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02小節(jié)PART重組DNA常用載體理想載體具備的條件自主復(fù)制能力或能整合到宿主染色體上與基因組一同復(fù)制的能力合適的限制性酶切位點(diǎn)供外源DNA片段插入常用的篩選標(biāo)記有抗藥性、酶基因、營(yíng)養(yǎng)分子量不宜過大,以便于容納較大的外源DNA片段并獲得較高的拷貝數(shù)常用的載體質(zhì)粒載體、噬菌體載體、病毒載體和人工染色體等根據(jù)用途不同克隆載體(cloningvector)表達(dá)載體(expressingvector)2.1質(zhì)粒pBR322質(zhì)粒載體(最早被廣泛應(yīng)用克隆的載體)01組成來(lái)源于ColE1的派生質(zhì)粒pMB1的復(fù)制起始位點(diǎn)來(lái)源于pSF2124質(zhì)粒易位子Tn3的Ampr來(lái)源于pSC101質(zhì)粒的Tetr特點(diǎn)帶有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)(ori)抗生素抗性基因(Ampr和Tetr)作選擇標(biāo)志數(shù)個(gè)單一的限制性酶切位點(diǎn)較小的分子量:易于自身DNA的純化,而且能有效地克隆6kb大小的外源DNA片段較高的拷貝數(shù)(每個(gè)細(xì)胞達(dá)1000~3000個(gè)拷貝)pUC質(zhì)粒載體系列(在pBR322基礎(chǔ)上改建而成)02組成來(lái)自pBR322質(zhì)粒的復(fù)制起始點(diǎn)Ampr基因大腸桿菌β-半乳糖苷酶基因(LacZ)啟動(dòng)子及編碼α-肽鏈的DNA序列(LacZ′基因)多克隆位點(diǎn)(位于LacZ′基因中靠近5′端)優(yōu)點(diǎn)具有更小的分子量和更高的拷貝數(shù)僅保留了pBR322的復(fù)制子和Ampr具有來(lái)自大腸桿菌LacZ操縱子的LacZ′基因,適應(yīng)于組織化學(xué)篩選重組體優(yōu)越性:pUC是最通用的大腸桿菌克隆載體之一pUC18/pUC19質(zhì)粒載體結(jié)構(gòu)pBR332質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖2.2噬菌體λ噬菌體載體粘粒載體稱柯斯質(zhì)粒(cosmid)單鏈絲狀噬菌體載體λgt10(插入型)結(jié)構(gòu)Charon
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