巴比妥PPT課件

1、.,1,萬 金 志 中山大學(xué)藥學(xué)院 藥物分析與質(zhì)量評價實(shí)驗(yàn)室中澳中醫(yī)藥研究中心 2010-4,第五章 巴比妥類藥物的分析（Analysis of Barbitals Drugs）,.,2,學(xué)習(xí)方法（事半功倍）,化學(xué)結(jié)構(gòu)及 結(jié)構(gòu)特點(diǎn),理化性質(zhì),分析方法,巧記，巧背 如：丙二酰脲 （巴比妥） 對乙酰氨基酚 (撲熱息痛),專屬性高 鑒別 反應(yīng)完全 定量,原料 制劑 生物樣品,.,3,要求： 1. 掌握各類藥物的基本結(jié)構(gòu)（母核）。 2. 典型藥物的結(jié)構(gòu)和官能團(tuán)的性質(zhì)以及在 分析中的應(yīng)用。 3. 熟悉藥物分析中的特殊方法（原理、 具體應(yīng)用） 4. 了解藥物分析中的現(xiàn)代分析方法和發(fā)展 趨勢。,.,4,巴比

2、妥類藥物是一類臨床常用的催眠鎮(zhèn)靜藥。由于這類藥物應(yīng)用廣泛，容易因不合理使用而引起中毒，需要對本類藥物的原料、制劑進(jìn)行分析，對違規(guī)添加巴比妥的產(chǎn)品進(jìn)行分析以及對生物樣品中微量巴比妥類藥物進(jìn)行分析。 本章重點(diǎn)介紹巴比妥類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法間的關(guān)系，介紹鑒別、檢查和含量測定的原理與方法。,.,5,中南某縣竟然發(fā)生豬吃了其縣飼料廠生產(chǎn)的飼料后，數(shù)個村幾百頭豬睡了五天五夜的嚴(yán)重中毒事故。市場上巴比妥類等鎮(zhèn)靜安眠藥物價格昂貴，種類繁多，常見商品名有：睡寶、安定、睡夢香、甜夢香等等，這些違禁藥物是國家明令禁止在飼料中添加，但是部分飼料廠無視國家法規(guī)和農(nóng)民利益，而在飼料中任意使用，經(jīng)常出現(xiàn)中毒事故。,.

3、,6,環(huán)狀丙二酰脲,一、巴比妥藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物,基本結(jié)構(gòu),.,7,多數(shù)為5,5取代的巴比妥類藥， 少數(shù)有1,5,5取代的巴比妥類藥， 還有5,5取代的硫代巴比妥類藥物。,.,8,5,5-取代的巴比妥類藥物,5,Barbital,典型藥物,.,9,Phenylbarbital,.,10,Secobarbital,異丙基,烯丙基,.,11,5位通常是乙基,.,12,戊巴比妥,仲戊基,.,13,環(huán)己烯巴比妥,.,14,C,C,N,C,N,H,O,O,O,H,3,C,C,H,3,1,5,5-取代的巴比妥類藥物,己瑣巴比妥，海索巴比妥,5,1,.,15,硫代巴比妥類藥物,仲戊基,戊巴比妥,3活性

4、氫,酸性-鑒別、含量測定 與Co,Cu,Ag,Hg反應(yīng)產(chǎn)生顏色或沉淀鑒別、含測 縮合反應(yīng)鑒別 改變VU吸收含測,水解 鑒別,含苯環(huán) NaNOH2SO4 ,HCOHH2SO4 顯色反應(yīng)鑒別 含雙鍵加成、氧化反應(yīng)鑒別、含測,1取代基,2酯鍵,二、巴比妥藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),S,醋酸鉛,.,17,區(qū)別各種巴比妥類藥物,環(huán)狀丙二酰脲、1,3-二酰亞胺基團(tuán) 決定巴比妥類藥物的特性,1. 環(huán)狀母核部分,2. 取代基部分,.,18,巴比妥類藥物的物理性質(zhì) (Physical properties) 白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉未，具有固定的熔點(diǎn)。游離巴比妥類藥物微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機(jī)溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而

5、不溶于有機(jī)溶劑。,.,19,弱酸性 取代基 環(huán)-六元環(huán)的結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，酸，氧化劑，還原劑時不會破裂，堿共沸時則水解開環(huán)。,巴比妥類藥物的化學(xué)性質(zhì) (Chemical properties),.,20,（一） 弱酸性 巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中都有1,3-二酰亞胺基團(tuán)，能發(fā)生酮式和烯醇式的互變異構(gòu)， 在水溶液中可以發(fā)生二級電離。因此，本類藥物的水溶液顯弱酸性（pKa為7.3-8.4），可與強(qiáng)堿形成水溶性的鹽類。,.,21,酮式,烯醇式,.,22,與強(qiáng)堿成鹽反應(yīng)（主要是鈉鹽）,.,23,（二） 水解反應(yīng),巴比妥類藥物 +,N,a,O,H,N,H,3,可使紅色石蕊試紙變藍(lán)。,.,24,（三） 與重金屬離

6、子反應(yīng) 1 與銀鹽的反應(yīng),碳酸鈉的目的是為形成鈉鹽而溶解。,.,25,一銀鹽是可溶性的，硝酸銀應(yīng)過量。,鑒別,.,26,1，5，5取代的藥物只能形成一銀鹽,.,27,2與銅鹽的反應(yīng),首先巴比妥在堿性的吡啶溶液中易形成烯醇式異構(gòu)體陰離子；吡啶與銅離子形成配位二價陽離子；然后二者結(jié)合，成有色絡(luò)合物。,.,28,.,29,紫色配位化合物,.,30,巴比妥類藥物呈紫堇色，或生成紫色沉淀，含硫的成綠色。在pH較高的溶液中，5，5取代的親酯性越強(qiáng)，生成的紫色物越容易溶于氯仿，可以此鑒別。,.,31,3與鈷鹽的反應(yīng),反應(yīng)條件： 無水; 所用試劑均應(yīng)不含水分。 堿性：異丙胺,.,32,與銅鹽吡啶法有什么不同？

7、,.,33,4 與汞鹽的反應(yīng) 巴比妥類藥物+汞鹽白色 （可溶于氨試液）可用硝酸汞或氯化汞。P99，汞可以看作是堿，而二酰亞胺之氨基是具有酸性的。成沉淀的汞鹽。,.,34,（四） 與香草醛（vanillin）的反應(yīng),BP 2000，英國藥典：瓷盤中加戊巴比妥10mg，香草醛10 mg，硫酸2ml，混合，水浴上加熱，2min，產(chǎn)生棕紅色，放冷，加乙醇5ml，先變紫后轉(zhuǎn)藍(lán)。P.99,.,35,P99 香草醛：3-甲氧基-4-羥基苯甲醛。醛與羥基都十分活潑，特別是在苯環(huán)上，甲氧基由到了致活的作用使碳氧雙鍵極化。 和水相比，乙醇是堿，因此生成烯醇式的異構(gòu)體。,.,36,（五） 紫外吸收光譜特征,H2SO

8、4溶液(0.05mol/L) pH9.9緩沖溶液 NaOH溶液(0.1mol/L) (pH 13),巴比妥類藥物的紫外吸收光譜,A,nm,.,37,酮式,烯醇式,.,38,5,5-取代的巴比妥類藥物在pH=2的酸性溶液中，因不電離，幾乎無明顯的紫外吸收。在pH=10的堿性溶液中，發(fā)生一級電離，于240 nm處有最大吸收。在pH=13的強(qiáng)堿性溶液中，發(fā)生二級電離，最大吸收紅移至255 nm處。,.,39,血清 CH2Cl2 提?。ㄈニ?CH2Cl2 層 0.15mol/L NaOH 提取 CH2Cl2 層 堿水層,16%NH4L, PH=10,0.45molNaOH, PH=13,A1,A2,

9、A = A1（261） A2 （261） = KC D,A,血樣中苯巴比妥的測定（高專屬性）,.,40,硫代巴比妥類藥物在酸性或堿性溶液中，均有較明顯的紫外吸收。,.,41,硫噴妥的紫外吸收光譜 HCl 溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液 (0.1mol/L),巴比妥類藥物的紫外吸收光譜特征和其電離的程度有關(guān)。,.,42,（六）、色譜行為特征 TLC、GC、HPLC TLC： 生物樣品分析 一般采用對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）比較法，要求供試品斑點(diǎn)的Rf值應(yīng)與對照品斑點(diǎn)一致。,.,43,取巴比妥類藥物50ug，點(diǎn)于硅膠60F254薄層板，氯仿：丙酮（4：1）展開，溫?zé)峥諝飧稍?，先?%氯化汞乙醇

10、液，再噴2%1，5-二苯卡巴腙。在紫色背景上顯蘭色斑點(diǎn)。,.,44,GC：巴比妥的GC行為很好。,.,45,三 鑒別試驗(yàn)(Test ofidentification),（一）、丙二酰脲類反應(yīng) 本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng),為共有的反應(yīng),收載于藥典附錄中。,.,46,取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10m1，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。,1. 與銀鹽的反應(yīng),附錄 一般鑒別試驗(yàn),.,47,取供試品約50mg，加吡啶溶液（110）5m1，溶解后，加銅吡啶試液（硫酸銅4g，水90ml溶解后，加吡啶30m1，

11、即得）1m1，即顯紫色或生成紫色沉淀。,2. 與銅鹽的反應(yīng),.,48,（二）熔點(diǎn)測定及衍生物熔點(diǎn)測定 1. 熔點(diǎn)測定,巴比妥類的鈉鹽酸 游離巴比妥類藥物 過濾 洗滌 干燥 測熔點(diǎn) 舉例如下：,.,49,（三）特殊取代基或元素的鑒別試驗(yàn)反應(yīng),（1）與碘 司可巴比妥鈉 ChP(2000) 取本品0.1 g，加水10 ml溶解后，加碘試液2m1，所顯棕黃色在5 min內(nèi)消失。也可使溴試劑退色。,不飽和烴取代基的反應(yīng),.,50,（2）含不飽和取代基的巴比妥類藥物具有還原性，在堿性水溶液中與紫色高錳酸鉀反應(yīng)生成棕色二氧化錳。,.,51,苯巴比妥 ChP（2000） （1）硝化反應(yīng)： 與硝酸鉀硫酸共熱，發(fā)

12、生硝化，生成黃色硝基化合物。,2. 芳環(huán)取代基的反應(yīng),.,52,（2）硫酸亞硝酸鈉反應(yīng)，確切原理不清，可區(qū)別是否含有苯環(huán)。 【鑒別】取本品約10 mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5 mg，混合，即顯橙黃色，隨即轉(zhuǎn)橙紅色。,.,53,（3）甲醛硫酸反應(yīng)： 取本品約50 mg，置試管中，加甲醛試液1 ml，加熱煮沸，冷卻，沿管壁緩緩加硫酸0.5 ml，使成兩液層，置水浴中加熱。界面顯玫瑰紅。,.,54,注射用硫噴妥鈉 ChP（2000） 【鑒別】（3）取本品約0.2 g，加氫氧化鈉試液5 ml與醋酸鉛試液2 ml，生成白色沉淀；加熱后，沉淀變?yōu)楹谏?3. 硫元素的反應(yīng)：硫元素，轉(zhuǎn)化為無機(jī)硫離子，而顯

13、硫化物反應(yīng)。,.,55,固相萃取 /離子阱氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用對血液中多種安眠藥物的同時測定,目前常見的安眠藥物主要有巴比妥類、吩噻嗪類和苯二氮雜 類。其中 , 巴比妥類安眠藥為酸性 , 苯二氮雜 類安眠藥為中性偏弱堿性 , 吩噻嗪類安眠藥為堿性安眠藥。目前刑事案件中常有投用此類藥物的案例 , 臨床中誤服過量該類藥物的病例也時有發(fā)生。然而在實(shí)際檢測中, 由于安眠藥種類較多 , 性質(zhì)差異較大 , 若對某種未知安眠鎮(zhèn)靜類藥物進(jìn)行檢驗(yàn) , 需調(diào)節(jié)檢材的 pH值后進(jìn)行提取、濃縮、檢驗(yàn) , 操作繁瑣且所需檢材量大。,.,56,生物檢材成分復(fù)雜 , 存在大量的干擾物 , 因此在生物檢材中進(jìn)行定性定量分析具有較

14、大難度。目前對此類藥物的檢測方法主要有分光光度法 、紅外光譜法 、氣相色譜法 、高效液相色譜 法 、薄層色譜法 等。氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法 GC - MS 既具有氣相色譜的高分離性能 , 又具有質(zhì)譜鑒定準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn) , 同時減少了干擾物的影響 , 提高了儀器檢測靈敏度 , 在安眠藥檢測方面顯示了極大優(yōu)越性 。李文海等 采用 GC -MS結(jié)合自動質(zhì)譜退卷積定性系統(tǒng) AMDIS 軟件的自動檢索功能對多種安眠藥物進(jìn)行了定性分析。謝秀紅等 建立了 GC -MS同時定性分,.,57,析血液中的安定、硝基安定、氯硝安定、三唑侖、艾司唑侖和阿普唑侖的方法。目前 , 尚無采用二級質(zhì)譜對不同種類安眠藥進(jìn)行同時分析的文

15、獻(xiàn)報(bào)道。 固相萃取 SPE 法由于操作簡便、溶劑用量少 , 已成為臨床毒物學(xué)和法庭毒物學(xué)藥物分析中樣品預(yù)處理的重要方法 。本文采用 SPE對血液中巴比妥類、吩噻嗪類和苯二氮雜 類安眠藥進(jìn)行預(yù)處理和富集 , 建立了 9種不同性質(zhì)安眠藥的同時二級質(zhì)譜定性定量分析 , 為案件偵破提供了快速有效的信息。,.,58,檢測條件 氣相色譜條件: 載氣為 He; 柱初溫 160 保持 1 min , 以 15 /min升溫至 220 保持 1 min ,再以 30 /min升溫至 280 保持 12 min ; 進(jìn)樣口溫度 280 ; 不分流進(jìn)樣 , 進(jìn)樣量 1 L。 質(zhì)譜條件: 離子阱溫度為 170 ; 倍

16、增器電壓為 1 700 V; 接口溫度: 270 ; 掃描質(zhì)量: 40450; EI源 70 eV。 血液中的安眠藥物經(jīng)固相萃取提取和初步純化后 , 仍很難排除生物體油 類、脂肪類等干擾物質(zhì)對色譜分析的影響。只采用一級質(zhì)譜分析將導(dǎo)致分析結(jié)果中目標(biāo)物因含量低、本底高、信噪比小而被掩蓋 圖 1a 。因此 , 優(yōu)化色譜分離條件與二級質(zhì)譜檢測條件對排除雜質(zhì)干擾、保證定量結(jié)果準(zhǔn)確有重要作用。,.,59,Barbital 巴比妥 Amobarbital 異戊巴比妥 Secobarbital 速可眠 Phenobarbital 苯巴比妥 Promethazine 異丙嗪 Diazepam 安定 Chlorpromazine 氯丙嗪 Chlordiazepoxide 利眠寧,.,60,案例應(yīng)用 采用優(yōu)化后的方法對殺人案被害人心血進(jìn)行檢測 ,檢出安定成分 圖 2 , 其質(zhì)量濃度為 016mg/L,.,61,四、