課題2　土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) (8).pptx

1、課題2,土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù),1.土壤取樣,3.樣品稀釋、取樣涂布,4.微生物的培養(yǎng)、觀察并記錄結(jié)果,5.細(xì)菌的計(jì)數(shù),土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。,實(shí)驗(yàn)步驟,1土壤取樣,制備5個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和15個(gè)選擇培養(yǎng)基，準(zhǔn)備好無(wú)菌試管和移液管。,實(shí)驗(yàn)步驟,2.制備培養(yǎng)基,制備5個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和15個(gè)選擇培養(yǎng)基，準(zhǔn)備好無(wú)菌試管和移液管。 注：每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基（平行重復(fù)原則），1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。選用稀釋倍數(shù)為103107的稀釋液

2、。,實(shí)驗(yàn)步驟,2.制備培養(yǎng)基,為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？,因?yàn)橥寥乐懈黝?lèi)微生物的數(shù)量(單位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2 185萬(wàn)，放線(xiàn)菌數(shù)約為477萬(wàn)，霉菌數(shù)約為23.1萬(wàn)。因此，為獲得不同類(lèi)型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。,測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)；測(cè)定放線(xiàn)菌的數(shù)量，一般選用103、104和105倍稀釋液；測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用102、103和104

3、倍稀釋液。,注： 樣品的稀釋,將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中,充分搖勻，吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至盛有9mL水的無(wú)菌試管中，依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107至103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。,實(shí)驗(yàn)步驟,3.樣品稀釋、取樣涂布,注意：由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103107。,將涂布好的培養(yǎng)皿放在30下培養(yǎng)。比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。,4.微生物的培養(yǎng)、觀察并記錄結(jié)果,不同種類(lèi)的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。

4、細(xì)菌一般在3037的溫度下培養(yǎng)12d；放線(xiàn)菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)57d；而霉菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)34d。,注：,一般來(lái)說(shuō)，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間)，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。菌落形狀、大小、隆起程度和顏色,當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。,實(shí)驗(yàn)步驟,5.細(xì)菌的計(jì)數(shù),操作提示,一無(wú)菌操作 1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。 2、應(yīng)在火焰旁稱(chēng)取土壤。在火焰附近將稱(chēng)好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀

5、釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁操作。 二做好標(biāo)記 注明培養(yǎng)基種類(lèi)、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。 三規(guī)劃時(shí)間,課題延伸,CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3,脲酶,pH升高 指示劑（酚紅）將變紅,挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基 的斜面中，觀察能否變紅。,1、結(jié)合對(duì)照，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。 2、是否獲得了某一稀釋度下，菌落數(shù)目在30300的平板。在這稀釋度下，是否至少有兩個(gè)平板的菌落數(shù)相近？ 3、你統(tǒng)計(jì)的每克土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),濾膜法,以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)液基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上，大腸桿