細(xì)胞化學(xué)染色PPT課件

,過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng) periodic acid-Scheff reaction PAS,1,原理,過(guò)碘酸是氧化劑，能使含有乙二醇基的多糖類(lèi)物質(zhì)（糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白及糖脂等）氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無(wú)色品紅結(jié)合，使無(wú)色品紅變成紫紅色化合物，定位于多糖類(lèi)的細(xì)胞內(nèi)。,2,乙二醇基 雙醛基,過(guò)碘酸氧化,血夫試劑中的無(wú)色品紅,紫紅色化合物,3,粒細(xì)胞系統(tǒng) 分化差的原始粒細(xì)胞陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至中性分葉粒細(xì)胞呈陽(yáng)性，隨著細(xì)胞成熟陽(yáng)性增強(qiáng)。 嗜酸性粒細(xì)胞顆粒本身不著色，顆粒間胞質(zhì)紅色，是堿性粒細(xì)胞反之。,正常細(xì)胞的染色反應(yīng),4,紅細(xì)胞系統(tǒng)： 陰性 單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核陰性，其它陽(yáng)性。 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：大多數(shù)陰性，少數(shù)陽(yáng)性（陽(yáng)性率常20%） 巨核細(xì)胞系統(tǒng)：巨核細(xì)胞和血小板呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)程度隨成熟增強(qiáng)。 其他細(xì)胞：少數(shù)漿細(xì)胞陽(yáng)性，巨噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性。,5,1.紅細(xì)胞系統(tǒng)疾病： 紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細(xì)胞呈陽(yáng)性。 缺鐵性貧血、地中海貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、再障有核紅細(xì)胞呈陰性。,臨床意義,6,2.白細(xì)胞系統(tǒng)疾?。?主要用于輔助鑒別急性白血病的細(xì)胞類(lèi)型。 急性巨核細(xì)胞白血?。翰糠志藓思?xì)胞呈陽(yáng)性，呈粗顆粒狀、小塊狀、或彌散分布。 急性粒細(xì)胞白血病:部分原始粒細(xì)胞呈陽(yáng)性，呈細(xì)顆粒狀或彌散分布,7,急性淋巴細(xì)胞白血病粗顆粒狀或小塊狀 急性單核細(xì)胞白血病有時(shí)胞質(zhì)邊緣顆粒較粗大 慢性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率增加，呈粗顆粒狀或小塊狀,8,戈謝細(xì)胞呈陽(yáng)性，尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性。 RS細(xì)胞陰性或弱陽(yáng)性，骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌呈強(qiáng)陽(yáng)性。,9,酯酶染色,分為特異性酯酶染色和非特異性酯酶染色,10,特異性酯酶染色：氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色。非特異性酯酶染色：酸性非特異性酯酶染色（酸性-醋酸萘酚酯酶染色）、堿性非特異性酯酶染色（-丁酸萘酚酯酶）和中性非特異性酯酶染色（-醋酸萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色）,11,氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色naphthol AS-D chloroacetate esteraseNAS-DCE,12,原理,血細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D萘酚，產(chǎn)生AS-D萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞內(nèi)酶所在部位。本實(shí)驗(yàn)常用重氮鹽為堅(jiān)牢紫醬GBC，形成有色沉淀為紅色。,13,原理： 氯乙酸AS-D AS-D萘酚 萘酚,氯乙酸AS-D 萘酚酯酶,監(jiān)牢紫醬GBC,不溶性 沉淀,14,正常血細(xì)胞染色粒細(xì)胞系統(tǒng) 分化差的原始粒細(xì)胞陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至成熟粒細(xì)胞呈陽(yáng)性。 嗜酸性粒細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性，嗜堿性粒細(xì)胞呈陽(yáng)性。,15,單核細(xì)胞系統(tǒng):絕大多數(shù)為陰性，僅個(gè)別單核細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞呈弱陽(yáng)性。 其他細(xì)胞：如淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、血小板等均呈陰性，肥大細(xì)胞陽(yáng)性。,16,臨床意義,主要用于輔助鑒別診斷急性白血病細(xì)胞的類(lèi)型，是急性白血病的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色。 1.急性粒細(xì)胞白血病時(shí)原始粒細(xì)胞呈陰性或陽(yáng)性，所以染色結(jié)果為陰性者不能排除急粒的可能。,17,2.急性早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性。 3.急性單核細(xì)胞白血病時(shí)原始單核細(xì)胞及幼稚單核細(xì)胞幾乎均呈陰性，個(gè)別弱陽(yáng)性。 4.急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞呈陽(yáng)性，原始單核細(xì)胞及幼稚單核細(xì)胞呈陰性。,18,5.急性淋巴細(xì)胞白血病和急性巨核細(xì)胞白血病均呈陰性,19,應(yīng)用評(píng)價(jià),NAS-DCE是粒細(xì)胞的特異酯酶，它是急性白血病形態(tài)分型時(shí)常規(guī)做的細(xì)胞化學(xué)染色，尤其有助于POX染色陽(yáng)性的急粒急單的鑒別。 該實(shí)驗(yàn)敏感性較POX低，如有一定數(shù)量白血病細(xì)胞NAS-DCE染色呈陽(yáng)性，可以肯定其中粒系成分的存在，陰性則不能排除有粒系成分的可能。,20,-醋酸萘酚酯酶染色 -naphthol acetate esterase -NAE,21,原理,-醋酸萘酚酯酶存在于單核細(xì)胞、粒系細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中，是一種中性非特異性酯酶。血細(xì)胞內(nèi)的-NAE在PH中性條件下，水解基質(zhì)中的-醋酸萘酚釋放出-萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于細(xì)胞內(nèi)酯酶所在部位。 單核細(xì)胞系統(tǒng)可被氟化鈉抑制，所以做-NAE時(shí)，需要同時(shí)做氟化鈉抑制試驗(yàn)。,22,醋酸萘酚 萘酚,醋酸萘酚酯酶,水解,重氮鹽,不溶性有色沉淀,23,正常血細(xì)胞染色,單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細(xì)胞呈陽(yáng)性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽(yáng)性，幼稚單核及單核細(xì)胞呈陽(yáng)性，可被氟化鈉抑制。所謂抑制是指氟化鈉實(shí)驗(yàn)的抑制率大于50%。 抑制前陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分-抑制后陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分氟化鈉抑制率= 前抑制陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分,24,粒細(xì)胞系統(tǒng)：陰性或陽(yáng)性，但不能被氟化鈉抑制。 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：多屬陰性，少數(shù)弱陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。 其他細(xì)胞：巨核細(xì)胞和血小板呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；少數(shù)有核紅細(xì)胞呈弱陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。,25,臨床意義,主要用于 輔助鑒別急性白血病的類(lèi)型： 1.急性單核細(xì)胞白血病中的細(xì)胞大多數(shù)呈陽(yáng)性且較強(qiáng)，陽(yáng)性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。 2.急性粒細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞呈陰性或陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。3.急性早幼粒細(xì)胞白血病中的早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不被氟化鈉抑制。,26,4.急性淋巴細(xì)胞白血病中的原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞呈陰性至陽(yáng)性，不被氟化鈉抑制。5.急性粒單核細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞呈陰性至陽(yáng)性。反應(yīng)不被氟化鈉抑制；原始單核及幼稚單核細(xì)胞呈陽(yáng)性且較強(qiáng)，陽(yáng)性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。,27,應(yīng)用評(píng)價(jià),-NAE染色是急性白血病形態(tài)學(xué)分型時(shí)常規(guī)要做的細(xì)胞化學(xué)染色，對(duì)單核細(xì)胞白血病與粒細(xì)胞白血病鑒別診斷意義較大。一般來(lái)說(shuō)，-NAE在急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞中的陽(yáng)性較強(qiáng)，但M3或M2b也可呈強(qiáng)陽(yáng)性。,28,醋酸AS-D萘酚酯酶染色,naphthol AS-D acetate esterase NAS-DAE,29,原理,NAS-DAE存在于單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中，是一種中性非特異性酯酶。 血細(xì)胞內(nèi)的 NAS-DAE在pH中性的條件下水解基質(zhì)液中的醋酸AS-D萘酚，釋放出AS-D萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)成不溶性的有色沉淀定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。,30,正常細(xì)胞的染色反應(yīng),粒細(xì)胞系統(tǒng)中，原始粒細(xì)胞陰性或陽(yáng)性，早幼粒細(xì)胞至成熟粒細(xì)胞均陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不被氟化鈉抑制，其他血細(xì)胞染色基本同-NAE染色。,31,臨床意義,基本同-NAE，用以輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類(lèi)型。,32,應(yīng)用評(píng)價(jià),基本同-NAE,33,-丁酸萘酚酯酶染色,-naphthol butyrate esterase -NBE,34,實(shí)驗(yàn)原理,-NBE主要存在于單核細(xì)胞中，是一種非特異性酯酶。血細(xì)胞中的-NBE在PH堿性條件下，水解基質(zhì)內(nèi)的-丁酸萘酚并釋放出-萘酚，后者與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的位置。,35,正常細(xì)胞染色反應(yīng),1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：各階段粒細(xì)胞皆陰性。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽(yáng)性，幼稚單核細(xì)胞及單核細(xì)胞呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)被氟化鈉抑制。,36,3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：T淋巴細(xì)胞、非T非B淋巴細(xì)胞可呈陽(yáng)性，B淋巴細(xì)胞呈陰性。4.其他細(xì)胞：巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性，組織細(xì)胞也可呈陽(yáng)性，但不被氟化鈉抑制。,37,臨床意義,與-NAE染色的臨床意義相同： 1.急性單核細(xì)胞白血病中的細(xì)胞大多數(shù)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)能被氟化鈉抑制 2.急性粒細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞一般呈陰性 3.急性早幼粒細(xì)胞白血病中的早幼粒細(xì)胞常呈陰性,38,4.急性粒單核細(xì)胞白血?。?jiǎn)魏讼挡糠职籽〖?xì)胞陽(yáng)性，粒系部分白血病細(xì)胞陰性。 5.急性淋巴細(xì)胞白血病中的原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞一般呈陰性。,39,酯酶雙染色,在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色的方法稱(chēng)為酯酶雙染色。一般采用一種特異性酯酶染色加一種非特異性酯酶染色，故常用的有-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色、-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色等。,40,酸性磷酸酶染色,acid phosphatase ACP,41,實(shí)驗(yàn)原理,酸性磷酸酶（ACP）存在于細(xì)胞的溶酶體顆粒中，有些細(xì)胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。染色方法有偶氮偶聯(lián)法和Gomori硫化鉛法，前者常用。,42,偶氮偶聯(lián)法：血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）條件下水解基質(zhì)中的磷酸萘酚AS-BI，釋放出萘酚AS-BI，后者與基質(zhì)中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞之內(nèi)酶所在的部位。,43,抗酒石酸酸性磷酸酶染色：用相同的方法制備兩份基質(zhì)液，一份加入適量的L-酒石酸（左旋酒石酸），另一份不加酒石酸。取同一份骨髓標(biāo)本的兩張涂片，分別用這兩種不同的基質(zhì)液做酸性磷酸酶染色。如果血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶耐酒石酸，兩張均呈陽(yáng)性；如不耐酒石酸，不加L-酒石酸呈陽(yáng)性反應(yīng)，二甲L-酒石酸呈陰性反應(yīng)。,44,正常細(xì)胞染色反應(yīng),粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈陽(yáng)性。,45,臨床意義,1.多毛細(xì)胞白血病呈陽(yáng)性（長(zhǎng)強(qiáng)陽(yáng)性），陽(yáng)性反應(yīng)不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴細(xì)胞白血病的淋巴細(xì)胞和惡性淋巴瘤細(xì)胞ACP染色也可呈陽(yáng)性，但被L-酒石酸抑制。 2、戈謝細(xì)胞陽(yáng)性，尼曼匹克細(xì)胞陰性。 3、T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性，B淋巴細(xì)胞陰性。,46,應(yīng)用評(píng)價(jià),ACP染色在多毛細(xì)胞白血病中最具特征性，所以主要用于多毛細(xì)胞白血病的診斷，其次是在戈謝病和尼曼匹克病應(yīng)用。這些疾病在臨床上均很少見(jiàn)，故常因?yàn)闃?biāo)本過(guò)少而導(dǎo)致試劑過(guò)期。,47,組織化學(xué)染色小結(jié),48,在急性髓系白血病骨髓中，