普通高中課程標(biāo)準(zhǔn)實驗教科書-生物選修1人教版課題1微生物的實驗室培養(yǎng)

普通高中課程標(biāo)準(zhǔn)實驗教科書一一生物選修1［人教版］

課題1微生物的實驗室培養(yǎng)

★課題目標(biāo)

（一）知識與技能

了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識；掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃線法等基本操

作技術(shù)

（二）過程與方法

分析實驗思路的確定和形成的原因，分析實驗流程，對比前面的實驗設(shè)計，歸納共性，

分析差異，增加印象

（三）情感、態(tài)度與價值觀

形成勇于實踐、嚴(yán)謹(jǐn)求實的科學(xué)態(tài)度和科學(xué)精神

★課題重點

無菌技術(shù)的操作

★課題難點

無菌技術(shù)的操作

★教學(xué)方法

啟發(fā)式教學(xué)

★教學(xué)工具

多媒體課件

★教學(xué)過程

（一）引入新課

在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)月中，都利用了微生物的發(fā)酵作用，其中的微生物來自于制作過程

中的自然感染。而在工業(yè)化生產(chǎn)中，為了提高發(fā)酵的質(zhì)量，需要獲得優(yōu)良菌利I,并保持發(fā)酵

菌種的純度。這就要涉及到微生物的培養(yǎng)、分離、鑒別等基本技術(shù)?，F(xiàn)在我們開始學(xué)習(xí)微生

物的培養(yǎng)和應(yīng)用專題。

（二）進(jìn)行新課

1.基礎(chǔ)知識

1.1培養(yǎng)基的種類包括」a匹培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基等。

K思考12瓊脂是從紅藻中提取的口L，在配制培養(yǎng)基中用作為凝固劑。

【補充】培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用:

標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點主要應(yīng)用

固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離，鑒定，計數(shù)

物理性質(zhì)半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少菌種保存

液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)

合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定

化學(xué)組成

天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生，產(chǎn)降低成本

鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別

目的用途

選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)成分菌種的分離

1.2培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機鹽、碳源、氮源四類營養(yǎng)成分。

K思考2］從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？

C、H、。、N、P、S是構(gòu)成細(xì)胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量的97%以上。

【補充】碳源：如C02、糖類、脂肪酸等有機物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物，并提

供能量。

氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白陳等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代

謝物等。含有C、H、。、N的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。

1.3培養(yǎng)基除滿足微生物生長的皿、特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣等要求。

【補充】生長因子：其些微生物正常生長代謝過程口必須從培養(yǎng)基中吸收的微量有機小

分子，如某些氨基酸、堿基、維生素等。

K思考3』牛肉膏和蛋白陳主要為微生物提供盤、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質(zhì)。

K思考43培養(yǎng)乳酸桿菌時需要添加維生素,培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為重

肉，培養(yǎng)細(xì)菌時需要將pH調(diào)節(jié)為中性或微堿性。

活動2：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：

1.4獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。

1.5無菌技術(shù)包括：

（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消用;

（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；

（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行:

（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。

1.6比較消毒和滅菌（填表）

比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽抱和抱子能否被消滅

消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能

滅菌強烈全部微生物能

K思考51無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是一防止感染實驗操作者o

1.7消毒方法：

（1）日常生活經(jīng)常用到的是煮沸消毒法；

（2）對一些不耐高溫的液體，則使用巴氏消毒法（作簡要介紹）；

（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強消毒效果,

然后使用紫外線進(jìn)行物理消毒。

（4）實驗操作者的雙手使用迺植進(jìn)行消毒；

（5）飲水水源用氯氣進(jìn)行消毒。

1.8滅菌方法：

（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用力］燒-滅菌法；

（2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是一干熱滅菌箱:

（3）培喬基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是一高壓蒸汽滅菌鍋。

（4）表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

K思考6》對接種環(huán)滅菌時要用酒精燈的生逑遴_層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的

部位。

K思考72利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是避免妨礙熱空氣

流通。

K思考8》物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣,

其目的是有利于鍋內(nèi)溫度升高:隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至100kPa,溫度為

121c,并維持15—30rrin；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至零時打開鍋

蓋，其目的是防止容器中的液體暴沸。

【補充】培養(yǎng)基的配制原則：

①目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。

②營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比4：1時，谷

氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3：1時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量

大增。

③pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。

2.實驗操作

2.1計算：根據(jù)配方比例，計算100mL培養(yǎng)基各成分用量。

2.2稱量：準(zhǔn)確稱取各成分。稱取牛肉膏和蛋白陳時動作要迅速，目的是防止牛肉膏吸

收空氣中水分。

2.3溶化：①加水加熱熔化牛肉膏；②加入蛋白陳和氯化鈉繼續(xù)加熱；③加入瓊脂；④

用蒸儲水定容到100mL。整個過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。

2.4調(diào)pH：用Imol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)pH至偏堿性。

2.5滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加塞包扎后用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；所

用培養(yǎng)皿用報紙包扎后用干熱滅菌箱滅菌。

2.6倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時在酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。

其過程是：

①在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞；

②右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰；

③左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋。

④待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。

K思考錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是消滅瓶口的雜是，防止雜菌感染培養(yǎng)基,

K思考21倒平板的目的是防止培養(yǎng)目冷卻過程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面。

K思考3》若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？

不能?？諝庵须s菌會在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。

K思考4】配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染。

K思考51試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種面積。

2.7接種

2.7.1微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法,另外還有穿刺接種和斜面

接種等“

2.7.2平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種

逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。其操作步驟是：

①將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅。

②在酒精燈火焰旁冷加接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。

③將菌種試管口通過火焰達(dá)到消滅試管口雜菌的目的。

④將冷卻的接種環(huán)伸入到菌液中取出一環(huán)菌種。

⑤將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。

⑥將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)伸入平板內(nèi)劃3?5條平行線,蓋上皿蓋，不要劃破培

養(yǎng)基。

⑦灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)上述過程，完成

三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線相連。

⑧將平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

K思考6》取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物;除第一次劃線外，其余

劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種;取菌種和劃線前都要求接種環(huán)逢卻

后進(jìn)行，其目的是防止高溫殺死菌種:最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者。

K思考72在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的=1的是獲得由單個細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌

螫。

2.7.3稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布

到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時，即可獲得單個細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。

2.7.4系列稀釋操作：

①取盛有9mL水的無菌試管6支，編號101、102、103、104、105、106。

②用灼燒冷卻的移液管吸取1mL菌液注入編號為101試管中，并吹打3次，使之混勻。

③從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得102倍液。依此

類推。

K思考8』操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰1?2cm處。整個操作過程中使用了1支移

液管。

3.結(jié)果分析與評價

3.1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照,若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。

3.2在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈亙色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。

3.3培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小丕回（相同、不同）；菌落分布位置相回（相同、不

同）。原因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體枳越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增

多。

K思考93在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或朵菌感

染等。

K思考io2頻繁使用的菌種利用臨時保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。

前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4c冰箱中，每3?6個月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點是保

存時間較短，容易發(fā)生污突和變異：后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在一20C冷凍箱

中。

（三）課堂總結(jié)、點評

（四）實例探究

例L關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是

A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量

C.除水以外的無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量

解析?：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、

B選項，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳：有的碳源可同時是氮源，

如NH4HCO3;有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白陳。

對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物

的碳源；NaHCCh，可作為芻養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaCI則只能提供無機鹽。對于D

選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH,可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。

答案：D

例2.下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是

A.防止雜菌污染B.消滅雜菌

C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前

解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌

種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯誤

的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生

物。C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專

門接種的，滅菌必須在接種前\如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。

答案：B

☆綜合應(yīng)用

例3.右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此問答:

（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型編號成分含量

是>

①粉狀硫10g

（2）若不慎將過量NaCI加入培養(yǎng)基中。

如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入，(NH4)

②0.4g

用于培養(yǎng)。2s。4

（3）若除去成分②，加入（CH?。），該培

③K2HPO44.0g

養(yǎng)基可用于培養(yǎng)。

④MgSO49.25g

（4）表中營養(yǎng)成分共有類。

（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化⑤FeSCU0.5g

后分裝前，要進(jìn)行的是0

⑥CaCI20.5g

（6）右表中各成分重量確定的原則

是O

⑦H20100ml

（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分

是___________________________

解析?：對于一個培養(yǎng)基，它能培養(yǎng)何種微生物，要看它的化學(xué)成分。當(dāng)然這只適用于合

成培養(yǎng)基，如果是一個天然培養(yǎng)基就不能從培養(yǎng)基的成分上區(qū)分它是培養(yǎng)何種微生物的。分

析化學(xué)成分要從營養(yǎng)物質(zhì)的類型出發(fā)。右表中的營養(yǎng)物質(zhì)有水、無機鹽、氮源三類，缺乏碳

源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)。對特殊營養(yǎng)物質(zhì)，有的微生物是不需要的，但沒有微生物是不需要碳源

的。該培養(yǎng)基中沒有碳源，說明培養(yǎng)的微生物是從空氣口獲得碳源的，即可培養(yǎng)的微生物就

是自養(yǎng)型微生物了。該培養(yǎng)基中加入了過量食鹽，就可以成為金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基，

但金黃色葡萄球菌是異養(yǎng)型微生物，這個培養(yǎng)基就還需要加入有機碳源。該培養(yǎng)基若加入

（CH2O）,培養(yǎng)基中就有了碳源，但除去成分②，卻使培養(yǎng)基中沒有了氮源，這時就只能用于

培養(yǎng)固氮微生物了。對于茵種鑒定，往往用的是固體培養(yǎng)基，而表中沒有凝固劑，需要加入

常見的凝固劑一一瓊脂。

答案：（1）自養(yǎng)型微生物（2）含碳有機物金黃色葡萄球菌（3）固氮微生

物（4）3⑸調(diào)整pH⑹依微生物的生長需要確定⑺瓊脂（或凝固劑）

（五）鞏固練習(xí)

1.不可能作為異養(yǎng)微生物碳源的是

A.牛肉百B.含碳有機物C.石油D.含碳無機物

2.根瘤菌能利用的營養(yǎng)物質(zhì)的組別是

A.NL,（CH2O）,NaClB.N2,（CH20）,CaCl2

C.核鹽，C&,NaClD.NO-,CO2,CaCl2

3.配制培養(yǎng)基的敘述中正確的是

A.制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂B.加入青霉素可得到放線菌

C.培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源D.發(fā)酵工程一-般用半固體培養(yǎng)基

4.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是

A.碳源B.氮源C.無機鹽D.特殊營養(yǎng)物質(zhì)

5.下表是有關(guān)4種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的概述。其中正確的是（）

生物硝化細(xì)菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒狀桿菌

能源氧化陽凡的固定分解糖類等有機物光能

碳源C02糖類糖類糖類

氮源NH,\NO/尿素

NH3N2

代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)兼性厭氧型自養(yǎng)需氧型

A.根瘤菌、谷氨酸棒狀桿菌B.硝化細(xì)菌、酵母菌

C.酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌D.硝化細(xì)菌、根瘤菌

6.甲、乙、丙是三種微生物，下表I、II、III是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、

丙都能在in種正常生長繁殖；甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在0口正常

生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（）

粉狀硫K--HP0FeSO蔗糖(NH,)2S0.H20MgSO.CeCl2

?1

10g4g10g0.4g1009.250.5g

0.5gmlg

I++++—+++

II+++—++++

III++++++++

A、甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物

B、甲、乙、丙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物

C、甲是固氮微生物、乙是白養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物

I）、甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物

7.微生物（除病毒外）需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。

下列有關(guān)微生物營養(yǎng)的說法正確的是

A.乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的

B.微生物生長中不可映少的一些微量的無機物稱為生長因子

C.培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對微生物的增殖越有利

D.生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往不足。

8.某一種細(xì)菌株要從環(huán)境中提取現(xiàn)成的亮氨酸（20種氨基酸中的一種）才能生長，此菌

株對鏈霉素敏感。實驗者月誘變劑處理此菌株，想篩選H表中細(xì)菌菌株類型。根據(jù)實驗?zāi)昴?/p>

的，選用的培養(yǎng)基類型是：）

注：L一亮氨酸S一鏈霉素"+”一加入“一”一不加入

如：L—：不加亮氨酸S+：加入鏈霉素

選篩選出不需要亮氨酸的菌株篩選出抗鏈霉素的菌株篩選出不需要亮氨

項