液質(zhì)聯(lián)用操作規(guī)程

1、液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 1 頁共 8 頁SO - Xe T SSDC1適用范圍本設(shè)備配備 A QUI UPL液相色譜儀、 T S MS/MS質(zhì)譜儀，適用于食品、藥品中各種有機(jī)物得定性、 定量分析，就是一種具有高靈敏度得檢測(cè)儀器, 儀器由主機(jī)、計(jì)算機(jī)與數(shù)據(jù)處理軟件等組成.2、 職責(zé)2、1 操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認(rèn)真填寫實(shí)驗(yàn)使用記錄。2、 保管人員負(fù)責(zé)對(duì)儀器進(jìn)行定期維護(hù)與保養(yǎng)。2、3 科室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)監(jiān)督檢查規(guī)程得執(zhí)行。3。操作程序日常操作步驟：準(zhǔn)備 UPLC 設(shè)置樣品表 - 運(yùn)行樣品 定量 打印報(bào)告。注 :如果一個(gè)星期內(nèi)不運(yùn)行樣品請(qǐng)不要關(guān)質(zhì)譜儀，使其保持真空。建立新方法與 rje得操作步驟：準(zhǔn)

2、備 PLC 建立新得 projec 用標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧 編輯質(zhì)譜方法 -編輯UPC 方法 -設(shè)置樣品表 運(yùn)行樣品 定量 -打印報(bào)告。3、1 開機(jī)：3.11 徹底開機(jī)順序（儀器已關(guān)閉)確定 M 及其它儀器電源電纜已連接,開氮?dú)獍l(fā)生器、開氬氣，小表電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)紅叉。打開 UPLC自動(dòng)進(jìn)樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)出現(xiàn)感嘆號(hào)！.打開 ULC泵電源 ,等約 30s 或者就是有響聲。打開質(zhì)譜電源，等待 5mn,離子源透視鏡里面亮。打開Masslynx 軟件， assl x 主界面-左側(cè)inst ue t-Massune-界面菜單欄vc m-pup同樣界面左側(cè)偏上diagn t c-acuum

3、-anaye MS t rbosp d%要在分鐘內(nèi)升到0。至少抽真空4 個(gè)小時(shí) 查瞧真空狀態(tài)主界面massconsole界面左側(cè) o tq ms detecto加號(hào)展開- mdisplay碰撞室真空度達(dá)液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 2 頁共 8 頁SOP - Xevo-TQS IDC到 7、x 5mbar 。 2 日常開機(jī)順序 (儀器未關(guān)閉 )開氮?dú)獍l(fā)生器、開氬氣，小表準(zhǔn)備樣品灌注二元泵灌注自動(dòng)進(jìn)樣器建立液相方法 平衡液相3.3。1、 準(zhǔn)備流動(dòng)相用 0、22um 得膜過濾緩沖液， 所有得緩沖液與超純水都要新配制 ,超純水與緩沖液使用不得超過二天 ,緩沖鹽一定要就是可揮發(fā)得，而且濃度不要大于 10 M.

4、3.3.2、樣品要求所有樣品都要用流動(dòng)相初始梯度比例得溶劑來溶解,并用、 22u得膜過濾。3.3。3 灌注二元泵在 Masslyx 主界面 ,單擊 MS nsle，進(jìn)入 ULC交互顯示界面， 點(diǎn)擊左欄 A ui y PL Syt m ontr l Stat Up Syst m ,單擊 SM，選擇需要用到得流動(dòng)相位置，如 A 與 B，選擇 eal wah，時(shí)間設(shè)為分鐘。單擊 M, 選擇 S rong W s 5 cycles , Smp syringe 20單擊 E ilib ate t Method ，將流速設(shè)為0 ,單擊 Sar 開始灌注、 時(shí)間大約為 9i 左右。設(shè)定流速，平衡液相在 Ma

5、slnx 主界面，單擊 Inet Met d圖標(biāo) ,打開液相方法編輯窗口，單擊 stat s CQ I dditi naSta ,進(jìn)入液相控制臺(tái) ,單擊A 或 B 或流速得位置 ,出現(xiàn)流速、比例設(shè)定對(duì)話框，設(shè)定液相流速與比例 ,單擊對(duì)勾 ,開始平衡液相， 如果后面要做調(diào)諧 ,可設(shè)定流速 0、2 /min ，有機(jī)相與水相得比例為 5： 50。液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 3 頁共8頁OPI XeoTQSFSDC3、4 準(zhǔn)備質(zhì)譜 4、計(jì)算化合物單同位素質(zhì)量數(shù)Massy主界面單擊 Tool Molecula eiht Cal laor，輸入化合物得分子式（大寫注意、Br 等正確得輸入方法 ) ，注意選單同位

6、素Monois ，Ion Mod ：離子化模式， ve正離子 ,-ve 負(fù)離子,單擊 Calcul te。34。2 用 Itel ita t 進(jìn)行自動(dòng)調(diào)諧在 asslnx 主界面單擊 MS Tu e 圖標(biāo)，打開調(diào)諧窗口 ,單擊 on Mod ES+ 或 E ，單擊API as 圖標(biāo)打開氮?dú)?, 單擊 打開高壓選擇 SMo e 圖標(biāo) ，設(shè)定液相流速 0、2l/min ，水：乙腈得比例為： 0.把標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧液放入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處得A（或或）號(hào)位（注 :濃度在 20p左右 )單擊 F i c,選擇 Reservoi為, lowStat為 LC模式，點(diǎn)擊 P rg 圖標(biāo)。Purge 結(jié)束后，將 Fl

7、owState 改為 ine模式 ,設(shè)定 Funtio 為 MS1 scan，M ss 為計(jì)算出化合物得質(zhì)量數(shù), an為 5，點(diǎn)擊進(jìn)樣,開始進(jìn)樣 ,直到離子得響應(yīng)比較穩(wěn)定 .保存調(diào)諧文件 :F le SavAs 至已建得項(xiàng)目下。在 asslnx 主界面，選擇 Ms Console Xev Q 選擇 In e listart ,選擇 ampleTune nd DeveloD ectorMe hod ，ES+單擊 Sta t 圖標(biāo) ,出現(xiàn) Intelli tar 自動(dòng)調(diào)諧編輯窗口，選擇witcho Ad nedmode ，輸入 oud nme(化合物名稱 ),oleular M s/Formul

8、（分子量或分子式）dduct A（ M +， 選擇 Load Exisin Smple Tu e，在 S le Tne Na e方框后得“?！碧幷{(diào)用開始保存得調(diào)諧文件,在 Develp M M etho 前得方框打鉤，并在方框出輸入 RM 方法得文件名 ,路徑為已建得項(xiàng)目下。在 Prin eport 前方框打鉤 ,Cone Voltag ，Colli ion En g 處為默認(rèn)值， Fluidics 下得 lwPath 選擇 bne 模式， mple eervir 與 Smple F Rat 參數(shù)與 Fudics 下 bined 模式下得進(jìn)樣參數(shù)保持一致。單擊右邊得 Start 開始自動(dòng)調(diào)諧。

9、調(diào)諧成功，會(huì)有綠勾出現(xiàn) ，查瞧 intel ista t 報(bào)告液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 4 頁共8頁SOPIeo QSF DC3.4.查瞧 int list rt中自動(dòng)生成得質(zhì)譜方法：從 MassLynx 主窗口 ,單擊 M Method ，出現(xiàn) MS Me hd 編輯對(duì)話框 ，選擇 File pen， 選擇 Ite listat 中保存得質(zhì)譜方法得文件，雙擊方法 ,如發(fā)現(xiàn)自動(dòng)調(diào)諧生產(chǎn)得質(zhì)譜方法中部分參數(shù)有誤， 則可以在 han ls 窗口手動(dòng)修改參數(shù)，填寫 relenti on wi o 中得 en時(shí)間 ，此時(shí)間必須與液相色譜方法運(yùn)行時(shí)間保持一致 ,選擇 Au wel，單擊 OK，點(diǎn)擊 Fi e

10、 Save As， 保存質(zhì)譜方法文件。3、建立液相方法 .。 1 編輯液相方法在液相方法編輯窗口，單擊 nle 梯度洗脫程序中最后階段時(shí)間必須與t ,輸入溶劑名稱，run ern time 及梯度洗脫程序符合，單擊 K， 選擇 File,Sves保存方法，單擊LoaMeth ，平衡液相。3。5.2建立樣品列表在 Massl x主窗口，選擇Fil Nw 建立一個(gè)空白得表sm lelit 。輸入文件名,樣品信息，雙擊MSFile ,選擇質(zhì)譜方法，雙擊 Inl t ile, 選擇液相方法，在 Bo tle中輸入樣品瓶得位置，在 Iject Volu e 中輸入進(jìn)樣體積 ,可右鍵Add, 增加樣品表得

11、行數(shù)，保存樣品表:File Sae As .3、6 數(shù)據(jù)采集與處理3。6.1、選中要采集得樣品， 單擊 Ru Star,選擇 cquireS mpleDat only，單擊 K 開始進(jìn)樣并采集 。3.6.在采集過程中，可查瞧色譜圖,點(diǎn)擊 hro t grm 窗口 ,點(diǎn)擊 Real-time pdae con 、如果不能見整個(gè) TIC圖 ,單擊 Default Rnge圖標(biāo) .如果方法中包括多個(gè)通道,可通過 D pl ss 查瞧如果方法中包括多個(gè)檢測(cè)器或多個(gè)Functi，可通過 Diplay IC 查瞧3.63 處理多個(gè) Function 得數(shù)據(jù)如果質(zhì)譜方法中有多個(gè)Function，如有三個(gè) F

12、unct o，如想瞧第二個(gè)Functon,MS Scan 得數(shù)據(jù) .液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 5 頁共 8頁SOPI- Xevo TQSSI 3.6.3、1 在色譜圖窗口 ,點(diǎn)擊 isplay TIC，選中 MS Sa,選擇Ad tra e ,單擊 OK。3. .3、2 如想查第二個(gè) uncion， Dau t r San 質(zhì)譜圖 ，在色譜圖中，選擇 splay I, 選擇 ScanWaveDS Add trace ,單擊 。3.6、3、 選擇 Pro e s bn spectra、 分別用右鍵輸入信號(hào)與本底噪音、 單擊 OK、 得到 au ter Sca得質(zhì)譜圖 ,單擊 Proess ooth

13、,單擊 K。3、7數(shù)據(jù)處理外標(biāo)定量法3。 .在 Maslnx 主頁面單擊 Targetlynx/Edit m hd，出現(xiàn)定量方法編輯對(duì)話框 ,單擊新建方法圖標(biāo)，新建一個(gè)定量方法.3.。 2 單擊 Addnew pund (添加新得化合物）圖標(biāo)，添加一個(gè)新得化合物。37。3 單擊菜單欄 ud e，選中 at taio on 與 pounNa（前面打勾 )在 Massln 主頁面，打開中等偏下低濃度標(biāo)準(zhǔn)品得色譜圖，Displa/Ma chroma o ram 選出要定量得化合物得離子對(duì)，一般強(qiáng)度高得化合物用來做為定量離子，另一個(gè)離子對(duì)則作為確證離子，用鼠標(biāo)右鍵在定量離子對(duì)色譜圖上拉一下 ,則p n

14、dame,Acquisition Functio umbr,Quatif ctio Tr ce，Pred edReenti n Tie 與Retentionw ndo 將自動(dòng)輸入到定量方法中。 注意：在色譜圖上拉得時(shí)候,要遵循兩個(gè)原則 ,拉得位置要以色譜峰得峰尖左右對(duì)稱，拉得寬度要超過峰得起點(diǎn)與終點(diǎn)。3.74 單擊工作曲線圖標(biāo) ,在工作曲線設(shè)置頁面，填入 oncent a in nits:濃度單位 ,例如 / l， ug/ g，pp, ppm 等。Concentat of Stada： Levl 選擇 Conc、A。Poynomia Typ 選擇 Linear、 （可根據(jù)自己行業(yè)得規(guī)定）Cal

15、ibat o Origin_選擇 excude(排除原點(diǎn)），nlud(包含原點(diǎn)），fo e（強(qiáng)制過原點(diǎn)）W it ting uncon（權(quán)重 )_ （根據(jù)自己行業(yè)規(guī)定） rpagate aira on Para et s如果所有得化合物均用相同得工作曲線得參數(shù) ,選 Ye液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第 6 頁共8頁SOPIXevoQSFS 7.5 打開積分參數(shù)列表,選中A exr ck Enabled（打勾， YES),negr tioWindow Extnt輸入2，選中 ro gtentgratin Parameer（打勾 ),如果色譜峰并不就是很對(duì)稱得色譜圖，可先在色譜圖上先設(shè)定參數(shù)，積分，好積分參

16、數(shù)滿意之后,proess ntgrate/copy ，在 Tar etlynx 方法中 Ei/Past 就可將其粘貼到 Targetynx 方法中。建議用 Apex Trck 積分方法， Smot 方法建議用 s o thiteratio 1，sm o h width 2 。重復(fù)上面得過程，把其她幾個(gè)化合物得信息全部加入，保存方法： As， 保存到當(dāng)前項(xiàng)目得 ethDB 文件夾中，正確得 sa ple i表格模板 ,除了前面進(jìn)樣時(shí)得選項(xiàng)之外， 還要有 sa e typ, ConA， 等選中要處理得樣品，單擊 ocss apls，出現(xiàn)下圖得對(duì)話框 ,確保選中， ntegrate 、 samle

17、，ca i e tadar, Quati y Sam ,選擇剛才編輯得 argtlynx 方法 ,單擊 OK后 ,出現(xiàn)定量結(jié)果對(duì)話框 .可根據(jù)自己得需要 ,用鼠標(biāo)右鍵 ,Chang Colun Order 來增加或減少 Su mary 中得選項(xiàng)。、關(guān)機(jī)程序3.8.日常關(guān)機(jī)：3. .、 1 如果流動(dòng)相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2 分鐘 ,流速設(shè)為、 2m/ in，8水相，沖洗至少30 分鐘，換成 80有機(jī)相，沖洗至少20分鐘 ,停流速 ,水相，沖洗至少 30 分鐘，換成 0%有機(jī)相，沖洗至少 20 分鐘，停流速 ,柱溫為室溫 .3.8。、 關(guān)質(zhì)譜：主界面 mass ue 或者電腦下面儀

18、器圖標(biāo) -界面左側(cè)偏上 lui cs- o stae 選擇為 wste、關(guān)氬氣 ,mass tune 界面或者電腦下面儀器圖標(biāo)工具欄第 6 個(gè) 關(guān)高壓 mas tune 界面右下角 等待去溶劑氣溫度降低至 100 度以下 mass t ne 界面或者電腦下面儀器圖標(biāo)左側(cè)偏上。S+s urc -tm raure-deolvaton 關(guān)氮?dú)?，點(diǎn)擊氮?dú)獍l(fā)生器開啟開關(guān)。3.8。徹底關(guān)機(jī)。 8.2、1先完成日常關(guān)機(jī)液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第頁共 頁SO I ev TQ FI3。8.2、2 泄真空： tune pa vacuum vent-es 等待渦輪分子泵轉(zhuǎn)速降到 10 以下 ，masslnx 主界面 -

19、左側(cè) instrumen -Mass ue-界面左側(cè)偏上 dianostcs-acuum-sorce t bo spe 8。、 3 退出軟件，其她界面先退出，主界面最后退出。8.、4 關(guān)質(zhì)譜電源關(guān)所有 U C 電源，計(jì)算機(jī)電源，儀器三個(gè)電源順序無所謂，關(guān)氮?dú)獍l(fā)生器，氬氣.3. .2、 如果有 UPS，關(guān)閉 UPS電源，計(jì)算機(jī)電源. 日常維護(hù)、保養(yǎng)及注意事項(xiàng)4、儀器室要保持整潔、干凈、無塵; 配套設(shè)施布局合理。、 2儀器室溫度應(yīng)相對(duì)穩(wěn)定，一般應(yīng)控制在2-25 , 保持恒溫 ; 相對(duì)濕度最好為 50-70 , 室內(nèi)應(yīng)備有溫度計(jì)與濕度計(jì), 一般采用空調(diào)與吸濕機(jī)調(diào)節(jié)溫度與濕度。4、3 氣壓過濾機(jī)械泵油

20、，停止樣品采集、停止流動(dòng)相、關(guān)閉高壓、關(guān)閉所有氣流 , 關(guān)閉離子源內(nèi)得真空隔離閥。 用一字鏍絲刀順時(shí)針方向擰開機(jī)械泵上得Gas alla t閥四分之一圈，運(yùn)行30分鐘后再把 Gas Ballast閥旋轉(zhuǎn)到原來關(guān)閉得位置。對(duì)于 ESI 源, 至少每星期做一次 , 對(duì)于 APC源，每天做一次。4、4開高壓之前一定要先開氮?dú)? 關(guān)氮?dú)庵耙欢ㄒ汝P(guān)高壓.4、5ESI離子化與溶劑密切相關(guān) , 在使用某些溶劑與添加物需要注意以下幾個(gè)方面：三氟乙酸 (TF ) 多用于蛋白質(zhì)與多肽分析，但對(duì) SI 離子化有抑制效應(yīng) ; 三乙胺 (T A）在 m/ 102 處有較強(qiáng)得 +H+峰 , 有可能會(huì)抑制某些堿性化合物在正離子ES條件下得離子化, 也有可能會(huì)增強(qiáng)某些堿性化合物在負(fù)離子EI條件下得