（高清版）DB62∕T 4756-2023 玉米抗北方炭疽病鑒定技術(shù)規(guī)程

DB62/T4756—20玉米抗北方炭疽病鑒定技術(shù)規(guī)程2023-09-25實施2023-09-25實施 1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14田間癥狀表現(xiàn)型 25人工接種抗病性鑒定方法 26抗性評價 5附錄A(規(guī)范性)玉米北方炭疽病癥狀、玉蜀黍球梗孢菌形態(tài)特征 6I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實施。本文件由甘肅省糧食油料作物栽培標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：河西學(xué)院、泉州師范學(xué)院、高臺縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、甘肅省會寧縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、德農(nóng)種業(yè)股份有限公司、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)、甘肅前進(jìn)生物科技發(fā)展有限公司、金塔縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、甘州區(qū)農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測服務(wù)中心、甘州區(qū)種子產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心、甘肅德光農(nóng)業(yè)有限公司、酒泉市通盈種苗有限公司、莊浪縣鄉(xiāng)村振興事務(wù)服務(wù)中心、莊浪縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。本文件主要起草人：雷玉明、雷鑫、秦國偉、任雯麗、鄭天翔、王偉、吳堯、濮超、楊國振、薛春生、馬金、李棟、冒國偉、張琪、陳海龍、陸靜、李會文、王廷三、程紫霞、蘇朋朋。本文件由河西學(xué)院負(fù)責(zé)解釋。本文件規(guī)定了玉米品種北方炭疽抗病性鑒定技術(shù)和抗病性評價標(biāo)準(zhǔn)。本文件規(guī)定了玉米北方炭疽病接種體制備、菌種繁殖與保存、鑒定圃設(shè)置、接種、病情調(diào)查、抗性評價等的技術(shù)要求及玉米自交系、雜交種等抗性鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。DB62/T4180玉米主要病蟲害綜合防治技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。玉米北方炭疽病一種由玉蜀黍球梗孢菌引起玉米的真菌性葉部病害。玉蜀黍球梗孢菌學(xué)名KabatiellazeaeNaritaetHiratsuka,一種引起玉米北方炭疽病的致病菌，屬無性型真菌，腔孢綱、黑盤孢目、黑盤孢科、球梗霉屬的一種真菌。單孢分離一種分離孢子的方法。在無菌條件下，通過解剖鏡或顯微鏡觀察孢子菌懸液或瓊脂平板表面，利用解剖針或移植器、玻璃毛細(xì)管等挑取單一孢子，置于相應(yīng)培養(yǎng)基上，萌發(fā)形成菌絲而獲得純菌種的方法。稱取馬鈴薯200g,洗凈去皮切碎，加水1000mL煮沸20min～30min,紗布過濾，補水至1000mL,加入葡萄糖18g～20g,瓊膠18g～20g,攪拌均勻，120℃~125℃高壓滅菌30min。KZM培養(yǎng)基稱取羧甲基纖維素10g,麥芽糖5g,蛋白胨1.5g,KH?OPO?1g,加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解，補水至1000mL,120℃~125℃高壓滅菌30min。PD液體培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基中不添加瓊脂制作的液體培養(yǎng)基。12利用組織分離法分離病原菌，將采集到的典型癥狀病葉，剪取病健交界處(0.2mm～0.3mm)× (0.2mm～0.3mm)小塊，經(jīng)70%酒精溶液消毒15s～20s,0.1%升汞溶液消毒30s,無菌水沖洗3次，將純培養(yǎng)物在PDA平板上培養(yǎng)15d,刮取PDA平板上的分生孢子，用無菌水配制成濃度為1×10?個/mL～1×10?個/mL的孢子懸浮液，噴霧接種于人工氣候室栽培的玉米6葉期的葉片上，保持室內(nèi)溫度25℃±2℃,相對濕度90%～92%,持續(xù)時間48h。接種10d后觀察發(fā)病情況，葉片癥狀與A.1規(guī)定一致，獲得病原物形態(tài)與A.2規(guī)定一致，確定分離物為致病菌。將純化培養(yǎng)物接種于PDA培養(yǎng)基25℃±1℃黑暗培養(yǎng)8d～10d后，用滅菌內(nèi)徑6mm打孔器切取菌落將帶菌KZM液體培養(yǎng)基進(jìn)行過濾，血球計數(shù)板測定濾液中分生孢子數(shù)量，無菌水調(diào)制濾液濃度至1×10?個/mL～1×10?個/mL,加入0.02%吐溫-20(v/v),子懸浮液，按照體積比1:1比例加入50%甘油，配制成甘油菌懸液，保存于-20℃低溫冰箱，備用。效種植面積≥500m2,溫室凈高≥4.0m,溫濕度可控，具備滴灌設(shè)施，種植鑒定材料≥5個。霧接種于植株葉片，接種量控制8mL/株～10mL/株。要求接菌時每個處理之間采用薄膜隔離b)灌注接種，適合于成株期鑒定，用一個帶刻度的10mL注射器吸取孢子懸浮液，從玉米心葉與其下的展開葉葉鞘相接處以下灌注心葉，接種量控制5mL/株～6mL/株。要求注射器不帶度≥60%,持續(xù)時間48h;溫室鑒定圃接種后灌水，溫度控制在25℃±2℃,相對濕度≥90%,持續(xù)時間28h。34參照A.1中田間癥狀表現(xiàn)型的特征，每小區(qū)隨機五點取樣，每點調(diào)查3株，苗期接種每株自上而下調(diào)查5～10片葉，成株期接種每株調(diào)查穗位節(jié)上下6～10片葉，記載病葉數(shù)，按照表1發(fā)病程度統(tǒng)計病情級別數(shù)。5.6.3病情分級與嚴(yán)重度以穗位節(jié)上部和下部葉片病斑的數(shù)量和病斑面積占葉面積的百分比表示發(fā)病程度，發(fā)病程度特征應(yīng)符合表1;病情級別依據(jù)發(fā)病程度由輕到重，采取數(shù)值連續(xù)法劃分1～7級；嚴(yán)重度級值依據(jù)病情級別由小到大，采取數(shù)值間隔法賦予每個級別0～11的代表值，以表示受害玉米葉片的嚴(yán)重度。表1玉米抗北方炭疽病鑒定的病情級別和嚴(yán)重度劃分病情級別10葉片上無病斑21僅在穗位節(jié)下部葉片上有少量病斑，病斑占葉面積≤533穗位節(jié)下部葉片有少量病斑，病斑占葉面積的5.1%～10%,穗位節(jié)上部45穗位節(jié)下部葉片有大量病斑，病斑占葉面積的10.1%～25%,穗位節(jié)上部57穗位節(jié)上部葉片有大量病斑，病斑占葉面積的25.1%～50%,穗位節(jié)下部葉片病斑相連，69穗位節(jié)上部葉片病斑相連，病斑占葉面積的50.1%～75%,穗位節(jié)下部和7全株葉片覆蓋病斑，病斑占葉面積≥75.1%以受侵染葉片數(shù)占調(diào)查總?cè)~片數(shù)的百分率表示，用以表示發(fā)病的普遍程度。每一鑒定材料根據(jù)苗期接種、成株期接種分別調(diào)查75～150片、90～150片葉，采用公式(1)計算普遍率。I(%)=d/M×100………………(1)式中：d——發(fā)病葉片數(shù)；M——調(diào)查總?cè)~片數(shù)。5.6.5病情指數(shù)計算以普遍率和葉片受侵染的嚴(yán)重程度數(shù)值化的綜合表示指標(biāo)，用以衡量玉米群體受北方炭疽病的危害程度。每一鑒定材料根據(jù)苗期接種、成株期接種分別調(diào)查75～150片、90～150片葉，采用公式DI=5(X×S)M×Smax×100………式中：DI——病情指數(shù)；∑——為累加符號，從0級病級數(shù)開始累加；X?第i病級數(shù)的發(fā)病葉片數(shù)；S;——第i病級數(shù)的嚴(yán)重度級值；病情指數(shù)(DI)類別縮寫免疫I抗病R中抗感病S高感6.4.1同一鑒定品種2年的抗性類別一致時，則此抗性類別為最終鑒定結(jié)論。6.4.2同一鑒定品種做第三次抗性鑒定時，取2次一致的抗性類別為最終鑒定結(jié)論。56(規(guī)范性)玉米北方炭疽病癥狀、玉蜀黍球梗孢菌形態(tài)特征A.1玉米北方炭疽病癥狀表現(xiàn)型A.1.1眼狀斑危害葉片，初期呈水浸狀病斑，后漸擴大呈圓形、橢圓形或長圓形，草黃色，中央乳白色，邊緣褐色，外圍鮮黃色的狹窄暈環(huán)。A.1.2枯斑型病斑大小為(0.5mm～2.0mm)×(0.5mm～1.5mm),病斑多相互融合，病斑正面中脈為淡褐色，形成不規(guī)則枯斑。A.2學(xué)名和形態(tài)描述異名：玉蜀黍出芽短梗霉菌Aureobasidiumzeae(Na