KTA0003-CN-Annexin V-AbFluor 555細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（橙色熒光）

AnnexinV-AbFluor555細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（橙色熒光）Cat#:KTA0003 Size:50T/100T AnnexinV-AbFluor?555細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（橙色熒光） 貨號(hào)：KTA0003 批號(hào)：見(jiàn)產(chǎn)品標(biāo)簽 應(yīng)用實(shí)驗(yàn)：適用細(xì)胞的流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè) 熒光激發(fā)/發(fā)射：AnnexinV-AbFlourTM555:555nm/565nm 保質(zhì)期：4℃保存6個(gè)月原理凋亡是細(xì)胞程序性死亡的一種形式，它能從組織中清除不需要的、受損的或衰老的細(xì)胞。在正常細(xì)胞中，負(fù)性磷脂位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，而膜的外表面則被不帶電的磷脂（PS）所占據(jù)。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入凋亡狀態(tài)后，帶負(fù)電的PS從質(zhì)膜的內(nèi)葉向外葉運(yùn)輸，使PS暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。人抗凝血?jiǎng)〢nnexinV是一種35-36kDaCa2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)PS具有高度親和力。AnnexinV標(biāo)記有熒光團(tuán)或生物素，可通過(guò)與外葉PS結(jié)合識(shí)別凋亡細(xì)胞。AnnexinV-AbFlourTM555細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（橙色熒光）為細(xì)胞凋亡提供了一種快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。在提供的結(jié)合緩沖液中用AnnexinV-AbFlourTM555染色細(xì)胞群后，早期凋亡細(xì)胞顯示細(xì)胞膜橙色熒光，活細(xì)胞幾乎沒(méi)有熒光。檢測(cè)可通過(guò)流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行分析。包裝清單試劑盒組分 規(guī)格 儲(chǔ)存條件 50T 100T AnnexinVBindingBuffer(5×) 5mL 10mL 4℃AnnexinV-AbFluor?555 250μL 500μL 4℃避光保存自備耗材·離心機(jī)·移液器及吸頭·去離子水·載玻片·熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀·24孔板（細(xì)胞培養(yǎng)用）試劑準(zhǔn)備1×AnnexinVBindingBuffer：用去離子水把AnnexinVBindingBuffer(5×)稀釋成1×AnnexinVBindingBuffer。AnnexinV-AbFlourTM555：即用型；使用前，平衡到室溫。實(shí)驗(yàn)步驟A.流式細(xì)胞儀分析1．通過(guò)所需方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)培養(yǎng)無(wú)誘導(dǎo)的對(duì)照培養(yǎng)物。2．4℃，300g離心5min收集1-2×105細(xì)胞，用冰預(yù)冷的PBS洗滌兩次。注意：貼壁細(xì)胞使用胰酶消化后離心收集細(xì)胞，消化時(shí)間如果過(guò)長(zhǎng)，易造成細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷而出現(xiàn)細(xì)胞壞死的假陽(yáng)性，所以需控制胰酶消化時(shí)間。3．用100μL1×AnnexinVBindingBuffer重懸細(xì)胞。4．每100μL細(xì)胞懸液中加入4-5μLAnnexinV-AbFlourTM555，輕柔混勻。5．室溫避光孵育15min。6．孵育結(jié)束后加入400μL1×AnnexinVBindingBuffer，輕柔混勻后置于冰上。染色后30min內(nèi)通過(guò)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞。使用555nm激發(fā)，565nm附近測(cè)量熒光。B.熒光顯微鏡分析1．對(duì)于懸浮細(xì)胞：(1)按照步驟A.1到步驟A.6的流式細(xì)胞分析步驟。(2)將步驟A.6的細(xì)胞懸浮置于玻片上，用蓋玻片蓋住細(xì)胞。盡快使用適當(dāng)?shù)臑V鏡通過(guò)熒光顯微鏡分析細(xì)胞。2．對(duì)于貼壁細(xì)胞，按照以下操作步驟：(1)細(xì)胞接種于爬片或腔室載玻片上，培養(yǎng)細(xì)胞。(2)通過(guò)所需方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)培養(yǎng)無(wú)誘導(dǎo)的對(duì)照培養(yǎng)物。(3)除去培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞兩次。(4)準(zhǔn)備工作液：每100μL1×AnnexinVBindingBuffer添加4-5μLAnnexinV-AbFlourTM555，輕柔混勻。注意：最佳濃度可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求確定。(5)在細(xì)胞中加入適量的工作液（確保工作液完全覆蓋細(xì)胞），室溫避光孵育15-30min。(可以在冰上孵育，以減緩凋亡過(guò)程，但孵育時(shí)間需延長(zhǎng)到至少30min)。(6)用1×AnnexinVBindingBuffer洗滌細(xì)胞兩次。注意：此步不要使用PBS洗滌細(xì)胞。(7)載玻片上添加一滴1×AnnexinVBindingBuffer，然后將細(xì)胞爬片置于在載玻片上。對(duì)于細(xì)胞腔室載玻片上的細(xì)胞，添加足夠的1×AnnexinVBindingBuffer覆蓋細(xì)胞。注意：也可使用抗熒光淬滅封片劑封片。(8)使用適當(dāng)?shù)臑V光片在熒光顯微鏡下分析細(xì)胞。相關(guān)產(chǎn)品CatalogNo. ProductNameKTA0001 AnnexinV-AbFluor?405細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（藍(lán)色熒光）KTA0002 AnnexinV-AbFluor?488細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（綠色熒光）KTA0004 AnnexinV-AbFluor?647細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（紅色熒光）KTA2010 TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（綠色熒光）KTA2011 TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（橙色熒光）KTA4001 線粒體膜電位分析試劑盒（JC-1法）KTD102-CN 細(xì)胞凋亡檢測(cè)雞尾酒套裝BMU104-CN SuperKine?增強(qiáng)型抗熒光淬滅