液質(zhì)聯(lián)用操作規(guī)程

1、液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 1 頁共 8 頁SO - Xe T SSDC1適用范圍本設備配備 A QUI UPL液相色譜儀、 T S MS/MS質(zhì)譜儀，適用于食品、藥品中各種有機物得定性、 定量分析，就是一種具有高靈敏度得檢測儀器, 儀器由主機、計算機與數(shù)據(jù)處理軟件等組成.2、 職責2、1 操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認真填寫實驗使用記錄。2、 保管人員負責對儀器進行定期維護與保養(yǎng)。2、3 科室負責人負責監(jiān)督檢查規(guī)程得執(zhí)行。3。操作程序日常操作步驟：準備 UPLC 設置樣品表 - 運行樣品 定量 打印報告。注 :如果一個星期內(nèi)不運行樣品請不要關質(zhì)譜儀，使其保持真空。建立新方法與 rje得操作步驟：準

2、備 PLC 建立新得 projec 用標準品調(diào)諧 編輯質(zhì)譜方法 -編輯UPC 方法 -設置樣品表 運行樣品 定量 -打印報告。3、1 開機：3.11 徹底開機順序（儀器已關閉)確定 M 及其它儀器電源電纜已連接,開氮氣發(fā)生器、開氬氣，小表電腦界面右下角網(wǎng)絡圖標紅叉。打開 UPLC自動進樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡圖標出現(xiàn)感嘆號！.打開 ULC泵電源 ,等約 30s 或者就是有響聲。打開質(zhì)譜電源，等待 5mn,離子源透視鏡里面亮。打開Masslynx 軟件， assl x 主界面-左側(cè)inst ue t-Massune-界面菜單欄vc m-pup同樣界面左側(cè)偏上diagn t c-acuum

3、-anaye MS t rbosp d%要在分鐘內(nèi)升到0。至少抽真空4 個小時 查瞧真空狀態(tài)主界面massconsole界面左側(cè) o tq ms detecto加號展開- mdisplay碰撞室真空度達液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 2 頁共 8 頁SOP - Xevo-TQS IDC到 7、x 5mbar 。 2 日常開機順序 (儀器未關閉 )開氮氣發(fā)生器、開氬氣，小表準備樣品灌注二元泵灌注自動進樣器建立液相方法 平衡液相3.3。1、 準備流動相用 0、22um 得膜過濾緩沖液， 所有得緩沖液與超純水都要新配制 ,超純水與緩沖液使用不得超過二天 ,緩沖鹽一定要就是可揮發(fā)得，而且濃度不要大于 10 M.

4、3.3.2、樣品要求所有樣品都要用流動相初始梯度比例得溶劑來溶解,并用、 22u得膜過濾。3.3。3 灌注二元泵在 Masslyx 主界面 ,單擊 MS nsle，進入 ULC交互顯示界面， 點擊左欄 A ui y PL Syt m ontr l Stat Up Syst m ,單擊 SM，選擇需要用到得流動相位置，如 A 與 B，選擇 eal wah，時間設為分鐘。單擊 M, 選擇 S rong W s 5 cycles , Smp syringe 20單擊 E ilib ate t Method ，將流速設為0 ,單擊 Sar 開始灌注、 時間大約為 9i 左右。設定流速，平衡液相在 Ma

5、slnx 主界面，單擊 Inet Met d圖標 ,打開液相方法編輯窗口，單擊 stat s CQ I dditi naSta ,進入液相控制臺 ,單擊A 或 B 或流速得位置 ,出現(xiàn)流速、比例設定對話框，設定液相流速與比例 ,單擊對勾 ,開始平衡液相， 如果后面要做調(diào)諧 ,可設定流速 0、2 /min ，有機相與水相得比例為 5： 50。液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 3 頁共8頁OPI XeoTQSFSDC3、4 準備質(zhì)譜 4、計算化合物單同位素質(zhì)量數(shù)Massy主界面單擊 Tool Molecula eiht Cal laor，輸入化合物得分子式（大寫注意、Br 等正確得輸入方法 ) ，注意選單同位

6、素Monois ，Ion Mod ：離子化模式， ve正離子 ,-ve 負離子,單擊 Calcul te。34。2 用 Itel ita t 進行自動調(diào)諧在 asslnx 主界面單擊 MS Tu e 圖標，打開調(diào)諧窗口 ,單擊 on Mod ES+ 或 E ，單擊API as 圖標打開氮氣 , 單擊 打開高壓選擇 SMo e 圖標 ，設定液相流速 0、2l/min ，水：乙腈得比例為： 0.把標準品調(diào)諧液放入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處得A（或或）號位（注 :濃度在 20p左右 )單擊 F i c,選擇 Reservoi為, lowStat為 LC模式，點擊 P rg 圖標。Purge 結(jié)束后，將 Fl

7、owState 改為 ine模式 ,設定 Funtio 為 MS1 scan，M ss 為計算出化合物得質(zhì)量數(shù), an為 5，點擊進樣,開始進樣 ,直到離子得響應比較穩(wěn)定 .保存調(diào)諧文件 :F le SavAs 至已建得項目下。在 asslnx 主界面，選擇 Ms Console Xev Q 選擇 In e listart ,選擇 ampleTune nd DeveloD ectorMe hod ，ES+單擊 Sta t 圖標 ,出現(xiàn) Intelli tar 自動調(diào)諧編輯窗口，選擇witcho Ad nedmode ，輸入 oud nme(化合物名稱 ),oleular M s/Formul

8、（分子量或分子式）dduct A（ M +， 選擇 Load Exisin Smple Tu e，在 S le Tne Na e方框后得“。”處調(diào)用開始保存得調(diào)諧文件,在 Develp M M etho 前得方框打鉤，并在方框出輸入 RM 方法得文件名 ,路徑為已建得項目下。在 Prin eport 前方框打鉤 ,Cone Voltag ，Colli ion En g 處為默認值， Fluidics 下得 lwPath 選擇 bne 模式， mple eervir 與 Smple F Rat 參數(shù)與 Fudics 下 bined 模式下得進樣參數(shù)保持一致。單擊右邊得 Start 開始自動調(diào)諧。

9、調(diào)諧成功，會有綠勾出現(xiàn) ，查瞧 intel ista t 報告液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 4 頁共8頁SOPIeo QSF DC3.4.查瞧 int list rt中自動生成得質(zhì)譜方法：從 MassLynx 主窗口 ,單擊 M Method ，出現(xiàn) MS Me hd 編輯對話框 ，選擇 File pen， 選擇 Ite listat 中保存得質(zhì)譜方法得文件，雙擊方法 ,如發(fā)現(xiàn)自動調(diào)諧生產(chǎn)得質(zhì)譜方法中部分參數(shù)有誤， 則可以在 han ls 窗口手動修改參數(shù)，填寫 relenti on wi o 中得 en時間 ，此時間必須與液相色譜方法運行時間保持一致 ,選擇 Au wel，單擊 OK，點擊 Fi e

10、 Save As， 保存質(zhì)譜方法文件。3、建立液相方法 .。 1 編輯液相方法在液相方法編輯窗口，單擊 nle 梯度洗脫程序中最后階段時間必須與t ,輸入溶劑名稱，run ern time 及梯度洗脫程序符合，單擊 K， 選擇 File,Sves保存方法，單擊LoaMeth ，平衡液相。3。5.2建立樣品列表在 Massl x主窗口，選擇Fil Nw 建立一個空白得表sm lelit 。輸入文件名,樣品信息，雙擊MSFile ,選擇質(zhì)譜方法，雙擊 Inl t ile, 選擇液相方法，在 Bo tle中輸入樣品瓶得位置，在 Iject Volu e 中輸入進樣體積 ,可右鍵Add, 增加樣品表得

11、行數(shù)，保存樣品表:File Sae As .3、6 數(shù)據(jù)采集與處理3。6.1、選中要采集得樣品， 單擊 Ru Star,選擇 cquireS mpleDat only，單擊 K 開始進樣并采集 。3.6.在采集過程中，可查瞧色譜圖,點擊 hro t grm 窗口 ,點擊 Real-time pdae con 、如果不能見整個 TIC圖 ,單擊 Default Rnge圖標 .如果方法中包括多個通道,可通過 D pl ss 查瞧如果方法中包括多個檢測器或多個Functi，可通過 Diplay IC 查瞧3.63 處理多個 Function 得數(shù)據(jù)如果質(zhì)譜方法中有多個Function，如有三個 F

12、unct o，如想瞧第二個Functon,MS Scan 得數(shù)據(jù) .液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 5 頁共 8頁SOPI- Xevo TQSSI 3.6.3、1 在色譜圖窗口 ,點擊 isplay TIC，選中 MS Sa,選擇Ad tra e ,單擊 OK。3. .3、2 如想查第二個 uncion， Dau t r San 質(zhì)譜圖 ，在色譜圖中，選擇 splay I, 選擇 ScanWaveDS Add trace ,單擊 。3.6、3、 選擇 Pro e s bn spectra、 分別用右鍵輸入信號與本底噪音、 單擊 OK、 得到 au ter Sca得質(zhì)譜圖 ,單擊 Proess ooth

13、,單擊 K。3、7數(shù)據(jù)處理外標定量法3。 .在 Maslnx 主頁面單擊 Targetlynx/Edit m hd，出現(xiàn)定量方法編輯對話框 ,單擊新建方法圖標，新建一個定量方法.3.。 2 單擊 Addnew pund (添加新得化合物）圖標，添加一個新得化合物。37。3 單擊菜單欄 ud e，選中 at taio on 與 pounNa（前面打勾 )在 Massln 主頁面，打開中等偏下低濃度標準品得色譜圖，Displa/Ma chroma o ram 選出要定量得化合物得離子對，一般強度高得化合物用來做為定量離子，另一個離子對則作為確證離子，用鼠標右鍵在定量離子對色譜圖上拉一下 ,則p n

14、dame,Acquisition Functio umbr,Quatif ctio Tr ce，Pred edReenti n Tie 與Retentionw ndo 將自動輸入到定量方法中。 注意：在色譜圖上拉得時候,要遵循兩個原則 ,拉得位置要以色譜峰得峰尖左右對稱，拉得寬度要超過峰得起點與終點。3.74 單擊工作曲線圖標 ,在工作曲線設置頁面，填入 oncent a in nits:濃度單位 ,例如 / l， ug/ g，pp, ppm 等。Concentat of Stada： Levl 選擇 Conc、A。Poynomia Typ 選擇 Linear、 （可根據(jù)自己行業(yè)得規(guī)定）Cal

15、ibat o Origin_選擇 excude(排除原點），nlud(包含原點），fo e（強制過原點）W it ting uncon（權(quán)重 )_ （根據(jù)自己行業(yè)規(guī)定） rpagate aira on Para et s如果所有得化合物均用相同得工作曲線得參數(shù) ,選 Ye液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 6 頁共8頁SOPIXevoQSFS 7.5 打開積分參數(shù)列表,選中A exr ck Enabled（打勾， YES),negr tioWindow Extnt輸入2，選中 ro gtentgratin Parameer（打勾 ),如果色譜峰并不就是很對稱得色譜圖，可先在色譜圖上先設定參數(shù)，積分，好積分參

16、數(shù)滿意之后,proess ntgrate/copy ，在 Tar etlynx 方法中 Ei/Past 就可將其粘貼到 Targetynx 方法中。建議用 Apex Trck 積分方法， Smot 方法建議用 s o thiteratio 1，sm o h width 2 。重復上面得過程，把其她幾個化合物得信息全部加入，保存方法： As， 保存到當前項目得 ethDB 文件夾中，正確得 sa ple i表格模板 ,除了前面進樣時得選項之外， 還要有 sa e typ, ConA， 等選中要處理得樣品，單擊 ocss apls，出現(xiàn)下圖得對話框 ,確保選中， ntegrate 、 samle

17、，ca i e tadar, Quati y Sam ,選擇剛才編輯得 argtlynx 方法 ,單擊 OK后 ,出現(xiàn)定量結(jié)果對話框 .可根據(jù)自己得需要 ,用鼠標右鍵 ,Chang Colun Order 來增加或減少 Su mary 中得選項。、關機程序3.8.日常關機：3. .、 1 如果流動相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2 分鐘 ,流速設為、 2m/ in，8水相，沖洗至少30 分鐘，換成 80有機相，沖洗至少20分鐘 ,停流速 ,水相，沖洗至少 30 分鐘，換成 0%有機相，沖洗至少 20 分鐘，停流速 ,柱溫為室溫 .3.8。、 關質(zhì)譜：主界面 mass ue 或者電腦下面儀

18、器圖標 -界面左側(cè)偏上 lui cs- o stae 選擇為 wste、關氬氣 ,mass tune 界面或者電腦下面儀器圖標工具欄第 6 個 關高壓 mas tune 界面右下角 等待去溶劑氣溫度降低至 100 度以下 mass t ne 界面或者電腦下面儀器圖標左側(cè)偏上。S+s urc -tm raure-deolvaton 關氮氣 ，點擊氮氣發(fā)生器開啟開關。3.8。徹底關機。 8.2、1先完成日常關機液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第頁共 頁SO I ev TQ FI3。8.2、2 泄真空： tune pa vacuum vent-es 等待渦輪分子泵轉(zhuǎn)速降到 10 以下 ，masslnx 主界面 -

19、左側(cè) instrumen -Mass ue-界面左側(cè)偏上 dianostcs-acuum-sorce t bo spe 8。、 3 退出軟件，其她界面先退出，主界面最后退出。8.、4 關質(zhì)譜電源關所有 U C 電源，計算機電源，儀器三個電源順序無所謂，關氮氣發(fā)生器，氬氣.3. .2、 如果有 UPS，關閉 UPS電源，計算機電源. 日常維護、保養(yǎng)及注意事項4、儀器室要保持整潔、干凈、無塵; 配套設施布局合理。、 2儀器室溫度應相對穩(wěn)定，一般應控制在2-25 , 保持恒溫 ; 相對濕度最好為 50-70 , 室內(nèi)應備有溫度計與濕度計, 一般采用空調(diào)與吸濕機調(diào)節(jié)溫度與濕度。4、3 氣壓過濾機械泵油

20、，停止樣品采集、停止流動相、關閉高壓、關閉所有氣流 , 關閉離子源內(nèi)得真空隔離閥。 用一字鏍絲刀順時針方向擰開機械泵上得Gas alla t閥四分之一圈，運行30分鐘后再把 Gas Ballast閥旋轉(zhuǎn)到原來關閉得位置。對于 ESI 源, 至少每星期做一次 , 對于 APC源，每天做一次。4、4開高壓之前一定要先開氮氣, 關氮氣之前一定要先關高壓.4、5ESI離子化與溶劑密切相關 , 在使用某些溶劑與添加物需要注意以下幾個方面：三氟乙酸 (TF ) 多用于蛋白質(zhì)與多肽分析，但對 SI 離子化有抑制效應 ; 三乙胺 (T A）在 m/ 102 處有較強得 +H+峰 , 有可能會抑制某些堿性化合物在正離子ES條件下得離子化, 也有可能會增強某些堿性化合物在負離子EI條件下得