疑難血型鑒定及配性.ppt

1、疑難血型鑒定及配型,在ABO血型系統(tǒng)內(nèi)，幾乎所有缺乏抗原的人體，在其血清內(nèi)必具有所缺乏抗原的抗體，若在紅細(xì)胞上具有抗原時(shí)，則其血清內(nèi)必缺乏對(duì)應(yīng)的抗體，但這種規(guī)則偶然也有例外，血清中的抗體和細(xì)胞上的抗原不互補(bǔ)，正反定型相互不支持，出現(xiàn)血型難以確定。 另外會(huì)遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗體或紅細(xì)胞上致敏有意外抗體及其它原因造成交叉配血不能相合。,在ABO分型實(shí)驗(yàn)中，技術(shù)上的錯(cuò)誤與各種臨床情況或疾病，都能造成正反定型之間的矛盾，當(dāng)預(yù)期的正反定型不能產(chǎn)生ABO抗原與抗體的互補(bǔ)結(jié)果時(shí)，首先需要排除在技術(shù)上可能發(fā)生的錯(cuò)誤，如果細(xì)心而反復(fù)的實(shí)行對(duì)照試驗(yàn)產(chǎn)生相同形式的凝集反應(yīng)，則需要

2、考慮到細(xì)胞和血清的變異情況：,（一）、實(shí)驗(yàn)者技術(shù)問(wèn)題,有時(shí)造成正反定型不符，并不是紅細(xì)胞或血清本身的問(wèn)題，而是由于操作不當(dāng)造成。主要原因有： 1. 標(biāo)本或試劑搞錯(cuò) 2.紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò) 3.標(biāo)本混亂 4.未加試劑,5.試劑受到污染 6.溫度在離心過(guò)程中增高 7.忽略觀察溶血現(xiàn)象 8.細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)，未發(fā)現(xiàn)弱凝集 9.如果使用血清來(lái)懸浮細(xì)胞，血清中的高濃度血型物質(zhì)中和了抗體試劑，使其不能再與紅細(xì)胞抗原發(fā)生反應(yīng) ，出現(xiàn)了假的陰性反應(yīng) 10.在反定型試驗(yàn)時(shí)沒(méi)有加血清，誤認(rèn)為是陰性結(jié)果； 11 結(jié)果判斷錯(cuò)誤,（二）如何解決技術(shù)原因造成的正反定型不符,為解決ABO血型不一致而開(kāi)始做深入試驗(yàn)之前

3、，首先要排除技術(shù)上可能發(fā)生的錯(cuò)誤，首先要重復(fù)作正反定性試驗(yàn)使用質(zhì)量合格的試劑，嚴(yán)格地執(zhí)行正規(guī)的操作，再者則重新抽取標(biāo)本。如果先前試驗(yàn)中紅細(xì)胞懸浮在血清或血漿中，改為用鹽水洗滌紅細(xì)胞后配成懸液，以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果就可解決許多明顯的問(wèn)題如果細(xì)心而反復(fù)的實(shí)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)還是與先前一樣的結(jié)果。就要根據(jù)情況從細(xì)胞和血清中尋找原因。,ABO血型定型中由于細(xì)胞和血清本身的原因造成正反定型不一致,一、減弱或缺少的抗原反應(yīng) 二、未知的抗原反應(yīng) 三、減弱或缺少的抗體反應(yīng) 四、未知的抗體反應(yīng),絕大多數(shù)A和B型人紅細(xì)胞用合格的抗-A和抗-B試劑檢測(cè)都呈3十和4+的凝集強(qiáng)度，血清用合格的試劑紅細(xì)胞檢測(cè)絕大部分呈2+

4、至4+的凝集強(qiáng)度。在A和B型紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度低于2+和1+的人中，有一部分是變異基因所致的亞型紅細(xì)胞或者是疾病相關(guān)的抗原減弱。血清中的抗A或抗B凝集強(qiáng)度低于2+和1+的人中，是抗體減弱或缺乏。,一個(gè)人減弱或缺少抗原的反應(yīng)范例,一、減弱或缺少的抗原反應(yīng),促成紅細(xì)胞抗原表面減弱或減少的情況包括下列3種情況： A或B抗原的亞型 疾病狀態(tài)（如白血?。?血型特異性可溶性物質(zhì),（1） 這位病人的紅細(xì)胞分型法與正常的強(qiáng)凝集反應(yīng)相比，證明是減弱的反應(yīng)，依據(jù)反定型法，應(yīng)預(yù)期病人具有A抗原的活性。紅細(xì)胞與抗AB的減弱凝集反應(yīng)及抗A試劑缺乏凝集反應(yīng)，都暗示為A型的亞型。 （2） 補(bǔ)充的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)：吸收和放散試驗(yàn)證明紅

5、細(xì)胞附著有抗A。病人唾液含有A與H物質(zhì)。 （3） 討論：A亞型的問(wèn)題要比B亞型者多而常見(jiàn)，因?yàn)锳2或A2B型的人體血清中可能有抗A1抗體。比A2型為弱的A亞型不多見(jiàn)。若一位弱亞型病人錯(cuò)誤地分型為O型而輸予O型血液時(shí)，預(yù)期應(yīng)無(wú)嚴(yán)重的后果。但若將一位弱亞型病人錯(cuò)誤地分型而輸給一位O型的病人時(shí)，則能引發(fā)嚴(yán)重的輸血反應(yīng)問(wèn)題。,1.A或B抗原的亞型,當(dāng)A、B及AB型紅細(xì)胞與試劑抗血清作實(shí)驗(yàn)時(shí)，預(yù)期發(fā)生的反應(yīng)皆為4+的強(qiáng)反應(yīng)。正定型減弱的凝集反應(yīng)，可暗示這可能是A、B亞型。當(dāng)減弱的反應(yīng)在健康供血者檢查時(shí)，亞型是最可能的解釋?？笰B分型血清能檢出某些不與抗A抗B試劑發(fā)生反應(yīng)的A及B型。,2、疾病狀態(tài)：減弱的

6、A抗原表現(xiàn)也可病人后天的特性，如：A型急性白血病患者在疾病活動(dòng)期改變?yōu)锳2型或A3亞型，在疾病緩解期又恢復(fù)到原來(lái)A型反應(yīng)。抗原性強(qiáng)度的減弱，也能發(fā)生于B抗原與H抗原以及其他血型系統(tǒng)的抗原。 3、過(guò)量血型特異性可溶性物質(zhì)：在患卵巢囊腫，胃癌或胰腺炎、腸道阻塞的稀有情況，能查見(jiàn)多量的血型特異性可溶性物質(zhì)。病人血清中的ABH物質(zhì)濃度極高，以抑制抗A或抗B試劑的作用，在正定型中，這種情形能產(chǎn)生假陰性，這種情況并非是病人的紅細(xì)胞抗原發(fā)生改變，而是其血清含有過(guò)量的病人血清時(shí)，則能進(jìn)行正確的ABO分型試驗(yàn)。,二、未知的抗原反應(yīng),未知的抗原反應(yīng)在正定型中產(chǎn)生的情況范例，能有以下七種情況所引起：,1、獲得性B抗

7、原 獲得性B抗原的特性，獲得性B只表現(xiàn)在A型紅細(xì)胞上，使紅細(xì)胞的反應(yīng)像AB型，而血清中只有抗B 抗體，正定型中反應(yīng)的強(qiáng)度，A抗原大于B抗原，自身對(duì)照實(shí)驗(yàn)為陰性反應(yīng)且分泌型人體內(nèi)有A物質(zhì)，但B物質(zhì)則缺乏。,當(dāng)紅細(xì)胞血型似乎是型而血清中含有抗時(shí)，應(yīng)該考慮是獲得性抗原只有型的紅細(xì)胞能獲得活性，因此稱(chēng)為獲得性抗原，鑒別獲得性抗原的方法如下： .觀察細(xì)胞與抗及抗的凝集強(qiáng)度，與抗的反應(yīng)要比與抗的反應(yīng)強(qiáng)； .用自身的紅細(xì)胞檢查本人的血清其血清中的抗不能凝集自身紅細(xì)胞中的類(lèi)抗原； .檢查唾液是否存在、物質(zhì)，如果病人是分泌型，那么有物質(zhì)而無(wú)物質(zhì)；,4. 獲得性抗原在正常PH介質(zhì)中，紅細(xì)胞與抗-B血清發(fā)生凝集，但

8、在等于和低于PH6的酸性條件下，凝集消失，這是獲得性抗原最主要的血清學(xué)特征。 5. 核對(duì)病人的診斷。獲得性抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌，革蘭氏陰性細(xì)菌變形桿菌的感染有關(guān)。 結(jié)論：病人為A型，具有獲得性B抗原,類(lèi)B抗原具有下例特點(diǎn) 1.類(lèi)B與抗B的反應(yīng)一般無(wú)溶血現(xiàn)象。類(lèi)B是獲得性的，不符合遺傳規(guī)律，病情好轉(zhuǎn)，類(lèi)B就消失，真正B抗原符合遺傳規(guī)律終生不變。 2.類(lèi)B與抗B結(jié)合疏松，用類(lèi)B紅細(xì)胞作吸收放散試驗(yàn)，可放散出大量抗B抗體，類(lèi)B病人的唾液中不含B血型物質(zhì)。,3.因類(lèi)B抗原而錯(cuò)定血型，其血清中天然抗體不合規(guī)律，如是AB型血清中應(yīng)該不含天然抗B抗體。但A型類(lèi)B表現(xiàn)似AB型，血清中卻含有抗B抗體，此抗

9、體并不凝集患者本人的紅細(xì)胞，只要按正規(guī)操作，在血型鑒定中很容易發(fā)現(xiàn)被檢者紅細(xì)胞所含抗原與血清中所含抗體的矛盾。在AB型的交叉配血時(shí)，如發(fā)現(xiàn)主側(cè)凝集，應(yīng)考慮類(lèi)B存在，重新鑒定血型并檢查唾液中的血型物質(zhì)，測(cè)出被檢者真正的血型，最后選擇同型人輸血。 4.類(lèi)B與全凝集或多凝集紅細(xì)胞不同，前者只與抗B反應(yīng)，在AB型血清中不凝集。,（二）改變的抗原,紅細(xì)胞表面遺傳產(chǎn)生的多凝集反應(yīng)可分為先天性的或?yàn)楂@得性的。紅細(xì)胞被大多數(shù)正常人類(lèi)血清所凝集的反應(yīng)稱(chēng)為多凝集反應(yīng)。三種形式的多凝集反應(yīng)包括：T抗原活化， Tn 抗原活化多凝集性。,所有正常人的血清含有抗T抗體，所以T活化的紅細(xì)胞都是多凝集的。 T活化的紅細(xì)胞與血

10、清的反應(yīng)，是一種混合視野的凝集反應(yīng)， T活化的紅細(xì)胞不為臍帶血清所凝集，因?yàn)槟殠а逯腥狈筎抗體，預(yù)備T活化的紅細(xì)胞，使其吸附血清中的抗T抗體，就能正確定出ABO分型法。,（三）抗體附著的紅細(xì)胞：,有抗體稠密的附著的紅細(xì)胞，顯示直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性。可在正定型中產(chǎn)生混合視野或減弱的凝集反應(yīng)。引起這種現(xiàn)象的原因包括： 自身免疫溶血性貧血癥 產(chǎn)生藥物抗體 輸血反應(yīng) 新生兒溶血病,患新生兒溶血病(HDN)嬰兒，其紅細(xì)胞嚴(yán)重地包被IgG抗體分子，時(shí)常是與抗D試劑和抗-A、抗-B試劑發(fā)生這種自發(fā)凝集，在45C進(jìn)行放散試驗(yàn)，可以從紅細(xì)胞上解禽掉這些抗體，此后，即可用抗-A、抗-B很容易地檢測(cè)這些紅細(xì)胞

11、血型。含冷抗體IgM自身凝集素的紅細(xì)胞標(biāo)本在鹽水中也發(fā)生凝集，這類(lèi)冷抗體可能由37孵育和37C洗滌被清除掉，也可由DTT等巰基化合物消除掉。 （還存在遮蔽現(xiàn)象）,自身免疫性溶血性貧血病人血清中可有溫性自身抗體。能凝集自身和其它各型紅細(xì)胞，病人的細(xì)胞上吸附了這種抗體，在自身或他人血清中，均可出現(xiàn)凝集，因此，其紅細(xì)胞常被誤定為AB，將其血清定型又被誤定O型。由這種抗體造成的血型檢查上的困難，可以用遞增溫度（由22度37度45度）的鹽水許多紅細(xì)胞后，在通過(guò)檢查血型來(lái)解決，如此類(lèi)抗體在配血中只影響影響病人紅細(xì)胞，而血清內(nèi)無(wú)游離抗體，也可用遞增溫度鹽水洗滌紅細(xì)胞后再進(jìn)行配型，如果血清中有游離的抗體存在，

12、表示病情嚴(yán)重，配血就較困難，不得已可選用凝集較弱的血，密切觀察，一旦出現(xiàn)反應(yīng)立即停輸。,（四）紅細(xì)胞的混合性族群：,在ABO分型法中的混合視野型視野反應(yīng)，通常是指示輸了一種不同血型的血液，如輸O型血至A型人或A型血或O型血人。因?yàn)檩敽筒∪俗约貉筒煌珹BO血型的嚴(yán)重性，故在輸血前解釋混合視野型凝集反應(yīng)的原因至為重要。假設(shè)一位病人為A型時(shí)，而在他（她）的循環(huán)內(nèi)，有些紅細(xì)胞為B型或，故能招致不幸的結(jié)果。調(diào)查此病的病史，可有助于證實(shí)混合視野型凝集反應(yīng)的原因。若新近輸血或母兒出血或骨髓移植的受髓者能予確定排除，應(yīng)考慮的其他原因?yàn)椋篈3亞型，Tn多凝集反應(yīng)。,三、減弱的或缺少的抗體反應(yīng)：,抗體的減弱或缺

13、少，是由降低或缺少抗體的產(chǎn)生所致。在反定型中缺少抗體反應(yīng)，可有下列四種情況引起： 年齡 丙球蛋白過(guò)低血癥 丙球蛋白缺乏血癥 嵌合現(xiàn)象。,一個(gè)缺少抗體的反應(yīng)范例,（1）正定型抗A4+，暗示為A型，但反定型提示為AB型 （2）補(bǔ)充試驗(yàn)：將正反定型試管放4度1030分鐘，證明反定型的BC管能夠出現(xiàn)凝集，自身對(duì)照試驗(yàn)仍保持陰性；加大血清量。 （3）結(jié)論：病人為A型，抗B減弱。,（一）年齡：,新生兒與幼兒及老年人可顯示種屬抗體的減弱或缺少。對(duì)新生兒血清常規(guī)不做血清分型法，是因他們尚未開(kāi)始產(chǎn)生抗體所致。在新生兒或幼兒能檢的抗體，都是在母體子宮內(nèi)被動(dòng)獲得者。,（二）丙球蛋白過(guò)低血癥：,血漿蛋白的丙球蛋白部分

14、減少（丙球蛋白低血癥）能導(dǎo)致抗體的減弱或減少。證明的丙球蛋白過(guò)低血癥的情況包括：免疫抑制藥物的應(yīng)用，白血病，免疫缺乏性疾患及骨髓移植后。,（三）丙球蛋白缺乏血癥：,丙球蛋白缺乏血癥（血漿丙球蛋白減少）可為先天性的或?yàn)楹筇煨缘?。如丙球蛋白缺乏血癥、免疫缺乏性疾患、以及物理性（如放散線(xiàn)的暴露）與細(xì)胞毒殺劑的作用，都有促成丙球蛋白缺乏血癥狀態(tài)之發(fā)生。,溶血反應(yīng)：,溶血反應(yīng)和凝集反應(yīng)在血型檢定和交叉配血上的意義相同。在血型鑒定中因有相對(duì)應(yīng)的抗原抗體而出現(xiàn)溶血反應(yīng)時(shí)，應(yīng)按血型不合處理， 處理：滅活補(bǔ)體或用EDYA處理,四、未知的抗體反應(yīng)：,反定型中所產(chǎn)生的未知的抗體反應(yīng)是有四種情況引起： 緡錢(qián)狀形成 冷

15、型自身抗體 未知的ABO種屬凝集素 未知的同種抗體。,（一）緡錢(qián)狀形成：,如紅細(xì)胞被懸浮在自己的血漿中，紅細(xì)胞的緡錢(qián)狀形成或聚合現(xiàn)象可疑似凝集反應(yīng)。能產(chǎn)生緡錢(qián)狀形成的種種情況包括：血清蛋白濃度異常，球蛋白濃度在疾病中升高（如多發(fā)性骨髓瘤），原發(fā)性巨球蛋白血癥，纖維蛋白原濃度增高，任何A/G倒置的病人，有血漿擴(kuò)張劑存在。新生兒臍帶內(nèi)血內(nèi)的華通氏膠亦能引起緡錢(qián)狀形成。,（二）冷型自體抗體：,血清內(nèi)可能有未知的自體抗體，與反定型中所用的A或B型紅細(xì)胞抗原起反應(yīng)。抗I是血清分型法最常見(jiàn)碰到的自體抗體。抗I通常凝集所有給血者的紅細(xì)胞，包括病人自己的及反定型中所用的紅細(xì)胞。一般由抗I所引起的凝集反應(yīng)常比抗

16、A及抗-B所引起者為弱。臍帶血球顯示的I抗原量較少，通常不被凝集。 抗抗體。,（三）未知的種屬凝集素：,血清內(nèi)未知的種屬凝集素，可在室溫與試劑紅細(xì)胞上的對(duì)應(yīng)抗原起反應(yīng)。此種范例包括A2型及A2B型人體能產(chǎn)生“天然發(fā)生的”抗-A抗體，在A2或A2B型人體血清內(nèi)的抗-A抗體可與A型紅細(xì)胞發(fā)生強(qiáng)的凝集反應(yīng),（四）未知的同種抗體：,在一個(gè)人的血清內(nèi)，除了ABO種屬凝集素以外，未知的種屬抗體可引起反定型的矛盾。在血清內(nèi)存在的其他未知抗體，可能與試劑紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。如在這種情況下普檢同種抗體的試驗(yàn)與O型紅細(xì)胞的反應(yīng)為陰性，則反定型應(yīng)反復(fù)的與其他A1及B型紅血球作試驗(yàn)。如此抗體與極罕見(jiàn)的抗原起反應(yīng)，則隨機(jī)選

17、擇的A1及B 型紅細(xì)胞，亦可預(yù)想到缺少該抗原。,一個(gè)典型未知的抗體的反應(yīng)范例（1）,（1）正定型與抗A及抗AB發(fā)生（+）凝集及反定型與BC發(fā)生（4+）凝集，代表一個(gè)典型的A型反應(yīng)。但與AC細(xì)胞有1+反應(yīng)， 暗示有額外減弱的反應(yīng)抗體。 （2）補(bǔ)充試驗(yàn)：血清各與三個(gè)的A1，A2及O型紅細(xì)胞作試驗(yàn)。所有A1型紅細(xì)胞都有凝集反應(yīng)，但A2或O型紅細(xì)胞反應(yīng)為陰性。,（3）結(jié)論：病人為A2表現(xiàn)型，血清中有抗A1抗體。,一個(gè)典型未知的抗體的反應(yīng)范例（2）,（1）依據(jù)（4+）的凝集反應(yīng)，暗示為A型；但與O型紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，預(yù)示有額外的抗體存在。 （2）補(bǔ)充的試驗(yàn)：病人紅細(xì)胞與抗A反應(yīng)。病人血清與額外的O、A2、

18、A1型紅細(xì)胞及O型臍帶紅細(xì)胞作試驗(yàn)。證明所有O型與A2型紅細(xì)胞有凝集反應(yīng)。額外的A1型紅細(xì)胞為陰性反應(yīng) （3）結(jié)論：病人為A型表現(xiàn)型，具有抗-I H抗體。,一個(gè)典型未知抗體的反應(yīng)范例（3）,（1）自身對(duì)照試驗(yàn)（病人的血清+病人的紅細(xì)胞）為陽(yáng)性反應(yīng)， 示初步認(rèn)為血清有問(wèn)題。 （2）補(bǔ)體的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)：實(shí)行冷自身抗體吸收法，用吸收的血清與抗A，B及O型紅細(xì)胞作試驗(yàn)，吸收的血清與這些試劑紅細(xì)胞未察見(jiàn)凝集反應(yīng)。 （3）結(jié)論：病人為AB型表現(xiàn)型，具有自身抗I抗體。,在每逢ABO分型問(wèn)題發(fā)生時(shí)，有八個(gè)重要的自我答問(wèn)方式，有助于矛盾問(wèn)題的解決：,第一，受檢的紅細(xì)胞是洗滌后懸浮于生理鹽水的嗎 第二，所用的檢驗(yàn)技術(shù)為最敏感的試管方法嗎？ 第三，已知病人年齡小于1歲或大于60歲嗎？ 第四，已知病人的丙球蛋白濃度減低嗎？ 第五，病人血清與O型普檢紅細(xì)胞發(fā)生的反應(yīng)和反定型所用的試劑紅細(xì)胞一樣嗎？ 第六，病人的診斷是白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸或直腸癌瘤嗎？ 第七，血液標(biāo)本是