《沙門氏菌檢驗(yàn)》PPT課件.pptVIP

沙門氏菌及其檢驗(yàn),一、概述 在微生物分類學(xué)中，沙門氏菌屬（Salmonella）是腸桿菌科的一個(gè)大屬，包括2000多個(gè)血清型，它們?cè)谛螒B(tài)結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性、生化特性和抗原構(gòu)造方面都非常相似，是一類形態(tài)短小的革蘭氏陰性桿菌，主要寄居于人和其它溫血?jiǎng)游锏哪c道中，可引起多種性質(zhì)的疾病，根據(jù)沙門氏菌的致病范圍，可將其分為三大類群。 第一類群：專門對(duì)人致病。如傷寒沙門氏菌,甲型、乙型、丙型副傷寒沙門氏菌。 第二類群：能引起人類食物中毒，稱之為食物中毒沙門氏菌群，如鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、紐波特沙門氏菌等。 第三類群：專門對(duì)動(dòng)物致病，很少感染人，如馬流產(chǎn)沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌，此類群中盡管很少感染人，但近年也有感染人的報(bào)道。,1,根據(jù)侵入機(jī)體沙門氏菌菌種的不同，在臨床上引起四種不同的疾病: （1）傷寒、副傷寒 由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。 （2）食物中毒 沙門氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最為多見。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般24d, 可完全恢復(fù)。 （3）敗血癥 多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。 （4）慢性腸炎 沙門氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。,2,沙門氏菌廣泛分布于自然界，是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各國各類細(xì)菌性的食物中毒中，沙門氏菌常居前列。因此，沙門氏菌的檢測(cè)是各國檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)多種進(jìn)出口食品的必檢項(xiàng)目之一。 沙門氏菌不產(chǎn)生外毒素，但能產(chǎn)生毒力較強(qiáng)的內(nèi)毒素。 沙門氏菌主要通過食物、飲水經(jīng)口感染。可存在多種食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚和田雞腿等。,3,二、沙門氏菌的生物學(xué)特性 1、形態(tài)與染色特性：革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢,一般無莢膜，周生鞭毛（除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外），大多數(shù)具有菌毛。 2、培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧；普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好，菌落中等大小，無色半透明、圓形、光滑、濕潤。,4,3、生化特性： 大部分發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇和山梨酸產(chǎn)氣； 一般不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不發(fā)酵側(cè)金盞花醇； 一般不產(chǎn)吲哚，V-P反應(yīng)陰性； 不分解尿素，苯丙氨酸不脫氨； 三糖鐵瓊脂斜面常產(chǎn)生H2S。 賴氨酸脫羧一般陽性 4、抵抗力：較弱，不耐熱，最適溫度37，最適pH6.8-7.8。 5、毒素特征：不產(chǎn)外毒素，產(chǎn)毒性很強(qiáng)的內(nèi)毒素，這是致病的主要原因。,5,6、血清學(xué)特性： 沙門氏菌具有復(fù)雜的抗原結(jié)構(gòu)。雖然沙門氏菌具有O、H、K和其它表面物質(zhì)(如菌毛)四種抗原，但只有O抗原是每個(gè)菌株均有的成分。 1）O抗原（菌體抗原） *存在于菌體表面，為脂多糖，多糖部分決定其特異性， *O抗原耐熱(100、2.5h或121、2h加熱均不破壞其抗原性)，其特異性不易喪失或變異。 *一個(gè)菌體具有一種或多種不同的O抗原。,6,2）H抗原（鞭毛抗原） *H抗原存在于鞭毛中，不耐熱，化學(xué)成分蛋白質(zhì)，其抗原性可以被酒精所破壞。 *H抗原可分為兩相 第1相：為特異相，用小寫英文字母表示，az，Z以后則從z1、z2，已編到z83。 第2相：為非特異相以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，共7種。 具有第1相和第2相H抗原的細(xì)菌稱為雙相菌，大多數(shù)沙門氏菌屬于此； 僅有一相者稱單相菌，如腸炎沙門氏菌。 極少數(shù)無鞭毛菌兩相抗原都不具有，稱為無相菌，如雞白痢沙門氏菌。,7,3） Vi抗原（包膜抗原） 少數(shù)沙門氏菌中尚有一種表面包膜抗原，功能與大腸桿菌的K抗原類同，因一般認(rèn)為它與毒力(Virulence)有關(guān)，故稱Vi抗原。能阻止O抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合； 經(jīng)過幾次傳代、60熱處理或石炭酸處理后容易消失。,8,三、 生化反應(yīng),9,1、吲哚試驗(yàn)( indol test) 細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。 色氨酸 吲哚（無色）對(duì)二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚（紅色，+ 大腸桿菌） 不產(chǎn)吲哚（無色，- 產(chǎn)氣桿菌） 試驗(yàn)方法：取培養(yǎng)24h培養(yǎng)液，先加入少量乙醚，搖動(dòng)試管以提取和濃縮吲哚，待其浮于培養(yǎng)液表面后，再沿試管壁徐緩加入吲哚試劑數(shù)滴，在接觸面呈紅色，即為陽性。 應(yīng)用：用于腸道桿菌的鑒定,10,Indol test 吲哚試驗(yàn) tryptophan色氨酸indole吲哚玫瑰吲哚 Kovacs reagent吲哚試劑 （對(duì)二甲基氨基苯甲醛）,- +,E.coli,蛋白胨水試管,11,2、尿素酶（Urease，脲酶）試驗(yàn) 有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個(gè)分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導(dǎo)酶，因?yàn)椴徽摰孜锬蛩厥欠翊嬖冢?xì)菌均能合成此酶。其活性最適pH為7.0。 酚紅： 黃色 紅色（+ 普通變形桿菌） 黃色（- 大腸桿菌） 試驗(yàn)方法：挑取1824h待試菌培養(yǎng)物大量接種于液體培養(yǎng)基管中，搖勻，于361培養(yǎng)，觀察結(jié)果?；蛲坎疾⒋┐探臃N于瓊脂斜面，不要到達(dá)底部，留底部作變色對(duì)照。培養(yǎng)24h左右，觀察結(jié)果，如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天，作最終判定，變?yōu)榉奂t色為陽性。,12,Urease Test 尿素酶試驗(yàn)：,urea尿素,ammonia氨,13,3、氨基酸脫羧酶的測(cè)定,有些細(xì)菌含有氨基酸脫羧酶，使羧基釋出，生成胺類和二氧化碳。此反應(yīng)在偏酸的條件下進(jìn)行，當(dāng)培養(yǎng)基含胺類時(shí)呈堿性反應(yīng)，使指示劑變色。 接種與觀察結(jié)果：用幼齡培養(yǎng)液作為菌種，直接接種。接種后封油，對(duì)照管與測(cè)定管同時(shí)接種封油。腸肝菌科的細(xì)菌于37培養(yǎng)4天觀察。 當(dāng)指示劑（溴甲酚紫）呈紫色或帶紅色調(diào)的紫色者為陽性，呈黃色者為陰性。對(duì)照管應(yīng)呈黃色反應(yīng)。,14,15,4、三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn),試驗(yàn)方法：以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置361培養(yǎng)1824h，觀察結(jié)果。 培養(yǎng)基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚紅 本試驗(yàn)可同時(shí)觀察糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。 只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。,16,17,5、-半乳糖苷酶（ONPG）的測(cè)定,ONPG: 鄰硝基酚-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的 細(xì)菌，能使其水解，從而釋放黃色的鄰硝基酚,ONPG試驗(yàn) 左為陽性（黃） 右為陰性對(duì)照,18,四、檢測(cè)方法,19,從食品中分離和鑒定沙門氏菌，當(dāng)前通常采用的方法共分5個(gè)步驟： 前增菌：食品樣品在含有營養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，使受損傷的沙門氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。 （選擇性）增菌：此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增菌，同時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌而直接增菌。 選擇性平板分離：采用固體選擇培養(yǎng)基，抑制非沙門氏菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識(shí)別。 生物化學(xué)篩選：排除大多數(shù)非沙門氏菌，也提供了沙門氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。 血清學(xué)技術(shù)鑒定培養(yǎng)物菌種。,20,中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB 4789.4-2003,TSI（排除A/A H2S結(jié)果 ），靛基質(zhì)，尿素，KCN，賴氨酸,H2S 靛 尿KCN 賴（或一項(xiàng)不符）,沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn),H2S 靛 尿 KCN 賴,H2S 靛 尿 K