《藥品微生物檢驗技術》中職全套教學課件

藥品微生物檢驗技術全套可編輯PPT課件

本課件是可編輯的正常PPT課件

模塊一藥品微生物檢驗前準備

項目一無菌室的使用

項目二微生物檢驗實訓基礎

項目三微生物檢驗安全

模塊二藥品安全性檢查

項目一無菌檢查

項目二微生物總數(shù)檢查

項目三控制菌檢查項目四熱原檢查

項目五細菌內毒素檢查

項目六異常毒性檢查

項目七過敏反應的測定

項目八溶血與凝聚檢查

模塊三藥品有效性檢查

項目一抑菌效力檢查項目二抗生素效價測定目錄本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗技術》模塊一藥品微生物檢驗前準備本課件是可編輯的正常PPT課件

項目一無菌室的使用

項目二微生物檢驗實訓基礎

項目三微生物檢驗安全

目錄本課件是可編輯的正常PPT課件項目一無菌室的使用任務無菌室的清潔與消毒本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考

微生物污染一直是制藥行業(yè)用藥安全方面最突出的問題，造成染菌的原因很多，如制劑原材料污染及生產(chǎn)環(huán)境不潔等。藥品染菌危害極大，在進行相關操作時，如有無菌要求，應務必保證?，F(xiàn)接到進行藥品無菌檢測的任務，需要保證試驗環(huán)境無菌。請對無菌室進行清潔與消毒，并檢測潔凈度是否達到要求。如何實現(xiàn)無菌的條件呢？

本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析

無菌是指沒有活的微生物存在，防止微生物進入機體或物體的方法稱為無菌技術或無菌操作。小規(guī)模的無菌操作可以使用無菌接種箱或超凈工作臺完成；工作量大時則在無菌室內配合使用超凈工作臺來完成，要求也更嚴格。

無菌室科學的布局是實現(xiàn)無菌操作的基礎保障。無菌室專辟于微生物實驗室內，可以用板材和玻璃建造。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識一、無菌室布局

無菌室通過空氣的凈化和空間的消毒為微生物檢驗提供一個相對無菌的工作環(huán)境。無菌室通常包括緩沖間和工作間兩大部分。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識二、無菌室的使用-無菌室的清潔(1)清潔形式包括日清潔、周清潔、月清潔。若無菌室長期處于停用狀態(tài)，可以每周清潔一次。下一次使用前，需進行徹底的清潔。(2)清潔范圍包括無菌室緩沖間、工作間。(3)清潔工具:清潔布、水桶等。(4)消毒劑:0.2%的苯扎溴銨(商品名:新潔爾滅)溶液、75%乙醇(每月輪換使用)等。(5)清潔效果評價:目測檢查，各種物體表面應光潔，物品擺放整齊有序，地面無可見異物、污垢、積水，區(qū)域內無廢棄物。(6)清潔程序:按照先里后外、先上后下、先物后地、先凈后臟的不可逆順序依次進行清潔。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識二、無菌室的使用-無菌室的消毒滅菌方法(1)甲醛溶液和高錳酸鉀溶液混合熏蒸。(2)紫外線殺菌。(3)

0.1%氯化汞溶液消毒。(4)苯酚溶液噴霧。(5)石灰水擦拭。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識二、無菌室的使用-無菌室內的設備使用超凈工作臺。（2）紫外線殺菌。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識三、無菌室潔凈度的檢測無菌室在消毒處理后、無菌操作前及操作過程中均需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達到規(guī)定的潔凈度。浮游菌監(jiān)測依靠浮游菌采樣器收集懸游在空氣中的生物性粒子于適宜的培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后形成可見的菌落并計數(shù)，以判定該無菌室的微生物濃度。沉降菌監(jiān)測通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)形成可見菌落并計數(shù)，以判定該無菌室的微生物濃度。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂分工計劃序號工作內容完成時間成員負責人1試驗前物品準備

2消毒試劑的配制

3無菌室的清潔消毒

根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑、用品規(guī)格數(shù)量用途無菌室

操作場所超凈工作臺

操作區(qū)域75％乙醇

擦拭消毒次氯酸鈉消毒液

擦拭消毒清潔布

水桶

補充1：

補充2：

本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、清潔與消毒項目內容備注清潔部位超凈工作臺、地面、墻面、天花板、門窗及玻璃、把手等清潔頻率操作前、操作后、每兩周的最后一個工作日清潔工具水桶、拖布、毛刷、海綿、清潔布、橡膠手套等清潔劑0.2％苯扎溴銨溶液、75％乙醇每月輪換使用清潔方法超凈工作臺用濕紗布擦拭后，用消毒劑擦拭消毒桌面用濕紗布擦拭后，用消毒劑擦拭消毒地面用清潔劑溶液擦拭后，用消毒劑擦拭消毒空氣打開超凈工作臺，使其運轉，開啟超凈工作臺紫外線燈及無菌室紫外線燈照射消毒30min，關閉紫外線燈后，方可進行操作清潔工具用洗滌劑清洗干凈，并用消毒劑消毒后，置于指定位置晾干備用本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、無菌室消毒清潔記錄清潔記錄清潔對象方法操作人日期工作間超凈工作臺、操作臺地面、墻面紫外線燈、日光燈緩沖間操作臺地面、墻面紫外線燈、日光燈過道地面、墻面紫外線燈、日光燈更衣室地面、墻面紫外線燈、日光燈備注:方法用對應符號表示?！?用無菌抹布蘸取75%乙醇擦拭，○-用無菌抹布蘸取0.2%苯扎溴銨溶液擦拭，√-用甲醛及高錳酸鉀熏蒸消毒。本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評考核內容考核標準配分得分任務分工和準備現(xiàn)團隊合作精神5

實施前檢查各類物品5

清潔過程按照正確順序清潔10

正確使用清潔工具10

消毒過程按要求正確配制消毒劑10

按規(guī)程完成超凈工作臺清潔消毒10

按規(guī)程完成空氣、地面等消毒10

經(jīng)檢測符合無菌室使用要求10完成各項工作記錄10任務完成情況按時完成任務10

安全生產(chǎn)完成過程符合安全規(guī)范10

合計100本課件是可編輯的正常PPT課件思考與練習簡答題1.在進入無菌室進行相關操作之前應該做什么？2.無菌室應具備的條件有哪些？本課件是可編輯的正常PPT課件項目二微生物檢驗實訓基礎任務常用接種方法的練習

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必須把它們分離出來。在保存菌種時，菌種不慎受到污染也應分離純化。某實驗室大腸埃希菌在保藏過程中，因保藏方法不當而被污染，現(xiàn)在需要進行分離純化。請同學們在無菌環(huán)境下，嘗試采用多種方法實施菌種接種，實現(xiàn)大腸埃希菌分離純化。經(jīng)培養(yǎng)后觀察菌落特征，并記錄結果。

本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析

完成大腸埃希菌的分離及純化，首先需要掌握微生物分離純化的基本原理，即將待分離的樣品進行一定程度的稀釋，使微生物（或孢子）盡量以分散狀態(tài)存在，然后長成一個個純種單菌落。上述工作需要依靠接種操作，因此掌握常見的微生物接種方法對獲得大腸埃希菌單菌落是非常必要的。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-無菌操作要求無菌操作的要求：操作前將操作空間中的細菌和病毒等微生物殺滅；操作過程中保證操作空間與外界隔離，避免微生物侵入。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-微生物常用的接種工具與接種方法1.接種工具本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-微生物常用的接種工具與接種方法2.接種方法（1）斜面接種。（2）液體接種。（3）劃線接種。（4）穿刺接種。（5）涂布接種。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-培養(yǎng)基培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質，應含有微生物生長發(fā)育所需的水分、碳源、氮源及各種離子、微量元素。此外，培養(yǎng)基還應具有適宜的酸堿度（pH值）、滲透壓和一定的緩沖能力。1.培養(yǎng)基的制備過程:

稱取組分-溶解-調pH值-過濾-分裝-包扎-標記-消毒或滅菌—擺斜面或倒平板。2.培養(yǎng)基的制備原則（1）選擇適宜的營養(yǎng)物質（2）營養(yǎng)物質濃度及配比合適（3）條件適宜（4）滅菌處理本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人1培養(yǎng)基制備

2培養(yǎng)基滅菌

3菌種準備

4物品準備5培養(yǎng)及觀察6結果判斷根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、接種1.斜面接種本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、接種2.劃線接種本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、接種3.涂布接種本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評按列任務評分標準進行測評，并做好記錄。本課件是可編輯的正常PPT課件思考與練習一、選擇題1.下列有關劃線接種的說法中，正確的是（）。Ａ取多量標本接種Ｂ于平板1/2處密集涂布Ｃ局部密集涂布后，來回作曲線連續(xù)劃線Ｄ線與線間應有交叉2.如圖所示是微生物劃線接種，劃線的順序為１、２、３、４、５。下列說法正確的是（）。Ａ操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌Ｂ劃線操作須在火焰上進行Ｃ在５區(qū)域中才可以得到所需菌落Ｄ在１、２、３、４、５區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌３.分離培養(yǎng)細菌一般需要（）。Ａ４～８ｈＢ８～１２ｈＣ１６～２０ｈＤ２～３天二、簡答題1.劃線接種的主要目的是什么？2.無菌物品的管理原則有哪些？本課件是可編輯的正常PPT課件項目三微生物檢驗安全任務微生物檢驗的安全防護

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入最美的“大白”和“小藍”

在抗擊新型冠狀病毒感染疫情這場戰(zhàn)役中，防疫人員的身影處處可見，人們親切地稱他們?yōu)椤按蟀住薄靶∷{”。他們不分日夜地做好流調溯源、人員轉運、樣本采集、核酸檢測、環(huán)境消殺、醫(yī)療救治……如果說他們是無畏的戰(zhàn)士，那么防護服便是戰(zhàn)士的“生命鎧甲”！防護服采用不光滑的透氣性材料（聚丙烯之類的化學合成材料）制作，可以阻止可能攜帶病原體的分泌物、噴濺物、顆粒物等接觸人體，有效保護防疫人員的健康，使防疫人員穿著時減少自身感染與病毒擴散的風險。在藥品微生物檢驗中，也應按要求做好安全防護。在操作過程中，應正確穿戴防護服、手套和口罩，安全使用實驗室中的水、電、氣；采用正確方法捉拿實驗動物，防止動物意外損傷，禁止對動物采取粗暴動作。若操作對象是致病微生物，為防止其感染操作人員或污染實驗室及周圍的環(huán)境，培養(yǎng)物及菌種的無害化處理尤為重要。當前無菌室的工作臺、培養(yǎng)箱中有微生物培養(yǎng)物和菌種，現(xiàn)需要對它們以及試驗中使用過的工具、容器等進行無害化處理，請大家學習相關知識，在老師的指導下，一起完成本項目任務。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-實驗室水、電、氣的安全處理方法用電安全用水安全用氣安全本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-個體防護裝備實驗室個體防護裝備個體防護裝備的種類個體防護裝備的使用本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-病原微生物實驗室分級與個體防護一級防護穿工作服、工作鞋→手清洗或手消毒→戴一次性隔離帽→戴防護口罩→穿一次性隔離衣→戴一次性乳膠手套。二級防護穿分體式衣和拖鞋→手清洗或手消毒→戴一次性隔離帽→戴防護口罩→穿防護服→戴一次性乳膠手套→換隔離鞋→穿一次性鞋套，此時可在半污染區(qū)工作；進入污染區(qū)，需要再穿一次性隔離衣→戴一次性乳膠手套→穿鞋套；對病原菌實施近距離操作時,需戴防護眼鏡。三級防護在二級防護著裝基礎上加戴全面型呼吸防護器。四級防護防護服應為正壓防護服。根據(jù)實驗室對病原微生物的生物安全防護水平，并依照實驗室生物安全國家標準的規(guī)定，將病原微生物實驗室分為一級（BSL-1）、二級（BSL-2）、三級（BSL-3）、四級（BSL-4）。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-培養(yǎng)物的無害處理廢液的處理廢氣的處理固體廢棄物的處理

微生物檢驗的操作對象若是致病微生物，為了保障實驗室的生物安全，必須及時對操作過程中產(chǎn)生的廢液、廢氣和固體廢棄物進行處理，防止其感染檢驗人員或污染實驗室及周圍的環(huán)境。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-常用實驗動物的捉拿方法小鼠的捉拿方法大鼠的捉拿方法豚鼠的捉拿方法兔的捉拿方法狗的捉拿方法正確地捉拿實驗動物，是為了不損害動物健康，不影響觀察指標，并防止被動物咬傷，保證后續(xù)操作順利進行。捉拿動物的方法根據(jù)動物種類而定。捉拿動物前，必須對各種動物的一般習性有所了解，捉拿時既要小心仔細，不能粗暴，又要大膽敏捷，達到正確捉拿動物的目的。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃工作內容完成時間成員負責人無菌室滅菌

培養(yǎng)皿滅菌

器具、器械滅菌

方法適用性試驗根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無菌室

操作場所

高壓蒸汽滅菌器

滅菌設備防護服

隔離微生物手套隔離微生物口罩隔離微生物補充1補充2補充3本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、處理方法選擇

1.無菌室滅菌

培養(yǎng)、觀察微生物或更換培養(yǎng)液時，必須從各方面防止任何污染物進入培養(yǎng)液或容器，所以無菌室的滅菌是至關重要的。無菌室的污染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子，因此長期停用后的無菌室應使用高錳酸鉀+甲醛進行熏蒸滅菌。經(jīng)常使用的無菌室，每次使用都應進行地面衛(wèi)生清潔，并用紫外線燈照射30min進行空氣滅菌。超凈工作臺每次操作前用紫外線燈照射30min，然后用75%乙醇擦拭。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、處理方法選擇2.培養(yǎng)皿滅菌使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時，將有培養(yǎng)物和菌種的培養(yǎng)皿集中于玻璃容器內，放入底部有一定量（淹沒加熱管）涼水的高壓蒸汽滅菌器內，經(jīng)一定程度的加壓排凈滅菌器內冷空氣，使蒸汽到達各個部位，保證徹底滅菌。然后繼續(xù)加壓加熱，當壓力表讀數(shù)達到103~104kPa、溫度為121℃時，保持15~40min即可。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、處理方法選擇4.玻璃器皿、塑料器皿和器械

本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評考核內容考核標準配分得分人員防護能正確穿脫個體防護裝備10能正確處理使用過的防護裝備10方法選擇能正確選擇適合的滅菌方法10

無害化處理能正確操作高壓蒸汽滅菌器15

能正確完成高壓蒸汽滅菌15

了解相關物品的無害化處理方法10

記錄填寫能正確客觀填寫過程及結果記錄10

清場能熟練規(guī)范操作10操作過程中具有安全意識10合計100任務評分標準本課件是可編輯的正常PPT課件思考與練習一、選擇題1.下列關于高壓蒸汽滅菌法的說法中，不正確的是（）。Ａ適用于對耐高溫和耐濕物品的滅菌Ｂ可殺滅細菌、芽孢Ｃ通常滅菌壓力為205kPaＤ通常滅菌溫度為121℃2.（）適用于不耐高熱的物品滅菌。Ａ火焰滅菌法Ｂ干熱滅菌法Ｃ高壓蒸汽滅菌法Ｄ化學藥劑法二、簡答題1.簡述高壓蒸汽滅菌法的原理和步驟。2.微生物檢驗的安全防護包括哪些方面？本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗技術》謝謝本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗技術》模塊二藥品安全性檢查項目一無菌檢查本課件是可編輯的正常PPT課件

任務一氯化鈉注射液無菌檢查-直接接種法

任務二喜炎平注射液無菌檢查-薄膜過濾法

目錄本課件是可編輯的正常PPT課件項目二無菌檢查任務一氯化鈉注射液無菌檢查-直接接種法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考氯化鈉注射液的主要作用是補充電解質，調節(jié)體內的水、電解質平衡。很多藥物需要溶解在氯化鈉注射液中，才能進行肌內注射或者靜脈注射，并直接進入血液循環(huán)。對氯化鈉注射液有什么要求呢？

現(xiàn)有一批氯化鈉注射液，需按照抽樣標準抽取一定數(shù)量并對這一批抽檢品是否無菌進行判斷。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析本任務以氯化鈉注射液作為研究對象，介紹氯化鈉注射液無菌檢查方法及操作，工作內容及要求見下表。本課件是可編輯的正常PPT課件

無菌檢查法的檢查對象是《中國藥典》２０２０年版要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器械、原料、輔料及其他品種。相關知識-無菌檢查法檢查對象

單向流空氣區(qū)域、工作臺面及受控環(huán)境應定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度確認。檢查環(huán)境

無菌檢查可以確保藥品的質量，間接反映藥品生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)條件、工藝方法和管理水平，反映藥物不同產(chǎn)地、不同批次之間的質量差異。檢查意義本課件是可編輯的正常PPT課件本次任務所用的方法是直接接種法，即通過無菌操作技術將供試品直接接種至相應培養(yǎng)基上，給予供試品中細菌、真菌充分的營養(yǎng)物質與適宜的生長環(huán)境，使微生物從單個狀態(tài)培養(yǎng)成肉眼可見的菌群。相關知識-直接接種法

直接接種法本課件是可編輯的正常PPT課件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌的培養(yǎng)；相關知識-檢查用培養(yǎng)基

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人1培養(yǎng)基制備

2培養(yǎng)基無菌檢查

3培養(yǎng)基靈敏度檢查

4方法適用性試驗5供試品接種6對照試驗7培養(yǎng)及觀察8結果判斷根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無菌室

操作場所超凈工作臺

操作區(qū)域酒精燈

局部無菌環(huán)境75%乙醇

擦拭消毒氯化鈉注射液

供試品培養(yǎng)基

提供營養(yǎng)物質移液器

定量移取供試品試管、試管架

容器、支架培養(yǎng)箱

微生物培養(yǎng)菌種

靈敏度檢查、陽性對照本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作培養(yǎng)基的制備依據(jù)培養(yǎng)基培養(yǎng)及制備要求，按照計算用量-稱量-溶解-調pH值-分裝-滅菌完成。注意特殊物質的溶解方式及順序，注意分裝是培養(yǎng)基裝量的高度。

計算用量

稱量

溶解

調pH值

分裝

滅菌本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作培養(yǎng)基的無菌檢查制備好的培養(yǎng)基每批隨機取不少于５支（瓶），放至相應培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１４天，觀察培養(yǎng)基狀態(tài)。如果培養(yǎng)基混濁，則表明培養(yǎng)基有菌，不能用；如果培養(yǎng)基澄清，則表明培養(yǎng)基無菌，符合培養(yǎng)基無菌檢查標準。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作培養(yǎng)基的靈敏度檢查菌懸液制備培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過５代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第０代），并采用適宜的菌種保藏技術進行保存和確認，以保證試驗菌株的生物學特性。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作培養(yǎng)基的靈敏度檢查菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)時間制備方式金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌接種其新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上３０～３５℃培養(yǎng)１８～２４小時上述培養(yǎng)物用ｐＨ7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液或0.9％無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液生孢梭菌接種其新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中白色念珠菌接種其新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上２０～２５℃培養(yǎng)２～３天黑曲霉接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上２０～２５℃培養(yǎng)５～７天或直到獲得豐富的孢子加入適量含0.05％（ｍＬ／ｍＬ）聚山梨酯80的ｐＨ7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液將孢子洗脫。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作培養(yǎng)基靈敏度檢查操作培養(yǎng)基名稱接種菌種試管數(shù)空白對照培養(yǎng)時間結果判斷硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（３０～３５℃培養(yǎng)）不大于１００ｃｆｕ的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌每種菌種各２支１支不接種菌種的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接種細菌的培養(yǎng)基管培養(yǎng)時間不超過３天，接種真菌的培養(yǎng)基管培養(yǎng)時間不得超過５天空白對照管應無菌生長。若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。如果加菌培養(yǎng)基管有無菌生長的現(xiàn)象，則培養(yǎng)基的靈敏度檢查不符合規(guī)定，不能使用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（２０～２５℃培養(yǎng)）不大于１００ｃｆｕ的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉每種菌種各２支１支不接種菌種的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作方法適用性試驗方法適用性試驗的意義進行產(chǎn)品無菌檢查時，應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結果，應重新進行方法適用性試驗。方法適用性試驗對每一試驗菌應逐一進行方法確認。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作方法適用性試驗-操作培養(yǎng)基名稱接種菌種接種方法培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌每種菌種各２管，其中１管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另１管作為對照置于３０～３５℃培養(yǎng)箱，其中生孢梭菌需置于厭氧培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)時間不得超過５天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉置于２０～２５℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時間不得超過５天結果判斷１與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，可照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查２如含供試品的任一容器中試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，應采用增加培養(yǎng)基用量、使用中和劑或滅活劑等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進行方法適用性試驗本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作供試品的取樣檢驗數(shù)量

檢驗數(shù)量指一次試驗所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品及上市產(chǎn)品按《中國藥典》２０２０年版最少檢驗數(shù)量規(guī)定進行抽樣。檢驗量

檢驗量即一次試驗所用的供試品數(shù)量（ｇ、ｍＬ或ｃｍ２）。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應分別接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作供試品的取樣樣品的抽樣要求：

１）須采用無菌操作技術在具有無菌條件的特定區(qū)域中進行取樣，防止樣品受到微生物污染而出現(xiàn)假陽性的結果。２）應監(jiān)測抽樣環(huán)境并記錄，同時記錄采樣時間。３）抽樣的任何消毒過程（如抽樣點的消毒）不能影響樣品中微生物的檢出。４）所抽樣品應有清晰標識，注明樣品名稱、批號、抽樣日期、采樣容器、抽樣人等信息。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作供試品的處理與接種除生物制品外，一般樣品無菌檢查時兩種培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)相等；生物制品無菌檢查時硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)為２∶１。除另有規(guī)定外，每個容器中培養(yǎng)基接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10％，同時，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ｍＬ，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于10ｍＬ。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作供試品的處理與接種氯化鈉注射液接種操作培養(yǎng)基供試品陽性對照陰性對照培養(yǎng)條件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基氯化鈉注射液分別接種與供試品等量的金黃色葡萄球菌（不大于100cfu）至培養(yǎng)基中未接種的培養(yǎng)基３０～３５℃培養(yǎng)１４天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基２０～２５℃培養(yǎng)１４天本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、結果判斷結果觀察培養(yǎng)期間應定期觀察，并記錄是否有菌生長。若在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液不少于１ｍＬ轉種至同種新鮮培養(yǎng)基中，將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于４天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)混蝕；或取培養(yǎng)液（物）涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌，必要時做菌種鑒定。陽性對照管所接種菌應生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則試驗無效。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、結果判斷結果觀察只有符合下列至少一個條件時，方可認為試驗無效：（１）無菌檢查試驗所用的設備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結果不符合無菌檢查法的要求。（２）回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。（３）在陰性對照中觀察到微生物生長。（４）供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是無菌試驗中所使用的物品和（或）無菌操作技術不當引起的。本課件是可編輯的正常PPT課件項目二無菌檢查任務二喜炎平注射液無菌檢查-薄膜過濾法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考喜炎平注射液是直接輸入靜脈的液體滅菌制劑，通常包裝于玻璃瓶、塑料瓶或軟袋中，使用時通過輸液器持續(xù)滴注輸入靜脈。喜炎平注射液成分中有穿心蓮內酯磺化物，穿心蓮內酯能清熱解毒、消炎止痛，具有一定抑菌作用?，F(xiàn)有一批喜炎平注射液，需按照抽樣標準抽取一定數(shù)量并對這一批抽檢品是否無菌進行判斷。。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（１）喜炎平注射液中可能存在的微生物包括細菌、真菌。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌的培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。（２）按照培養(yǎng)基配方完成培養(yǎng)基制備，對培養(yǎng)基進行無菌檢查、靈敏度檢查，確認培養(yǎng)基適用于該試驗后，該培養(yǎng)基才能被采用。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析直接接種法與薄膜過濾法優(yōu)、缺點比較方法優(yōu)點缺點直接接種法供試品用量較少，比較節(jié)約不能有效除去供試品中的抑菌成分，易出現(xiàn)假陰性結果薄膜過濾法操作環(huán)境相對封閉，可以有效減少外部環(huán)境的影響；能有效除去抑菌成分的影響，適用于含抑菌成分的供試品檢查消耗的供試品量較多本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（４）薄膜過濾法采用無菌操作技術將供試品通過集菌儀過濾后再加入相應培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀察，需要進行方法適用性試驗，以確認該方法適用于喜炎平注射液的無菌檢查。（５）按照《中國藥典》２０２０年版規(guī)定，確定喜炎平注射液的檢驗數(shù)量、檢驗量，保證供試品抽樣的客觀性，在無菌室中完成供試品檢查。放置相應培養(yǎng)箱培養(yǎng)，通過觀察培養(yǎng)基是混濁還是澄清來判斷供試品是否合格。本課件是可編輯的正常PPT課件

薄膜過濾法:一般采用封閉式薄膜過濾器,根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。無菌檢查用的濾膜孔徑應不大于0.45μｍ，濾膜直徑約為50ｍｍ。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。采用無菌操作技術使供試液通過集菌儀，供試品中可能存在的微生物被截留收集在濾膜上，通過沖洗液沖洗濾膜除去供試品中的抑菌成分。把所需培養(yǎng)基通過進樣管道直接注入集菌培養(yǎng)器中，放置規(guī)定的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)、觀察，以檢驗供試品是否無菌。相關知識-薄膜過濾法

薄膜過濾法全封閉預滅菌不易受污染本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-集菌儀的使用集菌儀的操作過程：（１）取出一次性培養(yǎng)器，確認包裝完好后在無菌室內打開無菌包裝。（２）將一次性培養(yǎng)器逐個插放在不銹鋼排液槽上。（３）將一次性培養(yǎng)器的彈性軟管裝入集菌儀的蠕動泵頭，要求定位準確，軟管走勢順暢。（４）將進樣針插入樣品中，啟動集菌儀，過濾集菌。若樣品中含有抑菌物質，應用適量緩沖液沖洗濾膜，方法與集菌過程相同。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-集菌儀的使用（５）完成集菌后，開啟已滅菌的培養(yǎng)基，插入針頭。（６）摘下一次性培養(yǎng)器頂部空氣濾器開口的膠塞，套在一次性培養(yǎng)器的底口上，泵入相應的培養(yǎng)基。（７）用夾子夾閉與一次性培養(yǎng)器連接部的軟管，留出５～６ｃｍ，剪除其余部分，并將開口端插在空氣濾器的開口上。（８）將培養(yǎng)器置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并觀察。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-集菌儀的使用集菌儀使用注意事項（１）在集菌儀泵頭扣緊之前，嚴禁啟動開關，否則可能導致手部受傷。（２）若無菌室采用化學消毒劑消毒，應將儀器移至封閉罩內或搬出無菌室，以免損壞電子部件和儀器表面。（３）在進樣針插入瓶裝流體樣品前應先開機，然后倒置容器瓶，以保持進樣針上的過濾膜干燥，氣流暢通，正常進液。（４）若進液管內出現(xiàn)過多氣泡，應將泵速降低，并檢查進氣濾膜是否被浸泡，若不能進液，則檢查進樣針是否暢通。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人1培養(yǎng)基制備

2培養(yǎng)基無菌檢查

3培養(yǎng)基靈敏度檢查

4方法適用性試驗5供試品集菌6對照試驗7培養(yǎng)及觀察8結果判斷根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無菌室

操作場所超凈工作臺

操作區(qū)域酒精燈

局部無菌環(huán)境75%乙醇

擦拭消毒喜炎平注射液

供試品培養(yǎng)基

提供營養(yǎng)物質緩沖液

沖洗濾膜集菌儀

截留樣品中的微生物培養(yǎng)箱

微生物培養(yǎng)菌種

靈敏度檢查、陽性對照本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作培養(yǎng)基的制備依據(jù)培養(yǎng)基培養(yǎng)及制備要求，按照計算用量-稱量-溶解-調pH值-分裝-滅菌完成。注意特殊物質的溶解方式及順序，注意分裝是培養(yǎng)基裝量的高度。

計算用量

稱量

溶解

調pH值

分裝

滅菌本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作方法適用性試驗-操作培養(yǎng)基名稱接種菌種接種方法培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌按供試品的無菌檢查要求，取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量，采用薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入不大于１００ｃｆｕ的試驗菌，過濾置于３０～３５℃培養(yǎng)箱，其中生孢梭菌需置于厭氧培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)時間不得超過５天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉置于２０～２５℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時間不得超過５天結果判斷１與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查２如含供試品的任一容器中試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，應采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進行方法適用性試驗本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作供試品的處理及接種喜炎平注射液為水溶性液體供試品，取規(guī)定量，直接過濾；或混合至含不少于１００ｍＬ適宜稀釋液的無菌容器中，混勻，立即過濾。用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于３次，以便除去抑菌成分。喜炎平注射液對革蘭陽性菌與革蘭陰性菌均有抑制作用，故選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌為陽性對照菌。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、試驗操作供試品的處理及接種喜炎平注射液接種操作方法培養(yǎng)基供試品接種原則陽性對照陰性對照培養(yǎng)條件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基氯化鈉注射液沖洗后，１份濾器中加入１００ｍＬ硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，１份濾器中加入１００ｍＬ胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基分別接種與供試品等量的金黃色葡萄球菌（不大于１００ｃｆｕ）至培養(yǎng)基中未接種的培養(yǎng)基３０～３５℃培養(yǎng)１４天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基２０～２５℃培養(yǎng)１４天本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗技術》謝謝本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗技術》模塊二藥品安全性檢查項目二微生物總數(shù)檢查本課件是可編輯的正常PPT課件

任務一葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-平皿法

任務二葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-薄膜過濾法

任務三葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-最可能數(shù)法

目錄本課件是可編輯的正常PPT課件項目二微生物總數(shù)檢查任務一葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-平皿法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考

葡萄糖酸鈣口服溶液用于預防和治療鈣缺乏癥，如骨質疏松、手足抽搐癥、骨發(fā)育不全、佝僂病，以及兒童、妊娠和哺乳期婦女、絕經(jīng)期婦女、老年人鈣的補充。某企業(yè)生產(chǎn)了一批葡萄糖酸鈣口服溶液，根據(jù)《中國藥典》2020年版要求需要進行微生物限度檢查。

請按照供試品取樣要求抽取一定數(shù)量的葡萄糖酸鈣口服溶液，并按照規(guī)定確定檢驗數(shù)量、檢驗量。查詢《中國藥典》2020年版四部通則1105（非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法），選擇平皿法，進行微生物計數(shù)，判斷被檢藥品是否符合微生物限度規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（１）《中國藥典》2020年版規(guī)定的微生物計數(shù)方法包括平皿法、薄膜過濾法和最可能數(shù)法（簡稱MPN法）。本任務以葡萄糖酸鈣口服溶液為材料，選擇平皿法進行微生物計數(shù)。（２）對微生物計數(shù)需要制備適合微生物生長的培養(yǎng)基，并將微生物培養(yǎng)成肉眼可見的菌落。因此，應按照培養(yǎng)基配方完成培養(yǎng)基制備及其適用性檢查。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（３）平皿法是《中國藥典》2020年版規(guī)定的微生物計數(shù)方法之一。對于所選擇的計數(shù)方法還需要進行計數(shù)方法適用性試驗。（４）按照《中國藥典》2020年版規(guī)定，確定葡萄糖酸鈣口服溶液的檢驗數(shù)量、檢驗量，保證供試品抽樣的客觀性，采用無菌操作完成供試品檢查。按照規(guī)定進行菌落計數(shù)并完成檢驗報告。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析本任務的工作內容及要求見下表。工作內容工作要求關鍵點供試液的制備采取適宜方法制備供試液稀釋比例菌液制備選取規(guī)定菌株培養(yǎng)，制備菌液菌株選擇、培養(yǎng)及菌液制備培養(yǎng)基制備正確選擇培養(yǎng)基，完成制備計算、稱量、調節(jié)pH值、分裝、滅菌培養(yǎng)基適用性檢查接種培養(yǎng)、計數(shù)判定培養(yǎng)、結果判定培養(yǎng)基無菌檢查抽檢培養(yǎng)基放置于相應培養(yǎng)箱中定期觀察計數(shù)方法適用性試驗試驗組、供試品對照組、菌液對照組設置方法適用性判斷供試品接種供試品抽樣、接種無菌操作陰性對照陰性對照操作對照設計培養(yǎng)及觀察培養(yǎng)、觀察、記錄細菌、真菌培養(yǎng)條件結果判斷菌落計數(shù)、報告有效結果、檢品合格結果本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-微生物計數(shù)法1.微生物計數(shù)法的概念及要求

微生物計數(shù)法系用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數(shù)。微生物計數(shù)法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合規(guī)定的微生物限度標準時，應按《中國藥典》2020年版規(guī)定進行檢驗，包括樣品的取樣量和結果的判斷等。除另有規(guī)定外，微生物計數(shù)法不適用于活菌制劑的檢查。

微生物計數(shù)試驗環(huán)境應符合微生物限度檢查的要求。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應定期進行監(jiān)測。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-微生物計數(shù)法２.計數(shù)方法

供試品檢查時，應根據(jù)供試品理化特性和微生物限度標準等因素選擇計數(shù)方法，檢測的樣品量應能保證所獲得的試驗結果能夠判斷供試品是否符合規(guī)定。3.計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計數(shù)方法適用性試驗

供試品微生物計數(shù)中所使用的培養(yǎng)基應進行適用性檢查；計數(shù)方法應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物計數(shù)。當檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結果時，計數(shù)方法應重新進行適用性試驗。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-非無菌藥品微生物限度標準

非無菌藥品的微生物限度標準是基于藥品的給藥途徑和對患者健康潛在的危害以及藥品的特殊性而制訂的，不同藥品的微生物限度標準不同。藥品生產(chǎn)、貯存、銷售過程中的檢驗，藥用原料、輔料、中藥提取物及中藥飲片的檢驗，新藥標準制訂，進口藥品標準復核，考察藥品質量及仲裁等，除另有規(guī)定外，其微生物限度均以此標準為依據(jù)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人1查詢標準

2培養(yǎng)基制備

3培養(yǎng)基無菌檢查4培養(yǎng)基適用性檢查5供試液制備6菌液制備7方法適用性試驗8供試液接種9培養(yǎng)及觀察10結果判斷

根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無菌室操作場所超凈工作臺操作區(qū)域酒精燈局部無菌環(huán)境75％乙醇擦拭消毒pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制備供試液胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基為微生物提供營養(yǎng)物質移液器定量移取供試液試管、試管架容器、支架培養(yǎng)皿微生物培養(yǎng)培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)試驗菌株培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基名稱配方制備1000ml實際制備___ml

制備方式用量計算各用量胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨15.0g

瓊脂15.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g

氯化鈉5.0g

水1000ml

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基動物組織胃蛋白酶水解物胰酪胨等量合物10.0g

瓊脂15.0g

葡萄糖40.0g

水1000ml

本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查菌液制備和培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)條件序號步驟操作內容1配制稀釋液pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2配制培養(yǎng)基按規(guī)定程序配制所需要的培養(yǎng)基：___________、___________滅菌后備用。3制備菌液（１）取__________、__________、__________、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。（２）取_________的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05％（體積分數(shù)）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05％（體積分數(shù)）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查菌液制備和培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)條件4接種培養(yǎng)（１）取11個無菌平皿，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各______皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對照。傾倒胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀察計數(shù)（需氧菌總數(shù)）。對照培養(yǎng)基同法操作。（２）取5個無菌平皿，分別接種______、______各2皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對照。傾倒沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀察計數(shù)（霉菌和酵母菌總數(shù)）。對照培養(yǎng)基同法操作5陰性對照取_______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對照，陰性對照應_______。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查菌液制備和培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)條件6定期觀察記錄（１）胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時間不超過______天；（２）沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時間不超過______天；觀察菌落生長情況，點計平板上生長的菌落數(shù)，菌落蔓延生長成片的平板，不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)；7結果判斷_______的菌落平均數(shù)與_______的菌落平均數(shù)的比值應為_______，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；陰性對照_______，則被檢培養(yǎng)基適用性檢查符合規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施五、計數(shù)方法適用性試驗１.供試液的制備２.接種和稀釋３.抗菌活性的去除或滅活４.供試品中微生物的回收——平皿法５.結果判斷——平皿法本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號步驟操作內容1配制稀釋液pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2制備培養(yǎng)基__________培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)，__________用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)3制備供試液取供試品10mL，加入_______的_______緩沖液配制成1:10的供試液。取1:10供試液_______加入含9mL_______緩沖液的試管中制成1:102的供試液，再取1:102的供試液1mL加入另一支含9mL_______緩沖液的試管中，制成1:103稀釋級的供試液4吸樣注皿分別取3個稀釋級別的供試液檢驗，每級稀釋液取1mL，置于直徑為90mm的無菌平皿中，注入15～20mL溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備_____個平皿5陰性對照吸取稀釋液（pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液）1mL，置于直徑為90mm的無菌平皿中，注入15～20mL溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號步驟操作內容6定期觀察記錄

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度____，培養(yǎng)時間不超過____天

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度____，培養(yǎng)時間不超過____天觀察菌落生長情況，點計平板上生長的菌落數(shù)，菌落蔓延生長成片的平板，不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)7結果判斷陰性對照應____，否則試驗無效。若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查結果均符合規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項不符合規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施七、微生物總數(shù)檢查原始記錄表單（平皿法）本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評序號考核內容考核標準配分得分1培養(yǎng)基制備能正確計算培養(yǎng)基各組分用量5

能正確配制培養(yǎng)基10

能完成培養(yǎng)基滅菌操作5

2培養(yǎng)基的無菌檢查能將不同培養(yǎng)基放至相應培養(yǎng)箱中5

能正確判斷培養(yǎng)基是否無菌5

3培養(yǎng)基適用性檢查能制備各菌種的菌液5

能將菌液接種至相應的培養(yǎng)基中10

能正確完成培養(yǎng)基適用性檢查5

4計數(shù)方法適用性試驗能正確設置驗證試驗5

能正確進行結果判斷5

本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評序號考核內容考核標準配分得分5供試品接種、培養(yǎng)、結果判斷能用無菌操作技術完成供試品接種10

能正確觀察供試品培養(yǎng)變化5

能正確判斷供試品是否合格10

6培養(yǎng)物處理、無菌室清潔能正確完成培養(yǎng)物處理10

能正確完成無菌室清潔5

合計100本課件是可編輯的正常PPT課件項目二微生物總數(shù)檢查任務二葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-薄膜過濾法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考

任務一介紹了微生物計數(shù)方法中的平皿法，如何使用薄膜過濾法進行葡萄糖酸鈣口服溶液的微生物總數(shù)檢查呢？

請按照供試品取樣要求抽取一定數(shù)量的葡萄糖酸鈣口服溶液，并按照規(guī)定確定檢驗量，查詢《中國藥典》2020年版四部通則1105（非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法），選擇薄膜過濾法，進行微生物計數(shù)，判斷被檢藥品是否符合微生物限度規(guī)定。

本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（１）本任務以葡萄糖酸鈣口服溶液為材料，選擇薄膜過濾法進行微生物計數(shù)。（２）薄膜過濾法是《中國藥典》2020年版規(guī)定的微生物計數(shù)方法之一。薄膜過濾法可以富集樣品中的微生物，分離去除樣品中對微生物生長產(chǎn)生干擾的因素，有效地提高檢驗結果的靈敏度和可靠性，是近年來微生物檢查領域應用廣泛的一種計數(shù)手段。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（３）按照《中國藥典》2020年版的規(guī)定，確定葡萄糖酸鈣口服溶液的檢驗數(shù)量、檢驗量，保證供試品抽樣的客觀性，采用無菌操作完成供試品檢查。按照規(guī)定進行菌落計數(shù)并完成檢驗報告。

本任務的工作內容及要求同任務一。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-薄膜過濾法

薄膜過濾法所采用的濾膜孔徑應不大于0.45?，直徑一般為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調整。供試品及其溶劑應不影響濾膜材質對微生物的截留。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法滅菌。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。

水溶性供試液過濾前，先過濾少量的沖洗液以潤濕濾膜；對于油類供試品，其濾膜和濾器在使用前應充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100mL，總沖洗量一般不超過500mL，最多不得超過1000mL，以避免濾膜上的微生物受到損傷。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人1查詢標準

2培養(yǎng)基制備

3培養(yǎng)基無菌檢查4培養(yǎng)基適用性檢查5供試液制備6菌液制備7計數(shù)方法適用性試驗8供試液接種9培養(yǎng)及觀察10結果判斷

根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無菌室操作場所超凈工作臺操作區(qū)域酒精燈局部無菌環(huán)境75％乙醇擦拭消毒ｐＨ7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制備供試液胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基為微生物提供營養(yǎng)物質移液器定量移取供試液試管、試管架容器、支架培養(yǎng)皿微生物培養(yǎng)培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)試驗菌株培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗濾膜及薄膜過濾器富集微生物本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基名稱配方制備1000ml實際制備___ml

制備方式用量計算各用量胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨15.0g

瓊脂15.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g

氯化鈉5.0g

水1000ml

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基動物組織胃蛋白酶水解物胰酪胨等量合物10.0g

瓊脂15.0g

葡萄糖40.0g

水1000ml

本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄序號步驟操作內容1配制稀釋液pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2配制培養(yǎng)基按規(guī)定程序配制所需要的培養(yǎng)基：___________、___________滅菌后備用。3制備菌液（１）取__________、__________、__________、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液（２）取_________的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05％（體積分數(shù)）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05％（體積分數(shù)）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄4接種培養(yǎng)（１）取11個無菌平皿，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各______皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對照。傾倒胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀察計數(shù)（需氧菌總數(shù)）。對照培養(yǎng)基同法操作。（２）取5個無菌平皿，分別接種______、______各2皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對照。傾倒沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀察計數(shù)（霉菌和酵母菌總數(shù)）。對照培養(yǎng)基同法操作。5陰性對照取_______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對照，陰性對照應_______。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄6定期觀察記錄（１）胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時間不超過______天；（２）沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時間不超過______天；觀察菌落生長情況，點計平板上生長的菌落數(shù)，菌落蔓延生長成片的平板，不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)。7結果判斷_______的菌落平均數(shù)與_______的菌落平均數(shù)的比值應為_______，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；陰性對照_______，則被檢培養(yǎng)基適用性檢查符合規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施五、計數(shù)方法適用性試驗１.供試液的制備２.接種和稀釋３.抗菌活性的去除或滅活４.供試品中微生物的回收——薄膜過濾法５.結果判斷——薄膜過濾法本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號步驟操作內容1配制稀釋液pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2制備培養(yǎng)基__________培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)，__________培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)3制備供試液按平皿法制備1:10的供試液_______mL4裝膜將裝有濾膜的薄膜過濾器安裝在帶有真空裝置的支架上5潤膜薄膜過濾器中倒入pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液50mL，打開真空閥潤洗濾膜，潤洗一次6樣品過膜將適量pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液倒入薄膜過濾器，移取10mL供試液至緩沖液中，打開真空閥過濾樣品本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號步驟操作內容7沖洗將約100mLpH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液倒入薄膜過濾器中，打開真空閥沖洗濾膜，沖洗不少于3次8貼膜用鑷子輕輕取出過濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中心9陰性對照取相應稀釋液過濾、沖洗，作為陰性對照10培養(yǎng)將貼有濾膜的平板倒置放入培養(yǎng)箱中11結果判斷若濾膜上有菌落生長，進行菌落計數(shù)，以相當于1g、1mL或10cm2供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施七、微生物總數(shù)檢查原始記錄表單（薄膜過濾法）本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評序號考核內容考核標準配分得分1培養(yǎng)基制備能正確計算培養(yǎng)基各組分用量5

能正確配制培養(yǎng)基10

能完成培養(yǎng)基滅菌操作5

2培養(yǎng)基的無菌檢查能將不同培養(yǎng)基放至相應培養(yǎng)箱中5

能正確判斷培養(yǎng)基是否無菌5

3培養(yǎng)基適用性檢查能制備各菌種的菌液5

能將菌液接種至相應的培養(yǎng)基中10

能正確完成培養(yǎng)基適用性檢查5

4計數(shù)方法適用性試驗能正確設置驗證試驗5

能正確進行結果判斷5

本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評序號考核內容考核標準配分得分5供試品接種、培養(yǎng)、結果判斷能用無菌操作技術完成供試品接種10

能正確觀察供試品培養(yǎng)變化5

能正確判斷供試品是否合格10

6培養(yǎng)物處理、無菌室清潔能正確完成培養(yǎng)物處理10

能正確完成無菌室清潔5

合計100本課件是可編輯的正常PPT課件項目二微生物總數(shù)檢查任務三葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-最可能數(shù)法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務引入請思考

任務一與任務二分別介紹了微生物計數(shù)方法中的平皿法和薄膜過濾法，如何使用最可能數(shù)法進行葡萄糖酸鈣口服溶液的微生物總數(shù)檢查呢？

請按照供試品取樣要求抽取一定數(shù)量的葡萄糖酸鈣口服溶液，并按照規(guī)定確定檢驗量，查詢《中國藥典》2020年版四部通則1105（非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法），選擇最可能數(shù)法，進行微生物計數(shù)，判斷被檢藥品是否符合微生物限度規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務分析（１）本任務以葡萄糖酸鈣口服溶液為材料，選擇最可能數(shù)法進行微生物計數(shù)。（２）按照《中國藥典》2020年版規(guī)定，確定葡萄糖酸鈣口服溶液的檢驗數(shù)量、檢驗量，保證供試品抽樣的客觀性，采用無菌操作完成供試品檢查。按照規(guī)定進行菌落計數(shù)并完成檢驗報告。

本任務的工作內容及要求同任務一。本課件是可編輯的正常PPT課件相關知識-最可能數(shù)法

最可能數(shù)法（MPN法）用于微生物計數(shù)時精密度和準確度不及薄膜過濾法和平皿法，但對于某些微生物污染量很小的供試品，最可能數(shù)法可能是更適合的方法，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒有適宜計數(shù)方法的情況下使用。最可能數(shù)法不適用于霉菌計數(shù)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人1查詢標準

2培養(yǎng)基制備

3培養(yǎng)基無菌檢查4培養(yǎng)基適用性檢查5供試液制備6菌液制備7計數(shù)方法適用性試驗8供試液接種9培養(yǎng)及觀察10結果判斷

根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無菌室操作場所超凈工作臺操作區(qū)域酒精燈局部無菌環(huán)境75％乙醇擦拭消毒ｐＨ7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制備供試液胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基為微生物提供營養(yǎng)物質移液器定量移取供試液試管、試管架容器、支架培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)試驗菌株培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗補充1補充2本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施三、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基名稱配方制備1000ml實際制備___ml

制備方式用量計算各用量胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪胨17.0g

葡萄糖/無水葡萄糖2.5g/2.3g

大豆木瓜蛋白酶水解物3.0g

氯化鈉5.0g

磷酸氫二鉀2.5g

水1000ml本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄序號步驟操作內容1配制稀釋液pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制。2配制培養(yǎng)基按規(guī)定程序配制所需要的培養(yǎng)基：___________。滅菌后備用。3制備菌液取__________、__________、__________用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。4接種培養(yǎng)取_____支無菌試管，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各_____管，每管接種不大于_____的菌液，最后一管作為陰性對照。按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀察計數(shù)（需氧菌總數(shù)）。對照培養(yǎng)管同法操作。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄5陰性對照取_______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對照，陰性對照應_______。6定期觀察記錄（１）胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管，培養(yǎng)溫度___，培養(yǎng)時間不超過____天（２）觀察菌落生長情況7結果判斷陰性對照_____；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應_____。本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施五、計數(shù)方法適用性試驗１.供試液的制備２.接種和稀釋３.抗菌活性的去除或滅活４.供試品中微生物的回收——最可能數(shù)法５.結果判斷——最可能數(shù)法本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號步驟操作內容1配制稀釋液pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2制備培養(yǎng)基按計數(shù)方法適用性試驗確認的計數(shù)方法進行供試品中_____的測定__________培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)3制備供試液制備1:10的供試液_______mL4稀釋用進行______10倍系列稀釋，至少3個連續(xù)稀釋級5接種每一稀釋級取3份

____

mL分別接種至3管裝有_____

mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的試管中本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號步驟操作內容6陰性對照取

______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對照7培養(yǎng)接種管置______℃培養(yǎng)______天，逐日觀察各管微生物的生長情況8結果判斷根據(jù)微生物生長的管數(shù)從表2-2-23中查供試品1g、1mL或10cm2中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)本課件是可編輯的正常PPT課件任務實施七、微生物總數(shù)檢查原始記錄表單（薄膜過濾法）本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評序號考核內容考核標準配分得分1培養(yǎng)基制備能正確計算培養(yǎng)基各組分用量5

能正確配制培養(yǎng)基10

能完成培養(yǎng)基滅菌操作5

2培養(yǎng)基的無菌檢查能將不同培養(yǎng)基放至相應培養(yǎng)箱中5

能正確判斷培養(yǎng)基是否無菌5

3培養(yǎng)基適用性檢查能制備各菌種的菌液5

能將菌液接種至相應的培養(yǎng)基中10

能正確完成培養(yǎng)基適用性檢查5

4計數(shù)方法適用性試驗能正確設置驗證試驗5

能正確進行結果判斷5

本課件是可編輯的正常PPT課件任務測評序號考核內容考核標準配分得分5供試品接