GB 5413.5-2010發(fā)布稿 嬰幼兒食品和乳品中乳糖、蔗糖的測(cè)定 發(fā)布稿.pdf

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB 5413.52010 中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中乳糖、蔗糖的測(cè)定 National food safety standard Determination of lactose and sucrose in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.52010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 5413.5-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 乳糖、蔗糖的測(cè)定 。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 5413.5-1997相比，主要變化如下： 增加了蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB/T 5413.5-1997。 GB 5413.52010 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中乳糖、蔗糖的測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中乳糖、蔗糖的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中乳糖、蔗糖的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本 適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 第一法 高效液相色譜法 3 原理 試樣中的乳糖、蔗糖經(jīng)提取后，利用高效液相色譜柱分離，用示差折光檢測(cè)器或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 檢測(cè)，外標(biāo)法進(jìn)行定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 4.1 乙腈。 4.2 乙腈：色譜純。 4.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液 4.3.1 乳糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液 （20 mg/mL） ： 稱取在94 2 烘箱中干燥2 h的乳糖標(biāo)樣2 g （精確至0.1 mg） ， 溶于水中，用水稀釋至 100 mL 容量瓶中。放置 4 冰箱中。 4.3.2 乳糖標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取乳糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.3.1）0 mL，1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL 于 10 mL 容量瓶中， 用乙腈 （4.1） 定容至刻度。 配成乳糖標(biāo)準(zhǔn)系列工作液， 濃度分別為 0 mg/mL， 2 mg/mL， 4 mg/mL，6 mg/mL，8 mg/mL，10 mg/mL。 4.3.3 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 （10 mg/mL） ： 稱取在 105 2 烘箱中干燥 2 h 的蔗糖標(biāo)樣 1 g （精確到 0.1 mg） ， 溶于水中，用水稀釋至 100mL 容量瓶中。放置 4 冰箱中。 4.3.4 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.3.3）0 mL，1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用乙腈(4.1)定容至刻度。配成蔗糖標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，濃度分別為 0 mg/mL，1 mg/mL， 2 mg/mL，3 mg/mL，4 mg/mL，5 mg/mL。 5 儀器和設(shè)備 GB 5413.52010 2 5.1 天平：感量為 0.1 mg。 5.2 高效液相色譜儀，帶示差折光檢測(cè)器或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。 5.3 超聲波振蕩器。 6 分析步驟 6.1 試樣處理 稱取固態(tài)試樣 1 g 或液態(tài)試樣稱取 2.5 g（精確到 0.1 mg）于 50 mL 容量瓶中，加 15 mL 50 60 水溶解，于超聲波振蕩器中振蕩 10 min，用乙腈（4.1）定容至刻度，靜置數(shù)分鐘，過(guò)濾。取 5.0 mL 過(guò)濾液于 10 mL 容量瓶中，用乙腈（4.1）定容，通過(guò) 0.45 m 濾膜過(guò)濾，濾液供色譜分析?？筛鶕?jù)具 體試樣進(jìn)行稀釋。 6.2 測(cè)定 6.2.1 參考色譜條件 色譜柱：氨基柱 4.6 mm 250 mm，5 m，或具有同等性能的色譜柱； 流動(dòng)相：乙腈(4.2)水=70+30； 流速：1 mL/min； 柱溫：35 ； 進(jìn)樣量：10 L； 示差折光檢測(cè)器條件：溫度 33 37 ； 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器條件：飄移管溫度：85 90 ； 氣流量：2.5 L/min； 撞擊器：關(guān)。 6.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中， 測(cè)定相應(yīng)的峰面積或峰高， 以峰面積或峰高為縱坐 標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 6.2.3 試樣溶液的測(cè)定 將試樣溶液（6.1）注入高效液相色譜儀中，測(cè)定峰面積或峰高，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得試樣溶液中糖 的濃度。 7 分析結(jié)果的表述 試樣中糖的含量按式（1）計(jì)算： 100 1000 c Vn X m = （1） 式中： X試樣中糖的含量，單位為克每百克（g/100 g） ； c樣液中糖的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）； V試樣定容體積，單位為毫升（mL）； n樣液稀釋倍數(shù)； m試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 GB 5413.52010 3 8 精密度 在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的 5 %。 第二法 萊因埃農(nóng)氏法 9 原理 乳糖： 試樣經(jīng)除去蛋白質(zhì)后， 在加熱條件下， 以次甲基藍(lán)為指示劑， 直接滴定已標(biāo)定過(guò)的費(fèi)林氏液， 根據(jù)樣液消耗的體積，計(jì)算乳糖含量。 蔗糖：試樣經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，其中蔗糖經(jīng)鹽酸水解為還原糖，再按還原糖測(cè)定。水解前后的差值乘 以相應(yīng)的系數(shù)即為蔗糖含量。 10 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級(jí)水。 10.1 乙酸鉛。 10.2 草酸鉀。 10.3 磷酸氫二鈉。 10.4 鹽酸。 10.5 硫酸銅。 10.6 濃硫酸。 10.7 酒石酸鉀鈉。 10.8 氫氧化鈉。 10.9 酚酞。 10.10 乙醇。 10.11 次甲基藍(lán)。 10.12 乙酸鉛溶液（200 g/L）：稱取 200 g 乙酸鉛，溶于水并稀釋至 1000 mL。 10.13 草酸鉀磷酸氫二鈉溶液：稱取草酸鉀 30 g，磷酸氫二鈉 70 g，溶于水并稀釋至 1000 mL。 10.14 鹽酸（1+1）：1 體積鹽酸與 1 體積的水混合。 10.15 氫氧化鈉溶液（300 g/L）：稱取 300 g 氫氧化鈉，溶于水并稀釋至 1000 mL。 10.16 費(fèi)林氏液（甲液和乙液） 10.16.1 甲液：稱取 34.639 g 硫酸銅，溶于水中，加入 0.5 mL 濃硫酸，加水至 500 mL。 10.16.2 乙液： 稱取 173 g 酒石酸鉀鈉及 50 g 氫氧化鈉溶解于水中， 稀釋至 500 mL， 靜置兩天后過(guò)濾。 10.17 酚酞溶液（5 g/L）：稱取 0.5 g 酚酞溶于 100 mL 體積分?jǐn)?shù)為 95 %的乙醇中。 GB 5413.52010 4 10.18 次甲基藍(lán)溶液（10 g/L）：稱取 1 g 次甲基藍(lán)于 100 mL 水中。 11 儀器和設(shè)備 11.1 天平：感量為 0.1 mg。 11.2 水浴鍋：溫度可控制在 75 2 。 12 分析步驟 12.1 費(fèi)林氏液的標(biāo)定 12.1.1 用乳糖標(biāo)定 12.1.1.1 稱取預(yù)先在 94 2 烘箱中干燥 2 h 的乳糖標(biāo)樣約 0.75 g（精確到 0.1 mg），用水溶解并 定容至 250 mL。將此乳糖溶液注入一個(gè) 50 mL 滴定管中，待滴定。 12.1.1.2 預(yù)滴定：吸取 10 mL 費(fèi)林氏液(甲、乙液各 5 mL)于 250 mL 三角燒瓶中。加入 20 mL 蒸餾 水， 放入幾粒玻璃珠， 從滴定管中放出 15 mL 樣液于三角瓶中， 置于電爐上加熱， 使其在 2 min 內(nèi)沸騰， 保持沸騰狀態(tài) 15 s，加入 3 滴次甲基藍(lán)溶液（10.18），繼續(xù)滴入至溶液藍(lán)色完全褪盡為止，讀取所用 樣液的體積。 12.1.1.3 精確滴定： 另取 10 mL 費(fèi)林氏液 （ 甲、 乙液各 5 mL） 于 250 mL 三角燒瓶中， 再加入 20 mL 蒸餾水，放入幾粒玻璃珠，加入比預(yù)滴定量少 0.5 mL1.0 mL 的樣液，置于電爐上，使其在 2 min 內(nèi) 沸騰，維持沸騰狀態(tài) 2 min，加入 3 滴次甲基藍(lán)溶液（10.18），以每?jī)擅胍坏蔚乃俣刃煨斓稳?，溶液藍(lán) 色完全褪盡即為終點(diǎn)，記錄消耗的體積。 12.1.1.4 按式（2）、（3）計(jì)算費(fèi)林氏液的乳糖校正值（f1）： 11 111 1000 4 250 Vm AVm =（2） 11 1 1 4 Vm f AL =（3） 式中： A1實(shí)測(cè)乳糖數(shù)，單位為毫克（mg） ； V1滴定時(shí)消耗乳糖溶液的體積，單位為毫升（mL） ； m1稱取乳糖的質(zhì)量，單位為克（g） ； f1費(fèi)林氏液的乳糖校正值； AL1由乳糖液滴定毫升數(shù)查表 1 所得的乳糖數(shù)，單位為毫克（mg） 。 表 1 乳糖及轉(zhuǎn)化糖因數(shù)表（10 mL 費(fèi)林氏液） 滴定量（mL） 乳糖（mg） 轉(zhuǎn)化糖（mg）滴定量（mL） 乳糖（mg） 轉(zhuǎn)化糖（mg） 15 68.3 50.5 33 67.8 51.7 16 68.2 50.6 34 67.9 51.7 17 68.2 50.7 35 67.9 51.8 18 68.1 50.8 36 67.9 51.8 19 68.1 50.8 37 67.9 51.9 20 68.0 50.9 38 67.9 51.9 21 68.0 51.0 39 67.9 52.0 22 68.0 51.0 40 67.9 52.0 GB 5413.52010 5 表 1（續(xù)） 滴定量（mL） 乳糖（mg） 轉(zhuǎn)化糖（mg）滴定量（mL） 乳糖（mg） 轉(zhuǎn)化糖（mg） 23 67.9 51.1 41 68.0 52.1 24 67.9 51.2 42 68.0 52.1 25 67.9 51.2 43 68.0 52.2 26 67.9 51.3 44 68.0 52.2 27 67.8 51.4 45 68.1 52.3 28 67.8 51.4 46 68.1 52.3 29 67.8 51.5 47 68.2 52.4 30 67.8 51.5 48 68.2 52.4 31 67.8 51.6 49 68.2 52.5 32 67.8 51.6 50 68.3 52.5 注：“因數(shù)”系指與滴定量相對(duì)應(yīng)的數(shù)目，可自表 1 中查得。若蔗糖含量與乳糖含量的比超過(guò) 3: 1 時(shí)，則在滴定量中 加表 2 中的校正值后計(jì)算。 12.1.2 用蔗糖標(biāo)定 12.1.2.1 稱取在 105 2 烘箱中干燥 2 h 的蔗糖約 0.2 g（精確到 0.1 mg），用 50 mL 水溶解并洗 入 100 mL 容量瓶中，加水 10 mL，再加入 10 mL 鹽酸（10.14），置于 75 水浴鍋中，時(shí)時(shí)搖動(dòng)，使 溶液溫度在 67.0 69.5 ，保溫 5 min，冷卻后，加 2 滴酚酞溶液（10.17），用氫氧化鈉溶液（10.15） 調(diào)至微粉色，用水定容至刻度。再按 12.1.1.2 和 12.1.1.3 操作。 12.1.2.2 按式（4）、（5）計(jì)算費(fèi)林氏液的蔗糖校正值（f2）： 22 222 1000 10.5263 100 0.95 Vm AVm = （4） 22 2 2 10.5263 Vm f AL =（5） 式中： A2實(shí)測(cè)轉(zhuǎn)化糖數(shù)，單位為毫克（mg） ； V2滴定時(shí)消耗蔗糖溶液的體積，單位為毫升（mL） ； m2稱取蔗糖的質(zhì)量，單位為克（g） ； 0.95果糖分子量和葡萄糖分子量之和與蔗糖分子量的比值； f2費(fèi)林氏液的蔗糖校正值； AL2由蔗糖溶液滴定的毫升數(shù)查表 1 所得的轉(zhuǎn)化糖數(shù)，單位為毫克（mg） 。 12.2 乳糖的測(cè)定 12.2.1 試樣處理 12.2.1.1 稱取嬰兒食品或脫脂粉 2 g，全脂加糖粉或全脂粉 2.5 g，乳清粉 1 g，精確到 0.1 mg，用 100 mL 水分?jǐn)?shù)次溶解并洗入 250 mL 容量瓶中。 12.2.1.2 徐徐加入 4 mL 乙酸鉛溶液（10.12）、4 mL 草酸鉀磷酸氫二鈉溶液（10.13），并振蕩容 量瓶，用水稀釋至刻度。靜置數(shù)分鐘，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去最初 25 mL 濾液后，所得濾液作滴定用。 12.2.2 滴定 12.2.2.1 預(yù)滴定：操作同 12.1.1.2。 12.2.2.2 精確滴定：操作同 12.1.1.3。 GB 5413.52010 6 12.3 蔗糖的測(cè)定 12.3.1 樣液的轉(zhuǎn)化與滴定 取 50 mL 樣液（12.2.1.2）于 100 mL 容量瓶中，以下按 12.1.2.1 自“加 10 mL 水”起依法操作。 13 分析結(jié)果的表述 13.1 乳糖 試樣中乳糖的含量 X 按式（6）計(jì)算 mV fF X = 1 11 10025. 0 （6） 式中： X試樣中乳糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為克每百克（g/100 g） ； F1 由消耗樣液的毫升數(shù)查表 1 所得乳糖數(shù)，單位為毫克（mg） ； f1費(fèi)林氏液乳糖校正值； V1 滴定消耗濾液量，單位為毫升（mL） ； m試樣的質(zhì)量，單位為克（g） 。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 13.2 蔗糖 利用測(cè)定乳糖時(shí)的滴定量，按式（7）計(jì)算出相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)化前轉(zhuǎn)化糖數(shù) X1。 22 1 1 0.25 100Ff X Vm = （7） 式中： X1轉(zhuǎn)化前轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為克每百克（g/100 g） ； F2由測(cè)定乳糖時(shí)消耗樣液的毫升數(shù)查表 1 所得轉(zhuǎn)化糖數(shù)，單位為毫克（mg） ； f2 費(fèi)林氏液蔗糖校正值； V1滴定消耗濾液量，單位為毫升（mL） ； m 樣品的質(zhì)量，單位為克（g） 。 用測(cè)定蔗糖時(shí)的滴定量，按式（8）計(jì)算出相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)化后轉(zhuǎn)化糖 X2。 32 2 2 0.50 100Ff X Vm =