T-AHSX 15-2024 飼料原料 釀酒酵母培養(yǎng)物

ICS65.120CCSB46Feedstuff—SaccharomycescerevisiaeculIT/AHSX15—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由安徽東方新新生物技術有限責任公司提出。本文件由安徽省飼料與健康養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會歸口。本文件起草單位：安徽東方新新生物技術有限公司、安徽科技學院、亳州市畜牧發(fā)展中心、阜陽市農業(yè)農村局獸藥監(jiān)察所、安徽省飼料與健康養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會。2T/AHSX15—2024飼料原料釀酒酵母培養(yǎng)物本文件規(guī)定了飼料原料釀酒酵母培養(yǎng)物的生產工藝、質量要求、試驗方法、檢驗規(guī)則和標簽、包裝、運輸、貯存及保質期。本文件適用于飼料原料釀酒酵母培養(yǎng)物生產及質量評判，或作為貿易結算和產品監(jiān)管的依據(jù)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6432飼料中粗蛋白測定方法GB/T6434飼料中粗纖維的含量測定GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6438飼料中粗灰分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標簽GB13078飼料衛(wèi)生標準GB/T14699.1飼料采樣GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B?的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T18246飼料中氨基酸的測定GB/T18823飼料檢測結果判定的允許誤差GB/T19540飼料中玉米赤霉烯酮的測定GB/T21704乳與乳制品中非蛋白氮含量的測定GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T32141飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定NY/T3477飼料原料釀酒酵母細胞壁《飼料原料目錄》（中華人民共和國農業(yè)農村部公告2013年第1773號）《飼料添加劑品種目錄》（中華人民共和國農業(yè)農村部公告2013年第2045號）3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1釀酒酵母培養(yǎng)物saccharomycescerevisiaeculture以釀酒酵母為菌種，經(jīng)固體發(fā)酵后，濃縮、干燥獲得的產品。3T/AHSX15—20244質量要求4.1原料要求發(fā)酵原料使用應符合《飼料原料目錄》的規(guī)定。4.2菌種要求4.2.1釀酒酵母應符合《飼料添加劑品種目錄》的規(guī)定。4.2.2釀酒酵母應具有穩(wěn)定的生物學特征和代謝特征，生物有效性應符合GB/T2318的規(guī)定。4.2.3釀酒酵母應采用甘油懸液保藏方法保存，并有完整的記錄，包括來源歷史、篩選、檢測、凍干保存、數(shù)量、使用等。4.3工藝要求選用發(fā)酵原料作為培養(yǎng)底物，加入酵母菌菌種，采用固態(tài)發(fā)酵工藝。需嚴格控制發(fā)酵過程，定時通風、翻料，溫度控制28℃±2℃,pH值5.0以上，經(jīng)烘干，粉碎、包裝。4.4外觀與性狀應符合表1規(guī)定。4.5粒度標準篩20目（孔徑0.85mm）通過率為99.0%。4.6質量指標應符合表2的規(guī)定。粗灰分/%粗蛋白/%非蛋白氮/%揮發(fā)性鹽基氮/（mg/100g）18種氨基酸總量/%甘露聚糖總量/%酵母細胞壁甘露聚糖/%4T/AHSX15—20244.7衛(wèi)生指標衛(wèi)生指標應符合表3的要求，其他未標明指標，應符合GB13078的規(guī)定?！?.55取樣按GB/T14699.1的規(guī)定執(zhí)行。6試驗方法6.1外觀與性狀取適量試樣置于清潔、干燥的白色背景板上，在非陽光直射條件下觀察其色澤和形態(tài)，并嗅其氣味。6.2粒度按GB/T5917.1規(guī)定執(zhí)行。6.3水分按GB/T6435規(guī)定執(zhí)行。6.4粗灰分按GB/T6438規(guī)定執(zhí)行。6.5粗纖維按GB/T6434規(guī)定執(zhí)行。6.6粗蛋白按GB/T6432規(guī)定執(zhí)行。6.7非蛋白氮按GB/T21704規(guī)定執(zhí)行。6.8揮發(fā)性鹽基氮按GB/T32141規(guī)定執(zhí)行。6.9酵母細胞壁甘露聚糖按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。5T/AHSX15—20246.10甘露聚糖總量按NY/T3477規(guī)定執(zhí)行。6.1118種氨基酸總量按GB/T18246規(guī)定執(zhí)行。6.12黃曲霉毒素B1按GB/T17480規(guī)定執(zhí)行。6.13玉米赤霉烯酮按GB/T19540規(guī)定執(zhí)行。6.14脫氧雪腐鐮刀菌烯醇按GB/T30956規(guī)定執(zhí)行。6.15其他衛(wèi)生指標按GB13078規(guī)定執(zhí)行。6.16凈含量按JJF1070規(guī)定執(zhí)行。7檢驗規(guī)則7.1組批以相同原料、相同生產工藝、連續(xù)生產或同一班次生產的同一規(guī)格的產品為一批，每批產品不得超過1000t。7.2出廠檢驗出廠檢驗包括外觀與性狀、水分、粗蛋白質、粗灰分和黃曲霉毒素B1。7.3型式檢驗型式檢驗項目為第4章規(guī)定的全部要求。產品正常生產時，型式檢驗每半年至少進行一次，有下列情況之一時，應進行型式檢驗：a)產品定型正式投產時；b)生產工藝、配方或主要原料有較大變動時；c)停產3個月以上，恢復生產時；d)出廠檢驗結果與上次型式檢驗結果有較大差異時；e)飼料行政管理部門提出檢驗要求時。7.4判定規(guī)則7.4.1所檢項目的檢驗結果均與本文件規(guī)定一致，則判定該批次產品合格。7.4.2檢驗結果中有任何指標不符合本文件規(guī)定時，可自同批產品中重新加倍取樣進行復檢。復檢結6T/AHSX15—2024果即使有一項指標不符合本文件規(guī)定，則判定該批產品不合格。微生物指標不得復檢。7.4.3檢測結果判定的允許誤差按GB/T18823的規(guī)定執(zhí)行。7.4.4各項指標的極限數(shù)值判定按GB/T8170中修約值比較法執(zhí)行。8標簽、包裝、運輸、貯存及保質期8.1標簽按GB10648的規(guī)定執(zhí)行。8.2包裝包裝材料應清潔、衛(wèi)生、無毒、無污染，包裝應完好、防潮。8.3運輸運輸工具應清潔、衛(wèi)生、防曬、防雨淋，不得與有害物質混裝、混運，避免包裝破損。8.4貯存應貯存于干燥、通風、無鼠害、無蟲害、無污染的地方，避免陽光直射及露天堆放。8.5保質期未開啟包裝的產品，在本文件規(guī)定的運輸、貯存條件下，產品保質期應與標簽中標明的保質期一致。7T/AHSX15—2024（規(guī)范性）釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖含量的測定高效液相色譜A.1原理樣品經(jīng)酸水解，使甘露聚糖轉化為甘露糖，以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮為衍生劑進行衍生，經(jīng)高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，外標法進行定量。將測得的甘露糖含量通過轉化系數(shù)校正，計算得到甘露聚糖的含量。A.2試劑A.2.1試驗用水：應符合GB/T6682中一級水的規(guī)定。A.2.2濃鹽酸（HCl分析純。A.2.3氫氧化鈉（NaOH分析純。A.2.4二氯甲烷（CH2Cl2分析純。A.2.5甲醇(CH3OH)：色譜純。A.2.6乙腈（CH3CN色譜純。A.2.7乙酸銨（CH3COONH4色譜純。A.2.81-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O分析純。A.3試劑配制A.3.1氫氧化鈉溶液（6mol/L）稱取120g氫氧化鈉（精確至0.01g），緩緩加入盛有200mL～300mL水的燒杯中，使其完全溶解，待溶液冷卻后，移至500mL容量瓶中，定容。A.3.2氫氧化鈉溶液（0.3mol/L）稱取6g氫氧化鈉（精確至0.01g），緩緩加入盛有200mL～300mL水的燒杯中，使其完全溶解，待溶液冷卻后，轉移至500mL容量瓶中，定容。A.3.3鹽酸溶液（0.3mol/L）移取12.5mL鹽酸（精確至0.01mL），緩緩加入盛有200mL～300mL水的燒杯中，待溶液冷卻后，轉移至500mL容量瓶中，定容。A.3.41-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液（0.5mol/L）稱取4.35g的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液，用甲醇溶解，定容至50mL，即配即用。A.3.5乙酸銨溶液（0.1mol/L）稱取7.708g的乙酸銨，加入適量水溶解，定容至1000mL，過0.22μm的濾膜后備用。A.4標準品8T/AHSX15—2024甘露糖（C6H12O6，CAS號3458-28-4）：純度≥98%，或經(jīng)國家認證授予標準物質證書的標準物質。A.5甘露糖標準溶液A.5.1標準儲備溶液（1000mg/L）稱取甘露糖標準品0.05g（精確至0.0001g用水溶解并定容至50mL容量瓶中，搖勻，保存恒溫于4℃標準儲存柜內，有效期為7d，使用前放置至室溫。A.5.2標準中間溶液（100mg/L）移取5mL標準儲備溶液（A.5.1）于50mL容量瓶中，用水定容。即配即用。A.5.3系列標準工作溶液分別移取標準中間溶液（A.5.2）0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于10mL容量瓶中，用水定容，得到質量濃度分別為5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、30.00μg/mL、40.00μg/mL和50.00μg/mL的系列標準工作溶液。即配即用。A.6材料A.6.1三角瓶：150mL，配留有氣孔的膠塞。A.6.2塑料離心管：15mL，50mL，帶螺口蓋。A.6.3濾膜：0.22μm，水系。A.6.4pH精密試紙：pH范圍為5.5～9.0。A.6.5定量濾紙。A.7儀器A.7.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。A.7.2分析天平：感量0.0001g和0.001g。A.7.3離心機：轉速≥8000r/min。A.7.4高壓滅菌鍋：工作壓力0.2MPa～0.4MPa，工作溫度121℃~134℃,控溫精度±0.1℃。A.7.5恒溫水浴鍋：控溫精度±0.1℃。A.7.6渦旋振蕩器。A.8樣品制備取不少于200g樣品，粉碎使其完全通過0.425mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中，備用。A.9試驗步驟A.9.1水解準確稱取0.5g～1.0g試樣（確至0.0001g）于50mL塑料離心管中，加入6mL鹽酸（A.2.2），旋緊離心管蓋，于渦旋振蕩器上渦旋2min，充分浸潤混勻，全部轉入150mL三角瓶中，用50mL水分數(shù)次清洗離心管，清洗液并入三角瓶中，塞上瓶口塞，置于高壓滅菌鍋121℃水解60min。取出冷卻至室溫，使用氫氧化鈉水溶液（A.3.1和A.3.2）調水解液pH至中性，轉移水解液至100mL容量瓶中，用水定容。取適量水解液過濾，濾液備用。高甘露聚糖含量試樣，過濾液需適當用水稀釋后備用。9T/AHSX15—2024A.9.2衍生A.9.2.1吸?。ˋ.9.1）濾液400μL于15mL塑料離心管中，加入0.5mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液（5.2.4）、0.3mol/L氫氧化鈉溶液（A.3.2）各400μL，充分混勻，于70℃水浴衍生化反應60min。取出冷卻至室溫，加入0.3mol/L鹽酸溶液（A.3.3）500μL，混勻。加入2.5mL二氯甲烷，渦旋30s，3000r/min離心5min，棄去下層二氯甲烷相，上層水相使用2.5mL二氯甲烷重復萃取3次，最后取上層水相，過0.22μm濾膜，待測定。A.9.2.2同樣方法對系列標準工作溶液(A.5.3)進行衍生化處理。A.9.3測定A.9.3.1色譜條件色譜條件應滿足：——色譜柱：C18柱，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm；或性能相當者；——柱溫：35℃;——檢測波長：250nm；——進樣量：20μL；——流動相：A為0.1mol/L乙酸銨溶液（A.3.5B為乙腈（A.2.6——流動相流速：1.0mL/min。流動相洗脫參考程序見表A.1。表A.1流動相洗脫參考程序00A.9.3.2標準曲線的制作將經(jīng)衍生化處理后的系列標準工作溶液在上述色譜條件下準確進樣20μL，以系列標準工作溶液（A.5.3）濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。標準溶液衍生色譜圖見附錄B中圖B.1。A.9.3.3試樣溶液的測定A.9.3.3.1定性分析：將經(jīng)衍生化處理后的樣品水解液,在上述色譜條件下準確進樣20μL，同樣測試條件下，試樣溶液中目標物的保留時間與標準工作溶液中甘露糖衍生物的保留時間相比，偏差應在±2.5%范圍內。樣品水解液衍生色譜圖見附錄B中圖B.2。A.9.3.3.2定量檢測：在定性分析的基礎上，將得到的峰面積代入標準曲線方程，計算得最終試樣溶液中甘露糖的質量濃度。A.10試驗數(shù)據(jù)處理試樣中甘露聚糖的含量按公式（A.1）計算：T/AHSX15—2024式中：X——甘露聚糖含量；P