（高清版）DB1308∕T 315-2022 珊瑚狀猴頭菌谷粒菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程VIP

65.020.20B05DB1308DB1308/T315—20222022-10-31發(fā)布2022-11-01實施承德市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB1308/T315—2022本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。本文件主要起草人：梁希才、羅民、柳鳳玉、張晨光、劉海軍、劉紹蒼、梁宏麗、張會超、孟凡飛、王彥玲、王帥。DB1308/T315—20221珊瑚狀猴頭菌谷粒菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了珊瑚狀猴頭菌谷粒菌種生產(chǎn)的前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。本文件適用于珊瑚狀猴頭菌谷粒菌種生產(chǎn)過程管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4前期準(zhǔn)備谷粒、石膏、玉米粉、消毒品等。4.2儀器設(shè)備750ml塑料原種瓶、接種工具、超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱等。5操作流程谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養(yǎng)→搖瓶→后續(xù)養(yǎng)菌→保存→備用。6操作方法6.1谷粒選擇選擇帶皮小米谷粒，籽粒飽滿、無雜質(zhì)、直徑為0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以內(nèi)。6.2谷粒浸泡使用塑料桶或箱作為容器，將谷粒倒入容器中，加水浸泡，水與谷粒的體積比為2:1。環(huán)境溫度20℃左右，浸泡4h；環(huán)境溫度15℃左右，浸泡10h；環(huán)境溫度10℃左右，浸泡24h。以谷粒浸透無白心為宜。DB1308/T315—20222浸泡完成后進(jìn)行濾水，將谷粒置于50目篩子上進(jìn)行濾水，以篩底沒有水滴滴下且手抓谷粒不粘手為宜。6.4添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏，攪拌均勻。使用無棉蓋體扣蓋封口，作為培養(yǎng)基。裝瓶后4h內(nèi)進(jìn)行滅菌，防止培養(yǎng)基變酸。采用高壓滅菌方式滅菌，溫度達(dá)到121℃時保持4h，確保滅菌徹底。滅菌完成后，待培養(yǎng)基溫度降到25℃左右時在超凈工作臺無菌的條件下進(jìn)行接菌，每支20mm×200mm的斜面試管PDA培養(yǎng)基母種轉(zhuǎn)接4瓶培養(yǎng)基。6.8菌絲培養(yǎng)接菌完成后，在培養(yǎng)溫度為22℃,空氣相對濕度為60%，二氧化碳濃度不超過0.2%的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)菌絲長到培養(yǎng)基1/4左右時進(jìn)行搖瓶，使得長有菌絲部分的培養(yǎng)基與沒長菌絲的培養(yǎng)基再次混合，以加快菌種的生長速度。6.10后續(xù)養(yǎng)菌待培養(yǎng)基中長滿菌絲后，繼續(xù)培養(yǎng)6d～8d，令菌絲充分長入培養(yǎng)基（谷粒）的內(nèi)部，保證菌絲充分分解谷粒培養(yǎng)基，使谷粒菌種菌絲健壯。6.11保存發(fā)好的菌種宜盡快使用，如較長時間不用，須在0℃~4℃條件下進(jìn)行保存，保存期不得超過90h。6.12備用在使用前用4