TCRHA 088-2024 病理免疫組織化學檢測質控品要求

ICS11.020CCSC50團 體 標 準T/CRHA088—2024————————————————————————————————病理免疫組織化學檢測質控品要求Qualitycontrolspecimenset-upandusagespecificationforpathologyimmunohistochemicaldetection2024-10-14發(fā)布 2024-10-20實施中國研究型醫(yī)院學會 發(fā) 布T/CRHA088—2024目 次前言 Ⅱ引言 Ⅲ范圍 1規(guī)范性引用文件 1術語和定義 1免疫組織化學檢測質控品的分類及設置要求 5免疫組織化學檢測質控品的設計與選擇 6操作方法及程序 6免疫組織化學檢測質控品的判讀與報告 7檢測失敗的處理方法 7免疫組織化學檢測質控品的質量控制 7管理和文件 8附錄A（規(guī)范性）質控品的染色判讀 9附錄B（規(guī)范性）質控品日常操作規(guī)范 14附錄C（資料性）病理診斷抗體的Ⅰ級質控品列表 16附錄D（資料性）質控品的意義與特點 20附錄E（資料性）液態(tài)細胞質控品 26附錄F（資料性）類組織質控品 30參考文獻 33IT/CRHA088—2024前 言GB/T1.1—20201部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中國研究型醫(yī)院學會超微與分子病理學專業(yè)委員會提出。本文件由中國研究型醫(yī)院學會歸口。首都醫(yī)科大學附屬首都醫(yī)科大學附屬IIT/CRHA088—2024引 言免疫組織化學技術是最重要的病理診斷輔助技術之一，其結果用于病理診斷和鑒別診方法標準無相關具體標準和要求。IIIT/CRHA088—2024病理免疫組織化學檢測質控品要求范圍規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T22576醫(yī)學實驗室質量和能力的專用要求GB/T27424—202042061—20221181—2021免疫組織化學試劑盒CNAS-CL02-A001:2023醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則的應用要求術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1免疫組織化學immunohistochemistry,IHC利用抗原與抗體特異性結合的原理，用已知抗體來檢測待測組織或細胞中的目標抗原，（對組織細胞內的抗原進行定位、定性及定量研究的實驗技術，簡稱“免疫組化”，縮略語為“IHC”。3.2病理免疫組織化學檢測質控品pathologyimmunohistochemistrycontrolspecimen注2：質控品與免疫組化對照、對照物、對照品、對照物質和質控物質是同義詞。3.3非特異性染色non-specificstaining免疫染色過程中，凡不屬于特異性抗原抗體反應所出現的染色通常稱為非特異性染色。1T/CRHA088—2024[來源：YY/T1181-2021,3.7]3.4標準化normalization3.5免疫組化染色的檢測下限lowlimitofdetection,LLOD在已知的可低表達某一抗原蛋白的組織/細胞成分中觀察的陽性反應，其設置必須遵循適用原則。3.6穩(wěn)定性stability質控品的穩(wěn)定性：質控品在規(guī)定界限內保持其性能特性的能力。檢測流程的穩(wěn)定性：指免疫組化的實驗條件，包括抗體孵育溫度/時間等的一致性；以及免疫組化的實驗步驟，包括修復、洗滌、孵育、顯色等步驟的一致性。檢測結果的穩(wěn)定性：在相同樣本和實驗條件下，重復進行免疫組化檢測，得到的結果是一致的。3.7均勻性homogeneity質控品各指定部分中某個特定特性值的一致性。[來源：GB/T27424-2020,3.3]3.8準確性accuracy檢測結果與檢測真值之間的一致程度。3.9可重復性reproducibility即檢測精確度，指相同的條件下，獲得的一系列檢測結果的一致程度。3.10特異性specificity3.11互換性commutability2T/CRHA088—20243.12短串聯(lián)重復序列shorttandemrepeats,STR短串聯(lián)重復序列，也稱微衛(wèi)星DNA（microsatelliteDNA），是一段包含1-6bp的重復DNA序列。由于其多態(tài)性和高突變率，又被稱為細胞的DNA指紋。STRSTR鑒定可檢測細胞是否發(fā)生交叉污染或者誤認的情況。3.13單核苷酸多態(tài)性singlenucleotidepolymorphisms,SNP在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，包括堿基的顛換、轉換、插入和缺失。3.14DNA條形碼DNAbarcode生物體內能夠代表該物種特征的、標準的、有足夠變異的、易擴增且相對較短的DNA片段。DNA條形碼技術是利用生物體DNA中一段保守片段對物種進行快速準確鑒定的新興技術，該技術基于對線粒體基因細胞色素c氧化酶亞基1（通常稱為CO1,COI1或COX1）測序結果進行分型。質控品的分類及設置要求質控品分類按性質分類質控品分為內對照/內質控品和外對照/外質控品。內對照/內質控品：指存在于待測樣本內部，無需獨立提供的質控品。外對照/外質控品：指獨立于待測樣本外，需要額外添加的質控品。按來源分類質控品分為組織質控品和細胞質控品。F），又依據制作工藝可分為組織切片質控品、組織懸液質控品等。細胞質控品：指采用細胞制品作為質控品；細胞質控品包括液態(tài)細胞質控品（詳見附錄E）、固態(tài)細胞質控品等。按用途分類質控品分為陽性質控品和陰性質控品。3T/CRHA088—2024陽性質控品：指已知含有目標抗原的免疫組化質控品。陰性質控品：指已知不含目標抗原的免疫組化質控品。按質控精細化程度分類質控品分為批次質控品和片內質控品。（片內質控品：指在每張待測樣本玻片上設置的質控品。按供應來源分類質控品分為自制質控品和商品化質控品。自制質控品：指由各級各類醫(yī)療機構病理科自行制備和使用的質控品。按級別分類質控品分為Ⅰ級質控品和Ⅱ級質控品。（包括但不限于組織、細胞、商品化質控品以及未來可能發(fā)現的更加穩(wěn)定、特異、準確的物質）。（市18種病理診斷抗體的Ⅰ級質控品列表見附錄C5.4.1至5.4.3的要求。Ⅱ級質控品：指經過Ⅰ級質控品比對驗證過的質控品、或經過3家三級或以上醫(yī)院病理（包括但不（如伴隨診斷抗體）的質控品宜和Ⅰ級質控品進行比對驗證。5.4.1至5.4.3的要求。設置要求4T/CRHA088—2024質控品的設置：用于免疫組化檢測性能驗證、或者應嚴格質控的項目（4.2.2與治療藥物靶點檢測相關的病理檢測項目和伴隨診斷項目，應設置片內質控品?；蜃儺悾ㄈ缤蛔兓蛉笔В╊惒±頇z測項目，應設置片內質控品。與診斷或鑒別診斷相關的病理檢測項目，宜設置片內質控品。質控品的設計與選擇質控品設計要求即使存在內對照的情況下，仍宜設計質控品作外對照，綜合監(jiān)測免疫組化染色結果。B。組織質控品的選擇陽性質控品的選擇優(yōu)先選擇含目標抗原的正常組織。腫瘤組織質控品應優(yōu)先選用與待測樣本具有相同瘤種或相同腫瘤亞型的組織。陰性質控品的選擇腫瘤組織質控品應優(yōu)先選用與待測樣本具有相同瘤種或相同腫瘤亞型的組織。細胞質控品的選擇細胞質控品應具有溯源性證明資料或基因工程細胞系鑒定資料。細胞質控品應具有與組織質控品的互換性。細胞質控品的細胞密度應適中，且在低倍鏡視野下其細胞應呈現單層均勻分布。商品化質控品的選擇（CNAS認證或中國計量認證（CMA認證）或具有等同資質的第三方檢驗機構開具檢驗證明，該檢驗證明應包含基因組學和蛋白質組學相關檢驗的結論。商品化質控品應具有不少于三家省級或以上不同臨床病理質控中心就不同方法的實用性、可重復性進行比對和驗證的臨床試驗資料。5T/CRHA088—2024GB/T42061-2022建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行。操作方法及程序質控品的操作方法免疫組化檢測步驟應符合《臨床技術操作規(guī)范:病理學分冊》的操作要求。質控品的自動化檢測推薦使用具有自動化加樣功能的免疫組化染色儀器。對儀器平臺有要求的試劑，應保證染色結果的一致性。質控品的判讀與報告質控品判讀基本原則18種病理診斷抗體的Ⅰ級質控品的染色結果判讀標準見附錄C。質控品判讀與報告在判讀待測樣本染色結果之前，應先判讀質控品的染色結果。質控品的檢測結果符合設計預期，即判定本次免疫組化檢測合格。陽性質控品或陰性質控品結果不符合預期時，均判定為本次免疫組化檢測失敗。CNAS-CL02-A001:2023的要求。檢測失敗的處理方法應建立檢測失敗的處理程序，確保及時發(fā)現、識別檢測失敗。應梳理排查檢測失敗的原因，排除原因后重新檢測。應記錄檢測失敗的原因、應急補救措施、糾正措施及解決方案，以便實時溯源。質控品的質量控制自制質控品的質控要求通用要求6T/CRHA088—2024具體要求自制細胞質控品應與組織質控品或驗證結果符合預期要求的組織進行染色結果一致性比對驗證，避免自制細胞質控品的物質互換性問題。料應包括細胞來源于符合預期要求的組織驗證結果、STR基因分型和/或單核苷酸多態(tài)性鑒定和/DNA商品化質控品的質控要求通用要求.3的要求。具體要求STR基因分型和/或單核苷酸多態(tài)性（SNP）鑒定和/DNA條形碼技術鑒定等可以確認細胞來源的證明資料?；蚬こ碳毎佃b定資料應包括測序分析和免疫學驗證資料。管理和文件質控品管理質控品管理應符合CNAS-CL02-A001:2023和GB/T22576的相關要求。文件與記錄要求7T/CRHA088—2024實驗室應控制與本文件要求有關的內部和外部文件。應建立質控品管理控制程序，實驗室應建立和保存清晰的記錄以證明滿足本文件的要求。應建立和實施與質控品（8T/CRHA088—2024附錄A（規(guī)范性）本文件列舉了常用應嚴格質控項目的質控品及染色結果判讀標準示例，見表A.1。表A.1常用應嚴格質控項目的質控品及染色結果判讀標準抗體名稱質控品 染色結果判讀標準PD-L1 扁桃體 扁桃體淺表鱗狀上皮無染色濾泡間區(qū)細胞絕大多數為胎盤 滋養(yǎng)層細胞呈現均勻中至強陽性的細胞膜染色和任強度的細胞質染色無染色的胎盤絨毛間質和脈管可作為陰性內對照。陽性細胞質控品陰性細胞質控品參考質控品說明書。HER2 乳腺癌（HER23+） 10%以上的浸潤癌細胞中觀察到強烈完整的細胞膜染色。乳腺癌（HER22+）10%以上的浸潤癌細胞中觀察到弱至中等陽性的完整10%的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色。乳腺癌（HER21+）10%乳腺癌（HER20）未觀察到染色或在≤10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色。（HER23+）

（HER22+）（HER21+）

應有大于10%的細胞呈現弱至中陽性的完整的細胞膜染色。應有大于10%的細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色，且多數細胞存在不完整的細胞膜點狀染色。（HER20）

在任何部位均無陽性染色。9T/CRHA088—2024ER宮頸（如果存在和間質（內皮細胞和淋巴細胞除外呈現中至強陽性的細胞核染色。扁桃體分散的濾泡樹突狀細胞/T細胞和扁桃體鱗狀上皮細胞呈現至少弱至中陽性的細胞核染色（LLOD）。陽性細胞質控品陰性細胞質控品參考質控品說明書。PR宮頸大多數柱狀上皮細胞和間質(內皮細胞和淋巴細胞除外)呈現中至強陽性的明顯的細胞核染色；大部分基底鱗狀上皮細胞呈現至少弱但明顯的細胞核染色。扁桃體鱗狀上皮細胞和生發(fā)中心細胞均陰性。陽性細胞質控品考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。ALK闌尾迷走神經叢的神經節(jié)細胞和散在的軸突呈現至少弱至染色。伴EML4-ALK易位幾乎所有腫瘤細胞都呈現至少弱至中陽性的顆粒狀細的肺腺癌胞質染色。無EML4-ALK易位腫瘤細胞陰性。的肺腺癌陽性細胞質控品考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。MLH1扁桃體外套區(qū)B細胞呈現弱至中陽性的細胞核染色，生發(fā)中心B細胞呈現中至強陽性的細胞核染色。MLH1表達缺失的腫瘤細胞陰性，間質細胞細胞核陽性。結腸癌陽性細胞質控品考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。PMS2扁桃體外套區(qū)B細胞呈現弱至中陽性的細胞核染色，生發(fā)中心B細胞呈現中至強陽性的細胞核染色。10T/CRHA088—2024PMS2表達缺失的結腸癌

腫瘤細胞陰性，間質細胞細胞核陽性。陽性細胞質控品 細胞應有中至強陽性的細胞核染色細胞染色陽性率參考質控品說明書。陰性細胞質控品 參考質控品說明書。MSH2 扁桃體 外套區(qū)B細胞呈現弱至中陽性的細胞核染色，生發(fā)中心B細胞呈現中至強陽性的細胞核染色。MSH2腸癌

腫瘤細胞陰性，間質細胞細胞核陽性。陽性細胞質控品 細胞應有中至強陽性的細胞核染色細胞染色陽性率參考質控品說明書。陰性細胞質控品 參考質控品說明書。MSH6 扁桃體 外套區(qū)B細胞呈現弱至中陽性的細胞核染色，生發(fā)中心B細胞呈現中至強陽性的細胞核染色。MSH6腸癌

腫瘤細胞陰性，間質細胞細胞核陽性。陽性細胞質控品 細胞應有中至強陽性的細胞核染色細胞染色陽性率參考質控品說明書。陰性細胞質控品 參考質控品說明書。EBER EBV感染的伯基特淋巴瘤

腫瘤細胞細胞核陽性。EBV感染的鼻咽癌 腫瘤細胞細胞核陽性。EBV感染的胃癌 腫瘤細胞細胞核陽性。陽性細胞質控品 細胞應有中至強陽性的細胞核染色細胞染色陽性率參考質控品說明書。陰性細胞質控品 參考質控品說明書。HelicobacterHP）

HP陽性細胞質控品參考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。11T/CRHA088—2024HBsAgHBV感染的肝組織HBV感染的肝細胞呈現細胞質顆粒狀染色。未感染區(qū)域肝細胞陰性。陽性細胞質控品參考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。Ki67扁桃體幾乎所有生發(fā)中心B細胞（包括暗區(qū)和明區(qū)）以及鱗狀上皮基底旁細胞均為中至強陽性的細胞核染色。闌尾大多數基底柱狀上皮細胞均為中至強陽性的細胞核染色。肝臟才偶爾可見中性粒細胞陽性。陽性細胞質控品考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。CD20扁桃體BB細胞均為中至強陽性的細胞膜染色，漿細胞也呈一定程度的弱陽性。闌尾固有層散在漿細胞常呈一定程度的弱陽性的細胞膜染色（LLOD）。肝臟散在B細胞均為中至強陽性的細胞膜染色。陽性細胞質控品正?，F象。陰性細胞質控品參考質控品說明書。CD117闌尾Cajal（卡哈爾間質細胞和肥固有肌層中的平滑肌細胞或血管周圍的平滑肌細胞沒有任何染色。陽性細胞質控品

陰性細胞質控品 參考質控品說明書。12T/CRHA088—2024CD10扁桃體幾乎所有的生發(fā)中心B細胞呈現中至強陽性的細胞膜染色，套區(qū)B細胞和鱗狀上皮細胞均陰性。散在分布的中性粒細胞呈現至少弱陽性的細胞膜染色。陽性細胞質控品細胞應有中至強陽性的完整的細胞膜染色，細胞染色陽性率參考質控品說明書，部分陽性細胞染色因細胞重疊或細胞切面影響，可能會出現類似細胞質的染色，屬于正?，F象。陰性細胞質控品參考質控品說明書。p53扁桃體超過50%的生發(fā)中心B細胞呈現弱至中陽性的細胞核染色。闌尾隱窩基底部分的分散的上皮細胞呈現弱至中陽性的細胞核染色，而腔上皮細胞是陰性的。陽性細胞質控品細胞應有中至強陽性的細胞核染色，細胞染色陽性率參考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。HMB45黑色素瘤活化的和腫瘤性黑色素細胞呈現強陽性的細胞質染色。皮膚基底層色素細胞呈現細胞質染色。陽性細胞質控品參考質控品說明書。陰性細胞質控品參考質控品說明書。13T/CRHA088—2024附錄B（規(guī)范性）質控品日常操作規(guī)范質控品位置演示質控品位置演示見圖B.1。圖B.1質控品位置演示質控品具體設計要求本文件列舉了常用應嚴格質控項目的質控品具體設計要求見表B.1。表B.1 常用應嚴格質控項目的質控品具體設計要求抗體名稱 質控品設計 位置要求 質控品排列方式PD-L1 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列HER2 111至少1個陰性質控品

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列ER 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列PR 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列ALK 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列MLH1 至少1個陽性質控品 近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列14T/CRHA088—2024至少1個陰性質控品PMS2 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列MSH2 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列MSH6 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列EBER 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列HP 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列HBsAg 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列Ki67 至少1個陽性質控品 近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排至少1個陰性質控品CD20 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列CD117 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列CD10 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列p53 11

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列HMB45 1個陽性質控品1個陰性質控品

近標簽端或遠標簽端 呈上下縱向排列15T/CRHA088—2024附錄C（資料性）國際特設專家委員會推薦的18種病理診斷抗體的Ⅰ級質控品列表本文件列舉了18種由國際特設專家委員會推薦的病理診斷抗體的Ⅰ級質控品及其染色結果判讀標準，見表C.1。表C.118種病理診斷抗體的Ⅰ級質控品及其染色結果判讀標準抗體名稱質控品染色結果判讀標準CKpan闌尾幾乎所有柱狀上皮細胞均為中至強陽性細胞質染色（可見膜深染）。肝臟絕大多數肝細胞至少顯示弱至中度陽性細胞質染色并伴膜深染（LLOD）。扁桃體所有鱗狀上皮細胞均為中至強陽性細胞質染色，CKpan顯示間質網狀細胞呈弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）。CK8/18（CK）闌尾所有柱狀上皮細胞均為中至強陽性細胞質染色（可見膜深染）。肝臟絕大多數肝細胞至少顯示弱至中度陽性細胞質染色并伴膜深染（LLOD）。扁桃體散在鱗狀上皮細胞呈中至強陽性細胞質染色（陽性細胞數因標本不同而異），CK8/18陽性間質網狀細胞呈弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）。CK5/14（CK）扁桃體幾乎所有鱗狀上皮細胞均為中至強陽性細胞質染色。胰腺閏管內散在柱狀上皮細胞均為弱至中度陽性細胞膜染色（LLOD）。肝臟均為陰性染色。CK20闌尾幾乎所有表層上皮細胞均為中至強陽性細胞質染色，絕大多數基底隱窩上皮細胞至少顯示細胞質弱陽性（LLOD）。肝臟均為陰性染色。扁桃體均為陰性染色。CK7肝臟幾乎所有膽管上皮細胞均為中至強陽性細胞質染色。胰腺幾乎所有閏管上皮細胞均為弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）。16T/CRHA088—2024闌尾通常呈陰性染色，散在柱狀上皮細胞和內皮細胞可呈弱至中度陽性細胞質染色。Vimentin闌尾上皮內散在Ｔ細胞均為弱至中度陽性細胞質染色，固有層大血管內皮細胞、間質細胞、巨噬細胞和淋巴細胞均為中至強陽性細胞質染色。肝臟肝竇內所有內皮細胞和kupffer細胞均為弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）。胰腺絕大多數外分泌腺泡上皮細胞均為弱至強陽性細胞質染色。TTF-1甲狀腺幾乎所有上皮細胞均為強陽性細胞核染色。肺幾乎所有肺泡細胞和終末支氣管基底細胞均為中至強陽性細胞核染色，終末支氣管柱狀上皮細胞至少顯示弱陽性細胞核染色（LLOD）。扁桃體均為陰性染色。CDX-2闌尾幾乎所有上皮細胞均為強陽性細胞核染色，?？梢娙蹶栃约毎|染色。胰腺大多數閏管上皮細胞均為弱至中度陽性細胞核染色（LLOD）。扁桃體均為陰性染色。CEA闌尾黏膜表層上皮刷狀緣均為中至強陽性染色，幾乎所有上皮細胞均為弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）；如果CEA在腺癌組織中過表達，那么黏膜表層染色是染色成功的唯一參照底限。扁桃體散在鱗狀上皮細胞呈中至強陽性細胞質染色（陽性細胞數因標本不同而異）。肝臟均為陰性染色。CD31扁桃體絕大多數套區(qū)B細胞均為弱至中度陽性細胞膜染色（LLOD）。胰腺幾乎所有內皮細胞均為中至強陽性細胞膜染色。肝臟幾乎所有肝竇內皮細胞均為弱至中度陽性細胞膜染色（LLOD）。α-SMA闌尾所有血管、黏膜肌層及固有肌層的平滑肌細胞均為中至強陽性細胞質染色。17T/CRHA088—2024扁桃體幾乎所有血管平滑肌細胞均為中至強陽性細胞質染色。肝臟大多數竇周細胞至少顯示弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）。Desmin闌尾黏膜肌層和固有肌層內所有平滑肌細胞均為中至強陽性細胞質染色，大多數血管平滑肌細胞呈弱至中度陽性細胞質染色（LLOD）。肝臟肝細胞均為陰性染色，血管散在平滑肌細胞可呈弱至中度陽性細胞質染色。扁桃體上皮細胞和淋巴細胞均為陰性染色，血管散在平滑肌細胞可呈弱至中度陽性細胞質染色。CD3扁桃體TTT細胞均為中至強陽性細胞膜染色。闌尾上皮內散在T細胞均為弱至中度細胞膜陽性染色（LLOD）。肝臟散在T細胞至少顯示弱至中度細胞膜陽性染色（LLOD）。CD20扁桃體幾乎所有生發(fā)中心B細胞和套區(qū)B細胞均為中至強陽性細胞膜染色，漿細胞也呈一定程度的弱陽性。闌尾固有層散在漿細胞常呈一定程度的弱陽性細胞膜染色（LLOD）。肝臟散在B細胞均為中至強陽性細胞膜染色。Ki-67扁桃體幾乎所有生發(fā)中心B細胞（包括暗區(qū)和明區(qū)）以及鱗狀上皮基底旁細胞均為中至強陽性細胞核染色。闌尾大多數基底柱狀上皮細胞均為中至強陽性細胞核染色。肝臟大多數正常肝細胞均為陰性染色，散在中性粒細胞不應表現任何程度的細胞核染色，只有炎癥和反應性改變時才偶爾可見中性粒細胞陽性。S100扁桃體散在濾泡間區(qū)樹突細胞均為弱至強陽性細胞核及細胞質染色（LLOD）。18胰腺T/CRHA088—2024大多數胰島內分泌細胞均為弱至強陽性細胞核及細胞質染色，所有脂肪細胞均為陽性染色（LLOD）。肝臟肝細胞及膽管上皮細胞均為陰性染色，可見散在的樹突狀細胞陽性。CgA胰腺大多數胰島內分泌細胞均為中至強陽性細胞質染色。闌尾大多數神經節(jié)細胞和軸突均為弱至中度陽性染色（LLOD），神經內分泌細胞均為強陽性細胞質染色。肝臟肝細胞和膽管上皮細胞均為陰性染色，可見散在的周圍神經軸突陽性染色。Syn闌尾大多數神經節(jié)細胞和軸突均為中至強陽性染色；大多數杯狀細胞均為弱陽性細胞質染色（LLOD）。胰腺大多數胰島內分泌細胞均為中至強陽性細胞質染色。肝臟肝細胞和膽管上皮細胞均為陰性染色，可見散在的周圍神經軸突陽性染色。19T/CRHA088—2024附錄D（資料性）質控品的意義與特點質控品的意義質控品的分類依據質控品來源分類，質控品分為組織質控品和細胞質控品。1)組織質控品的分類——依據組織來源分類，組織質控品分為剩余組織質控品和類組織質控品?！罁谱鞴に嚪诸?，組織質控品分為組織切片質控品和組織懸液質控品。2）細胞質控品的分類細胞質控品分為液態(tài)細胞質控品和固態(tài)細胞質控品。不同質控品的特征剩余組織質控品01+2+3+各1（如HER2），在顯微鏡下找出目標部位并標記。②從標記好的蠟塊上找出相應組織位置，用0.2mm的空心針取出組織，并按照染色強℃20min2-4μm目前由于倫理風險以及難以實現標準化批量生產等原因，上述形式的剩余組織質控品，均不能用于市場化生產和銷售。類組織質控品移植瘤組織質控品20T/CRHA088—2024（包括已知表達目標抗原的移植瘤組織和不表達或低表達該抗原的陰性組織移植瘤組織質控品的制作需注意實驗動物的選擇、移植瘤的制備質量、迭代變異控制，類器官組織質控品類器官是指在體外三維（3D）環(huán)境中培養(yǎng)生長的微型細胞簇，這些細胞簇在細胞因子、化學小分子抑制劑/激活劑、培養(yǎng)基及其他添加劑等物質作用下，經過自組織并分化為功能性細胞群，具有類似相應器官的組織結構和遺傳學特點。或者腫瘤組織。對于ESC/iPSC衍生的類器官，ESC/iPSC在各種細胞生長因子或小分子化合物（抑制劑/激活劑）以及基質膠和細胞培養(yǎng)添加劑的逐步分化方案下，能夠按照類似于原腸胚形成和器官發(fā)生過程中的發(fā)育線索，從三個胚層生成類器官。對于ASC來源的類器官，ASC需要從胎兒或成人組織中產生；獲得單個ASC或含有ASC的組織單元之后，再通過3D3D培養(yǎng)，能夠衍生出腫瘤類器官。組織懸液質控品組織懸液質控品是一種通過對石蠟包埋組織切片進行碎片勻漿化處理制成的懸液型質控時，可使用組織芯片方法采取目標組織/細胞、然后集中包埋處理；②切片：對蠟塊進行大量切片2-3μm碾碎切片，并加入二甲苯溶解；充分溶解后進行離心，2500rpm離心3min棄上清；加入無水乙醇重懸混勻后再離心3min1:20-1:50加入75%-100%乙醇重懸混勻，即為組織懸液質控品；④免疫組化檢測：用10μL移液器分別在待測樣本玻片的近標簽端和遠標簽端滴加2-3μL組織懸液質控品，然后按日常檢測流程進行烤片、檢測及閱片。組織懸液質控品在病理科的檢測中具有很高的操作性，它能夠大大提高檢測的便利性。液態(tài)細胞質控品21T/CRHA088—2024STR基因分型等分/不表達細胞系，可實現稀缺陽性靶標的長期穩(wěn)定生產；④液態(tài)細胞質控品的蛋白質表達豐度經過標準化控制，保持高度均勻和穩(wěn)定；固態(tài)細胞質控品其它種屬來源質控品其它種屬來源的質控品可能包括不同動物模型的組織樣本，如小鼠、大鼠、兔子、狗、不同質控品的異同分析對前述不同類別質控品的異同點進行分析，見表D.1。不同質控品的優(yōu)缺分析對前述不同類別質控品的優(yōu)缺點進行分析，見表D.2。22T/CRHA088—2024表D.1不同類別質控品的異同分析質控品類別剩余組織質控品類組織質控品組織懸液質控品固態(tài)細胞質控品液態(tài)細胞質控品其他種屬來源質控品來源醫(yī)療剩余人體組織醫(yī)療剩余人體組織醫(yī)療剩余人體組織培養(yǎng)細胞系培養(yǎng)細胞系動物組織有無倫理風險有無有無無無前處理抗原變性處理(多聚甲醛+石蠟)抗原變性處理(多聚甲醛+石蠟)抗原變性處理(多聚甲醛+石蠟)抗原變性處理(多聚甲醛+石蠟)抗原變性處理(多聚甲醛+石蠟)抗原變性處理(多聚甲醛+石蠟)形態(tài)固態(tài)固態(tài)液態(tài)固態(tài)液態(tài)固態(tài)獲得方式及難易度需自制，繁瑣，耗時長有商品化，極少，如自制技術難度極高需自制，繁瑣，耗時長可商品化采購，如自制技術難度極高可商品化采購，如自制技術難度極高有商品化，極少，如自制技術難度極高物料成本低很高低中中高制備及使用人力成本高高低低極低（全自動化）高自動化使用可能無無無無可以無記錄和可追溯便利性低低低低高低片內質控可實現性難難易難易難質控方案靈活性（加樣位置/數量）低低高低高低成品有效期長長較長短較長長勻質性低，異質性高低，異質性高低，異質性高勻質性很高勻質性很高低，異質性高具備陰陽性質控品具備具備具備具備具備具備稀缺靶點的質控品不易獲得易獲取不易獲得易獲取易獲取不易獲得標準化程度相對低相對低相對低可符合GBT42061，標準化程度高可符合GBT42061，標準化程度高相對低23T/CRHA088—2024表D.2不同類別質控品的優(yōu)缺分析質控品類別優(yōu)點缺點須實驗室自行制備、管理，工作量較大，人工成本高昂；形式接近待檢組織，包含組織形態(tài)學等全面的組織信息；難以實現嚴格的質量控制，材料和制備過程的標準化程度較低；剩余組織質控品大部分檢測指標對應的組織樣本材料易于獲取，材料成本部分重要的檢測指標對應的組織樣本難以穩(wěn)定持續(xù)性獲取；忽略不計；跨院使用，存在倫理風險，須經復雜和嚴格的倫理審查程序；難以實現使用過程的標準化、自動化和質控記錄的管理和溯源；形式接近待檢組織，包含組織形態(tài)學等全面的組織信息；類組織質控品存在商品化質控品，無需實驗室自行制備和管理，無需相應的人工成本；質控品的標準化程度高；與實驗室自制質控品相比，存在額外材料成本，且成本很高；難以實現使用過程的標準化、自動化和質控記錄的管理和溯源；不存在倫理風險，便于跨院使用場景；須實驗室自行制備、管理，工作量較大；大部分檢測指標對應的組織樣本材料易于獲取；難以實現嚴格的質量控制，材料和制備過程的標準化程度較低；組織懸液質控品材料成本低廉；部分重要的檢測指標對應的組織樣本難以穩(wěn)定持續(xù)性獲取；使用方式簡單易行；跨院使用，存在倫理風險，須經復雜和嚴格的倫理審查程序；難以實現使用過程的標準化、自動化和質控記錄的管理和溯源；存在商品化質控品，無需實驗室自行制備和管理，無需相應的人工成本；液態(tài)細胞質控品可全自動化使用，使用過程的人工成本忽略不計，且使用過程標準化程度較高；質控品的標準化程度很高；形式與待檢組織差異較大，無法包含組織形態(tài)學等全面的組織信息；與實驗室自制質控品相比，存在額外材料成本；易于實現質控記錄的管理和溯源；不存在倫理風險，便于跨院使用場景；24T/CRHA088—2024固態(tài)細胞質控品存在商品化質控品，無需實驗室自行制備和管理，無需相應的人工成本；質控品的標準化程度很高；不存在倫理風險，便于跨院使用場景；形式與待檢組織差異較大，無法包含組織形態(tài)學等全面的組織信息；與實驗室自制質控品相比，存在額外材料成本；難以實現使用過程的標準化、自動化和質控記錄的管理和溯源；其他種屬來源質控品形式接近待檢組織，包含組織形態(tài)學等全面的組織信息；大部分檢測指標對應的組織樣本材料可以通過制備獲得；不存在倫理風險，便于跨院使用場景；尚未有商品化產品，實驗室自行制備的難度和成本很高；難以消除種屬差異帶來的，和目標檢測樣本的差異；難以實現使用過程的標準化、自動化和質控記錄的管理和溯源；25T/CRHA088—2024附錄E（資料性）定義（上明確具有或明確排除（即免疫組織化學檢測的蛋白靶標（使用方法自動化應用操作方法可使用配套的全自動免疫組織化學染色系統(tǒng)（包括全自動質控加樣模塊和切片染色模塊），或全自動免疫組織化學質控加樣染色一體機完成質控品智能加樣和染色的全過程。切片準備：在配套的系統(tǒng)軟件上，打印標簽，粘貼到對應的待檢組織樣本切片（白片）的玻片上，然后將切片放入全自動質控加樣模塊（玻片處理系統(tǒng)）的玻片架中。質控瓶上載及信息錄入：將液態(tài)細胞質控品試劑瓶上載至儀器指定位置的瓶架中。在設備屏幕“質控品”“掃碼質控品質控加樣方案設置：在設備屏幕“玻片”菜單界面下，點擊“質控加樣設置”，可對每（陰/、數量、加樣位置等。質控品加樣：點擊“開始加樣”選項，設備將按照預設的質控加樣方案，全自動智能質控品染色：質控品加樣完成后，將切片上載至切片染色模塊（全自動免疫組織化學質控加樣染色一體機可忽略此步驟全自動免疫組織化學染色系統(tǒng)可實現對所有切片的質控品設置及添加情況的記錄，包括圖片掃描，并實時傳到實驗室的LIS/HIS系統(tǒng)保存，便于信息追溯。手工使用操作方法使用混勻儀將液態(tài)細胞質控品試劑重懸，使之形成均一的細胞懸液（備注：無肉眼明顯可見的顆粒狀物質或細胞沉淀）。使用10μL1.5μL26T/CRHA088—2024質控品加樣完成后，切片進行免疫組織化學染色，若在全自動免疫組化機上進行實質控品主要功能監(jiān)測免疫組化檢測過程中試劑的覆蓋范圍，避免試劑覆蓋不全導致的假陰性。（避免因此而導致的假陽性、假陰性、非特異性染色、染色弱等錯誤的染色結果。監(jiān)測免疫組化檢測過程中抗體試劑使用的準確性，避免因使用錯誤試劑而導致的假陽性、假陰性、非特異性染色、染色弱等錯誤的染色結果。監(jiān)測免疫組化檢測過程中抗原修復條件，避免因抗原修復不當（pH值、修復時長、修復溫度等異常），而導致的假陽性、假陰性、非特異性染色、染色弱等錯誤的染色結果。監(jiān)測免疫組化檢測過程中抗體孵育條件，避免因抗體孵育條件異常（孵育時長、孵應用示例液態(tài)細胞質控品監(jiān)測一抗試劑質量波動以ALK免疫組化染色結果為例，當ALK陰性液態(tài)細胞質控品出現非特異陽性染色結果時，提示本次實驗所使用的一抗?jié)舛冗^高，此時同條件進行染色的ALK陽性肺腺癌（組織質控品）也出現了間質非特異陽性著色。當ALK陽性液態(tài)細胞質控品染色陽性強度下降至弱到中等且陽性率無法達到80%圖E.1ALK液態(tài)細胞質控品監(jiān)測一抗?jié)舛茸兓?7T/CRHA088—2024液態(tài)細胞質控品監(jiān)測抗原修復條件變化以HER20/1+/2+/3+液態(tài)細胞質HER2HER21+:大于10%的細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色；HER22+：大于10%的細胞呈現弱至中等強度的完整的細胞膜染色HER23+:80%-100%細胞有強且完整的細胞膜（pH值不適或修復時長不足時，HER21+/2+/3+細胞的染色結HER21+/2+/3+的判讀要求，提示同步染色的待檢樣本染色結果不可信，不適用于診斷結果判讀。（圖E.2）圖E.2HER2液態(tài)細胞質控品監(jiān)測修復條件變化28T/CRHA088—2024附錄F（資料性）定義應用與價值移植瘤組織質控品腫瘤生長和特性的動物模型。主要的移植瘤模型分為細胞系異種移植模型（CDX模型）和人源腫瘤異種移植模型（PDX模型）。CDX模型是將體外傳代培養(yǎng)的腫瘤細胞移植到免疫缺陷小鼠體內形成移植瘤。PDX模PDX模型保留了親代腫瘤類器官組織質控品類器官技術在腫瘤研究中的獨特價值在于其能夠保留患者腫瘤的遺傳多樣性與異質性，PDX類組織的構建過程移植瘤的構建過程當移植瘤生長到一定體積時，通過手術從小鼠體內取出腫瘤組織，用于后續(xù)的驗證和研究。移植瘤的構建過程見圖F.1。29T/CRHA088—2024圖F.1移植瘤的構建過程202331(3):374-381.）類器官的構建過程3D培養(yǎng)物；②共培養(yǎng)和微環(huán)境重建：進一步通過建立適宜的共培養(yǎng)體系，包括引入多樣化的細胞種類和細胞外基質，與3D培養(yǎng)物共同培養(yǎng)，以模擬和重建體內微環(huán)境；③組織培養(yǎng)技術的應用：運用一系列先進的組織培養(yǎng)技術，如浸沒基質膠培養(yǎng)法、3D微流控培圖F.2類器官的構建過程（HuH,LyuX,YiM,etal.Organoidtechnologyandapplicationsincancerresearch.JHematolOncol.2018Sep15;11(1):116.）應用示例CRISPR/Cas9技術建立了MLH1蛋白缺失型細胞系，并通過異種移植技術制備了移植瘤。經蘇木素-伊紅染色（簡稱HE染色）和免疫組化檢測，這些樣本與臨床樣本高度相似，驗證了其作為MLH1缺失型免30T/CRHA088—2024F.3移植瘤樣本與臨床樣本的HE及IHC染色比對HEIHCCRISPR編輯的MLH1缺失型細胞系（GM12878Cas9_6GM12878Cas9_9）MLH1HCT116細胞系產生MLH1PMS2蛋白的核染色上呈現顯著缺失。HE染色中的紅色箭頭標出了出血、MLH1蛋白缺失的陰性腫瘤細胞R,ZhangR,TanP,etal.DevelopmentofnovelqualitycontrolmaterialbasedonCRISPR/Cas9editingandxenograftsforMLH1proteindeficiencytesting.JClinLabAnal.2021;35(5):e23746.）31T/CRHA088—2024參 考 文 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