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文檔簡介

沙門氏菌及其檢驗(yàn),一、概述 在微生物分類學(xué)中,沙門氏菌屬(Salmonella)是腸桿菌科的一個(gè)大屬,包括2000多個(gè)血清型,它們?cè)谛螒B(tài)結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性、生化特性和抗原構(gòu)造方面都非常相似,是一類形態(tài)短小的革蘭氏陰性桿菌,主要寄居于人和其它溫血?jiǎng)游锏哪c道中,可引起多種性質(zhì)的疾病,根據(jù)沙門氏菌的致病范圍,可將其分為三大類群。 第一類群:專門對(duì)人致病。如傷寒沙門氏菌,甲型、乙型、丙型副傷寒沙門氏菌。 第二類群:能引起人類食物中毒,稱之為食物中毒沙門氏菌群,如鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、紐波特沙門氏菌等。 第三類群:專門對(duì)動(dòng)物致病,很少感染人,如馬流產(chǎn)沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌,此類群中盡管很少感染人,但近年也有感染人的報(bào)道。,1,根據(jù)侵入機(jī)體沙門氏菌菌種的不同,在臨床上引起四種不同的疾病: (1)傷寒、副傷寒 由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。 (2)食物中毒 沙門氏菌屬引起的食物中毒,主要以腸炎桿菌、鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最為多見。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短,一般24d, 可完全恢復(fù)。 (3)敗血癥 多為豬霍亂桿菌引起,甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。 (4)慢性腸炎 沙門氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。,2,沙門氏菌廣泛分布于自然界,是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各國各類細(xì)菌性的食物中毒中,沙門氏菌常居前列。因此,沙門氏菌的檢測(cè)是各國檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)多種進(jìn)出口食品的必檢項(xiàng)目之一。 沙門氏菌不產(chǎn)生外毒素,但能產(chǎn)生毒力較強(qiáng)的內(nèi)毒素。 沙門氏菌主要通過食物、飲水經(jīng)口感染。可存在多種食物中,包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚和田雞腿等。,3,二、沙門氏菌的生物學(xué)特性 1、形態(tài)與染色特性:革蘭氏陰性短桿菌,無芽孢,一般無莢膜,周生鞭毛(除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外),大多數(shù)具有菌毛。 2、培養(yǎng)特性:需氧或兼性厭氧;普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好,菌落中等大小,無色半透明、圓形、光滑、濕潤。,4,3、生化特性: 大部分發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇和山梨酸產(chǎn)氣; 一般不發(fā)酵乳糖和蔗糖,不發(fā)酵側(cè)金盞花醇; 一般不產(chǎn)吲哚,V-P反應(yīng)陰性; 不分解尿素,苯丙氨酸不脫氨; 三糖鐵瓊脂斜面常產(chǎn)生H2S。 賴氨酸脫羧一般陽性 4、抵抗力:較弱,不耐熱,最適溫度37,最適pH6.8-7.8。 5、毒素特征:不產(chǎn)外毒素,產(chǎn)毒性很強(qiáng)的內(nèi)毒素,這是致病的主要原因。,5,6、血清學(xué)特性: 沙門氏菌具有復(fù)雜的抗原結(jié)構(gòu)。雖然沙門氏菌具有O、H、K和其它表面物質(zhì)(如菌毛)四種抗原,但只有O抗原是每個(gè)菌株均有的成分。 1)O抗原(菌體抗原) *存在于菌體表面,為脂多糖,多糖部分決定其特異性, *O抗原耐熱(100、2.5h或121、2h加熱均不破壞其抗原性),其特異性不易喪失或變異。 *一個(gè)菌體具有一種或多種不同的O抗原。,6,2)H抗原(鞭毛抗原) *H抗原存在于鞭毛中,不耐熱,化學(xué)成分蛋白質(zhì),其抗原性可以被酒精所破壞。 *H抗原可分為兩相 第1相:為特異相,用小寫英文字母表示,az,Z以后則從z1、z2,已編到z83。 第2相:為非特異相以阿拉伯?dāng)?shù)字表示,共7種。 具有第1相和第2相H抗原的細(xì)菌稱為雙相菌,大多數(shù)沙門氏菌屬于此; 僅有一相者稱單相菌,如腸炎沙門氏菌。 極少數(shù)無鞭毛菌兩相抗原都不具有,稱為無相菌,如雞白痢沙門氏菌。,7,3) Vi抗原(包膜抗原) 少數(shù)沙門氏菌中尚有一種表面包膜抗原,功能與大腸桿菌的K抗原類同,因一般認(rèn)為它與毒力(Virulence)有關(guān),故稱Vi抗原。能阻止O抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合; 經(jīng)過幾次傳代、60熱處理或石炭酸處理后容易消失。,8,三、 生化反應(yīng),9,1、吲哚試驗(yàn)( indol test) 細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶,可分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基質(zhì)(吲哚),靛基質(zhì)與試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰靛基質(zhì)。 色氨酸 吲哚(無色)對(duì)二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚(紅色,+ 大腸桿菌) 不產(chǎn)吲哚(無色,- 產(chǎn)氣桿菌) 試驗(yàn)方法:取培養(yǎng)24h培養(yǎng)液,先加入少量乙醚,搖動(dòng)試管以提取和濃縮吲哚,待其浮于培養(yǎng)液表面后,再沿試管壁徐緩加入吲哚試劑數(shù)滴,在接觸面呈紅色,即為陽性。 應(yīng)用:用于腸道桿菌的鑒定,10,Indol test 吲哚試驗(yàn) tryptophan色氨酸indole吲哚玫瑰吲哚 Kovacs reagent吲哚試劑 (對(duì)二甲基氨基苯甲醛),- +,E.coli,蛋白胨水試管,11,2、尿素酶(Urease,脲酶)試驗(yàn) 有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶,將尿素分解、產(chǎn)生2個(gè)分子的氨,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導(dǎo)酶,因?yàn)椴徽摰孜锬蛩厥欠翊嬖冢?xì)菌均能合成此酶。其活性最適pH為7.0。 酚紅: 黃色 紅色(+ 普通變形桿菌) 黃色(- 大腸桿菌) 試驗(yàn)方法:挑取1824h待試菌培養(yǎng)物大量接種于液體培養(yǎng)基管中,搖勻,于361培養(yǎng),觀察結(jié)果?;蛲坎疾⒋┐探臃N于瓊脂斜面,不要到達(dá)底部,留底部作變色對(duì)照。培養(yǎng)24h左右,觀察結(jié)果,如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天,作最終判定,變?yōu)榉奂t色為陽性。,12,Urease Test 尿素酶試驗(yàn):,urea尿素,ammonia氨,13,3、氨基酸脫羧酶的測(cè)定,有些細(xì)菌含有氨基酸脫羧酶,使羧基釋出,生成胺類和二氧化碳。此反應(yīng)在偏酸的條件下進(jìn)行,當(dāng)培養(yǎng)基含胺類時(shí)呈堿性反應(yīng),使指示劑變色。 接種與觀察結(jié)果:用幼齡培養(yǎng)液作為菌種,直接接種。接種后封油,對(duì)照管與測(cè)定管同時(shí)接種封油。腸肝菌科的細(xì)菌于37培養(yǎng)4天觀察。 當(dāng)指示劑(溴甲酚紫)呈紫色或帶紅色調(diào)的紫色者為陽性,呈黃色者為陰性。對(duì)照管應(yīng)呈黃色反應(yīng)。,14,15,4、三糖鐵(TSI)瓊脂試驗(yàn),試驗(yàn)方法:以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物,穿刺接種并涂布于斜面,置361培養(yǎng)1824h,觀察結(jié)果。 培養(yǎng)基:乳糖:蔗糖:葡萄糖=10:10:1;加有酚紅 本試驗(yàn)可同時(shí)觀察糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣(變黃);產(chǎn)生硫化氫(變黑)。 只能利用葡萄糖的細(xì)菌,葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸,因接觸空氣而氧化,加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì),生成堿性產(chǎn)物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態(tài)下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。,16,17,5、-半乳糖苷酶(ONPG)的測(cè)定,ONPG: 鄰硝基酚-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的 細(xì)菌,能使其水解,從而釋放黃色的鄰硝基酚,ONPG試驗(yàn) 左為陽性(黃) 右為陰性對(duì)照,18,四、檢測(cè)方法,19,從食品中分離和鑒定沙門氏菌,當(dāng)前通常采用的方法共分5個(gè)步驟: 前增菌:食品樣品在含有營養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌,使受損傷的沙門氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。 (選擇性)增菌:此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增菌,同時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌而直接增菌。 選擇性平板分離:采用固體選擇培養(yǎng)基,抑制非沙門氏菌的生長,提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識(shí)別。 生物化學(xué)篩選:排除大多數(shù)非沙門氏菌,也提供了沙門氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。 血清學(xué)技術(shù)鑒定培養(yǎng)物菌種。,20,中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB 4789.4-2003,TSI(排除A/A H2S結(jié)果 ),靛基質(zhì),尿素,KCN,賴氨酸,H2S 靛 尿KCN 賴(或一項(xiàng)不符),沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn),H2S 靛 尿 KCN 賴,H2S 靛 尿 K

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