《實驗三要素》PPT課件.ppt

醫(yī)學科研方法學,醫(yī)學科研的基本要素,中南大學基礎醫(yī)學院生理學系,羅自強,內(nèi)皮素-1對肺型細胞表面活性物質(zhì)合成的調(diào)控,被試因素 實驗對象 實驗效應,一、被試因素,1. 因素（factor）與水平 （level） * 雌二醇對肺成纖維細胞增殖的調(diào)控,* 不同季節(jié)環(huán)磷酰胺對小鼠精子細胞致畸效應的研究,* 性別與年齡和心肌梗塞病死率的研究,* 心理應激與高血壓發(fā)生的關(guān)系,* CC16 gene polymorphism influences the degree of airway responsiveness in asthmatic children,外源性的： 人為給予的物理、化學、生物因素 外界客觀存在的：氣候、季節(jié)等 內(nèi)源性的的自身特征： 性別、年齡、心理、遺傳因素,因素,實驗的目的是闡明被試因素的作用,被試因素（T）+非被試因素（N） t + n,實驗組： T + N t + n 對照組： N n,必須明確被試因素；各組間非被試因素必須一致,效應 T t,水平的選定 水平：實驗因素的不同的量或狀態(tài),被試因素的效應與水平有依賴關(guān)系 藥物如果沒有量-效關(guān)系，為非特異作用 水平的選擇與目的有關(guān),藥效篩選：最大安全量（通常LD50的1/10） 影響藥效的因素：半數(shù)有效濃度（EC50） 半數(shù)有效劑量（ED50） 毒性實驗：半數(shù)致死量（LD50） 最大致死量（LD100）,單因素單水平： 簡單易行，效率不高 單因素多水平：比較不同劑量 多因素單水平：比較不同因素（藥物、療法） 多因素多水平：探索聯(lián)合用藥方案、最佳反應條件,因素與水平的組合,2.因素的施加,確保因素的施加 被試因素標準化：保證被試因素在整個實驗過程中始終保持一致 劑量、劑型、給藥時間、用藥時間、給藥途徑、藥品批號,不同時間給予曲馬多所引起的死亡率不同,藥學學報 2001 08,晝夜節(jié)律,曲馬多鎮(zhèn)痛作用的晝夜變化,藥學學報 2001 08,皖南醫(yī)學院學報 2002 01,小鼠痛閾的晝夜變化,季節(jié)節(jié)律,苯丙胺 LD50 1月小于7月,實驗組和對照組平行進行,* 吸收速度 靜脈注射吸入肌肉=腹腔皮下口服經(jīng)肛貼皮,* 藥物的生物轉(zhuǎn)化 口服 先經(jīng)肝轉(zhuǎn)化 皮下、肌肉、靜脈 先經(jīng)肺轉(zhuǎn)化,正確選擇劑量,口服 100% 灌胃 100% 灌腸 100-200% 皮下 30-50% 肌肉 25-30% 腹腔 25-30% 靜脈 20-25%,二、受試對象,實驗對象的確定取決于試驗目的 1.受試對象的選擇 （1）敏感、穩(wěn)定 動脈粥樣硬化 兔 過敏反應 豚鼠 心肌缺血 狗、兔、大鼠、豬 降壓治療 高血壓II期 （2）可行性 （3）病人診斷明確（客觀指標）,實驗動物 種屬、品系、窩別、性別、齡、體重、營養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件,實驗動物分為四級： 一級，普通動物（conventinal animal）：教學和預試 二級，清潔動物（clean animal）：大多數(shù)的科研 三級，無特定病原體動物（specific pathogen free animal）：為國際標準級，所有科研 四級，無菌動物（germfree animal）：特殊課題,第四章 實驗動物的應用 第十九條 應用實驗動物應當根據(jù)不同的實驗目的，選用相應的合格實驗動物。申報科研課題和鑒定科研成果，應當把應用合格實驗動物作為基本條件。應用不合格實驗動物取得的檢定或者安全評價結(jié)果無效，所生產(chǎn)的制品不得使用。 第二十條 供應用的實驗動物應當具備下列完整的資料： （一）品種、品系及亞系的確切名稱； （二）遺傳背景或其來源； （三）微生物檢測狀況； （四）合格證書； （五）飼育單位負責人簽名。,實驗動物管理條例（國家科委，1988）,人體為研究對象 種族、性別、年齡、體重、職業(yè)、工種、工齡、精神狀態(tài)、居住條件、生活習慣、嗜好、經(jīng)濟及社會因素,病人為研究對象 病種、病程、病期、病型、既往史、治療和護理條件,人體實驗或用人體組織或器官作材料, 應被有關(guān)研究單位的專門委員會批準，同時符合1975年出版、1983年修訂的赫爾辛基宣言和有關(guān)國際倫理標準。被試者應知情并同意。醫(yī)院和被試者的名稱可以省略。動物實驗也應符合國家實驗動物管理條例和有關(guān)動物保護與使用的法律和法規(guī)。 -生理學報投稿須知,所有醫(yī)學研究的基本原則 -摘自赫爾辛基宣言 * 要保護人體對象的生命、健康、隱私和尊嚴。 * 必須遵守公認的科學原則，十分熟悉科學文獻、以及適當?shù)膭游飳嶒灥幕A上 。 * 實驗方案應上報專門的道德審核委員會批準。 * 只能由科學上合格的人員來承擔，并在醫(yī)務人員的監(jiān)督下進行。 * 必須先對預計的風險和壓力或給實驗對象的好處進行仔細評估。 * 醫(yī)學研究只有當研究結(jié)果有可能造益于參與研究的人們時才是合理的。 * 研究對象必須自愿，并了解研究項目情況。,下列情況一般不作為臨床研究對象,* 存在影響結(jié)果的并發(fā)癥 * 危重狀態(tài) * 多種療法無效 * 不配合者,2.選擇適當?shù)难芯克?整體實驗 （in vivo） ： 綜合性實驗 離體實驗 （in vitro）： 分析性實驗 器官水平 細胞水平 分子水平 半體內(nèi)實驗（ex vivo）： 分析性實驗,3.受試對象的純化 所用受試對象力求一致，盡力減少個體差異，降低非被試因素對效應的影響,（1） 表現(xiàn)典型的確診病例 （2） 病情輕重一致，先從病情中等的病例開始 （3） 使用統(tǒng)一、公認的診斷和分型分級標準,Case 4 某人為了研究“補充維生素A對學齡前兒童血紅蛋白的影響”，選擇1999年秋季入托的三歲兒童進行體檢，排除呼吸道、消化道等系統(tǒng)疾病，測定174名兒童的血清VA、血紅蛋白、血清鐵濃度，將血紅蛋白110g/L定為貧血。再將貧血組兒童隨機分為兩組，一組為治療組33例，每日投VA2000IU，另一組為對照組25例。三月后，兩組兒童分別查血清VA、血紅蛋白、血清鐵濃度。結(jié)果：治療組三月后血清VA、血紅蛋白、血清鐵濃度明顯升高P0.01，對照組治療后無明顯變化P0.05。,4.受試對象的依從性 按預定計劃接受被試因素的合作程度,* 增加患者的信任感 * 實驗時間不要太長 * 盲法（單盲、雙盲、三盲）,急性動物實驗必須在藥物麻醉下進行, 嚴禁單純用肌肉松弛劑進行實驗動物手術(shù)。 生理學報 投稿須知 2001,5.麻醉,三、試驗效應,客觀指標 主觀指標 定量指標 定性指標 率 定量和定性指標的轉(zhuǎn)換 特異性指標 非特異性指標,比較生物效應 可以用引起同一水平效應所需要的量 半數(shù)致死量 LD50 半數(shù)有效量 ED50 半數(shù)有效濃度 EC50 閾強度,比較生物效應的時間 潛伏期 半衰期 效應持續(xù)期：從起效到作用消失所需時間,三、試驗效應,（一）指標的要求 扣題-關(guān)聯(lián)性 TXA2 TXB2 11脫氫TXB2 PGI2 6酮PGFI 去二甲6酮PGFI 自由基 膜磷脂 MDA 血小板AA代謝,自由基 膜磷脂,異構(gòu)前列腺素（isoprostane),結(jié)果 兩名醫(yī)生讀 名醫(yī)生在兩次 同一批片子 不同時間讀片,結(jié)果一致 6245 701 結(jié)果不一致 2686（30%） 192（21%）,X線胸片讀片結(jié)果,2.客觀化,三、試驗效應,（一）指標的要求 1.扣題-關(guān)聯(lián)性 指標與研究主題要有本質(zhì)聯(lián)系 2.客觀化 * 統(tǒng)一標準 * 儀器相對定量 * 多人盲法，加權(quán)平均,3.靈敏度,能正確反映效應變化的最小數(shù)量或水平,4.指標的可用性,敏感度：是否可檢出發(fā)生的變化，真陽性率 特異度：檢出變化的專一性，真陰性率,真陽性率=a/（a+c）,真陰性率=d/（b+d）,漏診率=1-真陽性率,誤診率=1-真陰性率,5.指標的精確性,準確度：與真實值的接近程度，測定的正確性 主要取決于系統(tǒng)誤差 精密度：各次測定值的集中程度，測定的可重復性 主要取決于隨機誤差,（二）注意事項,1.標本的采集于儲存標準化 采樣時間、部位、方法、保持、運輸 2.測定方法標準化 方法、儀器、試劑、