金黃色葡萄球菌檢驗ppt課件

1、.,1,金黃色葡萄球菌檢驗,2,.,概況,葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個菌種，從人體上可檢出12個種。 葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動物的粘膜相關(guān)系，有些種是人及動物的條件致病菌。 金黃色葡萄球菌對人類有致病性，通常被稱為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱為化膿性球菌。,3,.,金黃色葡萄球菌的生物學特性,形態(tài)與染色： 金黃色葡萄球菌的典型形態(tài)呈球形，直徑0.41.2m，大小不一，平均直徑約為0.8m。 革蘭氏染色陽性，呈葡萄串狀排列。無鞭毛、無芽胞。在陳舊培養(yǎng)物中，衰老的菌體常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。,4,.,培養(yǎng)特性： 易培養(yǎng)，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長良好。 需氧或兼性

2、厭氧。 最適生長溫度37，最適生長pH 7.4。耐鹽性強，在含1015%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長，可用于篩選菌種。 在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)1824，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落。可產(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內(nèi)，不滲至培養(yǎng)中。,5,.,在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為型溶血。 可產(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。 大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、 VP試驗多為陽性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽性。,6,.,金黃色葡萄球菌的酶,金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生血漿凝固酶和耐熱DNA酶。這兩種酶均與金黃色葡萄球菌的致病性有關(guān)

3、。 血漿凝固酶：與金黃色葡萄球菌的致病力密切相關(guān)。一般認為，血漿凝固陽性的金黃色葡萄球菌菌株有致病力。否則為無力的菌株。血漿凝固酶對熱穩(wěn)定，能抵抗6030min甚至10030min后，仍能保存大部分活性。 耐熱DNA酶作為除血漿凝固酶外鑒定金黃色葡萄球菌致病力的指標之一。該酶的最適pH為9.0。,7,.,金黃色葡萄球菌腸毒素：是金黃色葡萄球菌一種重要的致病物質(zhì)。本菌引起的食物中毒是因為食品污染了金黃葡萄球菌后，由細菌產(chǎn)生大量腸毒素而導致的。 近年報導表明，50%以上的金黃色葡萄球菌菌株在實驗室條件下可產(chǎn)生腸毒素，并且1個菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素。 腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，由單個無分枝

4、的肽鏈組成。分子量約為3000左右。易溶于水，難溶于有機溶劑。,金黃色葡萄球菌的腸毒素,8,.,耐熱，經(jīng)100煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。食物中的腸毒素耐熱性更強，一般烹調(diào)溫度不能將其破壞。218248 的油中需30min才能被破壞?？梢鸺毙晕改c炎。 根據(jù)腸毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E 5 個型。A型腸毒素引起的食物中毒較多，約占50%左右。其他依次為D、C、B和E型。也有AD、AB、AC、BC等。,9,.,A型腸毒素毒力較強，攝入1g即可引起中毒；B型毒力較弱攝入25g，才引起中毒。一般認為引起人中毒的最小劑量是1.07.2g/kg。,10,.,金黃

5、色葡萄球菌的檢測程序,檢樣25g(mL) 225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液,7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯,361,Baird-Parker平板，血平板,涂片染色,觀察溶血,血漿凝固酶試驗,報告,血平板1824h， Baird-Parker平板1824h或4548h。,BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面,361,1824h,11,.,增菌培養(yǎng)基,7.5%氯化鈉肉湯：為葡萄球菌選擇性增菌培養(yǎng)基，因金黃色葡萄球有耐受高鹽的特性，因而能在此增菌液中生長，除某些嗜高鹽的海洋菌外，大多數(shù)細菌都被增菌液中的高鹽所抑制。 胰酪胨大豆肉湯：含氯化鈉達10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氫二鉀和

6、葡萄糖促進葡萄球菌的生長。,12,.,樣品的稀釋,固體和半固體樣品：稱取25g樣品至盛有225 mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min10000 r/min均質(zhì)1min2min，或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min2min，制成1:10的樣品勻液。 液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。,13,.,增菌與分離培養(yǎng),增菌培養(yǎng)：吸取5mL上述樣品勻液，接種于50mL 7.5%氯化鈉肉湯或10%胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，3

7、61培養(yǎng)18h24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長，污染嚴重時在10%胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長。 將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板361培養(yǎng)18h24h。Baird-Parker平板361培養(yǎng)18h24h或45h48h。,14,.,分離培養(yǎng)基,Baird-Parker瓊脂：培養(yǎng)基中含有卵黃亞碲酸鉀，能抑制大多數(shù)細菌的繁殖，并能促進金黃色葡萄球菌的生長使其產(chǎn)生黑色和暈圈。培養(yǎng)基中的丙酮酸鈉和甘氨酸也能促進金黃色葡萄球菌的生長。 金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤，直徑約23mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，

8、在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶而可見無混濁帶和透明圈的非典型菌落。 長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。,15,.,16,.,分離培養(yǎng)基,血瓊脂：是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有5%的脫纖維血(羊血或兔血)。用于觀察金黃色葡萄球菌的溶血現(xiàn)象。金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上呈溶血。 金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的溶血環(huán)。,17,.,18,.,革蘭氏染色,19,.,血漿凝固酶試驗,試驗原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w蛋白，附著

9、于細菌表面 ，產(chǎn)生凝固。 金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細胞壁結(jié)合的凝固酶，為結(jié)合凝固酶；另一種是菌細胞釋放于培養(yǎng)基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。,20,.,血漿凝固酶試驗,挑取BairdParker平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5mL BHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，361培養(yǎng)18 h24 h。 取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養(yǎng)物0.2mL0.3mL，振蕩搖勻，置361溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽性結(jié)果。,21,.,同時以血漿凝固酶試驗陽性

10、和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。 結(jié)果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mL BHI，361培養(yǎng)18h48h，重復實驗。,22,.,結(jié)果報告,如血漿凝固酶試驗陽性，可判定為金黃色葡萄球菌 。 報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。,23,.,謝謝!,24,.,融這里房屋抵押貸款 銀蒙雨揈,25,.,后面內(nèi)容直接刪除就行 資料可以編輯修改使用 資料可以編輯修改使用,26,.,主要經(jīng)營：網(wǎng)絡(luò)軟件設(shè)計、圖文設(shè)計制作、發(fā)布廣告等 公司秉著以優(yōu)質(zhì)的服務(wù)對待每一位客戶，做到讓客戶滿意！,27,.,致力于數(shù)據(jù)挖掘，合同簡歷、論文寫作、PPT設(shè)計、計劃書、策劃案、學習課件、各類模板等方方面