家兔玻璃體高濃度高頻次注射康柏西普的安全性研究

家兔玻璃體高濃度高頻次注射康柏西普的

安全性研究雷

博

重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科眼科學(xué)重慶市市級重點實驗室重慶市眼科研究所抗VEGF紀元20042005200620072008200920102011201220132014VISIONMARINAANCHORPIERVIEW1VIEW2HOPEAURORAPHOENIXPegaptanibRanibizumabAfliberceptConberceptVEGF-A165VEGF-A

VEGF-A,VEGF-B,PlGF新一代多靶點抗VEGF藥物Folkman1974…..可應(yīng)用抗VEGF治療的相關(guān)眼病濕性年齡相關(guān)性黃斑變性（wetAMD）

糖尿病性視網(wǎng)膜病變（DR）

病理性近視（PM）

視網(wǎng)膜靜脈阻塞（RVO）

早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（ROP）新生血管性青光眼中滲其他眼病驚人的成就，革命性的標志VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）刺激血管內(nèi)皮細胞的有絲分裂、遷徙誘導(dǎo)毛細血管形成加強新生血管形成增加血管通透性PLGFVEGF-AVEGF-BVEGF-CVEGF-DVEGF-EVEGFPIER(n=184)可提高視力但是效果可分成三類其中有NonrespondersEXCITE(IIIb,n=353)Q3M不能維持療效40%60%ThisstudyshowsthattheincidencefornonresponsivenesstosingleantiVEGFtherapyinneovascularAMDis32%.AnexchangeshouldbeconsideredinnonrespondersinthetreatmentofexudativeAMD.有32%患者無反應(yīng)。對無反應(yīng)者應(yīng)該考慮更換其他藥物。新問題約1/3患者無效長期用藥藥效下降需頻繁注射維持療效Aflibercept對Ranibizumab和Bevacizumab抵抗或無反應(yīng)AMD患者有效OCT解剖形態(tài)改善Cho,etal(2013)Bakall,etal(2013)Yonekawa,etal(2013)Ho,etal(2013)Kumar,etal(2013)Chang,etal(2014)Hall,etal(2014)Wykoff,etal(2014)Thorell,etal(2014)視力明顯提高KumarN,etal(2013)Chang,etal(2014)Sarao,etal(2014)造成療效差別的原因？基因的多態(tài)性？

(CFH,C3,ARMS2,HTRA1,VEGFA)

Imen,etal(2014)(YesCFH,C3,VEGFA)藥物的結(jié)構(gòu)

貝伐單抗雷珠單抗阿柏西普康柏西普靶點VEGF-A所有異構(gòu)體VEGF-AVEGF-BPIGF結(jié)構(gòu)單克隆抗體人源單克隆片段可溶性重組VEGFR蛋白貝伐單抗雷珠單抗阿柏西普康柏西普分子量（KDa璃體內(nèi)半衰期（天）5.63.27.1結(jié)合受體VEGF-A所有異構(gòu)體VEGF-AVEGF-BPIGFVEGF-AVEGF-BPlGF兔眼玻璃體半衰期(天）4.32.94.72.5-4.2系統(tǒng)半衰期（天）200.251.5親和力低中高高結(jié)構(gòu)單克隆抗體人源單克隆片段可溶性重組VEGFR蛋白可溶性重組VEGFR蛋白用藥方案1次/月1次/月x3月+1次/2月或PRN1次/月x3月+1次/2月或PRN安全性相似價格（美元）50195018501100新一代抗VEGF藥物：作用靶點不同結(jié)構(gòu)不同可延長注射時間間隔對部分無應(yīng)答患者有效對重癥患者有效果康柏西普（Conbercept）由人的VEGF受體1(VEGFR1，F(xiàn)lt-1)中的免疫球蛋白樣區(qū)域2，VEGF受體2(VEGFR2，KDR)中的免疫球蛋白樣區(qū)域3和4與人的免疫球蛋白Fc片斷經(jīng)過融合而成(FLTd2／KDRd3，d4-Fc)。國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準康柏西普眼用注射液用于治療濕性年齡相關(guān)性黃斑變性。研究背景PHOENIX視力結(jié)果:新一代抗VEGF藥物靶點增多是否會引起副作用？生理功能有關(guān)抗VEGF藥的副作用：眼壓升高眼內(nèi)炎（眼內(nèi)炎、葡萄膜炎、IL-6及IL-8升高）視功能下降（ERG電圖a波及b波振幅降低）視網(wǎng)膜節(jié)細胞層細胞數(shù)量減少研究背景Time(day)124714Untreatedn544443研究目的不同劑量和高頻次玻璃體注射康柏西普后的安全性對房水炎性因子、視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)及功能的影響注射康柏西普后的蛋白質(zhì)組學(xué)眼內(nèi)注射不同劑量康柏西普的安全性家兔（n=36）左眼右眼A組：PBSC組:0.5mgB組:0.2mg眼壓、眼底照相、ERG、房水炎性因子、視網(wǎng)膜形態(tài)、細胞凋亡、視網(wǎng)膜節(jié)細胞計數(shù)不作處理D組:2.0mg4d、7d、14d研究方案右眼注射0.2mg左眼未處理每周注射一次共六次眼壓、眼底照相、ERG、房水檢炎性因子，眼球結(jié)構(gòu)及細胞凋亡、視網(wǎng)膜節(jié)細胞計數(shù)7d眼內(nèi)多次注射康柏西普的安全性研究方案蛋白提取BCA法測蛋白濃度SDS電泳檢測TMT標記C18離心柱樣品脫鹽TMT蛋白質(zhì)譜眼內(nèi)注射康柏西普的蛋白組學(xué)家兔（n=36）左眼右眼不作處理A組PBSC組

0.5mgD組

2.0mg研究方案結(jié)果一.兔玻璃體內(nèi)注射高濃度、高頻次康柏西普后眼壓變化玻璃體內(nèi)注射高濃度和高頻次的康柏西普注射液未引起眼壓變化二.兔玻璃體內(nèi)注射高濃度、高頻次康柏西普后ERG變化結(jié)果Day14MultipleInjections與注射PBS的對照組相比,注射不同劑量及高頻次的康柏西普未引起ERG明顯變化Day7Day4二.兔玻璃體內(nèi)注射高濃度、高頻次康柏西普后ERG變化與注射PBS的對照組相比,注射不同劑量及高頻次的康柏西普未引起ERG明顯變化結(jié)果Day14MultipleInjectionsDay7Day4三.兔玻璃體注射高濃度、高頻次康柏西普后眼底情況

與注射PBS的對照組相比，注射不同劑量及高頻次康柏西普未引起明顯眼底改變。結(jié)果四.兔玻璃體內(nèi)注射高濃度、高頻次康柏西普后視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)結(jié)果四.兔玻璃體內(nèi)注射高濃度、高頻次康柏西普后視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)與PBS對照組相比，眼內(nèi)注射不同劑量及高頻次的康柏西普未引起視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)改變。各組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)及內(nèi)核層厚度均無差異。結(jié)果五.兔眼內(nèi)注射高濃度、高頻次康柏西普視網(wǎng)膜細胞凋亡情況

與對照組相比，眼內(nèi)注射不同劑量及高頻次康柏西普，視網(wǎng)膜節(jié)細胞層未見TUNEL陽性細胞增多。結(jié)果六.兔玻璃體注射高濃度、高頻次康柏西普后房水炎性因子的表達

與PBS對照組相比，不同劑量康柏西及連續(xù)眼內(nèi)注射康柏西普房水炎性因子IL-6、IL-8及TNF-α的表達未發(fā)生變化。各組均明顯低于注射LPS的陽性對照組。結(jié)果康博西普注射眼與對照眼相比VEGF受體1蛋白質(zhì)組學(xué)以下蛋白水平未發(fā)現(xiàn)明顯變化各種生長因子炎癥相關(guān)蛋白凋亡相關(guān)蛋白未檢測出以下蛋白VEGFPlGF白細胞介素(IL-1,IL-17)結(jié)論玻璃體高濃度