抗生素類藥物分析

1、在低微濃度下即可對(duì)某些生物（病原微生物）的生命活動(dòng)有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱,內(nèi)酰胺類 氨基糖苷類 四環(huán)素類 大環(huán)內(nèi)酯類 多烯大環(huán)類 多肽類,1. 抗生素（antibiotics）,2. 分 類,一、概 述,化學(xué)純度較低 活性組分易發(fā)生變異 穩(wěn)定性差,3. 來 源,4. 抗生素的特點(diǎn),生產(chǎn)工藝復(fù)雜 發(fā)酵過程不易控制，易受污染,原因,一、概 述,鑒別：物理化學(xué)方法、微生物法 檢查：水分、異常毒性、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等 含量/效價(jià)測(cè)定： 微生物法 ： 與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)； 理化方法： 準(zhǔn)確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差,5. 抗生素質(zhì)量分析,一、概

2、 述,1. 化學(xué)結(jié)構(gòu),包括青霉素類和頭孢菌素類,青霉素類：6-APA為母核 頭孢菌素類：7-ACA為母核,中 國 藥 科 大 學(xué) 藥 學(xué) 院 藥 分 教 研 室,二、內(nèi)酰胺類,酸性較強(qiáng)（pKa 2.5-2.8） 臨床常用其堿金屬鹽 （水溶性好）,酸性(羧基),有多個(gè)手性碳,旋光性,青霉素類：苯環(huán)取代基 頭孢菌素類：母核有共軛結(jié)構(gòu),UV（共軛）,干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定,穩(wěn)定性(內(nèi)酰胺),2、主要 理化性質(zhì),降解 失效,氧化劑、酸、堿 酶、金屬離子、,青霉素,二、內(nèi)酰胺類,1）羥肟酸鐵反應(yīng)： 內(nèi)酰胺類 羥肟酸 顯色 2）茚三酮反應(yīng) -氨基 藍(lán)紫色 3）雙縮脲反應(yīng) 內(nèi)酰胺類 紫紅色 4）光譜法（

3、UV、NMR） 5）色譜法（HPLC、TLC）,NH2OHHCl NaOH,茚三酮 ,堿性酒石酸銅,呈色反應(yīng),3、鑒 別,二、內(nèi)酰胺類,二、內(nèi)酰胺類,4、檢 查,聚合物 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 吸光度 殘留溶劑 結(jié)晶性,5、含量測(cè)定 -碘量法（ChP2000）,二、 內(nèi)酰胺類,原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應(yīng)，但其堿性降解產(chǎn)物可消耗碘,青霉素族 頭孢菌素族,NaOH 水解,4I2H +,8I-,I2+2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6,定量過量,剩 余,5、含量測(cè)定,-碘量法（ChP2000）,反應(yīng)分兩步進(jìn)行：,水解反應(yīng) (按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行),氧化-還原反應(yīng) (無定量關(guān)系，受溫度、p

4、H值和時(shí)間等因素影響， 應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測(cè)定),5、含量測(cè)定,-碘量法（ChP2000）,因樣品中雜質(zhì)會(huì)消耗碘，故應(yīng)作空白試驗(yàn)。,加入樣品，不加堿； 其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。,空白試驗(yàn):,空白試驗(yàn)與經(jīng)典空白試驗(yàn)不同：,5、含量測(cè)定,-碘量法（ChP2000）,含量 對(duì)照品,V樣空 - V樣 W對(duì) V對(duì)空 - V對(duì) W樣,靈敏度高：樣品 : 碘 = 1 : 8 反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高,1份含量,V對(duì)、V對(duì)空 V樣、V樣空,加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同,特 點(diǎn)：,5、含量測(cè)定,-電位配位滴定法（汞量法）,原理：青霉素不與汞鹽反應(yīng)，其堿性降解

5、產(chǎn)物可與Hg2+絡(luò)和。,Hg+ + 2R-SH (RS)2Hg + 2H+,方法說明： a、空白試驗(yàn)與碘量法類似，加樣品，不加NaOH b、與碘量法相比，汞量法不需對(duì)照試驗(yàn),5、含量測(cè)定,-其他常用方法,酸堿滴定法：應(yīng)用廣泛,硫醇汞鹽法,HPLC法：應(yīng)用廣泛,1. 化學(xué)結(jié)構(gòu),三、氨基糖苷類,都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷； 分子結(jié)構(gòu)中都含有多羥基； 均為堿性抗生素；,鏈霉素,臨床應(yīng)用其硫酸鹽,堿性(氨基),（糖）：有多個(gè)手性碳,旋光性(糖),水 溶 性,溶解度(氨基、羥基),強(qiáng)酸、堿條件均可水解,穩(wěn)定性(苷),2、主要 理化性質(zhì),三、氨基糖苷類,3、鑒 別,三、氨基糖苷類,茚三酮反應(yīng)：具羥

6、基胺類，-氨基酸性質(zhì),鏈霉素 + 水和茚三酮 藍(lán)紫色,鏈霉素 N-甲基葡萄糖胺,N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應(yīng)：,紅 色,水解,對(duì)二甲氨基苯甲醛,乙酰丙酮 OH-,8-羥基喹啉 NaOBr,坂口（Sakaguchi）反應(yīng)：(鏈霉胍特有）,麥芽酚（Maltol)反應(yīng)：(鏈霉糖特有）,三、氨基糖苷類 -鑒別,鏈霉素 麥芽酚 紫紅色,鏈霉素 鏈霉胍 橙紅,硫酸鹽反應(yīng),或-萘酚,4、檢 查-,來 源：,發(fā)酵中產(chǎn)生,BP:,薄層色譜法（雜質(zhì)對(duì)照品法）,要求：NC2 2000，C2a峰和C2峰的分離度應(yīng)符合要求，重復(fù)進(jìn)樣RSD2.0%,三、氨基糖苷類,鏈霉素中鏈霉素B的檢查,慶大霉素C

7、組分測(cè)定（系統(tǒng)適用性試驗(yàn)）,色譜柱：ODS,流動(dòng)相： H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時(shí)調(diào)節(jié)甲醇的含量。,檢測(cè)波長： 330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）,4、含 量 檢 測(cè),三、氨基糖苷類,氨基糖苷類 含量檢測(cè),微生物法、HPLC法等,四、四環(huán)素類,1. 化學(xué)結(jié)構(gòu),四、四環(huán)素類,-OH：酸性 N(CH3)2：堿性 與酸、堿均可成鹽 臨床多用鹽酸鹽,兩 性,旋光性,易發(fā)生異構(gòu)化，降解等反應(yīng)，性質(zhì)不穩(wěn)定,穩(wěn)定性,酚羥基、烯醇基與Ca2+、Mg2+絡(luò)合顯色,與金屬離子絡(luò)合,2、主要 理化性質(zhì),UV和熒光,四、四環(huán)素類,2. 主要理化性質(zhì),堿 性 C環(huán)開環(huán)，形成內(nèi)酯 異四環(huán)素,弱酸性（pH2-6） A環(huán)C-4異構(gòu)化 差向四環(huán)素,酸性（pH 2） C環(huán)脫水 脫水四環(huán)素,四、四環(huán)素類,差向異構(gòu)體,異四環(huán)素,OH-,四、四環(huán)素類,四、四環(huán)素類,3. 鑒 別,1）濃硫酸反應(yīng) 2）FeCl3反應(yīng)： （酚羥基） 顯紅色褐色 3） TLC、HPLC 4）熒光：（含共軛雙鍵）紫外燈照射下產(chǎn)生不同顏色熒光,HPLC法,4. 檢 查,TLC、HPLC法 雜質(zhì)吸收度（降解產(chǎn)物顏色較深） 殘留溶劑,5. 含