《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊三-3 外植體的選擇與處理

項目三

無菌操作技術(shù)任務(wù)三外植體的選擇與處理任務(wù)二無菌操作技術(shù)任務(wù)一虛擬無菌操作無菌操作任務(wù)三外植體的選擇與處理知識目標(biāo)學(xué)會處理各種外植體的方法和操作流程；學(xué)會外植體的培養(yǎng)方法；掌握外植體的培養(yǎng)過程。123掌握外植體的選擇方法；熟練掌握外植體的滅菌方法和無菌操作技術(shù)；學(xué)會外植體的培養(yǎng)過程

123技能目標(biāo)第一節(jié)外植體的選擇和處理第二節(jié)培養(yǎng)和馴化任務(wù)講解第一節(jié)外植體的選擇和處理一、外植體選擇時應(yīng)注意：（1）選擇優(yōu)良的種質(zhì)及母株（2）選擇適當(dāng)?shù)臅r期（3）選取適宜的大?。?）外植體來源要豐富（5）外植體要易于消毒二、外植體取材的部位：（1）莖尖莖尖不僅生長速度快，繁殖率高，不容易發(fā)生變異，而且莖尖培養(yǎng)是獲得脫毒苗木的有效途徑。因此莖尖是植物組織培養(yǎng)中最常用的外植體。（2）節(jié)間部大部分果樹和花卉等植物，新梢的節(jié)間部是組織培養(yǎng)的較好材料。新梢節(jié)間部位不僅消毒容易，而且脫分化和再分化能力較強(qiáng)，因此是常用組織培養(yǎng)材料。（3）葉和葉柄葉片和葉柄取材容易，新出的葉片雜菌較少，實驗操作方便，是植物組織培養(yǎng)中常用的材料。尤其是近年在植物的遺傳轉(zhuǎn)化中，以葉片為試驗材料的報道很多。（4）鱗片水仙、百合、蔥、蒜、風(fēng)信子等鱗莖類植物常以鱗片為材料。（5）其他種子、根、塊莖、塊根、花粉等也可以作為植物組織培養(yǎng)的材料。三、外植體處理：

首先，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細(xì)洗干凈，如用適當(dāng)?shù)乃⒆拥人⑾?。把材料切割成適當(dāng)大小，即滅菌容器能放人為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準(zhǔn)備好消毒的燒杯、70％酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70％酒精浸10-30s。第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1-2種使用。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次1-3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-10次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細(xì)胞的副作用。第五步接種。接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官，經(jīng)切割或剪裁成小段或小塊，放人培養(yǎng)基的過程。第二節(jié)培養(yǎng)和馴化

指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室(有光照、溫度條件)里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進(jìn)一步分化成再生植株的過程。

1．培養(yǎng)方法(1)固體培養(yǎng)法即用瓊脂固化培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料的方法。是現(xiàn)在最常用的方法。雖然該方法設(shè)備簡單，易行，但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。1培養(yǎng)方法(2)液體培養(yǎng)法即用不加固化劑的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方法。由于液體中氧氣含量較少，所以通常需要通過攪動或振動培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供給，采用往復(fù)式搖床或旋轉(zhuǎn)式搖床進(jìn)行培養(yǎng)，其速度一般為50-100r／min，這種定期浸沒的方法，既能使培養(yǎng)基均一，又能保證氧氣的供給。1.初代培養(yǎng)◆2.繼代培養(yǎng)◆3.生根培養(yǎng)◆培養(yǎng)步驟2．培養(yǎng)步驟2．培養(yǎng)步驟叢生芽的發(fā)育Ⅰ頂芽腋芽微型扦插叢生芽的發(fā)育Ⅱ頂芽CTK刺激帶芽的莖切段側(cè)芽接種培養(yǎng)形成的莖梢節(jié)長，直立向上呈小灌木叢狀獲得較多嫩莖梢莖段培養(yǎng)繼代擴(kuò)繁試管苗生根培養(yǎng)無愈傷組織產(chǎn)生初代繼代叢生芽的發(fā)育2不定芽的發(fā)育脫分化分化愈傷組織芽、芽叢切割芽叢繼代培養(yǎng)大量芽叢試管苗生根培養(yǎng)外植體初代繼代不定芽的發(fā)育石龍芮下胚軸培養(yǎng)產(chǎn)生胚狀體過程體細(xì)胞胚狀體的發(fā)育Ⅰ體細(xì)胞胚狀體的發(fā)育1體細(xì)胞胚狀體的發(fā)育Ⅱ

外植體特點：數(shù)量多，速度快，結(jié)構(gòu)完整，成苗率高愈傷組織小孢子游離單細(xì)胞器官

胚狀體

試管苗體細(xì)胞胚狀體的發(fā)育2原球莖的發(fā)育

縮短的、呈珠粒狀的、由胚性細(xì)胞組成的、類似嫩莖的器官。原球莖的發(fā)育視頻視頻3-5初代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)擴(kuò)繁方法：以幾何級數(shù)增加，可切割莖段、分離芽叢、胚狀體、原球莖。培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基或分化培養(yǎng)基實質(zhì)：增殖培養(yǎng)物，為生產(chǎn)成品試管苗做準(zhǔn)備。繼代培養(yǎng)目的：擴(kuò)繁無根苗，最后達(dá)到邊繁殖邊生根視頻3-6繼代培養(yǎng)生根培養(yǎng)培養(yǎng)材料生根繼代培養(yǎng)初代培養(yǎng)生根培養(yǎng)基：1／2或1／4MS培養(yǎng)基生根方法與途徑新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h在含IAA培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6d移入含IAA的生根培養(yǎng)基培養(yǎng)其它方法(濾紙橋等）生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)視頻視頻3-7生根培養(yǎng)任務(wù)小結(jié)外植體的取材部位較多，應(yīng)合理選擇；應(yīng)選擇合適的消毒劑對外植體進(jìn)行處理；外植體