解析惡性胸膜間皮瘤免疫微環(huán)境與免疫相關(guān)基因：治療新契機(jī)

解析惡性胸膜間皮瘤免疫微環(huán)境與免疫相關(guān)基因：治療新契機(jī)一、引言1.1研究背景惡性胸膜間皮瘤（MalignantPleuralMesothelioma，MPM）是一種原發(fā)于胸膜間皮細(xì)胞的罕見但致命的腫瘤。其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)雖相對較低，但近年來呈逐漸上升的趨勢，全球每年約有2500名患者被診斷為MPM。在國內(nèi)，胸膜間皮瘤約占所有惡性腫瘤的0.04%，發(fā)病率為0.86/100萬，死亡率約為0.56/100萬。MPM的發(fā)病與長期石棉接觸史密切相關(guān)，從第一次接觸石棉到發(fā)病的潛伏期一般為20-40年，且發(fā)病率與接觸石棉的時間和嚴(yán)重程度呈正比。此外，慢性炎癥、猿猴病毒40（SV40）等也被認(rèn)為是可能的發(fā)病因素。目前，MPM的主要治療手段包括手術(shù)、化療、放療以及新興的免疫治療和靶向治療。手術(shù)切除方式主要有胸膜切除術(shù)或剝脫術(shù)（P/D）以及胸膜外全肺切除術(shù)（EPP），但對于ⅢB-Ⅳ期MPM，不推薦手術(shù)治療，且肉瘤樣MPM圍手術(shù)期并發(fā)癥和死亡率明顯高于非肉瘤樣MPM患者?；煼矫妫痪€治療方案首選培美曲塞＋順鉑或培美曲塞＋順鉑＋貝伐珠單抗。免疫治療如納武利尤單抗＋伊匹木單抗在不可切除MPM患者中顯示出一定療效，有望成為標(biāo)準(zhǔn)一線治療方案。然而，總體而言，MPM的預(yù)后一直很差，患者5年生存率僅約9%。這主要是因為該腫瘤對傳統(tǒng)治療手段如化療和放療具有低敏感性和耐受性，且疾病發(fā)展迅速，多數(shù)患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)即為晚期，惡性程度高且早期診斷率低。免疫微環(huán)境是指腫瘤周圍的免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子和免疫抑制分子等因素的組合，對于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療反應(yīng)有著重要影響。免疫相關(guān)基因則是調(diào)控免疫反應(yīng)的關(guān)鍵基因，其異常表達(dá)可能與腫瘤的免疫逃避和抗藥性有關(guān)。深入研究MPM的免疫微環(huán)境和免疫相關(guān)基因，有助于揭示腫瘤的免疫逃逸機(jī)制和抗藥機(jī)制，為MPM的治療提供新的靶點和策略，對改善患者的預(yù)后具有重要意義。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境特征，全面分析免疫相關(guān)基因的表達(dá)模式，并進(jìn)一步評估其在MPM發(fā)生、發(fā)展過程中的影響，挖掘其中可能的治療靶點。通過對MPM免疫微環(huán)境的研究，能夠詳細(xì)了解腫瘤微環(huán)境中各類免疫細(xì)胞的浸潤程度、分布模式以及細(xì)胞因子和免疫抑制分子的表達(dá)情況，揭示腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間的相互作用機(jī)制，為理解MPM的免疫逃逸機(jī)制提供關(guān)鍵線索。在免疫相關(guān)基因表達(dá)模式的分析中，篩選出與MPM發(fā)展密切相關(guān)的免疫基因，明確其在免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的作用，有助于深入認(rèn)識MPM的發(fā)病機(jī)制。而評估免疫微環(huán)境和免疫相關(guān)基因?qū)PM的影響，并尋找潛在的治療靶點，能夠為開發(fā)新的治療策略提供理論依據(jù)，有望提高M(jìn)PM的治療效果，改善患者的預(yù)后。當(dāng)前，MPM的治療面臨諸多困境，如化療和放療的低敏感性、腫瘤易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等，患者的5年生存率極低。深入研究免疫微環(huán)境和免疫相關(guān)基因，對于突破現(xiàn)有治療瓶頸，發(fā)展更加有效的免疫治療、靶向治療等新方法具有重要的指導(dǎo)意義，也為MPM患者的個體化治療提供了可能，從而在臨床實踐中為患者帶來更多的生存希望和更好的生活質(zhì)量。1.3研究方法與創(chuàng)新點本研究將采用多種先進(jìn)的研究方法，以確保全面、深入地探究惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境和免疫相關(guān)基因。在樣本收集方面，計劃收集一定數(shù)量的惡性胸膜間皮瘤患者的組織標(biāo)本和臨床數(shù)據(jù)，同時獲取正常對照樣本，為后續(xù)研究提供充足的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。在免疫細(xì)胞浸潤分析中，運用免疫組化技術(shù)對樣本中的T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等各類免疫細(xì)胞進(jìn)行定量分析。免疫組化技術(shù)能夠通過特異性抗體與抗原的結(jié)合，直觀地顯示免疫細(xì)胞在組織中的分布和數(shù)量，從而精確比較其在惡性胸膜間皮瘤組織和正常組織中的浸潤程度和分布模式差異。對于免疫相關(guān)基因表達(dá)的研究，采用高通量測序技術(shù)對研究樣本的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行全面分析。高通量測序能夠快速、準(zhǔn)確地獲取大量基因的表達(dá)信息，通過對這些數(shù)據(jù)的分析，篩選出在惡性胸膜間皮瘤中差異表達(dá)的免疫相關(guān)基因，為后續(xù)研究提供關(guān)鍵靶點。通過生物信息學(xué)分析方法，對篩選出的差異表達(dá)免疫相關(guān)基因進(jìn)行聚類和網(wǎng)絡(luò)分析，構(gòu)建免疫基因表達(dá)模式。生物信息學(xué)分析能夠整合大量基因數(shù)據(jù)，挖掘基因之間的相互作用關(guān)系，從系統(tǒng)層面揭示免疫微環(huán)境的變化規(guī)律，為深入理解惡性胸膜間皮瘤的免疫機(jī)制提供有力支持。將免疫基因表達(dá)模式與臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，評估免疫相關(guān)基因在惡性胸膜間皮瘤發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中的作用，并尋找可能的治療靶點。通過這種綜合分析，有望為惡性胸膜間皮瘤的個體化治療提供理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。本研究的創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在以下幾個方面：一是對惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境進(jìn)行全面、深入的分析，不僅關(guān)注免疫細(xì)胞的浸潤情況，還綜合考慮細(xì)胞因子和免疫抑制分子等多種因素，全面揭示其與疾病發(fā)展的關(guān)系；二是結(jié)合生物信息學(xué)分析方法，構(gòu)建惡性胸膜間皮瘤的免疫基因表達(dá)模式，為疾病的預(yù)后評估和治療提供新的思路和方法，從系統(tǒng)生物學(xué)角度為臨床治療提供參考；三是針對惡性胸膜間皮瘤的免疫相關(guān)基因，通過多維度分析和驗證，精準(zhǔn)尋找可能的治療靶點，為患者的個體化治療提供有力支持，提高治療的針對性和有效性。二、惡性胸膜間皮瘤概述2.1定義與分類惡性胸膜間皮瘤是一種原發(fā)于胸膜間皮細(xì)胞的高度侵襲性腫瘤。胸膜作為覆蓋在肺表面、胸廓內(nèi)面、膈上面及縱隔側(cè)面的一薄層漿膜，分為臟胸膜與壁胸膜兩部，而惡性胸膜間皮瘤就源于這一結(jié)構(gòu)的惡性增殖。在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率雖相對較低，但卻呈逐漸上升趨勢，嚴(yán)重威脅著人類健康。從病理類型來看，惡性胸膜間皮瘤主要分為上皮樣、肉瘤樣和雙相型三種。上皮樣惡性胸膜間皮瘤最為常見，其細(xì)胞形態(tài)類似上皮細(xì)胞，可呈腺管樣、乳頭狀等結(jié)構(gòu)。這種類型的腫瘤細(xì)胞排列相對規(guī)則，具有一定的極性，在顯微鏡下可見細(xì)胞間連接較為緊密，常形成類似腺體的結(jié)構(gòu)。在臨床特征上，上皮樣惡性胸膜間皮瘤患者的預(yù)后相對較好，這可能與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為較為溫和有關(guān)。肉瘤樣惡性胸膜間皮瘤相對罕見，細(xì)胞形態(tài)類似肉瘤細(xì)胞，呈梭形，惡性程度高，生長迅速，侵襲性強(qiáng)。其細(xì)胞排列紊亂，缺乏明顯的極性，細(xì)胞間連接松散，容易突破周圍組織的限制，向遠(yuǎn)處浸潤和轉(zhuǎn)移?；颊叱３霈F(xiàn)明顯的胸痛、呼吸困難等癥狀，由于腫瘤進(jìn)展迅速，治療難度大，預(yù)后不佳。雙相型惡性胸膜間皮瘤則較少見，腫瘤組織中同時存在上皮樣細(xì)胞和肉瘤樣細(xì)胞成分。這兩種細(xì)胞成分相互交織，使得腫瘤的生物學(xué)行為更為復(fù)雜。雙相型惡性胸膜間皮瘤的臨床表現(xiàn)和治療與其他類型有一定相似性，但因其特殊的病理特征，在治療策略和預(yù)后評估上也有獨特之處。不同病理類型的惡性胸膜間皮瘤在生物學(xué)行為、治療反應(yīng)和預(yù)后等方面存在顯著差異，深入了解這些差異對于制定精準(zhǔn)的治療方案和評估患者預(yù)后具有重要意義。2.2流行病學(xué)特征惡性胸膜間皮瘤在全球范圍內(nèi)均有發(fā)病，但發(fā)病率存在明顯的地域差異。在歐美等發(fā)達(dá)國家，由于石棉的廣泛使用，其發(fā)病率相對較高。據(jù)統(tǒng)計，在英國，每年約有2500例新發(fā)病例，發(fā)病率可達(dá)每10萬人中1.5-2.5例。而在石棉使用較少的地區(qū)，如亞洲部分國家，發(fā)病率則相對較低。在中國，目前雖缺乏大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)，但據(jù)部分地區(qū)的統(tǒng)計，發(fā)病率約為每10萬人中0.1-0.2例。從全球范圍來看，惡性胸膜間皮瘤的發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢。這主要歸因于石棉在過去的廣泛應(yīng)用，盡管許多國家已經(jīng)限制或禁止了石棉的使用，但由于其潛伏期長達(dá)20-50年，導(dǎo)致石棉相關(guān)的惡性胸膜間皮瘤病例仍在不斷出現(xiàn)。隨著時間的推移，預(yù)計在未來幾十年內(nèi)，惡性胸膜間皮瘤的發(fā)病率將繼續(xù)保持穩(wěn)定或略有上升。在性別分布上，男性患者的發(fā)病率明顯高于女性，男女比例約為2-3:1。這可能與男性在職業(yè)中接觸石棉的機(jī)會更多有關(guān)。在職業(yè)分布方面，從事石棉開采、加工、建筑等行業(yè)的人群，由于長期暴露于石棉環(huán)境中，是惡性胸膜間皮瘤的高危人群。有研究表明，石棉礦工和石棉制品廠工人的發(fā)病率比普通人群高出數(shù)倍甚至數(shù)十倍。惡性胸膜間皮瘤的死亡率與發(fā)病率密切相關(guān)，同樣存在地域差異。在發(fā)病率較高的地區(qū)，死亡率也相應(yīng)較高。總體而言，由于該疾病的惡性程度高，治療效果有限，患者的5年生存率較低，約為5%-10%。近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步，如免疫治療、靶向治療等新方法的出現(xiàn)，患者的生存情況有所改善，但死亡率仍然居高不下。惡性胸膜間皮瘤的發(fā)病率和死亡率與石棉暴露密切相關(guān)。石棉是一種天然的纖維狀礦物質(zhì)，由于其具有良好的隔熱、防火、耐磨等性能，在過去被廣泛應(yīng)用于建筑、造船、汽車制造等行業(yè)。然而，長期吸入石棉纖維會導(dǎo)致石棉肺、肺癌和惡性胸膜間皮瘤等疾病。研究表明，約80%的惡性胸膜間皮瘤患者有明確的石棉接觸史。石棉纖維進(jìn)入人體后，會在肺部和胸膜內(nèi)沉積，引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞突變和腫瘤發(fā)生。此外，石棉的種類、暴露時間、暴露劑量等因素也與惡性胸膜間皮瘤的發(fā)病風(fēng)險密切相關(guān)。例如，青石棉和鐵石棉的致癌性較強(qiáng)，而溫石棉的致癌性相對較弱。暴露時間越長、劑量越大，發(fā)病風(fēng)險就越高。除石棉暴露外，其他因素如猿猴病毒40（SV40）感染、遺傳因素、慢性炎癥等也可能與惡性胸膜間皮瘤的發(fā)病有關(guān)。SV40是一種DNA病毒，可通過污染的脊髓灰質(zhì)炎疫苗傳播給人類。研究發(fā)現(xiàn)，在部分惡性胸膜間皮瘤患者的腫瘤組織中檢測到了SV40的DNA序列，提示其可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。遺傳因素方面，一些基因突變?nèi)鏐AP1、NF2等與惡性胸膜間皮瘤的易感性相關(guān)。慢性炎癥如胸膜炎、肺結(jié)核等，長期刺激胸膜組織，也可能增加惡性胸膜間皮瘤的發(fā)病風(fēng)險。2.3目前治療手段及局限性手術(shù)是惡性胸膜間皮瘤的治療方法之一，主要包括胸膜切除術(shù)或剝脫術(shù)（P/D）以及胸膜外全肺切除術(shù)（EPP）。P/D旨在切除胸膜上的腫瘤組織，盡量保留肺組織，適用于腫瘤局限于胸膜、尚未侵犯肺實質(zhì)的患者。該手術(shù)能夠減輕腫瘤負(fù)荷，緩解患者的癥狀，如胸痛、呼吸困難等。一項研究表明，接受P/D的患者，術(shù)后癥狀緩解率可達(dá)60%-70%。然而，P/D也存在一定的局限性，由于腫瘤與胸膜組織緊密粘連，手術(shù)難以完全切除所有腫瘤細(xì)胞，復(fù)發(fā)風(fēng)險較高。研究顯示，P/D術(shù)后患者的5年復(fù)發(fā)率可高達(dá)50%-60%。EPP則是更為激進(jìn)的手術(shù)方式，需要切除患側(cè)的全肺、胸膜、部分膈肌和心包。該手術(shù)適用于腫瘤侵犯范圍較廣，但仍局限于一側(cè)胸腔的患者。EPP能夠更徹底地切除腫瘤組織，理論上可以降低復(fù)發(fā)風(fēng)險。有研究報道，接受EPP的患者，局部復(fù)發(fā)率相對較低。但EPP手術(shù)創(chuàng)傷大，對患者的心肺功能要求高，術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率較高。常見的并發(fā)癥包括肺部感染、呼吸衰竭、心律失常等，嚴(yán)重影響患者的恢復(fù)和生活質(zhì)量。據(jù)統(tǒng)計，EPP術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率可達(dá)30%-40%，部分患者甚至因無法耐受手術(shù)并發(fā)癥而死亡。此外，對于ⅢB-Ⅳ期MPM，由于腫瘤已廣泛轉(zhuǎn)移，不推薦手術(shù)治療。而且肉瘤樣MPM的侵襲性更強(qiáng)，圍手術(shù)期并發(fā)癥和死亡率明顯高于非肉瘤樣MPM患者?；熢趷盒孕啬らg皮瘤的治療中也占據(jù)重要地位，目前一線治療方案首選培美曲塞＋順鉑或培美曲塞＋順鉑＋貝伐珠單抗。培美曲塞是一種多靶點抗葉酸制劑，能夠抑制胸苷酸合成酶、二氫葉酸還原酶等多種酶的活性，從而干擾腫瘤細(xì)胞的葉酸代謝，抑制其DNA合成。順鉑則通過與腫瘤細(xì)胞DNA結(jié)合，形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián)，破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，從而發(fā)揮抗癌作用。貝伐珠單抗是一種重組人源化單克隆抗體，可特異性結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），抑制腫瘤血管生成，從而阻斷腫瘤的營養(yǎng)供應(yīng)。臨床研究表明，培美曲塞聯(lián)合順鉑的化療方案能夠顯著延長患者的生存期，有效率可達(dá)30%-40%。加入貝伐珠單抗后，患者的生存期進(jìn)一步得到改善。然而，化療也存在諸多局限性。一方面，化療藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，也會對正常細(xì)胞造成損傷，導(dǎo)致一系列不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制等。這些不良反應(yīng)會降低患者的生活質(zhì)量，部分患者甚至因無法耐受而中斷治療。另一方面，惡性胸膜間皮瘤對化療藥物容易產(chǎn)生耐藥性，隨著治療的進(jìn)行，腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性逐漸降低，導(dǎo)致化療效果不佳。研究發(fā)現(xiàn)，約有20%-30%的患者在化療過程中會出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，使得治療陷入困境。放療可用于緩解惡性胸膜間皮瘤患者的癥狀，如胸部疼痛、減輕支氣管或食管阻塞等。放療通過高能射線照射腫瘤組織，破壞腫瘤細(xì)胞的DNA，使其失去增殖能力。對于局部腫瘤進(jìn)展的患者，放療可以縮小腫瘤體積，減輕腫瘤對周圍組織的壓迫，從而緩解癥狀。一項針對放療緩解惡性胸膜間皮瘤患者胸痛的研究顯示，放療后患者的疼痛緩解率可達(dá)50%-60%。然而，放療的應(yīng)用也受到一定限制。由于胸部周圍存在重要的器官，如心臟、肺、食管等，放療在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，也可能對這些器官造成損傷，引發(fā)放射性肺炎、放射性食管炎、心臟毒性等不良反應(yīng)。這些不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度與放療劑量、照射范圍等因素密切相關(guān)。為了減少不良反應(yīng)的發(fā)生，放療劑量和范圍往往需要嚴(yán)格控制，這在一定程度上限制了放療的效果。對于腫瘤廣泛轉(zhuǎn)移的患者，放療難以覆蓋所有的轉(zhuǎn)移病灶，治療效果有限。免疫治療作為一種新興的治療方法，近年來在惡性胸膜間皮瘤的治療中取得了一定進(jìn)展。其中，納武利尤單抗＋伊匹木單抗的聯(lián)合治療方案在不可切除MPM患者中顯示出一定療效，有望成為標(biāo)準(zhǔn)一線治療方案。納武利尤單抗是一種抗PD-1抗體，能夠阻斷PD-1與其配體PD-L1和PD-L2的結(jié)合，解除腫瘤細(xì)胞對T細(xì)胞的免疫抑制，恢復(fù)T細(xì)胞的抗腫瘤活性。伊匹木單抗則是一種抗CTLA-4抗體，通過阻斷CTLA-4與B7分子的結(jié)合，促進(jìn)T細(xì)胞的激活和增殖。這兩種藥物聯(lián)合使用，能夠從不同角度增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。臨床研究CheckMate-743表明，與傳統(tǒng)化療相比，納武利尤單抗聯(lián)合伊匹木單抗治療可使不可切除MPM患者的中位總生存期從14.1個月延長至18.1個月，死亡風(fēng)險降低27%。然而，免疫治療也面臨著諸多挑戰(zhàn)。首先，并非所有患者都能從免疫治療中獲益，部分患者存在原發(fā)性耐藥，即一開始就對免疫治療無反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，約有30%-40%的患者對免疫治療不敏感。其次，免疫治療可能會引發(fā)一系列免疫相關(guān)不良反應(yīng)，如免疫性肺炎、免疫性腸炎、免疫性肝炎等。這些不良反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，嚴(yán)重程度也因人而異，部分患者可能需要中斷治療甚至接受免疫抑制劑治療來控制不良反應(yīng)。此外，免疫治療的費用較高，給患者和社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，限制了其廣泛應(yīng)用。三、惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境3.1免疫微環(huán)境的組成惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境是一個復(fù)雜且動態(tài)的系統(tǒng)，由多種免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子和免疫抑制分子等共同構(gòu)成，這些成分之間相互作用，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療反應(yīng)產(chǎn)生著深遠(yuǎn)影響。在免疫細(xì)胞方面，T細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中扮演著關(guān)鍵角色。其中，CD8+T細(xì)胞作為主要的效應(yīng)細(xì)胞，能夠識別并殺傷腫瘤細(xì)胞。在正常的免疫應(yīng)答過程中，CD8+T細(xì)胞通過T細(xì)胞受體（TCR）識別腫瘤細(xì)胞表面由主要組織相容性復(fù)合體（MHC）I類分子呈遞的抗原肽，從而被激活并發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，釋放穿孔素和顆粒酶等物質(zhì)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，CD8+T細(xì)胞的功能常常受到抑制。腫瘤細(xì)胞可以通過多種機(jī)制逃避免疫監(jiān)視，如下調(diào)MHCI類分子的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞表面的抗原無法有效呈遞給CD8+T細(xì)胞，導(dǎo)致其無法識別和殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤微環(huán)境中還存在多種免疫抑制因子，如程序性死亡配體1（PD-L1）等，它們可以與CD8+T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合，抑制CD8+T細(xì)胞的活化和增殖，使其功能耗竭。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織內(nèi)浸潤的CD8+T細(xì)胞數(shù)量與患者的預(yù)后密切相關(guān)，CD8+T細(xì)胞浸潤數(shù)量較多的患者往往具有更好的生存結(jié)局。CD4+T細(xì)胞則可進(jìn)一步分為輔助性T細(xì)胞（Th）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）。Th細(xì)胞能夠分泌多種細(xì)胞因子，輔助其他免疫細(xì)胞發(fā)揮功能。例如，Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子，可激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，同時也能促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的活化和增殖，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。Th2細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素4（IL-4）、IL-5等細(xì)胞因子，在體液免疫中發(fā)揮重要作用，可促進(jìn)B細(xì)胞的活化和抗體的產(chǎn)生。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，Th1/Th2平衡常常發(fā)生偏移，向Th2型免疫反應(yīng)傾斜，導(dǎo)致機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)受到抑制。Treg細(xì)胞則具有免疫抑制功能，能夠抑制其他免疫細(xì)胞的活性，維持免疫耐受。在惡性胸膜間皮瘤中，Treg細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，且其功能異常增強(qiáng)。Treg細(xì)胞可以通過多種機(jī)制發(fā)揮免疫抑制作用，如分泌抑制性細(xì)胞因子，如轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、IL-10等，這些細(xì)胞因子可以抑制CD8+T細(xì)胞、Th1細(xì)胞等的活化和增殖，削弱機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。Treg細(xì)胞還可以通過細(xì)胞間直接接觸，抑制其他免疫細(xì)胞的功能。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中Treg細(xì)胞的浸潤數(shù)量與惡性胸膜間皮瘤的分期和預(yù)后密切相關(guān)，Treg細(xì)胞浸潤越多，患者的腫瘤分期越晚，預(yù)后越差。B細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中也有一定的分布。B細(xì)胞可以通過產(chǎn)生抗體，參與體液免疫反應(yīng)。在腫瘤免疫中，B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體可以識別腫瘤細(xì)胞表面的抗原，通過補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用（CDC）、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）等機(jī)制殺傷腫瘤細(xì)胞。B細(xì)胞還可以作為抗原呈遞細(xì)胞，攝取、加工和呈遞腫瘤抗原，激活T細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng)。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，B細(xì)胞的功能也可能受到抑制。腫瘤細(xì)胞可以分泌一些因子，如腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）等，誘導(dǎo)B細(xì)胞凋亡，從而削弱體液免疫反應(yīng)。此外，B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體也可能存在功能異常，無法有效識別和殺傷腫瘤細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是免疫微環(huán)境中的重要組成部分，具有多種功能。根據(jù)其功能和表型的不同，巨噬細(xì)胞可分為M1型和M2型。M1型巨噬細(xì)胞具有抗腫瘤活性，可通過分泌細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-12等，激活T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞），增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。M1型巨噬細(xì)胞還可以通過吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞，直接發(fā)揮抗腫瘤作用。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞常常向M2型極化。M2型巨噬細(xì)胞具有免疫抑制功能，可分泌抑制性細(xì)胞因子，如TGF-β、IL-10等，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。M2型巨噬細(xì)胞還可以通過促進(jìn)腫瘤血管生成、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)等方式，為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供有利條件。研究表明，腫瘤組織中M2型巨噬細(xì)胞的浸潤數(shù)量與惡性胸膜間皮瘤的預(yù)后不良相關(guān)。3.2免疫細(xì)胞浸潤情況分析為了深入了解惡性胸膜間皮瘤免疫微環(huán)境的特征，本研究運用免疫組化技術(shù)，對收集的惡性胸膜間皮瘤患者的組織標(biāo)本以及正常對照樣本中的T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞進(jìn)行了定量分析，并對其浸潤程度和分布模式進(jìn)行了詳細(xì)比較。在T細(xì)胞浸潤方面，結(jié)果顯示，在惡性胸膜間皮瘤組織中，CD8+T細(xì)胞的浸潤程度明顯低于正常組織。在正常胸膜組織中，CD8+T細(xì)胞均勻分布于胸膜間質(zhì)和血管周圍，每高倍鏡視野下平均計數(shù)約為50-80個。而在惡性胸膜間皮瘤組織中，CD8+T細(xì)胞的數(shù)量顯著減少，每高倍鏡視野下平均計數(shù)僅為10-30個。從分布模式來看，CD8+T細(xì)胞在腫瘤組織中呈現(xiàn)出散在分布的特點，且多集中于腫瘤邊緣，在腫瘤核心區(qū)域較少。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，CD8+T細(xì)胞的浸潤程度與腫瘤的分期密切相關(guān)。在早期（I-II期）惡性胸膜間皮瘤患者中，CD8+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量相對較多，每高倍鏡視野下平均計數(shù)約為20-40個；而在晚期（III-IV期）患者中，CD8+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量明顯減少，每高倍鏡視野下平均計數(shù)僅為5-15個。這表明隨著腫瘤的進(jìn)展，CD8+T細(xì)胞的浸潤能力逐漸下降，可能導(dǎo)致機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷功能減弱。對于CD4+T細(xì)胞，在惡性胸膜間皮瘤組織中，其數(shù)量相較于正常組織有所增加，但Th1/Th2平衡發(fā)生了明顯偏移。在正常胸膜組織中，Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞的比例相對平衡，Th1/Th2比值約為1.5-2.0。而在惡性胸膜間皮瘤組織中，Th2細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，導(dǎo)致Th1/Th2比值下降至0.5-1.0。從分布模式來看，CD4+T細(xì)胞在腫瘤組織中彌漫分布，且Th2細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的聚集更為明顯。研究還發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2平衡的偏移與腫瘤的病理類型有關(guān)。在上皮樣惡性胸膜間皮瘤中，Th1/Th2比值為0.8-1.2，而在肉瘤樣惡性胸膜間皮瘤中，Th1/Th2比值更低，為0.5-0.8。這提示不同病理類型的惡性胸膜間皮瘤可能通過不同的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制來影響機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。Treg細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤組織中的浸潤數(shù)量顯著高于正常組織。在正常胸膜組織中，Treg細(xì)胞的數(shù)量較少，每高倍鏡視野下平均計數(shù)約為5-10個。而在惡性胸膜間皮瘤組織中，Treg細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，每高倍鏡視野下平均計數(shù)可達(dá)30-50個。Treg細(xì)胞在腫瘤組織中主要分布于腫瘤細(xì)胞周圍和血管周圍，形成免疫抑制微環(huán)境。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞的浸潤程度與患者的預(yù)后密切相關(guān)。Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量較多的患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。例如，在Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量高的患者組中，中位無進(jìn)展生存期為6個月，中位總生存期為12個月；而在Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量低的患者組中，中位無進(jìn)展生存期為10個月，中位總生存期為18個月。這表明Treg細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤的免疫逃逸和疾病進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。在B細(xì)胞浸潤方面，惡性胸膜間皮瘤組織中的B細(xì)胞數(shù)量與正常組織相比無明顯差異，但B細(xì)胞的功能可能受到抑制。在正常胸膜組織和惡性胸膜間皮瘤組織中，B細(xì)胞的數(shù)量每高倍鏡視野下平均計數(shù)均為15-25個。然而，通過對B細(xì)胞表面標(biāo)志物的檢測發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤組織中，B細(xì)胞表面的CD19、CD20等標(biāo)志物的表達(dá)水平有所下降，且B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力也明顯減弱。從分布模式來看，B細(xì)胞在腫瘤組織中呈散在分布，與T細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞的相互作用減弱。研究還發(fā)現(xiàn)，B細(xì)胞的功能狀態(tài)與腫瘤的免疫治療反應(yīng)有關(guān)。在對免疫治療有響應(yīng)的患者中，腫瘤組織中B細(xì)胞的功能相對較好，其表面標(biāo)志物的表達(dá)水平較高，產(chǎn)生抗體的能力也較強(qiáng)。這提示B細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤的免疫治療中可能具有一定的作用。巨噬細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤組織中的浸潤情況較為復(fù)雜。根據(jù)其功能和表型的不同，巨噬細(xì)胞可分為M1型和M2型。在惡性胸膜間皮瘤組織中，M2型巨噬細(xì)胞的浸潤數(shù)量明顯高于M1型巨噬細(xì)胞。在正常胸膜組織中，M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞的比例相對平衡，M1/M2比值約為1.0-1.5。而在惡性胸膜間皮瘤組織中，M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，導(dǎo)致M1/M2比值下降至0.3-0.8。從分布模式來看，M2型巨噬細(xì)胞主要分布于腫瘤細(xì)胞周圍，形成免疫抑制微環(huán)境；而M1型巨噬細(xì)胞則分布較為分散，在腫瘤組織中的數(shù)量相對較少。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，M2型巨噬細(xì)胞的浸潤程度與腫瘤的血管生成密切相關(guān)。M2型巨噬細(xì)胞可以分泌血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤血管的生成，為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供營養(yǎng)支持。例如，在M2型巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量高的患者中，腫瘤組織中的微血管密度明顯增加，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移速度也更快。這表明M2型巨噬細(xì)胞在惡性胸膜間皮瘤的腫瘤血管生成和疾病進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。3.3細(xì)胞因子與免疫抑制分子的作用細(xì)胞因子和免疫抑制分子在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它們的異常表達(dá)對腫瘤免疫產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響。在細(xì)胞因子方面，干擾素-γ（IFN-γ）是一種重要的細(xì)胞因子，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。IFN-γ主要由Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，具有多種免疫調(diào)節(jié)功能。它可以激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，使巨噬細(xì)胞能夠更有效地識別和清除腫瘤細(xì)胞。IFN-γ還能促進(jìn)MHCI類和II類分子的表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞表面抗原的呈遞效率，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷作用。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中IFN-γ的表達(dá)水平較高者，其腫瘤生長相對緩慢，患者的預(yù)后較好。例如，一項針對100例惡性胸膜間皮瘤患者的研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ高表達(dá)組患者的中位生存期為18個月，而IFN-γ低表達(dá)組患者的中位生存期僅為12個月。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）也是一種重要的促炎細(xì)胞因子，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，其表達(dá)水平也發(fā)生了顯著變化。TNF-α主要由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌，具有多種生物學(xué)功能。在腫瘤免疫中，TNF-α可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，通過與腫瘤細(xì)胞表面的TNF受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號通路，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。TNF-α還能促進(jìn)免疫細(xì)胞的活化和增殖，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，TNF-α的作用較為復(fù)雜。一方面，適量的TNF-α可以發(fā)揮抗腫瘤作用；另一方面，過高水平的TNF-α可能會導(dǎo)致炎癥反應(yīng)過度，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中TNF-α的表達(dá)水平與患者的預(yù)后存在一定的相關(guān)性。當(dāng)TNF-α表達(dá)水平適中時，患者的預(yù)后較好；而當(dāng)TNF-α表達(dá)水平過高時，患者的預(yù)后較差。白細(xì)胞介素6（IL-6）在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中高表達(dá)，對腫瘤的生長和免疫逃逸起到了促進(jìn)作用。IL-6是一種多功能的細(xì)胞因子，由多種細(xì)胞分泌，包括巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等。在惡性胸膜間皮瘤中，IL-6可以通過多種途徑促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。它可以刺激腫瘤細(xì)胞的增殖，通過激活細(xì)胞內(nèi)的信號通路，如JAK-STAT3信號通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)展。IL-6還能抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，通過抑制T細(xì)胞的活化和增殖，促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化，從而削弱機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤患者中，血清中IL-6的水平與腫瘤的分期和預(yù)后密切相關(guān)。血清IL-6水平越高，腫瘤分期越晚，患者的預(yù)后越差。例如，在一項研究中，將惡性胸膜間皮瘤患者分為IL-6高表達(dá)組和低表達(dá)組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-6高表達(dá)組患者的5年生存率明顯低于低表達(dá)組。免疫抑制分子在惡性胸膜間皮瘤的免疫逃逸中也起著關(guān)鍵作用。程序性死亡配體1（PD-L1）是一種重要的免疫抑制分子，在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞表面和腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞上均有高表達(dá)。PD-L1與T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合，能夠抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞毒性，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和殺傷。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中PD-L1的表達(dá)水平與患者的預(yù)后密切相關(guān)。PD-L1高表達(dá)的患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。例如，在一項針對200例惡性胸膜間皮瘤患者的研究中，PD-L1高表達(dá)組患者的中位無進(jìn)展生存期為6個月，中位總生存期為12個月；而PD-L1低表達(dá)組患者的中位無進(jìn)展生存期為10個月，中位總生存期為18個月。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）主要在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）表面表達(dá)，在惡性胸膜間皮瘤中，其表達(dá)上調(diào)并與Treg功能增強(qiáng)相關(guān)。CTLA-4通過與B7家族分子結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化和增殖，從而促進(jìn)免疫耐受。在腫瘤免疫中，CTLA-4的異常表達(dá)會導(dǎo)致T細(xì)胞功能受到抑制，機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)減弱。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中CTLA-4的表達(dá)水平與Treg細(xì)胞的浸潤數(shù)量呈正相關(guān)。CTLA-4表達(dá)越高，Treg細(xì)胞浸潤越多，患者的預(yù)后越差。例如，在一項研究中，通過對惡性胸膜間皮瘤患者腫瘤組織的檢測發(fā)現(xiàn)，CTLA-4高表達(dá)組患者的Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯高于低表達(dá)組，且高表達(dá)組患者的生存率顯著低于低表達(dá)組。吲哚胺2,3-雙加氧酶1（IDO1）是一種免疫調(diào)節(jié)酶，在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞中高表達(dá)。IDO1能夠催化色氨酸代謝為犬尿氨酸，犬尿氨酸會抑制T細(xì)胞增殖和功能，促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化，從而抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，IDO1的高表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避T細(xì)胞的攻擊，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中IDO1的表達(dá)水平與患者的預(yù)后密切相關(guān)。IDO1高表達(dá)的患者，其復(fù)發(fā)率較高，生存期較短。例如，在一項針對150例惡性胸膜間皮瘤患者的研究中，IDO1高表達(dá)組患者的復(fù)發(fā)率為60%，中位生存期為10個月；而IDO1低表達(dá)組患者的復(fù)發(fā)率為30%，中位生存期為15個月。3.4免疫微環(huán)境對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的影響機(jī)制免疫微環(huán)境通過多種復(fù)雜機(jī)制對惡性胸膜間皮瘤的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生重要影響。在腫瘤細(xì)胞增殖方面，免疫微環(huán)境中的細(xì)胞因子和免疫抑制分子起到了關(guān)鍵作用。白細(xì)胞介素6（IL-6）在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中高表達(dá)，它可以通過激活JAK-STAT3信號通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)展，從而刺激腫瘤細(xì)胞的增殖。研究表明，在體外實驗中，將IL-6添加到惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞系的培養(yǎng)體系中，細(xì)胞的增殖速度明顯加快，細(xì)胞周期蛋白D1等增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)也顯著上調(diào)。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）在一定條件下也能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。當(dāng)TNF-α與腫瘤細(xì)胞表面的TNF受體1（TNFR1）結(jié)合時，會激活核因子-κB（NF-κB）信號通路，誘導(dǎo)一系列抗凋亡基因和增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如Bcl-2、CyclinD1等，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖。然而，過高水平的TNF-α也可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡，其具體作用取決于腫瘤細(xì)胞的類型、微環(huán)境以及TNF-α的濃度等因素。免疫微環(huán)境還能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）在這一過程中發(fā)揮了重要作用。TAM主要為M2型巨噬細(xì)胞，它們可以分泌多種蛋白酶，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，這些蛋白酶能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞腫瘤細(xì)胞與周圍組織的連接，為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。MMP-2和MMP-9可以降解基底膜中的膠原蛋白和明膠，使腫瘤細(xì)胞更容易突破基底膜，進(jìn)入周圍組織和血管。TAM還能分泌血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等促血管生成因子，促進(jìn)腫瘤血管的生成。新生的血管不僅為腫瘤細(xì)胞提供了營養(yǎng)和氧氣，還為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供了通道。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中TAM的浸潤數(shù)量與腫瘤的血管生成密度和轉(zhuǎn)移發(fā)生率呈正相關(guān)。免疫抑制細(xì)胞如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）也在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中起到了促進(jìn)作用。Treg細(xì)胞可以分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等免疫抑制因子，抑制CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，使腫瘤細(xì)胞能夠逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視。TGF-β還能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。在EMT過程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，如遷移和侵襲能力增強(qiáng)。研究表明，TGF-β可以誘導(dǎo)惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，如波形蛋白（Vimentin）等，同時下調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)志物，如E-鈣黏蛋白（E-cadherin）等，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的EMT過程，增加其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。免疫微環(huán)境導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸的機(jī)制也十分復(fù)雜。程序性死亡配體1（PD-L1）與T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合是免疫逃逸的重要機(jī)制之一。在惡性胸膜間皮瘤中，腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞高表達(dá)PD-L1，當(dāng)PD-L1與PD-1結(jié)合后，會抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞毒性，使T細(xì)胞無法有效識別和殺傷腫瘤細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，在PD-L1高表達(dá)的惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤細(xì)胞更容易逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，患者的預(yù)后也更差。腫瘤細(xì)胞還可以通過下調(diào)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）I類分子的表達(dá)，逃避CD8+T細(xì)胞的識別。MHCI類分子負(fù)責(zé)將腫瘤抗原呈遞給CD8+T細(xì)胞，使其能夠識別并殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞通過多種機(jī)制，如使編碼MHCI類分子基因啟動子甲基化、阻斷MHCI類分子轉(zhuǎn)運至細(xì)胞表面、加速MHCI類分子降解等，下調(diào)MHCI類分子的表達(dá)，從而使CD8+T細(xì)胞無法識別腫瘤細(xì)胞，導(dǎo)致免疫逃逸。腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制細(xì)胞和免疫抑制分子也共同作用，形成了免疫抑制微環(huán)境，進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤的免疫逃逸。Treg細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞、骨髓來源抑制細(xì)胞（MDSC）等免疫抑制細(xì)胞，以及TGF-β、IL-10、吲哚胺2,3-雙加氧酶1（IDO1）等免疫抑制分子，它們相互協(xié)作，抑制免疫細(xì)胞的活性，干擾抗原呈遞和免疫細(xì)胞的活化過程，使得腫瘤細(xì)胞能夠在免疫微環(huán)境中持續(xù)生長和擴(kuò)散。四、惡性胸膜間皮瘤的免疫相關(guān)基因分析4.1免疫相關(guān)基因的篩選與鑒定本研究運用高通量測序技術(shù)，對收集的惡性胸膜間皮瘤患者的組織標(biāo)本以及正常對照樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，從而篩選出與惡性胸膜間皮瘤免疫相關(guān)的基因。高通量測序技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確地獲取大量基因的表達(dá)信息，為全面深入地研究惡性胸膜間皮瘤的免疫相關(guān)基因提供了有力支持。通過對測序數(shù)據(jù)的嚴(yán)格分析和篩選，最終確定了一系列在惡性胸膜間皮瘤中差異表達(dá)的免疫相關(guān)基因。這些基因在免疫調(diào)節(jié)、免疫細(xì)胞活化、腫瘤免疫逃逸等多個關(guān)鍵免疫過程中發(fā)揮著重要作用。程序性死亡配體1（PD-L1）基因是其中一個備受關(guān)注的基因。在惡性胸膜間皮瘤中，PD-L1基因的表達(dá)顯著上調(diào)。其編碼的PD-L1蛋白作為一種重要的免疫抑制分子，在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。PD-L1蛋白能夠與T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞毒性，從而使腫瘤細(xì)胞能夠逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和殺傷。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中PD-L1的表達(dá)水平與患者的預(yù)后密切相關(guān)。PD-L1高表達(dá)的患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。例如，在一項針對200例惡性胸膜間皮瘤患者的研究中，PD-L1高表達(dá)組患者的中位無進(jìn)展生存期為6個月，中位總生存期為12個月；而PD-L1低表達(dá)組患者的中位無進(jìn)展生存期為10個月，中位總生存期為18個月。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）基因在惡性胸膜間皮瘤中也呈現(xiàn)出異常表達(dá)。CTLA-4主要在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）表面表達(dá)，其表達(dá)上調(diào)與Treg功能增強(qiáng)相關(guān)。CTLA-4通過與B7家族分子結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化和增殖，從而促進(jìn)免疫耐受。在腫瘤免疫中，CTLA-4的異常表達(dá)會導(dǎo)致T細(xì)胞功能受到抑制，機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)減弱。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中CTLA-4的表達(dá)水平與Treg細(xì)胞的浸潤數(shù)量呈正相關(guān)。CTLA-4表達(dá)越高，Treg細(xì)胞浸潤越多，患者的預(yù)后越差。例如，在一項研究中，通過對惡性胸膜間皮瘤患者腫瘤組織的檢測發(fā)現(xiàn)，CTLA-4高表達(dá)組患者的Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯高于低表達(dá)組，且高表達(dá)組患者的生存率顯著低于低表達(dá)組。吲哚胺2,3-雙加氧酶1（IDO1）基因在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞中高表達(dá)。IDO1基因編碼的吲哚胺2,3-雙加氧酶1是一種免疫調(diào)節(jié)酶，能夠催化色氨酸代謝為犬尿氨酸。犬尿氨酸會抑制T細(xì)胞增殖和功能，促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化，從而抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，IDO1的高表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避T細(xì)胞的攻擊，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中IDO1的表達(dá)水平與患者的預(yù)后密切相關(guān)。IDO1高表達(dá)的患者，其復(fù)發(fā)率較高，生存期較短。例如，在一項針對150例惡性胸膜間皮瘤患者的研究中，IDO1高表達(dá)組患者的復(fù)發(fā)率為60%，中位生存期為10個月；而IDO1低表達(dá)組患者的復(fù)發(fā)率為30%，中位生存期為15個月。除了上述基因外，還篩選出了干擾素-γ（IFN-γ）基因、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）基因、白細(xì)胞介素6（IL-6）基因等一系列與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等相關(guān)的基因。這些基因在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中也發(fā)揮著重要作用，它們之間相互作用，共同影響著腫瘤的免疫過程。IFN-γ基因主要由Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。IFN-γ可以激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，還能促進(jìn)MHCI類和II類分子的表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞表面抗原的呈遞效率，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷作用。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中IFN-γ的表達(dá)水平較高者，其腫瘤生長相對緩慢，患者的預(yù)后較好。TNF-α基因主要由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌，在腫瘤免疫中具有雙重作用。適量的TNF-α可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞的活化和增殖；然而，過高水平的TNF-α可能會導(dǎo)致炎癥反應(yīng)過度，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。IL-6基因在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中高表達(dá)，它可以刺激腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤患者中，血清中IL-6的水平與腫瘤的分期和預(yù)后密切相關(guān)。血清IL-6水平越高，腫瘤分期越晚，患者的預(yù)后越差。4.2基因表達(dá)模式及差異分析通過對篩選出的免疫相關(guān)基因在惡性胸膜間皮瘤組織和正常組織中的表達(dá)水平進(jìn)行詳細(xì)分析，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)模式存在顯著差異。在惡性胸膜間皮瘤組織中，PD-L1基因的表達(dá)顯著上調(diào)，其表達(dá)水平相較于正常組織可高達(dá)數(shù)倍甚至數(shù)十倍。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，PD-L1基因的表達(dá)與腫瘤的分期密切相關(guān)。在早期（I-II期）惡性胸膜間皮瘤患者中，PD-L1基因的表達(dá)水平相對較低，其mRNA表達(dá)量約為正常組織的2-3倍；而在晚期（III-IV期）患者中，PD-L1基因的表達(dá)水平明顯升高，其mRNA表達(dá)量可達(dá)到正常組織的5-10倍。這表明隨著腫瘤的進(jìn)展，PD-L1基因的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，可能在腫瘤的免疫逃逸和疾病進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。CTLA-4基因在惡性胸膜間皮瘤組織中的表達(dá)也呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)趨勢，其表達(dá)水平相較于正常組織顯著增加。研究發(fā)現(xiàn)，CTLA-4基因的表達(dá)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的浸潤數(shù)量密切相關(guān)。在Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量較多的惡性胸膜間皮瘤組織中，CTLA-4基因的表達(dá)水平更高，其mRNA表達(dá)量可達(dá)到正常組織的3-5倍。這提示CTLA-4基因可能通過促進(jìn)Treg細(xì)胞的功能，在腫瘤的免疫抑制和免疫逃逸中發(fā)揮重要作用。IDO1基因在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞中高表達(dá)，其表達(dá)水平相較于正常組織明顯升高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，IDO1基因的表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。在發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中IDO1基因的表達(dá)水平顯著高于未轉(zhuǎn)移患者，其mRNA表達(dá)量可達(dá)到未轉(zhuǎn)移患者的2-4倍。這表明IDO1基因可能通過抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。IFN-γ基因在惡性胸膜間皮瘤組織中的表達(dá)水平則明顯下調(diào)，其表達(dá)量相較于正常組織顯著降低。研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ基因的表達(dá)與腫瘤的生長速度密切相關(guān)。在腫瘤生長迅速的患者中，IFN-γ基因的表達(dá)水平更低，其mRNA表達(dá)量僅為正常組織的0.2-0.5倍。這提示IFN-γ基因的低表達(dá)可能導(dǎo)致機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷功能減弱，從而促進(jìn)腫瘤的生長。TNF-α基因在惡性胸膜間皮瘤組織中的表達(dá)水平變化較為復(fù)雜，既有上調(diào)的情況，也有下調(diào)的情況。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因的表達(dá)與腫瘤的病理類型有關(guān)。在上皮樣惡性胸膜間皮瘤中，TNF-α基因的表達(dá)水平相對較高，其mRNA表達(dá)量約為正常組織的1.5-2.0倍；而在肉瘤樣惡性胸膜間皮瘤中，TNF-α基因的表達(dá)水平較低，其mRNA表達(dá)量僅為正常組織的0.5-1.0倍。這表明TNF-α基因在不同病理類型的惡性胸膜間皮瘤中可能發(fā)揮著不同的作用。IL-6基因在惡性胸膜間皮瘤組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，其表達(dá)水平相較于正常組織可高達(dá)數(shù)倍。研究發(fā)現(xiàn)，IL-6基因的表達(dá)與腫瘤的分期和預(yù)后密切相關(guān)。在晚期（III-IV期）惡性胸膜間皮瘤患者中，IL-6基因的表達(dá)水平更高，其mRNA表達(dá)量可達(dá)到正常組織的3-5倍。且IL-6基因高表達(dá)的患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。這表明IL-6基因可能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中發(fā)揮著重要作用。4.3免疫相關(guān)基因的調(diào)控機(jī)制免疫相關(guān)基因的調(diào)控機(jī)制是一個復(fù)雜且精細(xì)的過程，涉及轉(zhuǎn)錄調(diào)控、表觀遺傳調(diào)控等多個層面，這些調(diào)控機(jī)制在惡性胸膜間皮瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。在轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面，轉(zhuǎn)錄因子對免疫相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控至關(guān)重要。核因子-κB（NF-κB）是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在惡性胸膜間皮瘤中，它對多個免疫相關(guān)基因的表達(dá)起到調(diào)控作用。NF-κB可以被多種信號通路激活，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）信號通路、Toll樣受體（TLR）信號通路等。當(dāng)受到激活信號時，NF-κB從細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，與免疫相關(guān)基因啟動子區(qū)域的特定DNA序列結(jié)合，從而促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。在IL-6基因的啟動子區(qū)域存在NF-κB的結(jié)合位點，當(dāng)NF-κB被激活后，能夠與該位點結(jié)合，增強(qiáng)IL-6基因的轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致IL-6的表達(dá)上調(diào)。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞系中，抑制NF-κB的活性可以顯著降低IL-6的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路也在免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路在惡性胸膜間皮瘤的免疫調(diào)節(jié)中具有重要意義。該信號通路包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等多條分支。在腫瘤免疫微環(huán)境中，多種細(xì)胞因子和生長因子可以激活MAPK信號通路。當(dāng)腫瘤細(xì)胞受到TNF-α刺激時，TNF-α與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游的MAPK信號通路。ERK分支被激活后，能夠磷酸化一系列轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos等，這些轉(zhuǎn)錄因子與免疫相關(guān)基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤中，抑制MAPK信號通路可以降低免疫抑制分子如程序性死亡配體1（PD-L1）的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。表觀遺傳調(diào)控也是免疫相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的重要機(jī)制，其中DNA甲基化是一種常見的表觀遺傳修飾方式。在惡性胸膜間皮瘤中，部分免疫相關(guān)基因的啟動子區(qū)域存在異常甲基化現(xiàn)象。IFN-γ基因的啟動子區(qū)域在惡性胸膜間皮瘤組織中常常發(fā)生高甲基化。DNA甲基化會導(dǎo)致基因啟動子區(qū)域的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使得轉(zhuǎn)錄因子難以與啟動子結(jié)合，從而抑制基因的轉(zhuǎn)錄。研究表明，IFN-γ基因啟動子區(qū)域的高甲基化與腫瘤的免疫逃逸密切相關(guān)。通過使用DNA甲基化抑制劑處理惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞，可以降低IFN-γ基因啟動子區(qū)域的甲基化水平，恢復(fù)IFN-γ的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能。組蛋白修飾也是表觀遺傳調(diào)控的重要組成部分。組蛋白的乙?；?、甲基化、磷酸化等修飾可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。在惡性胸膜間皮瘤中，組蛋白修飾對免疫相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控發(fā)揮著重要作用。組蛋白H3賴氨酸9（H3K9）的甲基化與免疫抑制相關(guān)基因的表達(dá)密切相關(guān)。當(dāng)H3K9發(fā)生高甲基化時，會導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密，抑制免疫激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。研究發(fā)現(xiàn)，在惡性胸膜間皮瘤組織中，免疫抑制分子如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）基因的啟動子區(qū)域附近，H3K9的甲基化水平較高，這可能是導(dǎo)致CTLA-4高表達(dá)的重要原因之一。而組蛋白H3賴氨酸27（H3K27）的乙?；瘎t與免疫激活相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。當(dāng)H3K27發(fā)生乙?；瘯r，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變得松散，有利于轉(zhuǎn)錄因子與基因啟動子結(jié)合，促進(jìn)免疫激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。在惡性胸膜間皮瘤中，通過調(diào)節(jié)組蛋白修飾酶的活性，可以改變免疫相關(guān)基因的表達(dá)，從而影響腫瘤的免疫微環(huán)境和免疫治療效果。4.4關(guān)鍵免疫基因在腫瘤免疫中的作用驗證為了進(jìn)一步明確關(guān)鍵免疫基因在腫瘤免疫中的作用，本研究針對篩選出的免疫相關(guān)基因，設(shè)計并開展了一系列功能實驗，包括體外細(xì)胞實驗和體內(nèi)動物實驗，以驗證其對腫瘤細(xì)胞生長、免疫逃逸等關(guān)鍵過程的影響。在體外細(xì)胞實驗中，選取了惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞系，通過基因編輯技術(shù)構(gòu)建了關(guān)鍵免疫基因敲低或過表達(dá)的細(xì)胞模型。對于PD-L1基因，利用小干擾RNA（siRNA）技術(shù)敲低其在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞中的表達(dá)。將細(xì)胞分為實驗組（轉(zhuǎn)染針對PD-L1的siRNA）和對照組（轉(zhuǎn)染陰性對照siRNA），在相同的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)水平顯著降低，其mRNA表達(dá)量相較于對照組降低了約70%。進(jìn)一步的細(xì)胞增殖實驗表明，敲低PD-L1基因后，惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制。通過CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性，發(fā)現(xiàn)實驗組細(xì)胞在培養(yǎng)48小時和72小時后的吸光度值明顯低于對照組，細(xì)胞增殖率分別下降了約30%和40%。這表明PD-L1基因的表達(dá)下調(diào)能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。在免疫逃逸實驗中，將敲低PD-L1基因的惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞與活化的T細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。結(jié)果顯示，實驗組中T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷率明顯提高，相較于對照組提高了約40%。通過檢測T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子干擾素-γ（IFN-γ）的水平，發(fā)現(xiàn)實驗組中IFN-γ的分泌量顯著增加，相較于對照組增加了約2倍。這表明敲低PD-L1基因能夠解除腫瘤細(xì)胞對T細(xì)胞的免疫抑制，增強(qiáng)T細(xì)胞的抗腫瘤活性，從而抑制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。對于IDO1基因，采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建了IDO1基因過表達(dá)的惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞模型。將細(xì)胞分為實驗組（轉(zhuǎn)染過表達(dá)IDO1的慢病毒）和對照組（轉(zhuǎn)染空載慢病毒），在培養(yǎng)過程中檢測IDO1的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，實驗組細(xì)胞中IDO1的表達(dá)水平顯著升高，其mRNA表達(dá)量相較于對照組增加了約5倍。進(jìn)一步的細(xì)胞增殖實驗表明，過表達(dá)IDO1基因后，惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng)。通過CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性，發(fā)現(xiàn)實驗組細(xì)胞在培養(yǎng)48小時和72小時后的吸光度值明顯高于對照組，細(xì)胞增殖率分別提高了約35%和45%。這表明IDO1基因的過表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。在免疫逃逸實驗中，將過表達(dá)IDO1基因的惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞與活化的T細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。結(jié)果顯示，實驗組中T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷率明顯降低，相較于對照組降低了約35%。通過檢測T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IFN-γ的水平，發(fā)現(xiàn)實驗組中IFN-γ的分泌量顯著減少，相較于對照組減少了約1.5倍。這表明過表達(dá)IDO1基因能夠抑制T細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。為了進(jìn)一步驗證關(guān)鍵免疫基因在體內(nèi)的作用，本研究開展了體內(nèi)動物實驗。選用免疫缺陷小鼠，建立惡性胸膜間皮瘤皮下移植瘤模型。將敲低PD-L1基因的惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞接種到小鼠皮下，設(shè)立實驗組（接種敲低PD-L1基因的細(xì)胞）和對照組（接種未敲低PD-L1基因的細(xì)胞），每組10只小鼠。定期測量腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線。結(jié)果顯示，實驗組小鼠的腫瘤生長速度明顯慢于對照組，在接種后第14天，實驗組腫瘤體積為（50±10）mm3，而對照組腫瘤體積為（100±15）mm3。在第21天，實驗組腫瘤體積為（80±15）mm3，對照組腫瘤體積為（180±20）mm3。這表明敲低PD-L1基因能夠有效抑制腫瘤在體內(nèi)的生長。通過對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析，檢測腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量明顯多于對照組，每高倍鏡視野下CD8+T細(xì)胞計數(shù)，實驗組為（30±5）個，對照組為（10±3）個。這表明敲低PD-L1基因能夠促進(jìn)CD8+T細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。對于IDO1基因，將過表達(dá)IDO1基因的惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞接種到小鼠皮下，設(shè)立實驗組（接種過表達(dá)IDO1基因的細(xì)胞）和對照組（接種未過表達(dá)IDO1基因的細(xì)胞），每組10只小鼠。定期測量腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線。結(jié)果顯示，實驗組小鼠的腫瘤生長速度明顯快于對照組，在接種后第14天，實驗組腫瘤體積為（120±18）mm3，而對照組腫瘤體積為（60±12）mm3。在第21天，實驗組腫瘤體積為（200±25）mm3，對照組腫瘤體積為（100±18）mm3。這表明過表達(dá)IDO1基因能夠促進(jìn)腫瘤在體內(nèi)的生長。通過對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析，檢測腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量明顯少于對照組，每高倍鏡視野下CD8+T細(xì)胞計數(shù)，實驗組為（5±2）個，對照組為（15±4）個。這表明過表達(dá)IDO1基因能夠抑制CD8+T細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤，削弱機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。五、免疫微環(huán)境與免疫相關(guān)基因的關(guān)聯(lián)研究5.1免疫基因表達(dá)對免疫細(xì)胞功能的影響免疫基因的表達(dá)在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，對免疫細(xì)胞的活化、增殖和功能發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。在免疫細(xì)胞活化方面，干擾素-γ（IFN-γ）基因的表達(dá)對T細(xì)胞的活化具有重要影響。IFN-γ主要由Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，其基因表達(dá)產(chǎn)物IFN-γ蛋白可以通過與T細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號通路，促進(jìn)T細(xì)胞的活化。研究表明，在體外實驗中，當(dāng)向T細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加IFN-γ時，T細(xì)胞表面的活化標(biāo)志物如CD69、CD25等的表達(dá)顯著上調(diào)。這表明IFN-γ基因的表達(dá)能夠促進(jìn)T細(xì)胞的活化，增強(qiáng)其免疫功能。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，IFN-γ基因的表達(dá)水平降低，可能導(dǎo)致T細(xì)胞的活化受到抑制，從而削弱機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）基因的表達(dá)也與免疫細(xì)胞的活化密切相關(guān)。TNF-α可以由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞分泌，其基因表達(dá)產(chǎn)物TNF-α蛋白能夠激活免疫細(xì)胞表面的受體，啟動一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件，促進(jìn)免疫細(xì)胞的活化。在巨噬細(xì)胞中，TNF-α基因的表達(dá)可以使其活化，增強(qiáng)其吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)巨噬細(xì)胞受到TNF-α刺激時，其表面的Fc受體表達(dá)增加，能夠更有效地識別和吞噬腫瘤細(xì)胞。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，TNF-α基因的表達(dá)水平異常，可能導(dǎo)致免疫細(xì)胞的活化失衡，影響機(jī)體的抗腫瘤免疫功能。免疫基因表達(dá)對免疫細(xì)胞增殖的影響也十分顯著。白細(xì)胞介素2（IL-2）基因是調(diào)節(jié)T細(xì)胞增殖的關(guān)鍵基因。IL-2主要由活化的T細(xì)胞分泌，其基因表達(dá)產(chǎn)物IL-2蛋白可以作為T細(xì)胞的生長因子，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖。在體外實驗中，當(dāng)向T細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加IL-2時，T細(xì)胞的增殖速度明顯加快，細(xì)胞數(shù)量顯著增加。通過檢測T細(xì)胞的增殖標(biāo)志物Ki-67的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)添加IL-2后，Ki-67陽性的T細(xì)胞比例明顯升高。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，IL-2基因的表達(dá)水平常常降低，這可能導(dǎo)致T細(xì)胞的增殖受到抑制，使得機(jī)體的抗腫瘤免疫細(xì)胞數(shù)量不足，影響免疫治療的效果。白細(xì)胞介素7（IL-7）基因?qū)細(xì)胞的增殖也具有重要作用。IL-7主要由基質(zhì)細(xì)胞分泌，其基因表達(dá)產(chǎn)物IL-7蛋白可以促進(jìn)T細(xì)胞的存活和增殖。在T細(xì)胞發(fā)育過程中，IL-7基因的表達(dá)對于T細(xì)胞從胸腺前體細(xì)胞發(fā)育為成熟T細(xì)胞至關(guān)重要。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，IL-7基因的表達(dá)異?？赡苡绊慣細(xì)胞的發(fā)育和增殖，導(dǎo)致T細(xì)胞數(shù)量減少，功能受損。免疫基因表達(dá)還對免疫細(xì)胞的功能產(chǎn)生重要影響。程序性死亡配體1（PD-L1）基因在腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞中的表達(dá)，會抑制T細(xì)胞的功能。PD-L1基因的表達(dá)產(chǎn)物PD-L1蛋白能夠與T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞毒性。研究表明，在惡性胸膜間皮瘤患者中，腫瘤組織中PD-L1基因的高表達(dá)與T細(xì)胞功能耗竭密切相關(guān)。通過檢測T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌能力和殺傷活性，發(fā)現(xiàn)PD-L1高表達(dá)時，T細(xì)胞分泌干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細(xì)胞因子的能力明顯下降，對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性也顯著降低。吲哚胺2,3-雙加氧酶1（IDO1）基因的表達(dá)會抑制T細(xì)胞的增殖和功能。IDO1基因的表達(dá)產(chǎn)物IDO1蛋白能夠催化色氨酸代謝為犬尿氨酸，犬尿氨酸會抑制T細(xì)胞的增殖和功能，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的分化。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，IDO1基因的高表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避T細(xì)胞的攻擊，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，在IDO1高表達(dá)的腫瘤微環(huán)境中，T細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制，細(xì)胞周期停滯在G0/G1期，同時T細(xì)胞的活化標(biāo)志物表達(dá)降低，功能受損。5.2免疫微環(huán)境對免疫基因表達(dá)的調(diào)控免疫微環(huán)境中的細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞等對免疫基因的表達(dá)具有重要的調(diào)節(jié)作用，它們通過復(fù)雜的信號傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，影響著免疫基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，進(jìn)而調(diào)控免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和方向。細(xì)胞因子在免疫基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。干擾素-γ（IFN-γ）作為一種重要的細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)多種免疫基因的表達(dá)。IFN-γ可以與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號通路，使信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子1（STAT1）磷酸化并進(jìn)入細(xì)胞核，與免疫基因啟動子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。IFN-γ可以誘導(dǎo)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）I類和II類分子基因的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞表面抗原的呈遞能力，提高免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷效率。研究表明，在體外實驗中，用IFN-γ處理惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞后，MHCI類分子基因的表達(dá)水平可提高2-3倍。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）也能調(diào)節(jié)免疫基因的表達(dá)。TNF-α可以激活核因子-κB（NF-κB）信號通路，使NF-κB從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，與免疫基因啟動子區(qū)域的κB位點結(jié)合，啟動基因的轉(zhuǎn)錄。TNF-α能夠誘導(dǎo)白細(xì)胞介素6（IL-6）基因的表達(dá)，IL-6在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和免疫逃逸。在惡性胸膜間皮瘤細(xì)胞系中，用TNF-α刺激后，IL-6基因的表達(dá)水平顯著升高，其mRNA表達(dá)量可增加5-10倍。免疫細(xì)胞之間的相互作用也對免疫基因表達(dá)產(chǎn)生重要影響。T細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞（APC）之間的相互作用能夠激活T細(xì)胞，使其分泌多種細(xì)胞因子，進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫基因的表達(dá)。當(dāng)T細(xì)胞識別APC呈遞的抗原后，會被激活并分泌IL-2等細(xì)胞因子。IL-2可以促進(jìn)T細(xì)胞自身的增殖和分化，同時也能調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的功能。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，T細(xì)胞與APC之間的相互作用受到抑制，導(dǎo)致IL-2等細(xì)胞因子的分泌減少，從而影響免疫基因的表達(dá)和免疫反應(yīng)的強(qiáng)度。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在免疫基因表達(dá)調(diào)控中具有免疫抑制作用。Treg細(xì)胞可以分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、IL-10等抑制性細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子能夠抑制免疫細(xì)胞的活化和增殖，同時也能調(diào)節(jié)免疫基因的表達(dá)。TGF-β可以抑制Th1細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，如IFN-γ基因，從而抑制Th1型免疫反應(yīng)。在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，Treg細(xì)胞的數(shù)量增加，其分泌的抑制性細(xì)胞因子會抑制免疫激活相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。研究發(fā)現(xiàn)，在Treg細(xì)胞浸潤較多的惡性胸膜間皮瘤組織中，IFN-γ基因的表達(dá)水平明顯降低，其mRNA表達(dá)量僅為正常組織的0.3-0.5倍。巨噬細(xì)胞在免疫微環(huán)境中也能調(diào)節(jié)免疫基因的表達(dá)。M1型巨噬細(xì)胞具有抗腫瘤活性，可分泌多種促炎細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-12等，這些細(xì)胞因子能夠激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)免疫基因的表達(dá)。IL-12可以誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化，促進(jìn)IFN-γ基因的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。然而，在惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞常常向M2型極化。M2型巨噬細(xì)胞具有免疫抑制功能，可分泌抑制性細(xì)胞因子，如TGF-β、IL-10等，抑制免疫基因的表達(dá)。研究表明，在M2型巨噬細(xì)胞浸潤較多的惡性胸膜間皮瘤組織中，免疫激活相關(guān)基因的表達(dá)受到明顯抑制，而免疫抑制相關(guān)基因的表達(dá)則上調(diào)。5.3聯(lián)合分析在腫瘤診斷與預(yù)后評估中的應(yīng)用綜合免疫微環(huán)境和免疫相關(guān)基因分析，在惡性胸膜間皮瘤的診斷和預(yù)后評估中具有重要的應(yīng)用價值。在腫瘤診斷方面，通過檢測免疫微環(huán)境中免疫細(xì)胞的浸潤情況以及免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平，可以為惡性胸膜間皮瘤的早期診斷提供重要依據(jù)。免疫細(xì)胞浸潤特征可以作為診斷的生物標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)，惡性胸膜間皮瘤組織中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的浸潤數(shù)量顯著高于正常組織，且與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。通過檢測腫瘤組織中Treg細(xì)胞的浸潤數(shù)量，可以輔助判斷腫瘤的性質(zhì)。當(dāng)Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量超過一定閾值時，患惡性胸膜間皮瘤的可能性顯著增加。在一項針對100例疑似惡性胸膜間皮瘤患者的研究中，以每高倍鏡視野下Treg細(xì)胞浸潤數(shù)量30個為閾值，診斷惡性胸膜間皮瘤的靈敏度為70%，特異度為80%。免疫相關(guān)基因的表達(dá)譜也可用于腫瘤診斷。程序性死亡配體1（PD-L1）基因在惡性胸膜間皮瘤中高表達(dá)，通過檢測PD-L1基因的表達(dá)水平，可以提高診斷的準(zhǔn)確性。利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測PD-L1基因的mRNA表達(dá)水平，在惡性胸膜間皮瘤患者中的表達(dá)量顯著高于良性胸膜疾病患者，以PD-L1基因表達(dá)量的中位數(shù)為臨界值，診斷惡性胸膜間皮瘤的受試者工作特征曲線下面積（AUC）可達(dá)0.85。免疫微環(huán)境和免疫相關(guān)基因分析在腫瘤預(yù)后評估中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。免疫細(xì)胞浸潤和免疫基因表達(dá)與患者的生存預(yù)后密切相關(guān)。腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量越多，患者的生存期往往越長。在一項對200例惡性胸膜間皮瘤患者的隨訪研究中，CD8+T細(xì)胞浸潤數(shù)量高的患者組，中位生存期為18個月，而CD8+T細(xì)胞浸潤數(shù)量低的患者組，中位生存期僅為12個月。免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平也可用于預(yù)測患者的預(yù)后。PD-L1基因高表達(dá)的患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。在另一項研究中，將惡性胸膜間皮瘤患者分為PD-L1高表達(dá)組和低表達(dá)組，高表達(dá)組患者的中位無進(jìn)展生存期為6個月，中位總生存期為12個月；低表達(dá)組患者的中位無進(jìn)展生存期為10個月，中位總生存期為18個月。通過構(gòu)建包含免疫細(xì)胞浸潤指標(biāo)和免疫相關(guān)基因表達(dá)水平的預(yù)后模型，可以更準(zhǔn)確地評估患者的預(yù)后。一項研究利用多因素Cox回歸分析，納入CD8+T細(xì)胞浸潤數(shù)量、PD-L1基因表達(dá)水平、腫瘤分期等因素，構(gòu)建了惡性胸膜間皮瘤的預(yù)后模型。該模型的C指數(shù)為0.75，具有較好的預(yù)測效能，能夠為臨床醫(yī)生制定治療方案和評估患者預(yù)后提供重要參考。六、基于免疫微環(huán)境和免疫基因的治療策略探索6.1現(xiàn)有免疫治療方法在惡性胸膜間皮瘤中的應(yīng)用免疫檢查點抑制劑在惡性胸膜間皮瘤的治療中展現(xiàn)出了一定的療效。其中，納武利尤單抗聯(lián)合伊匹木單抗的雙免疫聯(lián)合治療方案在臨床研究中取得了顯著成果。CheckMate-743研究是一項開放標(biāo)簽、多中心的隨機(jī)III期試驗，旨在評估納武利尤單抗聯(lián)合伊匹木單抗對比標(biāo)準(zhǔn)化療（培美曲塞聯(lián)合順鉑或卡鉑）用于一線治療惡性胸膜間皮瘤患者的治療效果。該研究結(jié)果顯示，在最短隨訪22個月時，納武利尤單抗聯(lián)合伊匹木單抗治療組較標(biāo)準(zhǔn)化療可顯著降低胸膜間皮瘤患者死亡風(fēng)險，患者的中位總生存期（OS）為18.1個月，而化療組為14.1個月（HR=0.74;96.6%CI:0.60-0.91;p=0.002）。在預(yù)后更差的惡性胸膜間皮瘤非上皮樣組織類型患者亞組中，雙免疫治療組生存期較化療組延長了近10個月，死亡風(fēng)險降低了54%?；诖搜芯繑?shù)據(jù)，納武利尤單抗聯(lián)合伊匹木單抗有望成為不可手術(shù)切除惡性胸膜間皮瘤一線治療新的標(biāo)準(zhǔn)方案。PD-1/PD-L1抑制劑單藥治療在惡性胸膜間皮瘤中的有效率有限。大量I/II期臨床研究數(shù)據(jù)提示PD-1/PD-L1抑制劑可能改變胸膜間皮瘤的預(yù)后，但單藥治療效果并不理想。一項針對PD-1抑制劑單藥治療惡性胸膜間皮瘤的研究顯示，其客觀緩解率（ORR）僅為10%-20%，中位無進(jìn)展生存期（PFS）為3-5個月。這可能是由于惡性胸膜間皮瘤的免疫微環(huán)境較為復(fù)雜，單一的PD-1/PD-L1抑制劑無法完全解除腫瘤的免疫逃逸機(jī)制。腫瘤細(xì)胞可以通過多種途徑抑制免疫細(xì)胞的活性，如上調(diào)其他免疫抑制分子的表達(dá)，導(dǎo)致PD-1/PD-L1抑制劑的作用受到限制。CTLA-4抑制劑單藥治療在惡性胸膜間皮瘤中的療效也不盡人意。大型II期隨機(jī)試驗Determine研究顯示，在1-2線治療后進(jìn)展的不可切除胸膜/腹膜間皮瘤中，CTLA-4抑制劑Tremelimumab單藥相對于空白對照組并不能