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1、分離土壤中分解尿酸的細菌實驗報告分離土壤中分解尿素的細菌和計數(shù)制作:鄒霖1.實驗?zāi)康模簭耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細菌,計數(shù)2.實驗原理: a. 培養(yǎng)基中加入唯一氮源 - 尿素,能分解尿素的細菌自身能夠合成脲酶,能夠分解利用尿素中的氮元素, 從而能夠生存繁殖;不能分解尿素的細菌的繁殖受到抑制, 從而達到分離出土壤中能分解尿素的細菌的作用。 b.使用酚紅鑒定尿素是否被分解 .co(nh2)2 分解產(chǎn)生 nh3 使溶液顯堿性 .如果尿素被分解,則酚紅會顯紅色, c. 分解原理 .co(nh2)2+h2o=脲酶 =co2+nh3d.稀釋涂布平板法. 將菌液進行一系列的梯度稀釋, 然后將不同稀釋濃度的
2、菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物被分散成單個細胞, 從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。e.計數(shù)菌落,一個或幾個細菌可以繁殖為一個肉眼可見的菌落 (計數(shù)結(jié)果低于實際細菌數(shù))3.提出問題:尿素分解后nh3 的產(chǎn)生是否會影響實驗?4.做出假設(shè):尿素分解后nh3 的產(chǎn)生會影響實驗。5.實驗材料用具: 超凈工作臺、 取樣鏟、試管、錐形瓶、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌鍋、 酒精燈、酒精、無菌水、地面以下 3-8cm處的土壤、培養(yǎng)基 a(磷酸二氫化鉀 1.4g 磷酸氫化二鈉 2.1g 水合硫酸鎂 0.2g 葡萄糖 10g 尿素 1g 瓊脂 15g
3、)培養(yǎng)基七b(牛分離土壤中分解尿酸的細菌實驗報告肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)涂布器、干熱滅菌箱、燒杯、膠頭滴管6.實驗步驟:1.對實驗用具消毒滅菌;按配方稱取上述物質(zhì),將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1000ml 。2.配置好培養(yǎng)基后, 將培養(yǎng)基 a.b 倒置都放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1d ,取出后觀察是否產(chǎn)生了菌落,若無,則繼續(xù)下一步實驗。若有,重做 (_)3.系列稀釋:將分別盛有 9ml 水的 5 只試管和 90ml 水的1 個錐形瓶滅菌,并按1010的順序編號錐形瓶編號10。將 10g符合條件的土壤放入錐形瓶中,震蕩錐形瓶,用移液管吸取1ml菌液,注入標有 10 的試管中,用手輕壓移液管上的橡皮頭,
4、吹吸三次,使菌液與水充分混勻。 以此類推,直到完成最后一只試管的稀釋。 (注意:移液管需要經(jīng)過滅菌,操作時,試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm處)4.涂布平板:將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中, 分別取 10.10 .10 中的少量菌液,分別各滴加到3 個培養(yǎng)基 a(總計 9 個)的表面,注明培養(yǎng)基種類,培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋程度,取少量無菌水滴加到1 個培養(yǎng)基中作為空白對照組, 取少量菌液滴加到培養(yǎng)基 b 中(判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用),將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃盡后,冷卻8-10s 。用涂布器將菌液均勻的涂布在每個培養(yǎng)基表面(每次涂布前都必須用酒精燈灼燒)涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿,使菌液分布均勻。分離土壤中分解尿酸的細菌實驗報告5.將培養(yǎng)基倒置并放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2d6.相同稀釋程度的 3 個培養(yǎng)基統(tǒng)計其菌落數(shù)(30-300 )取平均值。7.實驗結(jié)果: 1. 空白對照組無菌落。2.培養(yǎng)
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