高等級病原微生物實驗室第 3 部分：消毒滅菌監(jiān)測與評價要求

湖北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB42/XXXXX.1-2024CCSC59備案號DB42DB42/TXXXX-2025Ⅰ I 2規(guī)范性引用文件 3術語和定義 4基本要求 25監(jiān)測與評價時機 26監(jiān)測與評價方式 37監(jiān)測與評價方法 48質量控制和記錄 59注意事項 510標準實施與評價 5附錄A（規(guī)范性）物體表面消毒效果評價 7附錄B（資料性）湖北省地方標準實施信息及意見反饋表 9DB42/TXXXX-2025Ⅱ本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是DB42/T****《高等級病原微生物實驗室》的第1部分。DB42/T****由以下4部分組成：——第1部分：消毒技術規(guī)范；——第2部分：感染性廢物處置規(guī)范；——第3部分：消毒滅菌監(jiān)測與評價要求；——第4部分：個人防護規(guī)范。本文件由湖北省衛(wèi)生健康委員會提出并歸口。本文件起草單位：湖北省疾病預防控制中心、中國科學院武漢病毒研究所、武漢生物制品研究所有限責任公司。本文件主要起草人：本文件實施應用中的疑問，可咨詢湖北省衛(wèi)生健康委員會，聯(lián)系電話：***，郵箱：***；對本文件的有關修改意見建議請反饋至湖北省疾病預防控制中心，聯(lián)系電話：***，郵箱：***。DB42/TXXXX-20251高等級病原微生物實驗室第3部分：消毒滅菌監(jiān)測與評價要求本文件規(guī)定了高等級病原微生物實驗室消毒滅菌效果監(jiān)測與評價的基本要求，監(jiān)測與評價的時機，方式和方法，質量控制和記錄，注意事項及標準實施與評價。本文件適用于生物安全三級實驗室和生物安全四級實驗室。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB18281.1醫(yī)療保健產品滅菌生物指示物第1部分：通則GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T30690小型壓力蒸汽滅菌器滅菌效果監(jiān)測方法和評價要求RB/T199實驗室設備生物安全性能評價技術規(guī)范WS233病原微生物實驗室生物安全通用準則WS310.3醫(yī)院消毒供應中心第3部分：清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標準WS/T466消毒專業(yè)名詞術語WS/T774新冠肺炎疫情期間現(xiàn)場消毒評價標準WS/T775新型冠狀病毒消毒效果實驗室評價標準WS/T797現(xiàn)場消毒評價標準WS/T10009消毒產品檢測方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1消毒滅菌監(jiān)測disinfectionandsterilizationmonitoring為保障消毒滅菌效果，對其重要環(huán)節(jié)、參數(shù)及全過程進行長期、連續(xù)、系統(tǒng)性的觀察和檢測。3.2消毒滅菌效果評價disinfectionandsterilizationeffectevaluation通過檢測消毒前后活性微生物的下降率，或滅菌后的無菌狀態(tài)，評價消毒滅菌工作質量是否符合要3.3目標微生物targetmicroorganism對實驗室消毒時，應殺滅某種特定病原微生物。[來源：WS/T797-2022，3.2，有修改]3.42DB42/TXXXX-2025指示微生物indicatormicroorganism具有確定的抗力并代表某類微生物、可供現(xiàn)場模擬評價使用的人工污染微生物。[來源：WS/T797-2022，3.3]3.5自含式生物指示物self-containedbiologicalindicator初級包裝中含有試驗微生物恢復生長所需培養(yǎng)基的生物指示物。[來源：GB18281.1-2015，3.17]3.6化學指示物chemicalindicator根據(jù)暴露于某種滅菌(消毒)程序所產生的化學或物理變化，在一個或多個預定程序參數(shù)上顯現(xiàn)變化的指示器材。[來源：WS/T466-2014，5.13]3.7B-D測試裝置B-Dtestdevice將B-D測試紙與作為負載的包裝整合在一起可直接用于B-D測試的指示裝置。4基本要求4.1實驗室應制定消毒滅菌監(jiān)測評價相關程序文件，包括人員培訓、操作流程、設備管理和記錄等環(huán)節(jié)。4.2消毒滅菌監(jiān)測評價工作應由指定人員負責。4.3監(jiān)測評價人員應具備消毒及微生物檢驗檢測專業(yè)技能。4.4監(jiān)測評價項目包括物理監(jiān)測、化學監(jiān)測和生物監(jiān)測。4.5監(jiān)測評價結果出現(xiàn)不合格時，應分析原因并及時處理，直至結果符合要求。5監(jiān)測與評價時機5.1消毒滅菌監(jiān)測對使用的消毒劑或消毒滅菌設備，應定期監(jiān)測其關鍵的化學或物理指標。對需要配制的或使用時間較長的化學消毒劑，可在配制后或使用中定期監(jiān)測有效成分濃度；紫外線燈應定期監(jiān)測輻照強度；壓力蒸汽滅菌器及氣（汽）體消毒等特殊設備按7.2執(zhí)行。5.2消毒滅菌效果評價對于消毒滅菌操作有下列情況之一時應進行效果評價：a）終末消毒；b）關鍵消毒對象或消毒設備的定期驗證和評價；c）首次采用新的消毒方法或消毒技術；d）更換消毒劑種類、使用新的消毒設備、消毒設備維修或重新安裝后；e）其他關鍵因素發(fā)生變化時，如消毒場景、消毒對象、消毒方式等；f）實驗室有特定需求時。DB42/TXXXX-202536監(jiān)測與評價方式6.1物理監(jiān)測用于物理消毒滅菌設備的監(jiān)測，如熱力、輻照和紫外線等。壓力蒸汽滅菌器可使用內置或外配檢測儀對滅菌器的物理參數(shù)進行監(jiān)測，如溫度、壓力和時間等。紫外線燈可使用紫外線強度指示卡或紫外輻照計對其輻照強度進行監(jiān)測。6.2化學監(jiān)測用于化學消毒劑有效成分濃度的監(jiān)測，宜優(yōu)先選擇有效的化學濃度指示卡或濃度檢測設備等簡單快速的方法，也可使用其他有效的標準方法監(jiān)測。6.3生物監(jiān)測以檢測微生物是否存在，或存在的數(shù)量作為判定依據(jù)的現(xiàn)場模擬評價方法。微生物的選擇應根據(jù)消毒因子特性和實驗室所操作病原微生物種類確定?？芍苯舆x用目標微生物，或選擇抗力與目標微生物相當或更高、易于培養(yǎng)且符合實驗室生物安全要求的指示微生物。選擇抗力強的微生物進行評價后，不需要再用抗力弱的微生物，除非有特殊要求。試驗方法分為載體法和染菌法，可按附錄A自行制備微生物載體，也可選用符合要求的商品化菌片或自含式生物指示物。7監(jiān)測與評價方法7.1消毒對象監(jiān)測與評價7.1.1一般物體表面可選用載體法或染菌法對物體表面進行消毒效果評價。以污染風險較高的操作臺面、儀器設備表面、門把手、按鈕等為重點采樣對象，并同時兼顧消毒因子難以達到的地方，每類采樣對象不少于2個樣本。采樣和檢測評價方法按附錄A執(zhí)行。7.1.2復用型防護用品可選用載體法或染菌法對防護眼（面）罩、正壓送風式呼吸器、正壓防護服等復用型防護用品進行消毒效果評價。正壓防護服的采樣點應包括頭部、前胸、后背、腋下、手臂、襠部及鞋底等重點部位。采樣和檢測評價方法參照附錄A執(zhí)行。7.1.3生物安全柜應選用載體法對生物安全柜進行消毒效果評價。柜內采樣點應設在操作臺面、頂面、側壁和集液槽等重點部位，排風高效過濾器采樣點應設在排風高效過濾器的下游。7.1.4房間高效過濾器DB42/TXXXX-20254應選用載體法對房間的高效過濾單元進行消毒效果評價。對排風高效過濾器消毒時，采樣點應設在排風高效過濾器的下游；需要對送風高效過濾器消毒時，采樣點應設在送風高效過濾器的下游。7.1.5獨立通風籠具應選用載體法對獨立通風籠具進行消毒效果評價。采樣點應設在送風、排風高效過濾器下游及籠具7.2消毒滅菌設備檢測與評價7.2.1紫外線燈對于房間、生物安全柜、傳遞窗等處安裝的紫外線燈，可用紫外線強度指示卡或紫外輻照計定期對其輻照強度進行監(jiān)測，按產品說明書操作并判定結果，其輻照強度應不低于產品說明書注明的輻照度值。必要時，可用載體法對其照射的物體表面進行消毒效果評價。7.2.2氣（氣）體消毒設備參數(shù)監(jiān)測每次消毒應監(jiān)測并記錄關鍵參數(shù)，如環(huán)境初始溫/濕度條件、過氧化氫注入的速率、時間及用量等。應符合設備使用說明或實驗室經驗證后確定的參數(shù)?；瘜W監(jiān)測每次消毒應使用化學指示卡或濃度傳感器監(jiān)測消毒因子的空間濃度，化學指示卡可放置于空間內污染風險較高或消毒因子較難擴散到達的部位，如操作臺面、儀器設備腔體等。經過一個消毒周期后，根據(jù)其顏色變化來判定其是否達到要求。日常應定期監(jiān)測設備配套使用的化學消毒劑的有效成分濃度。生物監(jiān)測應使用嗜熱脂肪桿菌（ATCC7953或ATCC12980）芽孢或枯草桿菌黑色變種（ATCC9372）芽孢為指示微生物，不銹鋼片為載體進行消毒效果評價。生物指示物應放置于空間內污染風險較高或消毒因子較難擴散到達的部位，如操作臺面、儀器設備腔體等。商品化菌片或自含式生物指示物按產品說明書的要求，培養(yǎng)至規(guī)定時間后判定結果。7.2.3壓力蒸汽滅菌器參數(shù)監(jiān)測每次滅菌應觀察并打印溫度、壓力和時間等物理參數(shù)。滅菌溫度范圍的實測值不低于設定值且不高于設定值3℃,滅菌室內任意2點差值不得超過2℃,滅菌時間實測值不低于設定值。化學監(jiān)測DB42/TXXXX-20255每包待滅菌物品外應粘貼化學指示膠帶，經過一個滅菌周期后，根據(jù)其顏色變化來區(qū)分已滅菌和未滅菌物品。每次滅菌均應放置化學指示卡，根據(jù)其顏色變化判定滅菌過程是否符合要求。化學指示物變色達標則為合格；變色不達標則為不合格。生物監(jiān)測應至少每6個月進行一次滅菌效果監(jiān)測，將生物指示物放置于滅菌器最難滅菌的部位。必要時，應模擬滅菌器常用的、有代表性的滅菌物品和包裝方式，將生物指示物放置于包內最難滅菌的部位進行滅菌效果驗證。自含式生物指示物按產品說明書的要求，培養(yǎng)至規(guī)定時間后，實驗組和陽性對照組顏色變化均符合產品說明書規(guī)定，則本次滅菌合格；反之不合格。B-D測試預真空（包括脈動真空）式壓力蒸汽滅菌器應至少每3個月進行一次B-D測試，用于監(jiān)測滅菌過程中冷空氣的排除情況。B-D測試裝置應放置于滅菌室排氣口的上方，按產品說明書確定滅菌參數(shù)，滅菌器應空載運行。B-D測試紙完全均勻一致變色為合格；變色不均勻則為不合格。7.2.4化學噴淋設備應每次對化學噴淋設備的運行程序進行監(jiān)測，如消毒劑噴淋時間、消毒暴露時間及水沖洗時間等。對所使用的消毒劑應每批次進行濃度監(jiān)測。應至少每年對所運行的程序進行一次消毒效果評價，可選用染菌法或載體法，評價對象應包括所消毒的正壓防護服表面及化學噴淋艙體側壁。8質量控制和記錄8.1化學消毒后生物監(jiān)測，采樣液應含有相應的中和劑（中和劑鑒定試驗參照WS/T10009）。8.2采樣后應盡快對樣本進行檢測，待檢時間不得超過4h。8.3應對消毒滅菌監(jiān)測與評價活動進行記錄，并存檔。8.4消毒滅菌監(jiān)測活動記錄應包括設備運行參數(shù)、主要操作及監(jiān)測結果等。8.5消毒效果評價記錄應包括樣本名稱、來源、數(shù)量、編號、采樣日期、采樣者、檢測項目及依據(jù)、檢驗結果及符合性評價、檢測者及審核者等關鍵內容。9注意事項9.1采樣人員應按照相應實驗室生物安全防護級別做好個人防護，按要求對帶出的樣本包裝表面進行消毒，檢測人員根據(jù)風險評估在相應級別的生物安全實驗室進行實驗操作。9.2若指示微生物為病毒，消毒效果評價方法可參照WS/T775。9.3微生物核酸無法指示其存活與否，核酸檢測結果不可用于消毒效果評價。10標準實施與評價DB42/TXXXX-2025610.1實施單位應結合實際制定實施方案，包括人員組織、物資配置、培訓宣貫等方面。10.2實施方案應遵循系統(tǒng)性、有效性和持續(xù)性原則，內容包括標準實施的范圍、方式、內容、步驟、預期目標和要求等。10.3培訓宣貫應針對生物安全實驗室管理、運維及實操等崗位人員，通過研討會、培訓班、網絡課程等方式進行宣傳和解讀，并對人員定期進行考核評價。10.4行業(yè)主管部門應建立標準監(jiān)測機制，包括標準的實際應用領域與應用效果，關注其與現(xiàn)有國家標準、行業(yè)標準或地方標準的匹配性。10.5標準主管部門應開展標準實施效果評價分析，包括標準實施的效果以及實施過程中的問題、定期收集處理意見建議。適時向專業(yè)標準化技術委員會和標準歸口單位反饋情況，提出標準推廣、修改、補充、完善或者廢止等意見建議。10.6標準實施信息及意見反饋表相關示例見附錄C。DB42/TXXXX-20257（規(guī)范性）物體表面消毒效果評價A.1指示微生物制備A.1.1載體法按照WS/T10009制備菌片，每個菌片的回收菌量為1×106CFU/片～5×106CFU/片?？蛇x擇方形布片（1cm×1cm）、圓形金屬片(Φ1.2cm）或其他與評價對象接近的材料作為染菌載體，使用氣（汽）體消毒方式時，不可使用布片或紙片等有吸附能力的載體。消毒前，按照7.1.2要求將菌片放置于現(xiàn)場，消毒達到規(guī)定時間后，用無菌鑷子將菌片移入含有5mL相應中和劑的采樣液中，混勻并中和10min。取2個未經消毒的同批菌片為陽性對照組。A.1.2染菌法按照WS/T10009制備菌懸液，每個陽性對照區(qū)塊的回收菌量為5×105CFU/樣本～5×106CFU/樣本，不同材質的物體表面各需設置2個陽性對照。消毒前，按照7.1.2要求選擇現(xiàn)場物體表面較平的部位，用無菌棉簽蘸以菌懸液均勻涂抹于5cm×5cm規(guī)格板內的物體表面，并對染菌區(qū)塊標識（至少另設2個陽性對照組區(qū)塊），自然干燥后對試驗區(qū)塊進行消毒。達到規(guī)定時間后，用無菌棉簽于含5mL中和劑的采樣液中潤濕，分別對試驗區(qū)塊和陽性對照組區(qū)塊進行涂抹采樣，每區(qū)塊橫豎往返各5次，將棉簽采樣端剪入原采樣管內，混勻并中和10min。A.2檢測方法A.2.1定量法將采樣管在混勻器上振蕩20s，分別吸取1mL平行接種2個平皿，傾注15mL～18mL培養(yǎng)基（培養(yǎng)基按指示微生物種類選擇邊傾注邊搖勻，細菌繁殖體培養(yǎng)48h，細菌芽孢培養(yǎng)72h（培養(yǎng)溫度按指示微生物種類設定），計數(shù)菌落數(shù)，計算殺滅率。A.2.1定性法將定量法的采樣管更換為10ml含相應中和劑的培養(yǎng)液（培養(yǎng)液按指示微生物種類選擇采樣方法與定量法相同，采樣后直接將采樣管放入培養(yǎng)箱，細菌繁殖體培養(yǎng)48h，細菌芽孢培養(yǎng)72h（培養(yǎng)溫度按指示微生物種類設定），觀察培養(yǎng)基是否變渾濁或變色。