不規(guī)則抗體篩選PPT課件

1、.,1,抗體篩選檢查,2006-10-17,.,2,臨床輸血技術(shù)規(guī)范,明確規(guī)定部分病人應(yīng)做“抗體篩選”檢測(cè)，第四章第17條：“凡遇以下情況必須按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程有關(guān)規(guī)定做抗體篩選試驗(yàn)：1、交叉配血不合的； 2、對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需接受多次輸血者。,.,3,為什么要開(kāi)展輸血前的“抗體篩選”檢查,1、目前已知紅細(xì)胞有26個(gè)抗原系統(tǒng)（確認(rèn)21個(gè)，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多種抗原（確認(rèn)200多種）。紅細(xì)胞抗原的多樣性決定了抗體的多樣性，檢測(cè)抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可確保絕大多數(shù)病人的輸血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引發(fā)的

2、溶血。,.,4,2、臨床有的病人出現(xiàn)慢性（遲緩性）溶血反應(yīng)，易忽視或引不起臨床醫(yī)師重視。 （理論上講，成年人每輸1U的濃縮紅細(xì)胞，在不丟失、不被破壞（溶血）的前提下，應(yīng)能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果輸3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或幾天后（1周內(nèi)）Hb仍舊下降到原來(lái)水平，甚至更低。這種情況，就要考慮是否有慢性溶血反應(yīng)存在。） 3、有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體，獲得充足的時(shí)間來(lái)選擇相配合的血，避免由于尋找不到相合的血液而造成患者病情的延誤。,.,5,抗體篩選檢查,一、什么叫“抗體篩選”檢查 1、不規(guī)則抗體的含義：通常把抗A、抗B

3、以外的所有紅細(xì)胞血型抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。 2、“抗體篩選”的含義：用具備有臨床意義的血型抗原的O型紅細(xì)胞，檢測(cè)病人血清（含多種抗體）；如果出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，則提示病人有不規(guī)則抗體存在，可判為“抗體篩選”陽(yáng)性。,.,6,抗體篩選技術(shù)要求,盡可能多的檢測(cè)出有臨床意義的抗體。 盡可能少的檢測(cè)出無(wú)臨床意義的抗體。 盡可能快的完成抗體檢測(cè),.,7,方法選擇：每種方法都有自己的特點(diǎn)，適應(yīng)于不同范圍及情況,鹽水法：可以用于檢測(cè)干擾ABO定型的鹽水反應(yīng)活性抗體，如：MN、P血型抗體。但此方法會(huì)檢查出無(wú)臨床意義的抗體，如冷凝集素抗I及抗IH等，而且會(huì)漏檢IgG性質(zhì)的抗體。 低離子聚凝

4、胺法（LIP-IAT）：所需試驗(yàn)時(shí)間少（35分鐘）、方法靈敏度高，準(zhǔn)確性高，但無(wú)法排除無(wú)臨床意義抗體的干擾。 間接抗人球方法：是很靈敏且有效的檢測(cè)抗體的方法，同時(shí)此方法可以有效的避免無(wú)臨床意義抗體的干擾。缺點(diǎn)：耗時(shí)間長(zhǎng)，步驟多。,.,8,試劑,抗體篩選用紅細(xì)胞懸液（1#、2#、3#） 試劑紅細(xì)胞必須含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb LIM 液、Polybrene及重懸液 抗球蛋白血清 受檢者血清 受檢者5%紅細(xì)胞懸液,.,9,鹽水法,原理：鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞膜上的抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見(jiàn)的凝集塊。,

5、.,10,實(shí)驗(yàn)步驟,取4支小試管，按表標(biāo)記及加入相應(yīng)試劑。 1# 2# 3# 自 身 受檢者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 篩選用紅細(xì)胞懸液1# 1滴 篩選用紅細(xì)胞懸液2# 1滴 篩選用紅細(xì)胞懸液3# 1滴 受檢者5%紅細(xì)胞懸液 1滴 混勻后3400rpm離心15秒，立即觀察結(jié)果 同前,.,11,注意事項(xiàng),標(biāo)本編號(hào)清楚！ 試劑紅細(xì)胞是保存在保存液中，一旦用生理鹽水或Liss液洗滌后則應(yīng)該在24小時(shí)內(nèi)使用，否則會(huì)因污染、抗原丟失導(dǎo)致試驗(yàn)錯(cuò)誤。 加血清和紅細(xì)胞懸液的量必須準(zhǔn)確不能多加，少加,以免引起前帶和后帶效應(yīng) 轉(zhuǎn)速不能太快或太慢、時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以免引起假陽(yáng)性或假陰性。,2020/8/15,

6、.,12,.,13,Polybrene法,原理：聚凝胺是一種多價(jià)陽(yáng)離子聚合物，在溶液中有多個(gè)陽(yáng)離子集團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，并借助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異性凝聚，這種凝聚是可逆的。當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育，IgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原結(jié)合后，在聚凝胺的作用下發(fā)生凝集，凝聚和凝集外表上不能區(qū)分，加入枸櫞酸鈉重懸液后，枸櫞酸根的負(fù)電荷中和了聚凝胺上的正電荷，使紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象消失，而真正的凝集不消失。(見(jiàn)圖).,.,14,實(shí)驗(yàn)步驟,取4支小試管，按表標(biāo)記及加入相應(yīng)試劑。 1# 2# 3# 自 身 受檢者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 篩選用紅細(xì)胞懸液1# 1滴 篩選用紅細(xì)胞懸液

7、2# 1滴 篩選用紅細(xì)胞懸液3# 1滴 受檢者5%紅細(xì)胞懸液 1滴 LIM液 （12滴） 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6ml 混勻后室溫靜置1分鐘。然后各加入Polybrene試劑1滴，混勻后3400rpm 離心 15秒，輕扣觀察有無(wú)凝集。 向試管中各加入重懸液 1滴，輕搖觀察凝集是否散開(kāi)。,.,15,注意事項(xiàng),標(biāo)本盡可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝素是大分子的陰離子物質(zhì),可以中和凝聚胺的陽(yáng)離子，導(dǎo)致假陰性。 在接收標(biāo)本時(shí)，要詢問(wèn)抽血時(shí)是否正在輸液或者剛輸過(guò)液，如果有這種情況則要咨詢臨床醫(yī)師液體中是否含有止血敏 ， KCL，VitC ，這些藥品會(huì)干擾聚凝胺的作用導(dǎo)致

8、假陰性，引起事故。 加血清量不能多加，否則會(huì)提高致敏過(guò)程中的離子強(qiáng)度，降低致敏效果。 加聚凝胺，只需加1滴，多加可能導(dǎo)致重懸液無(wú)法充分解散非特異性凝集，出現(xiàn)假凝集，導(dǎo)致假陽(yáng)性。 看結(jié)果：陰性結(jié)果-紅細(xì)胞迅速散開(kāi)，并在1分鐘內(nèi)完全散開(kāi)?？稍阽R下觀察。 陽(yáng)性結(jié)果-紅細(xì)胞不完全散開(kāi)，弱凝集可能在30分鐘內(nèi)明顯減弱或消失，因此以立即看的結(jié)果為準(zhǔn)。 轉(zhuǎn)速不能太快或太慢、時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以免引起假陽(yáng)性或假陰性。,.,16,抗球蛋白試驗(yàn),原理：抗體分子和補(bǔ)體成分都是球蛋白，用這些球蛋白免疫動(dòng)物使之產(chǎn)生抗體即抗人球蛋白，抗球蛋白試劑可以和致敏在紅細(xì)胞上的人球蛋白（抗體分子和補(bǔ)體分子）反應(yīng)，通過(guò)架橋作用使致

9、敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集。見(jiàn)圖,.,17,抗球蛋白試驗(yàn) 抗球蛋白,.,18,實(shí)驗(yàn)步驟,1# 2# 3# 自 身 受檢者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 篩選用紅細(xì)胞懸液1# 1滴 篩選用紅細(xì)胞懸液2# 1滴 篩選用紅細(xì)胞懸液3# 1滴 受檢者5%紅細(xì)胞懸液 1滴 混勻后置37水浴30分鐘后，用生理鹽水洗滌3次（怎么洗）最后1次用吸水紙吸盡鹽水，然后加1滴抗球蛋白血清，混勻后以3400rpm 離心15秒鐘，輕搖，觀察結(jié)果。,.,19,結(jié)果意義,篩選紅細(xì)胞1、2、3 自身紅細(xì)胞 血清中存在的抗體 + 同種抗體 + + 自身抗體，或自身抗 體和同種抗體同時(shí)存 在 + 自身抗體,.,20,注意事項(xiàng),必須進(jìn)行間接抗

10、人球蛋白試驗(yàn)。 必須同時(shí)作自身抗體的檢查，即患者血清與自身紅細(xì)胞的反應(yīng)，以識(shí)別同種抗體、自身抗體或兩者是否都存在。 觀察水浴箱的溫度、血清對(duì)細(xì)胞的比例準(zhǔn)確、反應(yīng)時(shí)間、轉(zhuǎn)速、。 觀察結(jié)果時(shí)輕搖試管，以免將弱凝集搖散造成假陰性，引起事故。 若抗體篩選時(shí)，無(wú)論哪一種方法出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，都必須進(jìn)一步進(jìn)行抗體特異性的鑒定.(以判斷抗體的臨床意義并給予配合型血液輸注，以預(yù)防溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生及預(yù)測(cè)新生兒溶血病等疾病) 建議：作抗體篩選試驗(yàn)的時(shí)候最好先做抗人球法,.,21,抗體特異性鑒定（了解）,使用譜細(xì)胞確定抗體的特異性，譜細(xì)胞一般由8-16種含有不同抗原的O型紅細(xì)胞配套組成，根據(jù)譜細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見(jiàn)的抗體。 實(shí)驗(yàn)方法和抗體篩選實(shí)驗(yàn)相同,.,22,二 實(shí)驗(yàn)原理,血型就是紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。