樣標(biāo)準(zhǔn)抽取一定數(shù)量的右旋糖酐20葡萄糖注射液供試品，注入小鼠體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)觀察小鼠死亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定。任務(wù)分析(1)異常毒性檢查實際上是一個限度試驗，在此劑量條件下，一般供試品不會導(dǎo)致動物中毒死亡。除試驗方法存在的差異或偶然差錯外，如果動物出現(xiàn)急性中毒甚至死亡，則表明該供試品中含有的急性毒性物質(zhì)超過了正常水平。

(2)供試品的注射速度是試驗成功的重要影響因素之一，注射速度過快、過慢或不均勻都有可能影響試驗結(jié)果。因此，在試驗時要保持勻速給藥，且一次試驗中每只小鼠的注射時間要盡量保持一致。

(3)按照《中國藥典》2020年版的規(guī)定，確定右旋糖酐20葡萄糖注射液的檢驗數(shù)量、檢驗量，保證供試品抽樣的客觀性，完成供試品檢查。在規(guī)定時間內(nèi)觀察小鼠異常反應(yīng)或死亡情況，以判斷供試品是否合格。相關(guān)知識-異常毒性檢查法的操作流程

《中國藥典》2020年版對非生物制品及生物制品的異常毒性試驗有以下規(guī)定。

1.非生物制品異常毒性試驗

應(yīng)采用小鼠試驗法。除另有規(guī)定外，取小鼠5只，體重為18～22g,每只小鼠分別靜脈注射平衡至室溫的供試品溶液0.5mL。應(yīng)在4~5s內(nèi)勻速注射完畢。規(guī)定緩慢注射的品種可延長至30s。若注射時藥液有損失，應(yīng)重新領(lǐng)取小鼠注射。注射完畢后，拔出針頭，用消毒棉球按住注射部位并輕輕按壓，防止藥液外漏。止血后，將小鼠放回鼠籠，及時觀察反應(yīng)，并做好記錄。相關(guān)知識-異常毒性檢查法的操作流程

2.生物制品異常毒性試驗

生物制品異常毒性試驗應(yīng)包括小鼠試驗和豚鼠試驗。首先將供試品溫度平衡至室溫，按照規(guī)定的給藥途徑緩慢注入動物體內(nèi)。除另有規(guī)定外，試驗中應(yīng)設(shè)同批動物空白對照，并根據(jù)對照組動物情況對供試品檢查結(jié)果進行綜合評估。

(1)小鼠試驗法。除另有規(guī)定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠稱體重，應(yīng)為18～22g。每只小鼠腹腔注射供試品溶液0.5mL,觀察7天，并記錄觀察期內(nèi)動物的反應(yīng)。相關(guān)知識-異常毒性檢查法的操作流程程度反應(yīng)無未見任何毒性反應(yīng)輕輕度癥狀，但無運動減少、呼吸困難或腹部刺激中腹部刺激、呼吸困難、運動減少、眼瞼下垂、腹瀉重衰竭、震顫、嚴(yán)重腹部刺激、眼瞼下垂、呼吸困難死亡注射后死亡異常毒性試驗動物反應(yīng)觀察指標(biāo)相關(guān)知識-異常毒性檢查法的操作流程

小鼠腹腔注射時，先抓取小鼠并固定于左手掌心，將注射器自腹中線任一側(cè)0.5cm處以45°刺入，不宜進針過深，4~5s內(nèi)勻速注射供試品溶液0.5mL,注射結(jié)束后，稍作停留再拔出針頭，防止藥物外漏，最后將小鼠輕輕放回籠中。相關(guān)知識-異常毒性檢查法的操作流程

(2)豚鼠試驗法。除另有規(guī)定外，取豚鼠2只，注射前每只豚鼠稱體重，應(yīng)為250~350g。每只豚鼠腹腔注射供試品溶液5.0mL,觀察7天，并記錄觀察期內(nèi)動物的反應(yīng)。相關(guān)知識-異常毒性檢查結(jié)果判斷

1.非生物制品異常毒性試驗

除另有規(guī)定外，全部小鼠在給藥后48h內(nèi)不得有死亡；當(dāng)有死亡時，應(yīng)另取體重為19～21g的小鼠10只復(fù)試，全部小鼠在48h內(nèi)不得有死亡。

2.生物制品異常毒性試驗

(1)小鼠試驗法。觀察期內(nèi)，小鼠應(yīng)全部健存，且無異常反應(yīng)，到期時每只小鼠體重應(yīng)增加，判定供試品符合規(guī)定。如不符合上述要求，應(yīng)另取體重為19～21g的小鼠10只復(fù)試1次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。

(2)豚鼠試驗法。觀察期內(nèi)，豚鼠應(yīng)全部健存，且無異常反應(yīng)，到期時每只豚鼠體重應(yīng)增加，判定供試品符合規(guī)定。如不符合上述要求，應(yīng)另取4只豚鼠復(fù)試1次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。任務(wù)實施一、制訂工作計劃序號工作內(nèi)容完成時間成員負(fù)責(zé)人1供試用小鼠的挑選

2試驗前準(zhǔn)備

3供試品的檢查

4結(jié)果判斷根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。任務(wù)實施二、試驗前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途天平

小鼠稱重消毒棉球

止血75%乙醇擦拭消毒無菌注射器注射供試品右旋糖酐20葡萄糖注射液供試品小鼠固定器、支架固定小鼠鼠籠、飼料飼養(yǎng)小鼠任務(wù)實施三、試驗操作步驟操作內(nèi)容供試品的制備按照《中國藥典》2020年版規(guī)定的檢驗數(shù)量進行抽樣，至少5份，取無菌注射器吸取供試品0.5mL小鼠的挑選取5只小鼠，用天平稱量體重，標(biāo)記小鼠并記錄給藥抓取一只小鼠，放入小鼠固定器中，固定，使尾巴暴露在外面，扭轉(zhuǎn)鼠尾，使靜脈向上，用75%乙醇擦拭鼠尾注射部位，待尾靜脈擴張后，一手捏住鼠尾，一手持注射器，針尖與鼠尾成一定角度(小于30°),刺入靜脈。如果注射部位發(fā)白且推入藥液時有阻力，表明針頭未插入靜脈內(nèi)，應(yīng)重做。如果藥液有損失，應(yīng)另取小鼠注射。注射完畢后，拔出針頭，用消毒棉球按住注射部位輕輕按壓，防止藥液外漏，然后將小鼠放入鼠籠中觀察觀察、記錄提供適量飼料和潔凈的水，觀察小鼠狀態(tài)結(jié)果判斷全部小鼠在給藥后48h內(nèi)不得有死亡；當(dāng)有死亡時，應(yīng)另取體重為19~21g的小鼠10只復(fù)試，全部小鼠在48h內(nèi)不得有死亡任務(wù)實施四、檢查報告檢品名稱生產(chǎn)廠家檢品規(guī)格生產(chǎn)批號檢品數(shù)量包裝和外觀有效期檢查項目異常毒性檢查檢查依據(jù)《中國藥典》2020年版第四部通則1141檢查方法實驗動物來源實驗動物數(shù)量實驗動物性別實驗動物平均體重檢驗結(jié)果：小鼠只，死亡只檢驗結(jié)論：檢驗人

復(fù)核人

室溫

相對濕度

檢驗日期：

續(xù)表：任務(wù)測評考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分小鼠的挑選能按要求正確挑選小鼠5能判斷選用的小鼠是否符合要求5試驗前準(zhǔn)備能判斷試驗