DB23-T2337-2019-白頭翁組培快繁技術(shù)規(guī)程-黑龍江省

ICS65.020.01B64DB23黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)DB23/T2337—2019白頭翁組培快繁技術(shù)規(guī)程黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB23/T2337—2019前言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009的編寫規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省森林工業(yè)總局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江省林業(yè)科學(xué)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：舒鈺、宋國華、李晶、王丹、王福德、趙學(xué)麗、王穎、王曉榮、黃金龍。IDB23/T2337—2019白頭翁組培快繁技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了白頭翁（Pulsatillachinensis（Bunge）Regel）種苗組培快繁技術(shù)的培養(yǎng)基制備、外植體選擇與處理、誘導(dǎo)分化與增殖、生根培養(yǎng)、煉苗與移栽和技術(shù)檔案。本標(biāo)準(zhǔn)適用于白頭翁組培快繁技術(shù)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3培養(yǎng)基制備3.1培養(yǎng)基不定芽誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基：MS基本培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+GA31.5mg/L+IBA0.5mg/L+瓊脂6.5g/L+蔗糖30g/L，pH調(diào)至5.8。增殖培養(yǎng)基：MS基本培養(yǎng)基+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+瓊脂6.5g/L+蔗糖30g/L，pH調(diào)至5.8。生根培養(yǎng)基：MS基本培養(yǎng)基+KT0.5mg/L+NAA1.5mg/L+瓊脂6.5g/L+蔗糖30g/L，pH調(diào)至5.8。瓶裝培養(yǎng)基需在10h內(nèi)完成滅菌，采用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌，在壓力0.105MPa、溫度121℃條件滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室，常溫條件下保存7d內(nèi)使用，2℃～4℃條件下保存14d內(nèi)使用。培養(yǎng)基應(yīng)保存于潔凈環(huán)境中，注意避光和防塵。擇生長健壯、無病蟲害的植株作為采樣母株，剪取幼枝莖段作為外植體，外植體大小在2cm～4cm先將外植體用洗滌劑作表面清洗，將外植體用流水沖洗30min后，放入消毒瓶中。把裝有外植體的消毒瓶用75%的酒精棉擦拭后放入超凈工作臺，在超凈工作臺上打開裝有外植體的消毒瓶，倒入75%酒精并搖晃消毒瓶，浸泡消毒30s，倒去酒精，用無菌水沖洗外植體3次～5次；然后用0.1%HgCl2浸泡5min，無菌水沖洗4次～5次，并浸泡30min，再用無菌濾紙吸干外植體表面的水分。將表面消毒后的外植體切割，兩端各剪去2mm，保持莖段長度1.5cm～2.5cm，接種至誘導(dǎo)分化培養(yǎng)1DB23/T2337—20195誘導(dǎo)分化與增殖培養(yǎng)條件5.1培養(yǎng)室的溫度控制在25℃±3℃，相對空氣濕度控制在70%～80%，光照強(qiáng)度為27μmol?m-2?s-1～36μmol?m-2?s-1，光照時間為12h/d。5.2誘導(dǎo)分化先將培養(yǎng)瓶的封口膜輕輕取下，放在一邊，將培養(yǎng)瓶口傾斜在酒精燈外焰上旋轉(zhuǎn)灼燒消毒。將槍式鑷子在酒精燈上灼燒消毒并冷卻后，將切割好的外植體放入不定芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)瓶放3個外植體，接種后蓋上封口膜，并標(biāo)注日期。5.3增殖培養(yǎng)外植體經(jīng)誘導(dǎo)分化培養(yǎng)生成愈傷組織及不定芽，將其轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中，繼代培養(yǎng)30d～35d，培養(yǎng)條件同5.1。6生根培養(yǎng)選取培養(yǎng)瓶中長度1.5cm～3.0cm生長健壯的不定芽接種至生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20d～30d，培養(yǎng)條件同5.1。7煉苗與移栽煉苗7.1將組培苗轉(zhuǎn)移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在20℃～25℃，空氣相對濕度在70%～80%，每天中午在培養(yǎng)瓶周圍噴灑霧水。3d后揭去封口膜，2d～4d后即可移栽。移栽取出組培苗，用清水洗去苗基部的培養(yǎng)基，移栽至裝有細(xì)沙、蛭石和珍珠巖（混合比例為1：1：1）的混合基質(zhì)的育苗盤中。育苗盤規(guī)格為35cm×50cm，育苗盤四壁高度不應(yīng)低于7cm，育苗基質(zhì)放入育苗容器并澆透水后，厚度不應(yīng)小于5cm，水滲干后再覆上一層土。溫室應(yīng)保持70%～80%的空氣濕度，溫度應(yīng)在1