食品科學與工程專業(yè)畢業(yè)論文43942.doc

摘要本科生畢業(yè)設計（論文）題目： 酶促棕櫚油醇解過程研究 酶促棕櫚油醇解過程研究摘要1,3-位置選擇性脂肪酶在 1,3-甘油二酯（dag）制備和油脂改性中發(fā)揮著重要作用。在脂肪酶催化油脂的醇解反應過程中，往往存在著?；D移反應。研究用特異性脂肪酶作為催化劑的反應過程中的酰基轉移變化規(guī)律對于生產目標產物及1,3-位置選擇性脂肪酶的應用都具有重要意義。本文以1,3-位專一性酶lipozyme rm im催化甲醇和棕櫚油的醇解體系為研究對象，研究底物比、反應溫度和反應用酶量對醇解體系過程中產生的?；D移的現(xiàn)象進行探究。以期了解1,3-位專一性脂肪酶催化甘三酯醇解酯交換反應過程中的?；D移，為1,3-位專一性脂肪酶在酶促醇解反應中的實際應用提供理論指導。棕櫚油與甲醇的醇解過程中?；D移的情況，包括1,2-甘二酯?；D移后形成1,3-甘二酯和2-單甘酯酰基轉移后形成1（3）-單甘酯。結果表明：當甲醇與棕櫚油摩爾比小于3:1時，?；D移量隨著反應時間的增加而增加；當反應溫度在50-60之間，酰基轉移量會隨著溫度和時間的增加而增加；當酶量從4%增加到8%，酰基轉移量隨著時間的增加而增加。關鍵詞：?；D移；醇解；脂肪酶abstract acyl migration has been researched by 1,3-positional specificity lipase（lipozyme rm im）catalyzed palm oil with methanol in solvent free system，including acyl migration of 1,2-diglyceride（1,2-dg）to 1,3-diglyceride（1,3-dg）and 2-monoglyceride（2-mg）to 1-monoglyceride （1（3）-mg）.discusses the effects of substrate molar ratio，reaction temperature and lipase loading on the acyl migration.the results show that methanol/oil molar ratio was not higher than 3:1, acyl migration increased with ration time. the temperature in the rang of 50 to 60 ,acyl migration increased greated along with increasing of temperature and ration time.when lipase loading increased from 4% to 8%, acyl migration increased greated along with increasing of temperature.key：lipozyme rm im；methanolysis；acyl migration目錄第1章 緒論11.1 脂肪酶的存在11.2脂肪酶的選擇性11.2.1脂質類型或底物的選擇性11.2.2區(qū)域或位置選擇性21.2.3脂肪酸和?；w的選擇性21.2.4立體選擇性21.2.5非選擇性21.3 脂肪酶在生物技術方面的應用21.3.1酯的水解21.3.2甘油解31.3.3酯化反應31.3.4醇解/酸解反應31.3.5酯交換反應31.4 不同因素對醇解產物的影響31.4.1底物摩爾比的影響31.4.2 溫度的影響41.4.3 酶量的影響41.5 本論文研究目的及研究內容41.5.1 研究目的41.5.2 研究內容5第2章 材料與方法52.1 實驗材料52.1.1 材料與試劑52.1.2儀器設備62.2 實驗方法62.2.1棕櫚油的脂肪酸組成分析62.2.2 醇解反應62.2.3高效液相分析反應產物72.2.4各因素對反應產物的影響72.2.4.1底物摩爾比對?；D移的影響72.2.4.2溫度對酰基轉移的影響72.2.4.3酶量對?；D移的影響7第3章 結果與討論83.1棕櫚油的脂肪酸組成83.2醇解反應的產物83.3 不同因素對酰基轉移的影響93.3.1底物對?；D移的影響93.3.2溫度對酰基轉移的影響103.3.3酶量度?；D移的影響11第4章 結論與展望134.1 主要結論134.2 問題與展望14參考文獻.14致謝17酶促棕櫚油醇解過程研究第1章 緒論.1.1 脂肪酶的存在脂肪酶(lipase e.c. 3.1.1.3)又稱三?；视王ニ饷?triacylglycerol esterhydrolases)，廣泛的存在于動植物和微生物中。脂肪酶的天然底物是甘油酯類，然而研究表明，脂肪酶除了能夠催化甘油酯類化合物的水解和合成之外，還可以用于催化酯交換反應、生物表面活性劑的合成、多肽合成、聚合物的合成和藥物的合成等，尤其是利用某些脂肪酶的立體專一性，催化旋光異構體的拆分1和手性藥物的合成2成為酶工程領域研究的新熱點。因而脂肪酶及其改性制劑在食品與營養(yǎng)、日用化學工業(yè)、油脂化學品工業(yè)、農業(yè)化學工業(yè)、造紙工業(yè)、洗滌和生物表面活性劑的合成、以及藥物合成等許多領域得到廣泛應用。1.2脂肪酶的選擇性與化學催化相比，酶催化反應的一個顯著優(yōu)勢就是其內在的選擇性。這種選擇性（selectivity）指的是酶催化一組底物中的某些成員發(fā)生反應的優(yōu)先性，客觀上表現(xiàn)為不同競爭性底物反應速度的差異3。也有人將此性質稱為專一性(specificity)，我們認為，選擇性應該是更為確切的表達，因為沒有絕對專一性的酶。脂肪酶的選擇性可分為五類：脂質類型或底物的選擇性、區(qū)域或位置選擇性、脂肪酸或?；w的選擇性、立體選擇性和非選擇性。1.2.1脂質類型或底物的選擇性該選擇性指的是酶催化某一類型的脂質（甘一酯 mg、甘二酯 dg、甘三酯tg、磷脂、脂肪酸甲酯等）的能力。雖然大多數(shù)脂肪酶都對催化甘三酯水解具有較高的活性，但是有些脂肪酶則對一些不完整甘油酯(mg、dg 等)具有選擇性。penicillium camembertii 脂肪酶催化 mg 和 dg 水解與合成的活性要高于 tg4。從老鼠的肝組織中提取的脂肪酶5對催化甘一酯的水解具有較高的活性，而對dg 和 tg 則幾乎沒有活性。1.2.2區(qū)域或位置選擇性該選擇性指的脂肪酶對催化甘油 1,3-位和 2-位酯化或水解的活性。豬胰脂酶、rhizomucor miehei 等可以催化甘三酯水解，生成 2-甘一酯；也可以催化甘油與脂肪酸的酯化合成 1,3-甘二酯。但是，由于熱力學平行的關系，反應過程中會伴隨有?；灰频陌l(fā)生，所以不論是水解反應還是酯化反應都會有其它異構體的生成。1.2.3脂肪酸和?；w的選擇性該選擇性指的是脂肪酶對脂肪酸的鏈長、不飽和程度、不飽和鍵的位置以及順反異構體的反應的傾向性。有的脂肪酶對短碳鏈脂肪酸有選擇性；而有的對中碳鏈或長碳鏈脂肪酸有選擇性6。1.2.4立體選擇性立體選擇性指的是對 tag 的 1-位或 3-位的區(qū)分能力，以及其它手性或潛手性化合物的選擇性酯化能力。rogalska 等7研究了 25 種動物和微生物來源的脂肪酶催化三辛酸甘油酯水解的反應，發(fā)現(xiàn)pseudomonas aeruginosa和pseudomonassp 是嚴格的 sn-1 脂肪酶；candida antarctica b 脂肪酶是嚴格的 sn-3 脂肪酶。但是這種選擇性也受到構成甘三酯碳鏈長度的影響，同種脂肪酶對 sn-1 或 sn-3 的選擇性會隨著脂肪酸碳鏈的長度而變化1.2.5非選擇性所謂的非選擇性脂肪酶，就是對甘油的三個位置反應速率近似相等，常用的candida rogusa 脂肪酶就是非選擇性脂肪酶8。1.3 脂肪酶在生物技術方面的應用1.3.1酯的水解比起油脂在酸堿催化及高溫高壓下的水解，酶催化油脂水解的條件要溫和得多。盡管如此，利用脂肪酶進行油脂的水解在工業(yè)上應用的實例還不多。脂肪酶目前在工業(yè)上的應用主要集中在洗滌劑領域。這一重大突破是在 1998 年novo/nordisk 推出其產品 lipolase tm之后發(fā)生的9。該產品是真菌 humicola lanuginosa 在宿主 aspergillus niger 體內表達生產的胞外酶。目前，世界上最大的兩家洗滌劑生產商寶潔（proctor and gamble）和聯(lián)合利華（unilever）使用的主要都是這種產品。1.3.2甘油解甘一酯是一種常用的乳化劑，廣泛應用于食品、化妝品和藥品的乳化。甘一酯可以通過油脂的甘油解反應得到，與化學方法相比，酶催化反應在富含多不飽和酸的油脂的甘油方面具有優(yōu)勢10-11。酶催化反應可以在較低的溫度下進行，可以有效地避免多不飽和脂肪酸的氧化和聚合。1.3.3酯化反應利用脂肪酶的專一性，可以通過甘油的直接酯化獲得純度很高的甘一酯、1，3-甘二酯等產品12。schneider 等13首先將甘油吸附到硅膠上，然后再與脂肪酸反應，獲得了純度很高的甘一酯和甘二酯產品。1.3.4醇解/酸解反應通過油脂的糖醇醇解反應可以合成糖酯等生物表面活性劑。由于化學方法更廉價，所以在蔗糖酯的生產方面，酶法并不占優(yōu)勢。但是，借助于酶催化反應可以很容易的將一些具有特殊功能而又對熱敏感的脂肪酸（如 epa、dha、cla等）引入甘三酯，生產所謂的功能性油脂14。1.3.5酯交換反應結構脂質的合成是目前一個很熱的研究領域，通過專一性脂肪酶可生產諸如類可可脂、擬人乳脂等高附加值的產品。比如利用棕櫚油的中間分提物生產類可可脂已經實現(xiàn)了工業(yè)化。rhizomucor miehei lipase 是結構脂合成中使用最廣泛的一種脂肪酶15-16。本實驗采用由諾維信中國生物技術有限公司提供的具有1,3-特異性的固定化脂肪酶lipozyme rm im作為催化劑，催化棕櫚油與甲醇的酯交換。1.4 不同因素對醇解產物的影響1.4.1底物摩爾比的影響過量的醇可以增加酯交換反應產率，但也會使酶活性降低甚至失活，尤其在非均相反應體系中較顯著。加入有機溶劑能增加醇的溶解性，抑制酶失活從而提高生物柴油的產率。例如，在正己烷中，甲醇/葵花籽油的摩爾比為3:1，固定化熒光假單胞菌脂肪酶催化反應24h小時后，甲酯轉化率達72%；在同樣條件下，來源于根霉菌、疏綿狀嗜熱絲孢菌和洋蔥假單胞菌三種固定化酶催化酯交換反應48h后，甲酯轉化率近80%。過量的醇是提高酯交換產率的先決條件,但反應過程中須保持低濃度的醇。因此，soumanou和bornscheuer在根霉菌脂肪酶催化制備生物柴油的反應中，將醇分為三部分（每部分醇/油摩爾比為1:1）分步加入到反應體系中，24h后產率分別為84%。通常酶法催化制備生物柴油過程中，在有機溶劑體系中需要稍微過量的醇（大于醇油化學計量摩爾比率即45:1），可達到較高的酯產率；無溶劑體系中醇應分步加入，而第一步酯交換反應時要考慮醇在油中的溶解性及溫度的影響。1.4.2 溫度的影響不同的脂肪酶在無溶劑體系中催化酯交換反應的最佳溫度范圍基本相同(30-55)。iso等在研究熒光假單胞菌脂肪酶催化合成油酸乙酯的反應中發(fā)現(xiàn)：在30-55之間，酯交換反應速率隨著溫度的增加而增加。xu等在固定化疏綿狀嗜熱絲孢菌脂肪酶催化制備生物柴油的實驗中（醇油摩爾比1：1）發(fā)現(xiàn)：當溫度從30逐漸升到40時，反應速率逐漸增大；當升至50時，反應速率不再增加。但醇油摩爾比增大，升高溫度將會加快酶的失活。du等在固定化疏綿狀嗜熱絲孢菌脂肪酶催化反應發(fā)現(xiàn)溫度、酯交換反應速率和脂肪酶穩(wěn)定性之間的影響關系與xu等實驗結果相同。溫度從30升高到40，加快了反應速度，但降低了脂肪酶的穩(wěn)定性。因此，酶法催化酯交換反應的最佳溫度主要取決于生物催化劑穩(wěn)定性和酯交換反應速率之間的相互影響，也受到醇油摩爾比、有機溶劑和酶熱穩(wěn)定的影響。1.4.3 酶量的影響 酶量的不同直接影響著酷交換反應速度和酯交換率，一般來說，隨著酶量的增大，酶與底物接觸幾率增大，酯交換率或醇轉化率增大。對于不同的原料，最佳脂肪酶的用量不一，shimada等17采用4%酶量催化植物油，而劉德華等18采用60%酶量催化豆油。1.5 本論文研究目的及研究內容1.5.1 研究目的1,3-位專一性脂肪酶廣泛用于催化油脂改性，然而在利用1,3-位專一性脂肪酶催化油脂改性時會存在副反應酰基轉移反應19，?；D移對酯交換反應的產品組成有很大的影響，若酰基轉移得不到有效的控制，則很難得到預期的產品。lipozyme rm im是一種常用的1,3-位專一性脂肪酶，在lipozyme rm im催化甘油三酯（tag）醇解反應過程中，理論上存在1,2-dag、2-mag、tag、脂肪酸甲酯和甘油,但實際上產物中還有1,3-dag和1（3）-dag，證實了酰基轉移的存在20 。研究發(fā)現(xiàn)影響?；D移的因素較多，其中底物比、反應溫度和反應用酶量的影響較大21。醇解反應是酯交換的一種，甘油三酯和醇（比如甲醇）在脂肪酶的作用下發(fā)生醇解反應生成dag、mag及脂肪酸甲酯、甘油等副產物22 。本文以lipozyme rm im催化棕櫚油與甲醇酯交換為反應模型，研究底物比、反應溫度和反應用酶量對?；灰频挠绊?，以期了解1,3-位專一性脂肪酶催化甘三酯醇解酯交換反應過程中的?；D移，為1,3-位專一性脂肪酶在酶促醇解反應中的實際應用提供理論指導。1.5.2 研究內容在無溶劑體系下1,3-位專一性酶lipozyme rm im催化棕櫚油與甲醇的醇解過程中?；D移的情況（1） 在溫度和酶量一定的條件下，底物摩爾比對?；D移的影響。（2） 在底物摩爾比和酶量一定的條件下，溫度對?；D移的影響。（3） 在底物摩爾比和溫度一定的條件下，酶量對?；D移的影響。第2章 材料與方法2.1 實驗材料2.1.1 材料與試劑5 棕櫚油 新實力食品（南京）有限公司提供 固定化脂肪酶lipozyme rm im, 由諾維信中國生物技術有限公司提供甲醇 分析純，國藥集團化學試劑有限公司正己烷、異丙醇、乙酸 色譜純2.1.2儀器設備waters 1525高效液相色譜系統(tǒng)，檢測器 蒸發(fā)光散射檢測器色譜柱 waters spherisorb silica色譜柱（2.0mm250mm）離心機、集熱式恒溫磁力攪拌水浴鍋等gc-14b氣相色譜儀 日本島津公司2.2 實驗方法2.2.1棕櫚油的脂肪酸組成分析脂肪酸甲酯的制備：采用bf3-ch3oh快速酯化法。色譜分析：peg-20000毛細管柱（30 m0.25 mm0.25 m），采用程序升溫：初溫100 ，保持3 min，以每分鐘20180 并保持4 min，再以每分鐘12235 保持15 min。載氣n2(99.999 %)，燃燒氣h2(99.999 %)和空氣；進樣口溫度250 ，檢測器250 ，h2壓力60 kpa，空氣壓力50 kpa，柱前壓220 kpa；進樣量1.0 l，分流比1：50。利用峰面積歸一法確定各種脂肪酸含量。2.2.2 醇解反應將一定量的棕櫚油與甲醇共同置于圓底燒瓶中，加入一定量的固定化脂肪酶，于一定溫度下反應一定時間，取樣，hplc分析產物中的含量。由于選用的lipozyme rm im是1,3-位專一性酶，故以醇解過程的中間產物1,3-dag和1（3）-mag的含量評價反應的酰基轉移情況。由高效液相色譜儀進行產物含量的測定。2.2.3高效液相分析反應產物一定量的反應物用正己烷溶解后，經10000 r /min離心10分鐘后用于hplc分析。色譜條件：檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器；色譜柱：waters spherisorb silica色譜柱（2.0mm250mm）；流動相a：正己烷-異丙醇（體積比99:1）；流動相b：正己烷-異丙醇-乙酸（體積比1:1:0.01）；柱溫：35；進樣量：5l；漂移管溫度：75；流速：0.5ml/min。梯度洗脫條件見表1。出峰順序為tag 、1，3-dag、1，2（2,3）-dag、1（3)-amg、 2-mag。 面積歸一化法定量。表1 梯度洗脫條件時間/mina相/%b相/%010001080201470301510002010002.2.4各因素對反應產物的影響2.2.4.1底物摩爾比對?；D移的影響選用底物醇油摩爾比為1:1、3:1及6：1作為底物研究的變量，反應溫度55，加酶量6%（油的質量），在一定的磁力攪拌條件下不同時間取樣。2.2.4.2溫度對?；D移的影響由于原料是50 -54的棕櫚油以及甲醇的沸點是64.5，故選用50、55、60作為溫度研究的變量，醇油摩爾比為1:1，加入酶量6%（油的質量），在一定的磁力攪拌條件下不同時間取樣。2.2.4.3酶量對?；D移的影響甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為1:1，反應溫度為55，在一定磁力攪拌條件下，加入的固定化脂肪酶的量占棕櫚油質量的4%、6%、8%。在不同的時間取樣進行分析。第3章 結果與討論3.1棕櫚油的脂肪酸組成棕櫚油的脂肪酸組成分析如表6表6 棕櫚油的脂肪酸組成樣品肉豆蔻酸棕櫚酸(軟脂酸)硬脂酸油酸亞油酸平行11.25753.4794.43932.7036.901平行21.30053.9714.26032.1116.944平均1.27853.7254.3532.416.9223.2醇解反應的產物醇解反應是酯交換的一種，甘油三酯和短鏈醇（比如甲醇）在脂肪酶的作用下發(fā)生醇解反應生成1,2-dag和2-mag，1,2-dag和2-mag經?；D移生成1,3-dag和1-mag,反應過程中生成的副產物有脂肪酸的短鏈酯和甘油23-24，如圖1。鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當富婆那聲音速度v n r e o鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 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不同因素對?；D移的影響3.3.1底物對酰基轉移的影響在反應溫度55，加酶量6%條件下，考察甲醇與棕櫚油的摩爾比對產物中?；D移組分含量的影響，結果見圖1。由于1mol甘油三酯在理論上需要3mol甲醇來參加反應，在此理論比值（即甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為3:1）下，?；D移較少；當甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為1:1時，即小于理論比值3:1時，1,3-dag和1（3）-mag含量顯著增加；而當甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為6:1時，即大于理論比值3:1時，1,3-dag和1（3）-mag含量只有少量的降低，即?；D移量沒有發(fā)生很大的改變。這可能是甲醇在棕櫚油中的溶解性差，當甲醇為3mol當量，底物與酶的接觸已達到飽和，且甲醇等短鏈醇對酶等蛋白質有變性作用，過量的甲醇對脂肪酶的催化反應有很強的抑制作用25-26，因此即使增加甲醇的量也不會使?；D移增加。由此可見，在利用該酶進行酶促醇解反應時，欲很好的利用其1,3位專一性，則以較高的醇油比為佳。圖1 底物摩爾比對醇解反應產物中?；D移組分含量的影響3.3.2溫度對酰基轉移的影響基轉移。在甲醇與棕櫚油摩爾比為1:1，加入酶量6%（油的質量），50、55、60作為溫度研究的變量條件下，考察了反應溫度對酰基轉移組分含量的影響，結果見2。由圖2可知，酰基轉移量1,3-dag與1（3）-mag含量隨著溫度的升高（從50上升至60）而增加，這可能一方面是因為本實驗采用熔點較高的棕櫚油，反應溫度升高，體系黏度低，傳質速率就快，進而反應速度快，使得1,3-dag與1（3）-mag含量隨著溫度的升高而增加；另一方面反應溫度升高會使甘三酯的水解速度加快，反應體系中甘二酯的濃度增大，有利于1,2(2，3)-dag向1,3-dag及2-mag向1（3）-mag轉化，即產生更多的?；D移。同時發(fā)現(xiàn)在反應前4小時，?；D移量增加的較快，尤其在反應前2小時，1,3-dag比1（3）-mag的增加量更多，這可能是因為1,3-dag有一個酰基受體，而1（3）-mag有兩個?；荏w，使得?；荏w進攻機會更多27-28,而引起在反應前4小時1（3）-mag 比1,3-dag的增加量更大。但隨著反應時間的增加，?；D移量則緩慢的增加，當反應至6小時后，1,3-dag和1（3）-mag的含量幾乎沒有發(fā)生改變。由此可見，利用該酶(lipozyme rm im的最適溫度范圍在50-65)進行酶促醇解反應時,在酶的最適范圍內溫度高利于甘二酯和單甘脂的酰012345670246810時間(h)5055601-mag含量(%)圖2溫度比對醇解反應產物中?；D移組分含量的影響3.3.3酶量度?；D移的影響在甲醇與棕櫚油摩爾比為1:1，反應溫度為55，4%、6%、8%（油的質量）作為酶量研究的變量條件下，考察了加酶量對產物中酰基轉移組分的影響，結果見圖3。由圖3可知，酶量為4%時，1,3-dag與1（3）-mag含量為18.7%和5.2%；酶量為6%時，1,3-dag與1（3）-mag含量能達到30%和8.5%；酶量為8%時，1,3-dag與1（3）-mag含量達到31%和9.1%，即酶量從4%增加到8%，1,3-dag與1（3）-mag含量是逐漸增加，尤其酶量大于6%，1,3-dag與1（3）-mag含量增加的更多。同時發(fā)現(xiàn)隨著反應時間的增加，1,3-dag與1（3）-mag含量增加；在反應前2小時，1,3-dag與1（3）-mag含量增加迅速，當反應至6小時后，1,3-dag與1（3）-mag含量增加的緩慢。即酰基轉移量隨著酶量和時間的增加而增加，反應前期?；D移量增加顯著，反應后期，?；D移量增加緩慢。這可能是酶量的增加使甘三酯的水解程度加劇，初期水解會產生更多的甘一酯和甘二酯29-30，且1,2（2,3）-dag與2-mag沒有1,3-dag和2-mag穩(wěn)定15，會使1,2（2,3）-dag和2-mag大量的轉化成1,3-dag和1（3）-mag，因此在醇解反應前期，隨著酶量的增加?；D移量增加的更為明顯。由此可見，在利用該酶進行酶促醇解反應時，為了很好的利用其1,3位專一性，應以較高的酶量為宜。圖3酶量比對醇解反應產物中?；D移組分含量的影響第4章 結論與展望4.1 主要結論本文在1.3-特異性脂肪酶催化棕櫚油與甲醇的醇解體系下，底物摩爾比、反應溫度和加酶量對醇解過程中發(fā)生的酰基轉移現(xiàn)象的影響進行了研究，得出以下結論：（1）在底物摩爾比為1:1，反應溫度為55、加酶量為6%的反應條件下進行了研究，發(fā)現(xiàn)產物1,3-dag和1-mag含量隨著反應時間的增加而增加，即酰基轉移量隨著時間的增加而逐漸增加；1,2-dag，2-mag和tag則隨著時間的增加而呈下降趨勢。（2）在溫度為55，加酶量為6%，醇油底物摩爾比分別為1:1、3:1和6:1的反應條件下進行了研究，發(fā)現(xiàn)當甲醇與棕櫚油摩爾比小于3:1時，?；D移量隨著反應時間的增加而增加；（3）在底物摩爾比為1:1，加酶量為6%，反應溫度分別為50、55和60的反應條件下進行了研究，發(fā)現(xiàn)酰基轉移量會隨著溫度和時間的增加而增加；（4）在底物摩爾比為1:1，溫度為55，加酶量分別為4%、6%和8%的反應條件下進行了研究，發(fā)現(xiàn)當酶量從4%增加到8%，?；D移量隨著時間的增加而增加。4.2 問題與展望（1）本文用1,3-特異性脂肪酶催化醇解體系，發(fā)現(xiàn)底物摩爾比、溫度和酶量對醇解過程中出現(xiàn)的?；D移（副產物）是有影響的，如何抑制酰基轉移（副產物）從而提高目標產物的產量，有待進一步更深入的探究。參考文獻.1 wei li, ren-wang li, qiang li,etal. acyl migration and kinetics study of 1(3)-positional specic lipase of rhizopus oryzae-catalyzed methanolysis of triglyceride for biodiesel production j. process biochemistry 2010,45:18881893.2 roxana rosu,mamoru yasui,yugo lwas