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中國中醫(yī)藥大學本科生畢業(yè)論文 論 文 題 目： 保健粥方有效成分的研究 學 生 姓 名： 學 號： 學 院： 專 業(yè) 方 向： 班 級： 指 導 教 師： 論文完成日期： 畢業(yè)論文（設計）誠信聲明書本人聲明：本人 楊興宇 （學號： 20061428 ）所提交的畢業(yè)論文 保健粥方有效成分的研究 是本人在指導教師 惠秋莎 老師指導下獨立研究、寫作的成果，論文中所引用他人的無論以何種方式發(fā)布的文字、研究成果，均在論文中加以說明；有關教師、同學和其他人員對本文的寫作、修訂提出過并為我在論文中加以采納的意見、建議，均已在我的致謝辭中加以說明并深致謝意。論文作者： （簽字） 時間： 2011年 6 月 日指導教師已閱： （簽字） 時間： 2011年 6 月 日畢業(yè)論文（設計）版權使用授權書本畢業(yè)論文 保健粥方有效成分的研究 是本人 楊興宇 （學號： 20061428 ）在校期間所完成學業(yè)的組成部分，是在指導教師 惠秋莎 老師的指導下獨立完成的。因此，本人特授權山東中醫(yī)藥大學藥學院可將本畢業(yè)論文的全部或部分內容編入山東中醫(yī)藥大學藥學院本科生優(yōu)秀畢業(yè)論文集（非正式出版）。論文作者： （簽字） 時間： 2011年 6 月 日指導教師已閱： （簽字） 時間： 2011年 6 月 日保健粥方有效成分的研究楊興宇（2007級中藥學專業(yè)6班 學號：20061428）摘要 綜述了近年來中藥口服緩釋制劑的研究進展。中藥單體化合物中藥緩釋制劑研究有著廣闊的發(fā)展前景。關鍵詞 中藥；口服緩釋制劑【摘要】 保健粥方如下：氣虛質-山藥粥方：淮山藥、蓮子、紅棗、粳米目的提高盾葉薯蕷藥材的品質。方法通過組織培養(yǎng)，對誘導獲得的盾葉薯蕷四倍體株系，進行了試管苗抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析。結果大部分四倍體株系APX活性、SOD和POD比活力高于或相近于二倍體株系。經誘導獲得的四倍體株系試管苗與對照相比薯蕷皂苷元含量有較大差異，大部分四倍體株系薯蕷皂苷元含量都超過了二倍體株系。結論經誘導獲得的四倍體株系在抗氧化酶活性及有效成分含量方面與二倍體表現(xiàn)出明顯差異，說明多倍體誘導可以作為盾葉薯蕷優(yōu)良品種選育的途徑。 【關鍵詞】 盾葉薯蕷四倍體抗氧化酶活性薯蕷皂苷元Abstract：ObjectiveTo improve the yield and quality of D. zingibiernsis C.H.Wright . MethodsThe research project of polyploidy breeding by tissue culture was done. The antioxidant enzyme activities and the diosgenin were analyzed in polyploidy lines. Results The results showed that SOD and POD activities in most of autotetraploid lines were not lower than those of diploid line, furthermore，the content of diosgenin in most induced plantlets was higher than that in control. Conclusion There was difference between autotetraploid and control lines in diosgenin content and antioxidant enzyme activities，therefore，inducing autotetraploid can be effective way to breeding the superior varieties.Key words： D. zingibiernsisC.H.Wright. ；Antotetraploid,； Autioxidant enzyme activities； Diosgenin 盾葉薯蕷D. zingibiernsis C.H.Wright.屬薯蕷科薯蕷屬根狀莖，又名黃姜、火頭根，其根莖內薯蕷皂素的含量一般為2%左右，是目前世界上最好的激素類藥源植物。同時具有清肺止咳、利濕通淋、通絡止痛、解毒消腫的功能，可治肺熱咳嗽、濕熱淋痛、風濕腰痛、癰腫惡瘡、跌打扭傷、蜂螯蟲咬；其水溶性甾體皂苷成分對心肌缺血、胸痹、高脂血癥等有明顯治療作用。 盾葉薯蕷是我國特有資源植物，是世界上薯蕷皂素含量最高的種類，最高單株達到16.5%，超過了世界王牌墨西哥小穗花薯蕷15%的紀錄。據調查我國10個省市都有盾葉薯蕷分布，其中湖北、湖南、陜西、四川分布最為集中，目前在陜西安康地區(qū)、湖北鄖西地區(qū)、湖南安化地區(qū)、河南南陽地區(qū)都有一定規(guī)模的種植面積。實現(xiàn)人工栽培后，雖然解決了皂素供應問題，而原料依舊短缺，主要原因是產量低、皂素含量變化較大，質量難以控制。因此有必要進行品種選育和提純復壯的工作。鑒于此，筆者利用組織培養(yǎng)技術進行了盾葉薯蕷多倍體的誘導，并對誘導株系進行了抗氧化酶活性及有效成分分析，為最終選育優(yōu)良品種提供依據。1 材料與儀器1.1 材料生長2540 d的盾葉薯蕷四倍體、二倍體試管苗新鮮葉片及根莖1。1.2 儀器和試劑BECKMAN DU-600分光光度計，水浴鍋，微量加樣器。酶提取液， pH 7.5的0.05mol/L 的Tris-HCl緩沖液，PBS pH(7.0)，0.1 mmol/L EDTA， 0.1mmol/L H2O2， 0.5 mmol/LASA，丙酮，SOD試劑盒（購于建成生物試劑研究所）。2 方法2.1 SOD，POD，APX活性的測定精密稱取盾葉薯蕷試管苗二倍體及其同源四倍體葉片1.0 g，每份材料加5ml預冷的提取緩沖液（pH7.5的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液）及少量石英砂，置于冰浴中研磨后，4冷凍離心機6 000 r/min離心10min，上清液即為酶提取液。SOD活性按南京建成生物工程研究所試劑盒說明書操作。POD總活力按文獻2的方法進行，酶的比活力用OD470/ (mgmin)(protein)表示。APX活性參照文獻2的方法，酶活單位定義為每小時氧化1mol ASA的酶量為一個酶活單位。2.2 盾葉薯蕷試管苗薯蕷皂苷元含量分析2.2.1 樣品制作盾葉薯蕷試管苗在MS/2+IAA 0.2 mg/L+NAA0.2 mg/L培養(yǎng)基上誘導生根，待苗長至3035d左右，洗凈根上的培養(yǎng)基，將根剪掉，在60下烘干，粉碎，過60目篩，供含量分析用。2.2.2 薯蕷皂苷元的測定供試品溶液制備3，4：精密稱取盾葉薯蕷粉末0.71.0 g，置于三角瓶中，加2.0 mol/L的硫酸50 ml，在100水浴鍋中水解4 h，放冷過濾，藥渣用蒸餾水洗至中性，60干燥后，用石油醚（6090）50 ml在90水浴中索市氏提取5h，提取液回收至干后用無水乙醇溶解，過濾至5ml的容量瓶中，用無水乙醇定容待測定。 對照品溶液制備：準確稱取薯蕷皂苷元標樣0.001 g，置2 ml容量瓶中，用無水乙醇溶解，稀釋至刻度，得0.5 g/l的標準溶液備用。 色譜條件選擇5，6：儀器：Agilent 1100 Series。分析條件：Microsorb-MV100 C18 (5m，4.6 mm250 mm )。無水甲醇為流動相，進樣量20 l，流速0.5 ml/min, 檢測波長203 nm, 柱溫為室溫。樣品中薯蕷皂苷元與其它成分達到良好分離（見圖1）。 樣品含量測定：以上述色譜條件對盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元含量進行分析，并計算其含量。3 結果3.1 四倍體與二倍體SOD，POD，APX活性比較 盾葉薯蕷二倍體與其同源四倍體各抗氧化酶的比較結果見表1。由表1可以看出，盾葉薯蕷四倍體株系APX活性基本上與二倍體相近或略大，其中有12個株系比二倍體高；14個四倍體株系POD活性均高于二倍體對照株系，平均高出23.4%，POD活性最高的株系G2比對照高出59%。16個四倍體株系SOD活性均高于二倍體對照。平均高出48.1%，活性最高的株系10-10比對照高出127%。表1 四倍體與二倍體SOD，POD，APX活性比較（略）3.2 盾葉薯蕷試管苗同源四倍體株系薯蕷皂苷元含量分析 對誘導獲得的19個四倍體株系試管苗的薯蕷皂苷元含量進行了初步分析。結果見表2，圖24。測定結果顯示：19個盾葉薯蕷四倍體株系中，有10個株系的薯蕷皂苷元含量高于二倍體，平均比對照株系高出30.8%。其中10-1、12-4、y9、3-1、y24、11-10，分別比對照株系高出75%，50%，50%，33%，25%，25%。表2 盾葉薯蕷四倍體株系薯蕷皂苷元含量（略）4 討論 目前，尋找強抗逆性植物，抵御活性氧對植物細胞的損傷越來越受到人們的重視?，F(xiàn)已有通過基因擴增，使SOD過度表達，產生較強抗逆性的轉基因植物。但由于SOD降解超氧陰離子產生的H2O2同樣也是一種活性氧，對植物細胞也有很大傷害，因此單一通過轉一種基因并不能達到徹底清除活性氧的目的。SOD在需氧原核生物和真核生物中廣泛存在，是活性氧清除系統(tǒng)中第一個發(fā)揮作用的抗氧化酶，也是植物體內氧代謝的關鍵酶，在保護細胞免受氧化損傷過程中具有十分重要的作用。POD可清除植物體內的H2O2，從而使需氧生物體免受H2O2的毒害7，APX被認為葉綠體中清除H2O2的關鍵酶。試驗獲得的大部分盾葉薯蕷四倍體株系SOD，POD和APX比活力均高于二倍體，說明這些株系將具有比對照株系更高的抗逆性或抵抗自然災害的能力。這為植物抗逆性的提高和產量的增加提供一條有效途徑；極大的縮短了選育時間，為優(yōu)良品種的前期篩選提供了新的研究思路；為應用組織培養(yǎng)技術進行優(yōu)良品種選育提供了新的研究方法。 成分分析結果說明大部分四倍體株系薯蕷皂苷元含量超過了對照株系，說明多倍體誘導可以作為盾葉薯蕷優(yōu)良品種選育的途徑，所得株系為進一步選育優(yōu)良品種提供了有用的育種材料?！緟⒖嘉墨I】 1謝彩俠，高山林，秦慧貞，等.盾葉薯蕷同源四倍體的誘導與鑒定J.藥物生物技術，2005，12（1）：15.2張志良，翟偉蕾.植物生理學實驗指導M. 北京：高等教育出版社，2006：168.3都述虎，夏重道，付鐵軍，等 穿龍薯蕷總皂苷水解條件的優(yōu)化J. 中成藥，2000，22（9）：608.4王俊，楊克迪，陳 鈞. 均勻設計法優(yōu)選穿山龍的水解工藝條件J.中藥材，2002，9：659.5王鐵杰， 劉中博，文琪珺，等.RP-HPLC法測定黃山藥和穿龍薯蕷中薯蕷皂苷的含量J.中藥材，2005，28 （12）： 1074.6趙景嬋，郭治安，成小飛，等.