脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備規(guī)范

ICS07.080

CCSC04

團體標(biāo)準(zhǔn)

T/XXXXXXX—XXXX

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備規(guī)范

Specificationforisolationandpreparationofadipose-derivedstemcells

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

中國國際經(jīng)濟技術(shù)合作促進會發(fā)布

T/XXXXXXX—XXXX

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的術(shù)語和定義、基本要求、樣本采集、樣本運輸、樣本接收、分離

與培養(yǎng)、記錄、質(zhì)量控制以及質(zhì)量評價與放行。

本文件適用于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離制備與質(zhì)量控制。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

GB19489實驗室生物安全通用要求

GB/T37864生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求

GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范

GB50346生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范

GB50591潔凈室施工及驗收規(guī)范

3術(shù)語和定義、縮略語

術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1.1

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）adipose-derivedstemcells

是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。

3.1.2

供者donor

提供用于細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)用細(xì)胞的個體，可以是健康人，也可以是患者。

3.1.3

樣本specimen

在特定時間從受試者或捐獻者中采集的器官、組織等標(biāo)本。

3.1.4

潔凈區(qū)cleanzone

需要對環(huán)境中塵埃及微生物數(shù)量進行控制的房間（區(qū)域），其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用應(yīng)當(dāng)能夠減

少該區(qū)域內(nèi)污染物的引入、產(chǎn)生和滯留。

3.1.5

干細(xì)胞質(zhì)量控制stemcellqualitycontrol

為達到臨床級人間充質(zhì)干細(xì)胞入庫質(zhì)量要求所采取的操作技術(shù)和管理程序。

3.1.6

細(xì)胞活率cellviability

能夠增值、保持正常代謝活性的細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比。

3.1.7

臺盼藍trypanblue

1

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細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性，檢測細(xì)胞是否存活。

注：活細(xì)胞因細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整會排斥臺盼藍，而喪失活性或者細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完整的細(xì)胞則會被臺盼藍染成淡藍色。

3.1.8

丫啶橙acridineorang

一種熒光染料，該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。

3.1.9

碘化丙啶propidiumiodide

一種DNA結(jié)合性染料，無膜通透性，不能透過活細(xì)胞膜，只能染死細(xì)胞。

3.1.10

放行檢驗releasetesting

在干細(xì)胞已完成質(zhì)量檢驗的基礎(chǔ)上，對每種類型的每批次干細(xì)胞，在凍存入庫及出庫前所進行的相

對快速和簡化的檢驗。

縮略語

下列縮略語適用于本文件。

HAV：甲型肝炎病毒（HepatitisAVirus）

HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）

HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV：人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

HTLV：人類嗜T細(xì)胞病毒(HumanThymicLeukemiaVirus)

EBV：人類皰疹病毒（Epstein-barrVirus）

CMV：巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus）

PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerasechainreaction）

4基本要求

場地與設(shè)施

4.1.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機構(gòu)選址應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求，空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合

GB3095標(biāo)準(zhǔn)分級二級標(biāo)準(zhǔn)。

4.1.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機構(gòu)實驗室或廠房應(yīng)由具有潔凈實驗室設(shè)計建設(shè)資質(zhì)的工程公司設(shè)計與

建造，并應(yīng)符合GB19489、GB50073、GB50346和GB50591的規(guī)定。建設(shè)完成后，各功能區(qū)域的潔凈

級別應(yīng)由專業(yè)機構(gòu)進行檢測并出具合格證明。

4.1.3干細(xì)胞制備功能區(qū)應(yīng)按脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備工藝進行各區(qū)域設(shè)計，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理

規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求。干細(xì)胞制備機構(gòu)應(yīng)配備獨立質(zhì)量檢測實

驗室，并符合GB19489和GB50346的規(guī)定。

設(shè)備和耗材

4.2.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機構(gòu)應(yīng)優(yōu)先選用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量

控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，獲得國家資質(zhì)認(rèn)證的設(shè)備、儀器、耗材和試劑。

4.2.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機構(gòu)應(yīng)對設(shè)備、儀器、耗材和試劑供應(yīng)商進行資質(zhì)審核認(rèn)證，要求供

應(yīng)商提供產(chǎn)品質(zhì)量報告和批次檢驗報告，并對耗材及試劑進行質(zhì)量抽檢，避免采購質(zhì)量不合格的產(chǎn)品。

4.2.3脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機構(gòu)設(shè)備和儀器正式使用前應(yīng)做安裝確認(rèn)(IQ)、運行確認(rèn)（OQ）和性

能確認(rèn)(PQ)，并定期進行第三方校準(zhǔn)，不得使用有安全隱患的儀器操作樣本及細(xì)胞制品。

4.2.4脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機構(gòu)應(yīng)對設(shè)備與儀器進行編號建檔，并建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程(SOP)，確保

使用、運行、保養(yǎng)、維修記錄完整可追溯，對于關(guān)鍵工藝相關(guān)設(shè)備參數(shù)應(yīng)進行實時監(jiān)測，及時對狀態(tài)異

常的設(shè)備進行校對和維修。

人員管理

4.3.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機構(gòu)應(yīng)分別設(shè)立干細(xì)胞制備負(fù)責(zé)人、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人和質(zhì)量授權(quán)人崗位。

由法人授權(quán)任命，任職資質(zhì)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指

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導(dǎo)原則》要求，定期接受崗位專業(yè)培訓(xùn)，制備技術(shù)負(fù)責(zé)人與質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人、質(zhì)量授權(quán)人不得相互兼任。

4.3.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)具備的健康要求：HAV、HBV、HCV、HIV及梅毒的抗體

檢測應(yīng)為陰性，并且(矯正)視力正常，無色盲、色弱。

4.3.3脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)半年接受體檢一次，有呼吸道感染或發(fā)熱等疾病狀態(tài)

下不得進入潔凈操作區(qū)，需完全康復(fù)后方可恢復(fù)崗位操作。

4.3.4脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員上崗前應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，內(nèi)容包括但不限于干細(xì)胞理論

與實踐、生命倫理、干細(xì)胞法律法規(guī)、GMP管理、GCP資質(zhì)、制劑基本知識、細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)、生物安全、

儀器設(shè)備使用與維護方法、物料管理與清潔衛(wèi)生、崗位職責(zé)、操作規(guī)范等內(nèi)容。

5樣本采集

基本原則

5.1.1脂肪樣本采集與處理應(yīng)符合GB/T37864的要求。

5.1.2采集和處理程序可供樣本采集人員使用。

5.1.3應(yīng)具備相關(guān)的資質(zhì)和設(shè)施環(huán)境。

5.1.4應(yīng)通過倫理審查批準(zhǔn)并履行知情同意程序。

5.1.5應(yīng)建立適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量管理體系確保符合用戶需求并持續(xù)改進。

供者健康

5.2.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞采集制備方應(yīng)對干細(xì)胞供者的基本信息與健康信息進行詳細(xì)采集與記錄，同

時做好對供者的隱私保護，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。

5.2.2干細(xì)胞供者應(yīng)無血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤史、性傳播疾病及高危人群史、吸

毒史，不應(yīng)具有包括但不限于以下疾病或健康狀況：

a)一般傳染性疾病或其他遺傳疾?。篐IV、HBV、HCV、梅毒、HTLV、EBV與CMV抗體與核酸檢測

應(yīng)為陰性；

b)傳染性皮膚病(未治愈的)；

c)大面積皮膚損傷(未治愈的)；

d)鼻/咽喉傳染病(未治愈的)。

e)采集前12個小時內(nèi)用過酒精，鎮(zhèn)靜藥等。

采集場所

脂肪的采集場所應(yīng)達到Ⅲ級潔凈手術(shù)室要求。

采集人員

采集人員應(yīng)具有醫(yī)師職業(yè)證，且經(jīng)過相應(yīng)的技術(shù)培訓(xùn)。

采集流程

5.5.1信息填寫

5.5.1.1采集人員應(yīng)按照要求填寫個人信息，個人信息表應(yīng)包括但不限于：姓名、性別、有效身份證

件、聯(lián)系方式、緊急聯(lián)絡(luò)人、住址等。

5.5.1.2采集人員在采集前填寫健康調(diào)查表。

5.5.2采集前準(zhǔn)備

5.5.2.1脂肪組織采集前應(yīng)由醫(yī)師制定抽脂方案和術(shù)前術(shù)后的防感染措施。

5.5.2.2應(yīng)確定供者身體健康，精神狀態(tài)良好。

5.5.2.3應(yīng)保持供者的血壓、血糖控制在較好的范圍內(nèi)。

5.5.2.4采集前的三天內(nèi)應(yīng)停用抗凝藥、激素、阿司匹林、維生素E等。

5.5.2.5采集術(shù)前兩天應(yīng)清淡飲食，合理安排作息時間。

5.5.2.6采集前應(yīng)對客戶進行身體檢查，包括但不限于：病毒全套、血常規(guī)、凝血系列、心電圖等。

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5.5.3耗材器械確認(rèn)

采集人員應(yīng)按照采集套裝清單核查器材種類和數(shù)量，一次性使用物品在有效期內(nèi)且包裝完好。采脂

肪前應(yīng)對采集器材進行復(fù)核，復(fù)核內(nèi)容主要包括：

——手術(shù)包：無破損、無滲漏、無污染，處于有效期內(nèi)；

——消毒劑：

?一般選用含碘消毒液，對碘過敏者可選用其他消毒劑；

?應(yīng)處于有效期內(nèi)；

?應(yīng)標(biāo)明啟用日期；

——采集容器上均已粘貼供者識別碼。

5.5.4采集過程

由醫(yī)師行脂肪抽吸術(shù)，抽取脂肪組織，置于無菌采集瓶中，密封保存，并粘貼條形碼作為唯一標(biāo)識。

5.5.5采集后注意事項

5.5.5.1采集后盡量平躺休息30分鐘。

5.5.5.2采集后一周建議溫水擦浴，傷口不要碰水。

5.5.5.3采集后三天內(nèi)禁止飲酒，飲食以清淡為主。

5.5.5.4建議使用收腹帶，以利于手術(shù)區(qū)膨脹液的回收和皮膚回縮，根據(jù)局部情況隨時調(diào)整腹帶。

5.5.5.5保持心情舒暢，合理飲食，作息時間規(guī)律。

5.5.5.6特殊情況（如感染、血腫、疼痛等）及時復(fù)診。

6樣本運輸

一般要求

6.1.1樣本運輸人員應(yīng)是經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)合格的人員，對樣本運輸應(yīng)制定規(guī)范及應(yīng)急預(yù)案，并對樣本運

輸全程做記錄，包括但不限于運輸?shù)姆绞健l件、路徑、時間、人員、地址及樣本信息，相關(guān)記錄入檔

保留至少30年。

6.1.2樣本運輸應(yīng)采用平穩(wěn)、安全、快速的運輸途徑，宜采用冷藏運輸車或?qū)Ｓ脴?biāo)本冷藏運輸箱運輸。

6.1.3運輸過程中應(yīng)防滲漏、防輻射、抗震動、耐壓、耐熱等，樣本包裝應(yīng)貼上條形碼作為唯一標(biāo)識。

6.1.4樣本運輸溫度應(yīng)維持在2℃～8℃，運輸時間不超過12小時。

運輸箱

運輸箱應(yīng)有相應(yīng)的標(biāo)識，標(biāo)識內(nèi)容應(yīng)完整、清晰，標(biāo)識至少包括以下內(nèi)容：

——采集機構(gòu)名稱及聯(lián)系方式；

——最大承重量；

——放置方向、防摔、防曬、防雨標(biāo)識；

——最多疊放層數(shù)；

——樣本的品名、運輸起始地和目的地、樣本保存溫度；

——生物危害標(biāo)識；

——禁止輻射標(biāo)識。

質(zhì)量監(jiān)控

6.3.1樣本運輸過程中應(yīng)有可供追溯的記錄，記錄應(yīng)包括下列內(nèi)容：

——品名、數(shù)量、規(guī)格；

——狀態(tài)是否正常；

——運輸?shù)氖及l(fā)地和目的地；

——采集機構(gòu)交接人、時間和日期；

——運輸承接人、時間和日期；

——運輸方式和運輸箱編號及溫度狀態(tài)；

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——運輸箱的外觀和標(biāo)識是否完整。

6.3.2運輸前應(yīng)檢查冷藏運輸箱及控溫設(shè)備的性能和運行狀態(tài)是否符合要求。

6.3.3運輸設(shè)備應(yīng)定期進行監(jiān)控和評估：

a)溫度：隨機抽取運輸箱進行腔體空載和滿載條件下的測定，確認(rèn)其滿足性能要求；

b)微生物：對箱體的內(nèi)壁進行取樣開展微生物培養(yǎng)，不得檢出致病性的微生物。

6.3.4運輸過程的記錄應(yīng)放入樣本檔案，保存至樣本使用或銷毀后10年以上。

7樣本接收

樣本接收人員應(yīng)是經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)合格的人，應(yīng)遵從安全與準(zhǔn)確的原則對樣本接收制定規(guī)范及應(yīng)急

預(yù)案，并對樣本接收過程進行記錄，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。

樣本接收時，接收人員應(yīng)做好自我防護工作，接觸樣本之前應(yīng)佩戴手套與口罩，并對接收場所進

行消毒。

接收樣本后應(yīng)先觀察樣本容器外包裝的外觀，檢查有無破損。

檢查外觀后，工作人員應(yīng)檢查樣本采集信息記錄表是否齊全，同時確認(rèn)記錄表上信息是否填寫完

整，檢查信息記錄表信息是否與樣本信息一一對應(yīng)，樣本及記錄表上應(yīng)貼有一致對應(yīng)的條形碼，做到樣

本與供者信息相對應(yīng)，確認(rèn)無誤后進行接收。

樣本接收后，使用75%醫(yī)用酒精消毒清理容器外表面，如不能及時對樣本進行處理，需把樣本保

存在2℃～8℃條件下，最長時間不超過12小時。

樣本量應(yīng)能夠滿足制備和檢測的最低要求。

樣本接收后應(yīng)及時將信息反饋給樣本發(fā)送方。

間充質(zhì)干細(xì)胞制備方應(yīng)制定樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)，按照樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)處理樣本，并及時通知有關(guān)部門或

負(fù)責(zé)人，同時做好相應(yīng)記錄。

8分離與培養(yǎng)

基本要求

8.1.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨

慶前研究指導(dǎo)原則》要求的車間內(nèi)進行。

8.1.2所有操作應(yīng)事先制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，由經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)的技術(shù)人員嚴(yán)格遵照執(zhí)行，并進行記錄登記，相

關(guān)記錄入檔保留至少30年。

8.1.3分離與培養(yǎng)過程中應(yīng)標(biāo)識干細(xì)胞的名稱、代次、批次、操作日期、培養(yǎng)條件、操作人員姓名等

信息。

8.1.4所使用試劑應(yīng)采用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》、《中華人民共和國藥典》和《干細(xì)胞制劑

質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求的藥品輔料或已獲批的藥品，應(yīng)出具產(chǎn)品質(zhì)檢合格報告，并對各

批次試劑進行質(zhì)量抽檢。

8.1.5應(yīng)避免人源或動物源性血清及蛋白，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，

應(yīng)確保其無特定動物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。

分離前準(zhǔn)備工作

8.2.1環(huán)境確認(rèn)：潔凈室和潔凈工作臺或生物安全柜應(yīng)使用紫外燈滅菌30分鐘，并啟動凈化風(fēng)機和空

調(diào)系統(tǒng)自凈20分鐘以上。

8.2.2工作人員核對樣本與采集信息內(nèi)容一致性，用75%的乙醇對采集瓶外表面自下而上進行清潔消

毒，并放置傳遞窗自凈15分鐘后，傳入分離、處理區(qū)域。

8.2.3物料準(zhǔn)備：取出所需的試劑及耗材放置物料推車上，放置于潔凈化工作臺或生物安全柜旁邊，

待用。核查確認(rèn)所用試劑及耗材的批號及是否在有效期內(nèi)。

8.2.4培養(yǎng)液準(zhǔn)備：自配培養(yǎng)液使用前確認(rèn)微生物培養(yǎng)72小時以上結(jié)果為陰性；商品化的細(xì)胞培養(yǎng)液

使用前應(yīng)核查確認(rèn)合格證和有效期。

分離與培養(yǎng)方法

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成人脂肪組織剪碎至糜狀，以膠原酶消化法分離脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。采用貼壁法進行人脂肪間充質(zhì)

干細(xì)胞原代培養(yǎng)。

細(xì)胞換液

8.4.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞換液操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及

臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進行記錄并入檔保存至少30年。

8.4.2換液時間及頻次應(yīng)根據(jù)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生長情況及培養(yǎng)基狀態(tài)進行判斷，以保障脂肪間充質(zhì)

干組胞生長所需營養(yǎng)物質(zhì)水平，并消除代謝物毒害作用。

8.4.3換液操作時吸棄培養(yǎng)瓶中原有的部分或全部培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液。首次換液需要在鏡下

觀察到原代細(xì)胞完全貼壁和延展后方可進行。

8.4.4培養(yǎng)基成分應(yīng)符合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)基本要求，盡量采用已獲國家批準(zhǔn)的臨床級產(chǎn)

品或藥品輔料。

細(xì)胞傳代

8.5.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞傳代操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及

臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進行記錄并入檔保存至少30年。

8.5.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞一般情況在達到80%～90%融合度可講行傳代操作，傳代操作應(yīng)密度適宜、及

時，迅速。

8.5.3傳代所使用消化酶應(yīng)符合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國家已批準(zhǔn)的臨

床級產(chǎn)品。如必須使用動物源性消化酶，應(yīng)確保其無特定動物源性病毒污染。

細(xì)胞凍存

8.6.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞凍存操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及

臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進行記錄并入檔保存至少30年。

8.6.2經(jīng)制備數(shù)量達到凍存要求的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞系可進行凍存操作，凍存細(xì)胞應(yīng)加入適當(dāng)?shù)膬龃?/p>

保護液，遵循程序降溫原則，并在液氮中進行保存。

8.6.3凍存液成分應(yīng)符合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國家已批準(zhǔn)的臨床級產(chǎn)

品或藥品輔料，二甲基亞砜含量不得超過10%，如必須使用動物源性血清，應(yīng)確保其無特定動物源性

病毒污染，嚴(yán)禁使用海綿狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。

8.6.4凍存細(xì)胞應(yīng)標(biāo)明干細(xì)胞名稱、培養(yǎng)條件、代次、批次、操作人員、凍存日期等信息，并具有唯

一標(biāo)識。

8.6.5液氮凍存應(yīng)使用符合要求的液氮容器，氣相凍存，由專人負(fù)責(zé)，保證液氮充足，溫度恒定。

穩(wěn)定性考察

8.7.1細(xì)胞庫應(yīng)依據(jù)儲存的干細(xì)胞產(chǎn)品的特性，制定年度的儲存細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定性考察方案和計劃，并

制定穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

8.7.2穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括但不限于以下內(nèi)容：

a)凍存容器完整性和密閉性；

b)細(xì)胞活率；

c)微生物培養(yǎng)；

d)細(xì)胞凍存復(fù)蘇回收率；

e)細(xì)胞表面標(biāo)記物表達；

f)細(xì)胞生物學(xué)效力。

8.7.3脂肪干細(xì)胞在凍存后1周復(fù)蘇存活率不應(yīng)低于80%，1年復(fù)蘇存活率不應(yīng)低于60%。

8.7.4常規(guī)每年至少執(zhí)行一次穩(wěn)定性考察計劃，如遇特殊情況（例如液相液氮罐故障）可臨時性增加

穩(wěn)定性考察計劃。

8.7.5應(yīng)對年度性的穩(wěn)定性考察結(jié)果進行趨勢分析，便于監(jiān)測細(xì)胞儲存的連續(xù)穩(wěn)定性并改進細(xì)胞儲存

工藝。

9記錄

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T/XXXXXXX—XXXX

原始記錄應(yīng)確保其可追溯細(xì)胞分離、處理和儲存操作所有環(huán)節(jié)，記錄內(nèi)容包含但不限于以下信息：

a)供者身份號碼；

b)產(chǎn)品描述碼、采集類型和分類碼；

c)產(chǎn)品名稱和組分；

d)供者唯一身份辨識符，如果適用；

e)采集日期和時間；

f)生產(chǎn)制備機構(gòu)的名稱和地址；

g)制備、保存、凍存中關(guān)鍵步驟的細(xì)節(jié)及結(jié)果；

h)關(guān)鍵步驟的日期和時間，如果適用；

i)每一步驟的操作人員姓名；

j)在分離、處理、凍存、儲存過程中使用的關(guān)鍵物料的名稱、生產(chǎn)商、批號、有效期限；

k)使用試劑的數(shù)量；

l)使用設(shè)備編碼。

記錄的審核：應(yīng)對記錄的準(zhǔn)確性和完整性以及標(biāo)準(zhǔn)、法律法規(guī)的符合性進行審核。

記錄的保存：記錄應(yīng)歸檔于受控區(qū)域進行保存，確保整個保存期間記錄的清晰和完整性，并應(yīng)避

免意外或非授權(quán)的調(diào)閱、丟失、損壞、破壞、混淆或篡改。

記錄的修改：機構(gòu)應(yīng)建立并保持合適的記錄修改程序。記錄修改人的簽名及日期應(yīng)記錄下來；修

改前的記錄內(nèi)容應(yīng)清晰可辨認(rèn)。

隱私保護：應(yīng)建立保密機制，確保供者、員工信息的保密性。

記錄保存期限：文件記錄是要保存至細(xì)胞應(yīng)用或處理后20年。

10質(zhì)量控制

質(zhì)控內(nèi)容

10.1.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞安全性

10.1.1.1無菌檢測

參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則1101無菌檢測法執(zhí)行，對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采

集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液

等）檢測。細(xì)菌和真菌檢測結(jié)果都應(yīng)為陰性。

10.1.1.2支原體檢測

參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則3301支原體檢測法執(zhí)行，對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞樣本

采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存

液等）檢測。支原體檢測結(jié)果都應(yīng)為陰性。

10.1.1.3細(xì)胞內(nèi)外源致病因子檢測

采用血清ELISA檢測法或核酸檢測法，對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、

復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液、細(xì)胞等）檢測。HIV抗體、HBsAg、

HCV抗體、TP抗體、CMV-IgM、HTLV抗體、HPV抗體、HHV抗體、EBV抗體檢測應(yīng)為陰性；HCV、HBV、HIV病

毒核酸檢測應(yīng)為陰性。

10.1.1.4內(nèi)毒素檢測

參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢測法執(zhí)行，對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

樣本采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、

凍存液等）檢測。各類樣本中的內(nèi)毒素檢測值應(yīng)≤0.5EU/mL。

10.1.1.5異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測

7

T/XXXXXXX—XXXX

采用流式細(xì)胞術(shù)以及ELISA技術(shù)測定脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對不同

淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響，以及對淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響。淋巴細(xì)胞亞群應(yīng)無異常增殖，

細(xì)胞因子表達水平應(yīng)無異常增加。

10.1.1.6致瘤性檢測

采用免疫缺陷動物（裸鼠或SCID鼠），通過局部或靜脈方式接種脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，評價脂肪間充

質(zhì)干細(xì)胞致瘤性。體內(nèi)致瘤試驗嚴(yán)格遵照動物倫理要求執(zhí)行，單只小鼠接種脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量≥106

細(xì)胞/kg，觀察期≥12周。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)無致瘤性。

10.1.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞穩(wěn)定性

10.1.2.1細(xì)胞數(shù)量和活率檢測

選用血球細(xì)胞計數(shù)板或細(xì)胞計數(shù)儀進行細(xì)胞計數(shù)，將待檢測細(xì)胞使用臺盼藍或A0/PI熒光染料染

色，讀取細(xì)胞數(shù)并計算活率。各代數(shù)及批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞活細(xì)胞比例≥90%。

10.1.2.2生長活性檢測

通過檢測細(xì)胞倍增時間、細(xì)胞周期、克隆形成率以及端粒酶活性對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生長活性進行

測定，各代數(shù)及批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)處于指數(shù)生長期，GO期細(xì)胞數(shù)≤10%，具有端粒酶活性。

10.1.2.3細(xì)胞純度和均一性檢測

采用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物流式檢測以及人基因組DNA短片段重復(fù)序列(STR)測序進行檢定。

各代數(shù)及批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物表達應(yīng)符合流式檢測比例要求，單一細(xì)胞系的脂肪間充質(zhì)

干細(xì)胞各代次及批次細(xì)胞STR檢測結(jié)果應(yīng)保持一致。

10.1.3脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特征

10.1.3.1細(xì)胞形態(tài)檢測

顯微鏡下觀察，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長，呈梭形或星狀外觀，形態(tài)均一。

10.1.3.2細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測

采用流式細(xì)胞術(shù)進行測定，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD73、CD90、CD105陽性率不低于95%；CD14、

CD31、CD34、CD45、HLA-DR陽性率不高于5%。

10.1.3.3分化能力檢測

采用體外條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)下，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)能夠分化為成脂肪、骨、軟骨細(xì)胞。成脂分

化經(jīng)油紅0染色法鑒定，成骨分化經(jīng)茜素紅染色法鑒定，成軟骨分化經(jīng)阿爾辛藍染色法鑒定。

10.1.3.4染色體核型檢測

采用G帶分析法進行測定，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞染色體數(shù)量為46(含XX/XY)，無染色體缺失、異位和重

排現(xiàn)象。

10.1.3.5免疫調(diào)節(jié)功能檢測

采用ELISA技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)測定經(jīng)炎癥因子(IFN-γ與TNF-α)誘導(dǎo)后脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞中吲哚

胺2，3-雙加氧酶(IDO)的表達和功能，以及對于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對不同淋巴細(xì)胞亞群增

殖能力的影響。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)應(yīng)表達IDO，并可抑制人淋巴細(xì)胞增殖。

質(zhì)控分類

10.2.1批次質(zhì)量檢驗

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機構(gòu)應(yīng)對由同一供體、同一時間、使用同一工藝采集和分離獲得的干細(xì)胞進

行例行批次質(zhì)量檢驗。當(dāng)制備工藝、耗材、試劑、場地或規(guī)模等條件發(fā)生時，制備機構(gòu)應(yīng)對多批次干細(xì)

胞制劑進行質(zhì)量檢驗，確保工藝和質(zhì)量穩(wěn)定合格，記錄入檔保存至少30年。質(zhì)量控制檢測表參見附錄A。

8

T/XXXXXXX—XXXX

10.2.2放行質(zhì)量檢驗

每一批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制劑在臨床使用前應(yīng)在完成例行質(zhì)量檢驗的基礎(chǔ)上，由干細(xì)胞臨床研

究機構(gòu)質(zhì)檢平臺進行快速和簡化的質(zhì)量檢測，應(yīng)包括但不限于活率、細(xì)胞表型、細(xì)菌、病毒、支原體和

內(nèi)毒素含量等，確認(rèn)細(xì)胞合格后方可申請臨床放行使用。相關(guān)記錄報告應(yīng)入檔保存至少30年。

10.2.3復(fù)核質(zhì)量檢驗

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機構(gòu)應(yīng)對每一批次干細(xì)胞制劑單獨留樣保存，詳細(xì)記錄批號、代次、生產(chǎn)日

期、來源等信息。定期由國家或地方相關(guān)部門授權(quán)的專業(yè)細(xì)胞檢驗機構(gòu)或?qū)嶒炇疫M行脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

制劑的質(zhì)量復(fù)核檢驗，并出具檢驗報告，入檔保存至少30年。復(fù)核質(zhì)量檢驗報告出具時間應(yīng)在該批次脂

肪間充質(zhì)干細(xì)胞制劑提出放行申請之前，并作為放行檢驗參考。

11質(zhì)量評價與放行

質(zhì)量評價內(nèi)容

11.1.1供者健康篩查結(jié)果應(yīng)符合合格供者要求并簽署了知情同意書。

11.1.2脂肪及檢測標(biāo)本的采集和運輸符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

11.1.3脂肪及檢測標(biāo)本的接收、標(biāo)識以及暫存符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

11.1.4細(xì)胞分離、處理、檢測區(qū)域應(yīng)滿足操作要求，有潔凈要求的操作環(huán)境應(yīng)滿足相應(yīng)級別環(huán)境要求，

應(yīng)有定期環(huán)境監(jiān)控；細(xì)胞分離、處理各工序完畢后均應(yīng)及時清場；現(xiàn)場應(yīng)無污染及交叉污染，如有傳染

病原體或污染物，應(yīng)得到有效隔離或清除。

11.1.5細(xì)胞在分離、處理及檢測等過程中所涉及的人員均已通過考核合格后上崗。

11.1.6細(xì)胞分離、處理、檢測等所使用的設(shè)備應(yīng)符合設(shè)備管理要求（標(biāo)識清晰正確，在合格計量校驗

期內(nèi)定期維護保養(yǎng)等）；與細(xì)胞接觸的器械應(yīng)經(jīng)消毒滅菌并在有效期內(nèi)。

11.1.7細(xì)胞制備、檢測所用物料應(yīng)經(jīng)確認(rèn)來自合格供應(yīng)商，關(guān)鍵物料均應(yīng)經(jīng)抽樣檢測并確認(rèn)其質(zhì)量合

格。試劑及耗材的有效期應(yīng)在規(guī)定期限內(nèi)，批號應(yīng)按照要求記錄下來以便具有可追溯性。

11.1.8應(yīng)核對供者檢測報告，其內(nèi)容至少包括：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗

體（HCVAb）、梅毒螺旋體特異性抗體（Anti-TP）、人類免疫缺陷病毒I/Ⅱ型抗體（HIV-I/ⅡAb）和丙

氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）等，其余檢測項目全部符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。采集時間距制備時間在要求時限以

內(nèi)，無凝血現(xiàn)象，病原體檢測及篩查標(biāo)準(zhǔn)按照產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

11.1.9細(xì)胞分離、處理、檢測和過程監(jiān)控程序應(yīng)與機構(gòu)批準(zhǔn)的管理文件內(nèi)容一致。記錄填寫應(yīng)真實、

完整、正確，關(guān)鍵計算結(jié)果應(yīng)進行確認(rèn)。

11.1.10樣本在采集、運輸、制備、分離、凍存、發(fā)放過程中不存在任何重大偏差；若有偏差發(fā)生，

均應(yīng)通過合適的評價，并采取了有效的糾正措施。

11.1.11數(shù)量及包裝：裝量細(xì)胞數(shù)量與臨床需求一致；細(xì)胞包裝滿足運輸要求，細(xì)胞的內(nèi)、外包裝標(biāo)

簽內(nèi)容與公司規(guī)定內(nèi)容相符，經(jīng)雙人復(fù)核確認(rèn)其準(zhǔn)確性和完整性。

11.1.12異常事件調(diào)查：過程中若出現(xiàn)異常，應(yīng)進行調(diào)查處理，按調(diào)查處理意見執(zhí)行。異常處理的有

關(guān)記錄應(yīng)歸入對應(yīng)批次細(xì)胞制備檔案中。

11.1.13其他需要考慮的因素。

評價結(jié)論

11.2.1如果細(xì)胞質(zhì)量評價各項都符合第10章的要求，則視為合格品，可轉(zhuǎn)為長期儲存。

11.2.2如果細(xì)胞質(zhì)量評價未能滿足第10章的要求，則應(yīng)視為不合格品，不可使用。不合格品的處理

應(yīng)符合醫(yī)療廢棄物處理管理的相關(guān)規(guī)定，涉及傳染性病原體陽性、致病性微生物陽性的不合格品應(yīng)進行

滅活處理。

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T/XXXXXXX—XXXX

A

A

附錄A

（資料性）

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制檢測表

取樣樣品名稱檢測檢測人備注

檢測項目檢測內(nèi)容

時間點及數(shù)量結(jié)果信息信息

細(xì)胞形態(tài)采用顯微鏡進行鏡檢

細(xì)胞鑒別采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物

細(xì)胞活率臺盼藍拒染法檢測

采用細(xì)胞計數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和端粒酶酶活試

生長活性劑盒檢測細(xì)胞倍增時間、克隆形成率、細(xì)胞

周期和端粒酶活性

染色體核型采用G帶分析法進行測定

采用流式細(xì)胞術(shù)和基因組STR測序技術(shù)進行

純度及均一性

測定

無菌檢測細(xì)菌和真菌檢測

支原體檢測