果洛牛布魯氏菌病的流行診斷和綜合防控策略的分析探討

牛布魯氏菌病是現(xiàn)代牛養(yǎng)殖業(yè)中危害極大的一類人畜共患傳染性疾病，病原主要進行消化道、生殖道、呼吸道和破損的黏膜組織等多種渠道進行傳播，很容易在養(yǎng)殖、屠宰、銷售等諸多環(huán)節(jié)傳播流行，嚴重威脅到養(yǎng)殖人員和消費者的身心健康以及畜牧養(yǎng)殖安全。青海省果洛州有著悠久的牛養(yǎng)殖歷史，牦牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)是當?shù)氐闹е援a(chǎn)業(yè)，隨著近年來養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴大，規(guī)?；B(yǎng)殖場的建設數(shù)量逐漸增加以及養(yǎng)殖戶對外引種頻率的顯著增強，布魯氏菌病的傳入風險大大增加，如果缺乏科學有效的診斷和防控，勢必會對牛的正常生長發(fā)育構成嚴重危害。目前基層地區(qū)的農(nóng)牧民群眾對布魯氏菌病的危害認知不足，在日常養(yǎng)殖過程中，并不能夠做好疾病的有效識別和防治工作經(jīng)驗的有效總結，當出現(xiàn)疑似病例之后，不知道該采取哪種措施進行有效的處理，最終造成布魯氏菌在養(yǎng)殖場中大范圍傳播蔓延，引發(fā)大批量的牦牛發(fā)病，帶來不可挽回的直接損失。本次研究在對青海省果洛州牛養(yǎng)殖現(xiàn)狀進行探討的基礎上，進一步分析了布魯氏菌病的流行特點、診斷方法和綜合防控措施，希望對更好地降低該類疾病的發(fā)生流行率有一定幫助。一、青海省果洛州牛布魯氏菌病的防控現(xiàn)狀1、青海省果洛州牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀青海省果洛州屬高原大陸性季風氣候，冬長夏短，溫差較大，降水稀少，年平均氣溫-2～2℃，1月平均氣溫-15～-5℃，7月平均氣溫10～16℃，平均年降水量300～500mm，主要集中在6～9月，年日照時數(shù)2800～3000h。當?shù)負碛胸S富的畜牧資源全州草地面積，占全省草場面積的1/3以上，境內(nèi)有黃河、瑪曲河等河流，高原氣候涼爽，晝夜溫差大，有利于畜牧業(yè)的發(fā)展，再加上藏族文化中重視畜牧業(yè)，當?shù)剞r(nóng)牧民群眾擁有豐富的畜牧業(yè)傳統(tǒng)和養(yǎng)殖經(jīng)驗。目前果洛州已經(jīng)基本形成了以牦牛肉、牦牛奶、牦牛絨為核心的牦牛產(chǎn)業(yè)鏈。2、青海省果洛州牛布魯氏菌病防控現(xiàn)狀隨著青海果洛州牦牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的不斷向前推進和發(fā)展養(yǎng)殖規(guī)模擴大背景之下，以布魯氏菌病為主的人畜共患傳染性疾病呈現(xiàn)散發(fā)流行的態(tài)勢，并且越發(fā)嚴重，其中瑪多縣、班瑪縣、久治縣等地發(fā)病率較高，病原主要通過接觸感染牛的胎盤、胎衣、流產(chǎn)物、精液等途徑傳播。為更好降低布魯氏菌病的陽性率，確保牦牛養(yǎng)殖安全，當?shù)剞r(nóng)牧部門和政府部門高度重視牛布魯氏菌病的防控工作，定期對牛群進行布魯氏菌抗體檢測，發(fā)現(xiàn)陽性牛后，立即隔離并撲殺，對密切接觸牛只進行檢測和隔離，對4～8月齡的雌性犢牛進行布魯氏菌疫苗接種，建立免疫屏障，加強疫區(qū)徹底消毒，對疫區(qū)引進的牛只進行檢疫和隔離，同時開展牛布魯氏菌病防治知識宣傳和培訓，增強牧民的防控意識和能力。盡管果洛州采取了積極的防控措施，但牛布魯氏菌病防控仍面臨挑戰(zhàn)。在疫病防控期間部分農(nóng)牧民對布魯氏菌病認識不足，防控措施落實不到位，另外果洛州地處高原，自然環(huán)境復雜，增加了布魯氏菌傳播的難度，再加上野生動物也可能攜帶布魯氏菌，對牛群構成潛在威脅。二、牛布魯氏菌病的流行病學1、牛布魯氏菌病的病原學布魯氏菌病是由布魯氏菌屬的細菌引起，病原為革蘭氏陰性細菌，呈球形、球桿狀或短桿狀，無鞭毛，不運動，也不形成芽孢，在沙黃-孔雀綠染色中呈紅色，而其他細菌則呈綠色，這一特性可作為其鑒別依據(jù)。布魯氏菌為絕對厭氧菌，對氧氣非常敏感，需要在無氧環(huán)境下生長。在低溫、干燥的環(huán)境中，其活動能力較強，而在高溫條件下活動能力較差，在60℃的環(huán)境中，約30min即可將其殺死。在體外環(huán)境中細菌的抵抗力較強，能在動物的乳汁、皮毛、分泌物和排泄物中存活數(shù)月，對常用的物理和化學消毒方法均敏感，濕熱60℃或紫外線照射20min即可滅活。目前，布魯氏菌病在全球近170個國家和地區(qū)的人畜中存在，在我國布魯氏菌病曾在20世紀80年代和90年代初期得到基本控制，但自90年代中期起疫病持續(xù)快速上升，成為報告發(fā)病率上升速度最快的傳染病之一。2、牛布魯氏菌病的致病機理牛布魯氏菌可通過皮膚損傷、吸入或攝入進入人體，優(yōu)先靶向單核巨噬細胞，在單核巨噬細胞內(nèi)牛布魯氏菌在細胞質中存活和增殖，并在增殖過程中能夠產(chǎn)生多種致病因子，常見的包括脂多糖（LPS）和生物膜，這些因子會抑制宿主的免疫反應，LPS抑制巨噬細胞吞噬和殺菌活性，生物膜形成保護層，防止抗體和免疫細胞的進入。隨后布魯氏菌產(chǎn)生胞內(nèi)生長抑制因子（IGS），損害巨噬細胞并導致細胞壞死，胞內(nèi)增殖會破壞單核巨噬細胞的生理功能，導致免疫反應受損，細胞當中的布魯氏菌死亡之后會釋放脂多糖（LPS），導致炎癥、發(fā)燒和組織損傷，炎癥細胞又會進一步釋放促炎細胞因子，例如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-6（IL-6），并持續(xù)在單核巨噬細胞內(nèi)建立持續(xù)感染。3、牛布魯氏菌病的流行特點從當前牛布魯氏菌病的流行情況來看，該種疾病在牧區(qū)大多呈現(xiàn)散發(fā)流行狀態(tài)呈散發(fā)流行狀態(tài)，并且近年來越發(fā)嚴重，發(fā)病率逐年上升，已波及果洛州所有縣市，主要感染牦牛和黃牛，牦牛感染率高于黃牛，病原要通過接觸感染牛的胎盤、胎衣、流產(chǎn)物、精液等途徑傳播。從傳播規(guī)律來看，牛布魯氏菌病的流行具有一定季節(jié)性，牧區(qū)該類疾病發(fā)病多集中在春季和秋季，與牛的繁殖季節(jié)有關，青年牛和初產(chǎn)牛感染率較高，呈現(xiàn)地域性分布，牧區(qū)發(fā)病率高于農(nóng)區(qū)。從流行原因來看，果洛州牛布魯氏菌病的流行往往與養(yǎng)殖方式、免疫接種、農(nóng)牧民群眾的防控意識、野生動物的接觸密切相關，當前在牧區(qū)大多數(shù)農(nóng)牧民群眾一直堅持放牧為主，牛群間接觸頻繁，增加了傳播風險，再加上部分牧民未及時對牛犢進行疫苗接種，對布魯氏菌病的認識不足，防控措施落實不到位，以及野生動物也可能攜帶布魯氏菌，對牧區(qū)牦牛生產(chǎn)構成潛在威脅。三、牛布魯氏菌病的臨床癥狀牦牛布魯氏菌病的潛伏期一般為7～60d，平均約為2～3周，但也有報告指出，少數(shù)病例的潛伏期可短至數(shù)天或長達數(shù)月。感染細菌之后，患病牛就會表現(xiàn)出較為復雜的臨床癥狀，牦牛在急性期可能出現(xiàn)發(fā)熱，典型的發(fā)熱形態(tài)為波狀熱，即體溫逐漸升高，達到高峰后緩慢下降，熱程約2～3周，間歇數(shù)日至2周，然后體溫再次升高，反復多次，并在此階段出現(xiàn)寒戰(zhàn)、多汗、頭痛、肌肉和關節(jié)疼痛、乏力、肝脾和淋巴結腫大等癥狀。病程超過一年的病例稱為慢性期，可分為兩類，一類是全身性非特異性癥狀，持續(xù)出現(xiàn)低熱、癥狀體征反復出現(xiàn)或加重，類似神經(jīng)癥和慢性疲勞綜合征，另一類是器質性損害，骨骼-肌肉系統(tǒng)的損害，大關節(jié)損害和肌腱攣縮，神經(jīng)系統(tǒng)病變?nèi)缰車窠?jīng)炎、腦膜炎，以及泌尿生殖系統(tǒng)病變?nèi)绮G丸炎、附睪炎、卵巢炎等，尤其是妊娠階段的母牛在妊娠中后期極容易出現(xiàn)流產(chǎn)現(xiàn)象，產(chǎn)下的胎兒大多死亡，即便是胎兒能夠存活也會天然攜帶有布魯氏菌導致該種病情大范圍傳播蔓延。四、牛布魯氏菌病的病理變化通過對病死牛解剖之后能夠發(fā)現(xiàn)，病死牛的多個臟器器官都會出現(xiàn)廣泛性的病理變化，其中肝臟是布魯氏菌最常侵犯的器官之一，急性感染時，肝臟出現(xiàn)充血、水腫和細胞浸潤，隨后形成肉芽腫，主要由上皮樣細胞、巨噬細胞和淋巴細胞組成，慢性感染時肝臟可能出現(xiàn)纖維化和肝硬化。脾臟腫大，鏡下可見淋巴細胞和巨噬細胞的彌漫性浸潤，淋巴結腫大，鏡下可見淋巴細胞、巨噬細胞和漿細胞的浸潤。母畜可能出現(xiàn)流產(chǎn)、不育和子宮炎，公畜可能出現(xiàn)睪丸炎，導致睪丸腫大和萎縮。腎臟出現(xiàn)炎性變化，充血、細胞浸潤和腎小球硬化，中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變導致腦膜炎、腦炎和神經(jīng)炎。將腫大關節(jié)切開之后可以發(fā)現(xiàn)內(nèi)部關節(jié)炎顯著增多，關節(jié)軟骨壞死，有的病死牛還會表現(xiàn)出心內(nèi)膜炎和心肌炎，導致心臟病變。五、牛布魯氏菌病的實驗室診斷1、顯微鏡檢查準備好干凈的載玻片，患病牛的流產(chǎn)物、胎衣碎片、科茲羅夫斯基染液、95%酒精溶液、顯微鏡。將病料粉碎之后，按照1∶20用生理鹽水進行稀釋，在干凈的載玻片上滴加少量病料，加一滴科茲羅夫斯基染液覆蓋在病料上。放置片刻，讓染料與病料充分接觸，滴加95%酒精溶液至玻片邊緣，讓酒精從邊緣處緩慢滲入，直至玻片中央，作用30s后，用濾紙吸去多余酒精，自然干燥，用顯微鏡觀察染色后的細菌。在顯微鏡下能夠觀察到菌體被染成紅色，背景是淡黃色或者淡棕色，其他菌體被染成藍色。出現(xiàn)上述特征之后，可以初步判定為布魯氏菌感染。2、虎紅平板凝集試驗在玻璃板各方格標記受檢血清編號，然后加入相應的血清25L，各待檢血清旁滴加虎紅抗原25L，用滅菌牙簽類小棒快速混勻血清和抗原，涂成2cm直徑的圓形，于4min內(nèi)觀察結果。標準陰性血型不出現(xiàn)凝集，標準陽性血清出現(xiàn)凝集，在陰性對照和陽性對照成立的基礎上待檢血清出現(xiàn)凝集之后表示為陽性，不出現(xiàn)凝集表示為陰性。3、試管凝集試驗在實驗之前準備好布魯氏菌標準抗原，0.5%石炭酸生理鹽水，待檢血清，已知陰性和陽性血清，用于對照、凝集試驗管（三角管）、試管架、吸管和溫箱。按常規(guī)方法將牦牛血清從-20℃冰箱中取出恢復到室溫溫度條件，對試管分別進行標記，記錄1號、2號、3號和4號試管。1號試管到4號試管分別加入0.5%石炭酸生理鹽水1.15mL、0.5mL、0.5mL、0.5mL。分別取0.1mL被檢血清加入1號試管，用吸管將混合液吹打均勻后棄去0.25mL，取0.5mL混合液加入2號試管，取0.5mL混合液加入3號試管，從3號試管棄去0.5mL混合液，取0.5mL混合液加入4號試管，在各個步驟操作完成之后，分別用吸管將混合液吹打均勻。陰性對照和陽性對照成立的條件下，4號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象且3號試管也出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，2號試管不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象判定為陽性，4號試管不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，3號試管不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，2號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象表示陰性，4號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，3號試管出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，2號試管也出現(xiàn)凝集現(xiàn)象判定可疑。4、全乳環(huán)狀試驗準備好疑似患病牛的全乳樣本、布魯氏菌抗原、PBS（pH7.2-7.4）、環(huán)狀試驗板（直徑3cm）。實驗操作期間將布魯氏菌抗原稀釋為1∶100，離心全乳樣本，取上清液使用，在環(huán)狀試驗板中添加50μlPBS，然后向其中小心加50μL稀釋的抗原，沿著抗原和PBS的界面緩慢滴加100μl乳樣，將試驗板置于搖床或旋轉儀上，以60～80r/min的速度旋轉30min，在環(huán)狀試驗板的界面處觀察結果。在抗原和乳樣之間出現(xiàn)明顯的環(huán)形沉淀帶判定為陽性，沒有出現(xiàn)環(huán)形沉淀帶可以判定為陰性，在抗原和乳樣之間出現(xiàn)不明顯的或部分環(huán)形沉淀帶判定為疑似感染。必要時可以采集血清進行PCR檢測，以確定疫病。六、牛布魯氏菌病的疫病處置方案在進行牦牛布魯氏菌病疫病處置過程中，一定要嚴格落實所出臺實施的強制性規(guī)章制度。發(fā)生疫病之后，應該注重做好疫病的報告工作，確診疫病后，立即啟動應急預案，開展疫病處置工作。首先將病患牦牛與其他牦牛分開，轉移到隔離區(qū)進行觀察，對病患牦牛所處的圈舍、用具使用2%的復合酚或者2%的甲酚皂等消毒劑進行全面消毒，防止疫病擴散，堅持每天上午下午各消毒1次，連續(xù)使用一周以后每周消毒1～2次，逐漸過渡到常規(guī)消毒方案。對疑似病例進行實驗室檢測，排查其他牦牛是否感染布魯氏菌，對確診為布魯氏菌病的牦牛嚴格地撲殺無害化處理，防止疫病反復。同時加強疫病監(jiān)測與防控，對牦牛進行布魯氏菌病檢測，確保疫病不擴散。疫病控制措施實施后，疫區(qū)的最后一頭患病牛撲上，或者死亡，連續(xù)監(jiān)測至少21d時間，未發(fā)現(xiàn)新發(fā)病例，可解除疫病，解除疫病后，應繼續(xù)加強監(jiān)測，防止疫病復發(fā)。七、牛布魯氏菌病的綜合預防為了有效防控牦牛布魯氏菌病，需要做到每間隔2～3個月對牦牛群進行布魯氏菌病的監(jiān)測，使用血清學檢測等方法，及時發(fā)現(xiàn)帶菌動物，對檢出的陽性牛只進行隔離撲殺，避免其與其他健康牛只接觸。養(yǎng)殖場內(nèi)部建立完善的生物安全體系，劃分好隔離養(yǎng)殖區(qū)，嚴格控制外來動物及產(chǎn)品進入養(yǎng)殖場，做好畜舍的清潔和消毒工作，特別是對于流產(chǎn)、死胎和排泄物等高風險區(qū)域應該嚴格落實流產(chǎn)物的無害化處理和衛(wèi)生消毒，避免不同年齡和來源的牦?；烊海貏e是避免帶菌牛與健康?；烊?。另外，加強飼養(yǎng)管理，保持牛只良好的體質，提高其對疾病的抵抗力，避免過度擁擠和不良的飼養(yǎng)環(huán)境，減少疾病傳播的風險。從事養(yǎng)殖、屠宰、加工等職業(yè)的人員在工作過程中，應采取適當?shù)膫€人防護措施并做到每年對從事相關工作的人員進行健康檢查，及時發(fā)現(xiàn)和治療感染者。此前，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下發(fā)的常見動物疫病免疫推薦方案中，將青海省確定為布魯氏菌病感染的一類地區(qū)，所以為更好防控該種疾病的發(fā)生流行，應該以縣為單位連續(xù)3年對牛實行全面免疫接種，推薦使用M5或者S9株布魯氏菌疫苗對牛進行免疫接種，2月齡以上的健康牛每頭牛使用1mL，皮下注射，免疫期12個月。綜上所述，牛布魯氏菌病具